GB××××—2009GB5009.30—xxxxI前言本標(biāo)準(zhǔn)代替GB/T5009.30-2003《食品中叔丁基羥基茴香醚（BHA）與2，6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）的測(cè)定》。本標(biāo)準(zhǔn)與GB/T5009.30-2003相比主要變化如下：——?dú)庀嗌V法增加毛細(xì)管柱分析測(cè)定條件；刪除了填充柱分析測(cè)定條件，更改了樣品提取方式；——增加液相色譜法；——修改了計(jì)算公式；——?jiǎng)h除GB/T5009.97-2003《食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測(cè)定》中的第二法薄層色譜法和第三法比色法；——依據(jù)GB/T1.1-2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第一部分：標(biāo)準(zhǔn)結(jié)構(gòu)與編寫規(guī)則》和GB/T20001.4-2001《標(biāo)準(zhǔn)編寫與規(guī)則第四部分：化學(xué)分析方法》對(duì)原標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了修改。食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)與的測(cè)定1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了植物油、奶油、糕點(diǎn)等食品中叔丁基羥基茴香醚（BHA）與2，6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）的二種測(cè)定方法——?dú)庀嗌V法、液相色譜法。本標(biāo)準(zhǔn)氣相色譜法適用于植物油、奶油、糕點(diǎn)等食品中叔丁基羥基茴香醚（BHA）與2，6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）的測(cè)定。本標(biāo)準(zhǔn)液相色譜法適用于植物油、奶油、糕點(diǎn)等食品中叔丁基羥基茴香醚（BHA）與2，6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）的測(cè)定。第一法氣相色譜法2原理試樣中的叔丁基羥基茴香醚（BHA）和2,6—二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）用甲醇提取，經(jīng)氣相色譜分離后用氫火焰離子化檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)試樣峰面積（或峰高）與標(biāo)準(zhǔn)峰面積（或峰高）比較定量。3試劑和材料試劑甲醇(CH3OH)：色譜純石油醚：沸程為30℃~60℃。標(biāo)準(zhǔn)品叔丁基羥基茴香醚（BHA）（C11H16O2），純度>98.0%。2，6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）（C15H24O），純度>99.0%。標(biāo)準(zhǔn)溶液配制3.3.1.叔丁基羥基茴香醚（BHA）與2，6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）標(biāo)準(zhǔn)貯備液（2.00mg/mL）：分別稱取0.1000g叔丁基羥基茴香醚（BHA）與2，6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于50.0mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，置于1℃-4℃冰箱保存，可保存1個(gè)星期。3.3.2.叔丁基羥基茴香醚（BHA）與2，6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）中間液（200μg/mL）：分別吸取1.0mL叔丁基羥基茴香醚（BHA）與2，6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）標(biāo)準(zhǔn)貯備液（3.3.1）于10.0mL容量瓶中，用甲醇溶液定容刻度，臨用時(shí)配制。3.3.3.標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液：分別吸取叔丁基羥基茴香醚（BHA）與2，6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）中間液（3.3.2）0.10mL、0.20mL、0.50mL、1.0mL、2.0mL、5.0mL于10.0mL容量瓶中，用甲醇稀釋并定容。此即為2.0μg/mL、4.0μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度，臨用時(shí)配制。4儀器與設(shè)備4.1氣相色譜儀：配有氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）。4.2天平：感量為0.0001g及0.001g。4.3渦旋振蕩器。4.4離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥3000r/min。4.5樣品均質(zhì)器。4.6旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。4.7恒溫水浴鍋5分析步驟5.1試樣制備5.1.1.植物油（花生油、豆油、菜籽油、芝麻油）稱取5.000g植物油置25mL具塞離心管中，加入13.0mL甲醇（3.1.1），渦旋（2200r/min）3min，放置2min，離心（3000r/min～3500r/min）10min，吸取上清液于100mL濃縮瓶中，重復(fù)提取2次，合并甲醇提取液。于40℃水浴中減壓濃縮約至5mL，用甲醇轉(zhuǎn)移并定容至10mL比色管中，混勻。于-20℃冰箱中冷凍1小時(shí)，待溶液澄清后過(guò)有機(jī)濾膜，濾液留作氣相色譜用。5.1.2.黃油等固體油脂稱取5.000g黃油等固體油脂置25mL具塞離心管中，加入13.0mL甲醇（3.1.1），置于60℃水浴中，待固體油脂完全熔化后取出，趁熱渦旋（2200r/min）3min,放冷水中冷卻，離心（3000～3500r/min）10min，吸取上清液置100mL濃縮瓶中，重復(fù)提取2次，合并甲醇提取液。于40℃水浴中減壓濃縮約至5mL，用甲醇溶液轉(zhuǎn)移并定容至10mL比色管中，于-20℃冰箱中冷凍1小時(shí)，待溶液澄清，留作氣相色譜用。5.1.3.食品（油炸花生米、糕點(diǎn)、餅干）根據(jù)食品中含油脂程度的多少，適量稱取50～300g，混合均勻，置于500mL具塞錐形瓶中，加入適量的石油醚（3.1.2），放置過(guò)夜，用快速濾紙過(guò)濾后，減壓回收溶劑，稱取殘留脂肪5.000g置100mL具塞離心管中，加入13.0mL甲醇（3.1.1），渦旋（2200r/min）3min，放置2min，離心（3000～3500r/min）10min，吸取上層清液置100mL濃縮瓶中，重復(fù)提取2次，合并甲醇提取液。于40℃水浴中減壓濃縮約至5mL，用甲醇溶液轉(zhuǎn)移并定容至10mL比色管中，于-20℃冰箱中冷凍1小時(shí)，待溶液澄清，留作氣相色譜用。5.2儀器參考條件a)色譜柱:毛細(xì)管柱：(14%-氰丙基-苯基)甲基聚硅氧烷，30m×0.25mm×0.25μm）或等效柱。b)柱溫升溫程序：初溫80℃保持1min，10℃/min升溫至250℃保持15min。c)進(jìn)樣口：溫度230℃；進(jìn)樣量1μL，分流進(jìn)樣，分流比1∶2(分流不分流可根據(jù)色譜條件調(diào)整）。d)檢測(cè)器：氫火焰離子化檢測(cè)器（FID），溫度260℃。e)載氣：高純氮?dú)猓髁?.0mL/min，尾吹30mL/min。f)氫氣：40mL/min；空氣450mL/min（載氣、氫氣、空氣流量大小可據(jù)儀器條件進(jìn)行調(diào)整）。5.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液分別注入氣相色譜儀中，測(cè)定相應(yīng)的不同濃度標(biāo)準(zhǔn)的峰面積響應(yīng)值，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。5.4試樣溶液的測(cè)定將試樣溶液注入氣相色譜儀中，得到相應(yīng)的峰面積響應(yīng)值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)液中叔丁基羥基茴香醚（BHA）與2，6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）的濃度，平行測(cè)定次數(shù)不少于兩次。6分析結(jié)果的表述試樣中叔丁基羥基茴香醚（BHA）與2，6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）含量按公式（1）計(jì)算：……（1）式中：Xi—試樣中叔丁基羥基茴香醚（BHA）與2，6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）的含量，單位為克每千克（g/kg）；C—由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出進(jìn)樣液中叔丁基羥基茴香醚（BHA）與2，6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）m—試樣中稱取的油脂質(zhì)量，單位為克（g）。計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留3位有效數(shù)字。7精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。8其它標(biāo)準(zhǔn)濃度的線性范圍2.0μg/mL~200μg/mL；當(dāng)試樣量為5g、定容體積為10.0mL時(shí)，叔丁基羥基茴香醚（BHA）方法定量限(LOQ)2.0mg/kg;2，6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）方法定量限(LOQ)4.0mg/kg。第二法高效液相色譜法9原理試樣中的叔丁基羥基茴香醚（BHA）和2,6—二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）用甲醇提取，經(jīng)液相色譜分離后用紫外吸收檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)試樣峰面積（或峰高）與標(biāo)準(zhǔn)峰面積（或峰高）比較定量。10試劑和材料注1：除非另有說(shuō)明，所有試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的二級(jí)水。10.1.試劑10.1.1甲醇(CH3OH)：色譜純10.1.2乙酸（CH3COOH）：分析純10.1.3石油醚：沸程為30℃～60℃10.2.叔丁基羥基茴香醚（BHA）與2，6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）標(biāo)準(zhǔn)品10.2.1叔丁基羥基茴香醚（C11H16O2），純度>98.0%。10.2.22，6-二叔丁基對(duì)甲酚（C15H24O），純度>99.0%。10.3.叔丁基羥基茴香醚（BHA）與2，6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）標(biāo)準(zhǔn)溶液配制10.3.1叔丁基羥基茴香醚（BHA）與2，6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）標(biāo)準(zhǔn)貯備液（2.00mg/mL）：分別稱取0.1000g叔丁基羥基茴香醚（BHA）與2，6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于50.0mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，混勻。置于1℃-4℃冰箱保存，可保存1個(gè)星期。10.3.2叔丁基羥基茴香醚（BHA）與2，6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）中間液（200μg/mL）：分別吸取1.0mL叔丁基羥基茴香醚（BHA）與2，6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）標(biāo)準(zhǔn)貯備液于10.0mL容量瓶中，用甲醇溶液定容刻度，臨用時(shí)配制。10.3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液：分別吸取叔丁基羥基茴香醚（BHA）與2，6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）中間液（10.3.2）0.10mL、0.20mL、0.50mL、1.0mL、2.0mL、5.0mL于10.0mL容量瓶中，用甲醇稀釋并定容。此即為2.0μg/mL、4.0μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度，臨用時(shí)配制。11儀器與設(shè)備11.1液相色譜儀：配有紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器。11.2天平：感量為0.0001g。11.3渦旋振蕩器。11.4離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥4000r/min。11.6旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。11.7恒溫水浴鍋12分析步驟12.1試樣制備12.1.1植物油（花生油、豆油、菜籽油、芝麻油）稱取5.000g植物油置25mL具塞離心管中，加入13.0mL甲醇（3.1.1），渦旋（2200r/min）3min，放置2min，離心（3000r/min～3500r/min）10min，吸取上清液于100mL濃縮瓶中，重復(fù)提取2次，合并甲醇提取液。于40℃水浴中減壓濃縮約至5mL，用甲醇轉(zhuǎn)移并定容至10mL比色管中，混勻。于-20℃冰箱中冷凍1小時(shí)，待溶液澄清后過(guò)有機(jī)濾膜，濾液留作液相色譜用。12.1.2黃油等固體油脂稱取5.000g黃油等固體油脂置25mL具塞離心管中，加入13.0mL甲醇（3.1.1），置于60℃水浴中，待固體油脂完全熔化后取出，趁熱渦旋（2200r/min）3min,放冷水中冷卻，離心（3000r/min～3500r/min）10min，吸取上清液置100mL濃縮瓶中，重復(fù)提取2次，合并甲醇提取液。于40℃水浴中減壓濃縮約至5mL，用甲醇溶液轉(zhuǎn)移并定容至10mL比色管中，于-20℃冰箱中冷凍1小時(shí)，待溶液澄清后過(guò)有機(jī)濾膜，濾液留作液相色譜用。12.1.3.食品（油炸花生米、糕點(diǎn)、餅干）根據(jù)食品中含油脂程度的多少，適量稱取50g～300g，混合均勻，置于500mL具塞錐形瓶中，加入適量的石油醚（3.1.2），放置過(guò)夜，用快速濾紙過(guò)濾后，減壓回收溶劑，稱取殘留脂肪5.0g（精確到0.001g）置50mL具塞離心管中，加入13.0mL甲醇（3.1.1），渦旋（2200r/min）3min，放置2min，離心（3000r/min～3500r/min）5min，吸取上層清液置100mL濃縮瓶中，重復(fù)提取2次，合并甲醇提取液。于40℃水浴中減壓濃縮約至5mL，用甲醇溶液轉(zhuǎn)移并定容至10mL比色管中，于-20℃冰箱中冷凍1小時(shí)，待溶液澄清后過(guò)有機(jī)濾膜，濾液留作液相色譜用。12.2儀器參考條件色譜參考條件色譜柱：ODSC18柱，5μm，250mm×4.6mm,或同等性能的色譜柱。流動(dòng)相A：1%乙酸水溶液；流動(dòng)相B:甲醇，梯度見(jiàn)表1表1洗脫梯度時(shí)間，min流動(dòng)相A,%流動(dòng)相B，%流量，mL/min60401.0440601.0820801.01310901.01810901.02101001.02601001.03060401.03560401.0進(jìn)樣量：20μL。柱溫：25℃。檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器。檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm。12.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液分別注入液相色譜儀中，測(cè)定相應(yīng)的不同濃度標(biāo)準(zhǔn)的峰面積響應(yīng)值，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。12.4樣品的測(cè)定將試樣溶液注入液相色譜儀中，得到相應(yīng)的峰面積響應(yīng)值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)液中叔丁基羥基茴香醚（BHA）與2，6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）的濃度，平行測(cè)定次數(shù)不少于兩次。13分析結(jié)果的表述試樣中叔丁基羥基茴香醚（BHA）與2，6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）含量按公式（2）計(jì)算：……（2）式中：Xi—試樣中叔丁基羥基茴香醚（BHA）與2，6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）的含量，單位為克每千克（g/kg）；C—由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出進(jìn)樣液中叔丁基羥基茴香醚（BHA）與2，6-二叔丁基對(duì)甲酚