中華人民共和國國家計(jì)量技術(shù)規(guī)范4特定蛋白分析儀校準(zhǔn)規(guī)范ns4發(fā)布 4實(shí)施國家市場監(jiān)督管理總局 發(fā)布4特定蛋白分析儀校準(zhǔn)規(guī)范rns

4歸 口 單 位:全國生物計(jì)量技術(shù)委員主要起草單位:南京市計(jì)量監(jiān)督檢測院參加起草單位:中國計(jì)量科學(xué)研究院上海市計(jì)量測試技術(shù)研究院本規(guī)范委托全國生物計(jì)量技術(shù)委員會負(fù)責(zé)解釋本規(guī)范主要起草人:殷瑤南京市計(jì)量監(jiān)督檢測院陳鴻飛南京市計(jì)量監(jiān)督檢測院)徐昇南京市計(jì)量監(jiān)督檢測院參加起草人:米 薇中國計(jì)量科學(xué)研究院)金有訓(xùn)中國計(jì)量科學(xué)研究院)劉 剛上海市計(jì)量測試技術(shù)研究院)目 錄引言………………………

Ⅱ)1范圍……………………2引用文件………………3術(shù)語和計(jì)量單位………………………4概述……………………5計(jì)量特性………………6校準(zhǔn)條件………………1環(huán)境條件……………2校準(zhǔn)用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及其他設(shè)備……………………7校準(zhǔn)項(xiàng)目和校準(zhǔn)方法…………………1校準(zhǔn)前準(zhǔn)備及檢查…………………2加液體積示值誤差和加液重復(fù)性…………………3設(shè)定溫度偏差和穩(wěn)定性……………4特定蛋白測量示值誤差……………5特定蛋白測量重復(fù)性………………6攜帶污染率…………7線性相關(guān)性…………8校準(zhǔn)結(jié)果表達(dá)…………1校準(zhǔn)結(jié)果處理………………………2校準(zhǔn)結(jié)果的測量不確定度…………9復(fù)校時(shí)間間隔…………

1)1)1)1)2)2)2)2)3)3)3)3)4)4)4)5)5)5)5)6)附錄A 校準(zhǔn)記錄和校準(zhǔn)證書的格式及內(nèi)容…………

7)附錄B 特定蛋白分析儀示值誤差測量結(jié)果的不確定度評定示例…

)附錄C 國際溫標(biāo)純水密度表…………

)附錄D 線性相關(guān)性校準(zhǔn)溶液的配制方法……………

)參考文獻(xiàn)…………………

)Ⅰ引言0國家計(jì)量校準(zhǔn)規(guī)范編寫規(guī)則1通用計(jì)量術(shù)語及定義2測量不確定度評定與表示》共同構(gòu)成支撐本規(guī)范制定工作的基礎(chǔ)性系列文件。本規(guī)范的制定主要參考了T1臨床化學(xué)體外診斷試劑盒A定量測量程序的線性評估:統(tǒng)計(jì)學(xué)方法批準(zhǔn)指南》efeAl;d)及現(xiàn)行特定蛋白分析儀相關(guān)技術(shù)文件。本規(guī)范為首次發(fā)布。Ⅱ特定蛋白分析儀校準(zhǔn)規(guī)范范圍本規(guī)范適用于基于免疫比濁法為測量原理的特定蛋白分析儀的計(jì)量性能的校準(zhǔn)。引用文件本規(guī)范引用了下列文件:1通用計(jì)量術(shù)語及定義2測量不確定度評定與表示0國家計(jì)量校準(zhǔn)規(guī)范編寫規(guī)則2生物計(jì)量術(shù)語及定義凡是注日期的引用文件,僅注日期的版本適用于本規(guī)范;凡是不注日期的引用文件,其最新版本包括所有的修改單適用于本規(guī)范。術(shù)語和計(jì)量單位2中界定的及以下術(shù)語和定義適用于本規(guī)范。特定蛋白n機(jī)體內(nèi)執(zhí)行某些生理功能或在疾病狀態(tài)時(shí)起到表現(xiàn)病理特征的蛋白質(zhì)的總稱。注:特定蛋白有時(shí)也被稱為特種蛋白。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的互換性el對于給定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的規(guī)定量,由兩個(gè)給定測量程序所得測量結(jié)果之間關(guān)系與另一個(gè)指定物質(zhì)所得測量結(jié)果之間關(guān)系一致程度表示的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)特性。注:定義中,給定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)通常是校準(zhǔn)器,而另一指定物質(zhì)通常是日常用的樣品。定議中涉及的兩個(gè)測量程序,依據(jù)校準(zhǔn)等級關(guān)系,通常一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是校準(zhǔn)等級中上一等級的,而另一個(gè)是下一等級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)校準(zhǔn)器?？苫Q標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的穩(wěn)定性要定期監(jiān)測。來源]概述特定蛋白分析儀是檢測血清、血漿或尿液中特定蛋白含量的蛋白質(zhì)分析儀器。特定蛋白分析儀測量方法有免疫比濁法、免疫熒光法、金標(biāo)法等,其中免疫比濁法應(yīng)用最多。免疫比濁法的原理是利用抗原與抗體在特殊反應(yīng)體系中反應(yīng)形成可溶性蛋白復(fù)合物。在稀釋系統(tǒng)中的促聚劑的作用下從反應(yīng)液析出形成微粒使反應(yīng)液出現(xiàn)濁度。特定蛋白分析儀通過檢測反應(yīng)液的散射光或透射光強(qiáng)度得到樣品中特定蛋白的濃1度。部分特定蛋白分析儀利用微小的膠乳顆粒聯(lián)結(jié)抗體再與抗原結(jié)合時(shí)形成抗原抗膠乳顆粒復(fù)合物,增加免疫復(fù)合物的直徑,稱為膠乳增強(qiáng)免疫比濁法。特定蛋白分析儀根據(jù)自動(dòng)化程度的不同分為全自動(dòng)特定蛋白分析儀和半自動(dòng)特定蛋白分析儀兩種。全自動(dòng)特定蛋白分析儀主要由控制系統(tǒng)包括自動(dòng)進(jìn)樣模塊、試劑處理模塊、反應(yīng)模塊、清洗模塊組成檢測系統(tǒng)、應(yīng)用軟件系統(tǒng)組成。半自動(dòng)特定蛋白分析儀主要由檢測系統(tǒng)、應(yīng)用軟件系統(tǒng)組成。計(jì)量特性特定蛋白分析儀的計(jì)量性能指標(biāo)見表。表1特定蛋白分析儀的計(jì)量性能指標(biāo)計(jì)量性能計(jì)量性能指標(biāo)加液體積示值誤差*0加液重復(fù)性*≤8溫度偏差*0℃溫度穩(wěn)定性*0℃特定蛋白測量示值誤差0特定蛋白測量重復(fù)性5攜帶污染率*≤2線性相關(guān)性9注:以上技術(shù)指標(biāo)不用于合格判別,僅供參考,計(jì)量性能指標(biāo)可參照分析儀制造廠商給出的技術(shù)要求。*如分析儀適用,可進(jìn)行該項(xiàng)目的校準(zhǔn)。校準(zhǔn)條件環(huán)境條件 ( ) , 。環(huán)境溫度

0℃

相對濕度不大于0室內(nèi)應(yīng)防潮、避光、防熱、無腐蝕性物品,通風(fēng)良好。校準(zhǔn)用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及其他設(shè)備1溫度測量設(shè)備:測量范圍:℃,最大允許誤差3℃。電子天平:分度值為1, 級。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)特定蛋白分析儀的校準(zhǔn)中應(yīng)根據(jù)該分析儀所能檢測項(xiàng)目和用戶要求采用C反應(yīng)蛋白或白蛋白或免疫球蛋白等有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)需要有高、低兩個(gè)濃度,并且有互換性,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)相對不確定度小于0。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)使用時(shí)應(yīng)遵守標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的使用說明。2可調(diào)移液器:容量范圍。校準(zhǔn)項(xiàng)目和校準(zhǔn)方法校準(zhǔn)前準(zhǔn)備及檢查檢查待校特定蛋白分析儀配套試劑是否在有效期內(nèi),是否批號相同且保存完好。將待校特定蛋白分析儀開機(jī)預(yù)熱,并使用分析儀自帶定標(biāo)品進(jìn)行定標(biāo)。加液體積示值誤差和加液重復(fù)性自動(dòng)進(jìn)樣的特定蛋白分析儀可以進(jìn)行此項(xiàng)目的校準(zhǔn)。=首先將可密封容器如L帶蓋離心管,可以防止容器內(nèi)的水分揮發(fā))在電子天平上稱量質(zhì)量;然后將去蓋容器放到分析儀加樣模塊的合適位置,通過分析儀命令控制樣品針或試劑針)往該容器中加入L平衡至室溫的除氣純水,立即蓋上容器在電子天平上稱量質(zhì)量;用溫度計(jì)測量純水溫度并從附錄C中查找到對應(yīng)的密度根據(jù)公式)計(jì)算加液體積;重復(fù)測量6次,取后3次測量結(jié)果根據(jù)公式)計(jì)算加液體積示值誤差;根據(jù)公式)計(jì)算加液體積重復(fù)性。=式中:V加液體積;

V m0ρ

)容器和純水的總質(zhì)量,;0容器質(zhì)量,;ρ 室溫下水的密度。V-13V0 1i

)式中:

=

0 0EV加液體積示值誤差;ni=1Vn)2ini=1Vn)2=

×10

)V式中:V加液體積重復(fù)性;ii次加液體積測量結(jié)果;V6次加液體積測量結(jié)果平均值;測量次數(shù)。設(shè)定溫度偏差和穩(wěn)定性3試劑倉或反應(yīng)倉對外敞開的特定蛋白分析儀可以進(jìn)行此項(xiàng)目的校準(zhǔn)。將溫度計(jì)探頭固定在試劑倉和反應(yīng)倉中試劑相應(yīng)的位置,將分析儀通電,設(shè)置為常用的儲存和反應(yīng)溫度。待溫度穩(wěn)定后,記錄下溫度計(jì)溫度讀數(shù)并開始計(jì)時(shí),每隔2n記錄一次讀數(shù),共計(jì)5次,求出平均值。根據(jù)公式)計(jì)算設(shè)定溫度偏差。根據(jù)公式)計(jì)算設(shè)定溫度穩(wěn)定性。式中:

TTd )T設(shè)定溫度偏差℃;T 5次測量的平均值℃;d分析儀設(shè)置溫度℃。式中:

fxn )f設(shè)定溫度穩(wěn)定性℃;x5次測量中的最高溫度℃;n5次測量中的最低溫度℃。特定蛋白測量示值誤差根據(jù)待測特定蛋白分析儀所檢測的特定蛋白項(xiàng)目和用戶的要求,分別選取高、低兩個(gè)濃度相應(yīng)特定蛋白有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)以下簡稱標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),每個(gè)濃度在分析儀上連續(xù)測量3次,記錄每次測定值,該濃度下示值誤差按公式)計(jì)算。ss0 )s式中:δ特定蛋白分析儀示值誤差;c測定的特定蛋白含量的平均值,選擇的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)單位;s特定蛋白標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)值,選擇的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)單位。特定蛋白測量重復(fù)性選取低值標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在特定蛋白分析儀上連續(xù)測量6次,記錄每次的測定值i,并根據(jù)公式)計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差作為重復(fù)性的表征。1 i2R= =n1 0

)c式中:R重復(fù)性;ii次特定蛋白的測定值,選擇的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)單位;c測定的特定蛋白含量的平均值,選擇的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)單位;n測量次數(shù)。攜帶污染率4對于全自動(dòng)進(jìn)樣的特定蛋白分析儀可以進(jìn)行攜帶污染率項(xiàng)目的校準(zhǔn)。選擇低值標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和高值標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)低值標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度需接近分析儀檢測下限,高值標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)需接近分析儀檢測上限,首先連續(xù)測定低值標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)4次,結(jié)果記為1234)后,立即連續(xù)測定高值標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)4次H1H2H3H4)再連續(xù)測定低值標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1次,結(jié)果記為5。根據(jù)公式)計(jì)算分析儀從高濃度到低濃度的攜帶污染率CL。CL=H

+5-23

0 )式中:

2 H3H-233CL從高濃度到低濃度的攜帶污染率;i低值標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)第ii為)次的測量值,選擇的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)單位;i高值標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)第ii為)次的測量值,選擇的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)單位。線性相關(guān)性∑n1ii)ni121∑n∑n1ii)ni121∑ni2r=式中:

)線性相關(guān)系數(shù);i各個(gè)濃度水平標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)值,選擇的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)單位;x各個(gè)濃度水平標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的平均值,選擇的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)單位;i各個(gè)濃度水平標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的測量值,選擇的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)單位;y各個(gè)濃度水平標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的測量值平均值,選擇的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)單位;n被分析項(xiàng)目濃度水平的個(gè)數(shù)。校準(zhǔn)結(jié)果表達(dá)校準(zhǔn)結(jié)果處理經(jīng)校準(zhǔn)后的特定蛋白分析儀應(yīng)核發(fā)校準(zhǔn)證書,校準(zhǔn)證書應(yīng)符合0中2的要求,并給出各校準(zhǔn)項(xiàng)目名稱和測量結(jié)果以及擴(kuò)展不確定度。校準(zhǔn)原始記錄格式推薦性表格及校準(zhǔn)證書內(nèi)頁格式推薦性表格。2校準(zhǔn)結(jié)果的測量不確定度特定蛋白分析儀校準(zhǔn)結(jié)果的不確定度按2的要求評定,特定蛋白示值誤差的不確定度及評定示例見附錄。5復(fù)校時(shí)間間隔建議特定蛋白分析儀復(fù)校準(zhǔn)間隔一般不超過1年。由于復(fù)校時(shí)間間隔的長短是由儀器的使用情況、使用者、儀器本身質(zhì)量等諸因素所決定的,因此送校單位可根據(jù)實(shí)際使用情況自主決定復(fù)校時(shí)間間隔。如果在使用過程中對儀器測量結(jié)果產(chǎn)生懷疑或更換主要部件應(yīng)及時(shí)校準(zhǔn)。6附錄A校準(zhǔn)記錄和校準(zhǔn)證書的格式及內(nèi)容圖1為校準(zhǔn)記錄的內(nèi)頁格式及內(nèi)容。校 準(zhǔn) 記 錄推薦性表格) 共2頁,第1頁儀器名稱型號制造廠商出廠編號委托單位名稱聯(lián)系人地址電話溫度濕度大氣壓試劑和校準(zhǔn)品批號記錄編號證書編號校準(zhǔn)員核驗(yàn)員本次使用的主要計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)器具規(guī)格型號不確定度/準(zhǔn)確度等級/最大允許誤差器具編號有效性確認(rèn)一、加液體積示值誤差和加液重復(fù)性實(shí)測溫度: 純水密度項(xiàng)目123456空管質(zhì)量加樣后重量計(jì)算體積加樣示值誤差加樣重復(fù)性二、設(shè)定溫度偏差和穩(wěn)定性試劑倉:溫度測量次數(shù)123456789012345設(shè)定值平均值溫度偏差穩(wěn)定性圖1校準(zhǔn)記錄的內(nèi)頁格式及內(nèi)容7反應(yīng)倉:溫度測量次數(shù)123456789012345設(shè)定值平均值溫度偏差穩(wěn)定性三、示值誤差測量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)名稱及編號:標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)值測定值平均值相對示值誤差高值低值四、測量重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測定值低值平均值相對標(biāo)準(zhǔn)偏差/五、攜帶污染率標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)12345攜帶污染率低值高值六、線性相關(guān)性標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)值123平均值12345線性相關(guān)系數(shù)圖1續(xù))8

共2頁,第2頁圖2為校準(zhǔn)證書格式及內(nèi)容。校 準(zhǔn) 證 書共 頁,第 序號校準(zhǔn)項(xiàng)目校準(zhǔn)結(jié)果不確定度1加樣示值誤差—2加樣重復(fù)性—3設(shè)定溫度偏差4設(shè)定溫度穩(wěn)定性—5相對示值誤差6測量重復(fù)性—7攜帶污染率—8線性相關(guān)性—校準(zhǔn)員: 核驗(yàn)員: 圖2校準(zhǔn)證書的格式及內(nèi)容9附錄B特定蛋白分析儀示值誤差測量結(jié)果的不確定度評定示例測量方法采用特定蛋白有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)值進(jìn)行比較。

此實(shí)驗(yàn)中使用C反應(yīng)蛋白標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

并與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測量模型

( ) :示值誤差可由公式式中:

1

給出ss0 )sδ特定蛋白分析儀示值誤差;c測定的特定蛋白含量的平均值,;特定蛋白標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)值,。不確定度來源不確定度來源包括:特定蛋白分析儀測量重復(fù)性引入的不確定度。C反應(yīng)蛋白標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的不確定度。不確定度分量的估算:選定一臺特定蛋白分析儀,對C反應(yīng)蛋白標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)連續(xù)測量0次,得到一組測量:選定一臺特定蛋白分析儀,對C反應(yīng)蛋白標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)連續(xù)測量0次,得到一組測量值450849,8216。則單次測量結(jié)果的實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)差i:∑( ∑( i=

21

≈1Ln-1實(shí)際校準(zhǔn)時(shí)在重復(fù)性條件下連續(xù)測量3次由測量重復(fù)性引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為:

,以3次測量的算術(shù)平均值作為結(jié)果,則ci/n1/8L2標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的不確定度分量s由標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的不確定度分量s可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書提供的擴(kuò)展不確定度s和包含因子s根據(jù)公式)計(jì)算:cs

)式中:ss標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度,;0標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書提供的擴(kuò)展不確定度,;s標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書提供的包含因子,通常為。C反應(yīng)蛋白標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)值為L,則由標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為:cs95Ls標(biāo)準(zhǔn)不確定度一覽表

s 2。標(biāo)準(zhǔn)不確定度一覽表見表1表1特定蛋白分析儀測定結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)不確定度一覽表不