DB21DB21/T2742—2017飼料中動(dòng)物源性成分—貂源性組織成分定AnimalderivedingredientsinFeed-qualitativedetectionofminktissuederivedingredientswithPCRmethod遼寧省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布IDB21/T2742—2017本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：遼寧省獸藥飼料畜產(chǎn)品質(zhì)請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些1DB21/T2742—2017飼料中動(dòng)物源性成分—貂源性組織成分定性檢測(cè)件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和GB/T20195動(dòng)物飼料試樣利用氯仿抽提法或使用等效的基因組DNA提取試劑盒提取DNA，以提取的DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；PCR產(chǎn)物用限制性內(nèi)切酶酶切級(jí)應(yīng)為不含DNA和DNA酶的分析純?cè)噭噭┑倪x購、驗(yàn)收根據(jù)Primer6軟件設(shè)計(jì)，貂源性成分?jǐn)U增產(chǎn)物為622bp，檢測(cè)用引2DB21/T2742—20174.8電泳緩沖液：Tris54g，硼酸27.54.10溴化乙錠貯存液（10mg/mL）或熒光3DB21/T2742—2017按GB/T14699.1規(guī)定采集試樣后，按GB/T200g，經(jīng)粉碎，全部過0.45mm孔篩，混勻裝入磨口稱取50mg試樣于1.5mL離心管中，加入200μLTE，混勻；加入400μL裂解液，加400μL三氯甲烷，也可采用等效的基因組DNA提取試劑盒，按照試劑的最佳范圍是2μg/mL-50μg/mL，OD值應(yīng)在0.05-1.0區(qū)間內(nèi)。1OD260=50μg/mL雙鏈DNA，用水稀釋，調(diào)4DB21/T2742—2017DNA模板11在貂源性成分的鑒定中，以貂肉粉末作為陽性對(duì)照。PCR過程中，以水作為電泳，直到指示劑遷移至凝膠尾部。凝膠成像儀下觀察電泳2限制性內(nèi)切酶BstXⅠ2795DB21/T2742—2017將特異性條帶進(jìn)行瓊脂糖凝膠回收，純化并委托測(cè)序，測(cè)序結(jié)果見切為107bp和515bp兩個(gè)片段，圖PCR產(chǎn)物為陽性，同時(shí)酶切結(jié)果符合附錄B、測(cè)序結(jié)果同源性達(dá)到99%判為含有貂源性成分，表述為檢出貂源性成分；PCR產(chǎn)物為陰性者，不需要再進(jìn)行酶切和測(cè)序鑒定，判為不含有貂源性成分，表述為參考GB/T19495.2《操作過程中避免交叉感染》和SN/T1193《基因檢驗(yàn)實(shí)6DB21/T2742—2017CAGTGATAAAAATTAAGCCATGAACGAAAGTTTGACTAAGCCATGTTAACACCAAAATTTCGTGCCAGCCACCGCGGTCATACGATTAACCCAAATCAATGGGCCAACGGCGTGTTAAGGACTATACAACACTAAAGTTAAAATTTAACCAGGCCGTAAAAAGCTACTGTTAAACAAACCACGAAAGTGACTTTACCACTTCCGACAACACGATAGCTGAGATCCAAACTTAGATACCCCACTATGCTCAGCCCTAAACATAAATAATTCACATAACAAAATTACTTGCATGTTAAAGCAATAGCTTAAAACTCAAAGGACTTGGCGGTGCTTTACATCCCTCTAGAGGAGTTCTATAATCGATAAACCCCGATAAACCTCACCACTTCTAGCTAAATCAGTCTATATACCGCTCTTCAGCAAACCCTTAAAAAGGAAGAAAAGTAAGCACAATAATGATACATAAAAAAGTTCAAGGTGTAACCCAGAAGTGGGA