摘要按照國家一級標準物質技術規(guī)范的各項要求，以美國國家標準與技術研究院研制的熒光相對發(fā)射強度標準物質為參照，采用八家資質實驗室進行聯(lián)合定值，并進行均勻性檢驗和穩(wěn)定性考察，研制了4-(二氰基亞甲基)-2-甲基-6-(4-二甲基氨基苯乙烯基)-4H-吡喃（DCM）正丙醇溶液相對熒光發(fā)射強度標準物質。結果表明該標準物質具有良好的均勻性，可在4

℃下穩(wěn)定保存12個月，可提供在472nm激發(fā)波長下，波長覆蓋范圍為490～830nm、波長間隔為1nm的標準熒光相對發(fā)射強度值。綜合考慮樣品的均勻性、穩(wěn)定性檢驗及定值過程中引入的不確定度，評定了各波長下的不確定度。該標準物質各技術指標符合相關規(guī)范的要求，其量值具有準確性和溯源性，已成功獲批為國家二級有證標準物質，編號為GBW(E)136758，可用于相關熒光類儀器及檢測模塊的校準、分析方法評價，以及生物、食品、藥品、化工產品及化妝品中的質量控制等方面。引言熒光是光致發(fā)光的一種，是物質從吸收光能后躍遷形成的激發(fā)態(tài)，返回基態(tài)能級時所發(fā)射的光。影響物質熒光發(fā)射強度的因素主要是吸收激發(fā)光的能力、熒光量子產量以及外部因素引起的熒光飽和與熒光猝滅等。熒光檢測具有靈敏度高、選擇性強、試樣量少等特點，因此，被廣泛應用于化學、生物、環(huán)境和醫(yī)學等領域。

正文部分1

實驗部分1.1

主要儀器與試劑1.2

實驗方法1.2.1

標準物質樣品制備DCM從試劑公司購買，置于填充有五氧化二磷的干燥器中干燥24h。準確稱取0.4mg

DCM固體，用色譜級正丙醇溶解，并轉移至2000mL的A級容量瓶中，用正丙醇溶液定容至刻度線，混勻，隨后分裝于5mL棕色安瓿瓶中，每支4mL，共分裝約400支。將封裝好的溶液放置于常溫下，避光保存。1.2.2

樣品的均勻性檢驗根據(jù)JJF1006-1994《一級標準物質研制技術規(guī)范》[14]的要求，分別從已經編上號碼的DCM正丙醇溶液相對熒光發(fā)射強度標準物質中按照頭尾、中間編號隨機抽取15個樣品，實驗室溫度為(25±3)℃，對490～830

nm每隔1nm采集熒光強度數(shù)值，計算校正后的相對發(fā)射強度，每個波長測量3次，采用單因素方差分析法評估樣品的均勻性。1.2.3

樣品的穩(wěn)定性考察長期穩(wěn)定性考察按照先密后疏的原則，考察在常規(guī)保存條件(25±3)℃下，保存0、1、3、6、9、12個月后樣品的穩(wěn)定性，每次取3個包裝，每個包裝取1個子樣，取平均值。短期穩(wěn)定性模擬了(50±3)℃運輸條件并選取常規(guī)儲存條件(25±3)℃作為參照。隨機抽取兩組樣品，每組6份，考察在選定的溫度條件下第0、1、3、5、7

d后樣品的穩(wěn)定性。待樣品恢復至25℃時，測定其相對發(fā)射光譜強度，通過回歸分析判斷模擬條件對其穩(wěn)定性的影響。1.2.4

定值1.2.5

標準物質量值比對驗證2

結果與討論2.1

均勻性檢驗由于共有341個波長下對應的相對發(fā)射強度均勻性檢驗結果，因此，本文選取其中一個發(fā)射波長下的相對發(fā)射強度的考察過程作為代表，取用的代表性發(fā)射波長為600nm，其均勻性檢查結果列于下表1中，其余波長下的均勻性檢驗結果與此類似。2.2

穩(wěn)定性考察本文選取的溶劑為色譜正丙醇，其熔點為﹣127

℃，沸點為97.1

℃。因此，在模擬運輸條件的溫度范圍內幾乎不會發(fā)生凝固或沸騰等物相改變過程。以發(fā)射波長為600nm下，DCM正丙醇溶液相對熒光發(fā)射強度標準物質的穩(wěn)定性實驗結果為代表進行分析，長期穩(wěn)定性和短期穩(wěn)定性結果分別列于表2、表3中，其余波長下的穩(wěn)定性實驗結果與此類似。2.3

定值結果在定值過程中，選用了兩種NIST的標準物質SRM2943和SRM2944的相對發(fā)射強度作為校準依據(jù)。利用這兩種物質對熒光光譜儀進行校準時，存在一段重復的波長范圍530～640

nm。為了比較兩種標準物質對波長校準的一致性，利用兩種不同的熒光光譜儀分別測量這兩種標準物質的發(fā)射光譜，并計算其能量校正因子F值，結果如圖1所示。2.4

不確定度評定2.4.1

定值引入的不確定度2.4.2

均勻性引入的不確定度2.4.3

穩(wěn)定性引入的不確定度2.4.4

合成不確定度2.5

標準物質量值比對驗證結果經在研標準物質校準后的測定結果與硫酸奎寧熒光標準物質證書的量值比對結果如表7所示。3

結論結論本文研制的DCM正丙醇溶液相對熒光發(fā)射強度標準物質均勻性良好，可以在儲存條件下穩(wěn)定保存12個月，可提供在472nm激發(fā)下，波長覆蓋范圍為490～830

nm，波長間隔為1nm的標準熒光相對發(fā)射