臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)技術(shù)考核試卷考生姓名：__________答題日期：__________得分：__________判卷人：__________

一、單項(xiàng)選擇題（本題共20小題，每小題1分，共20分，在每小題給出的四個(gè)選項(xiàng)中，只有一項(xiàng)是符合題目要求的）

1.以下哪種技術(shù)不屬于基因擴(kuò)增技術(shù)？（）

A.PCR

B.SouthernBlot

C.Real-timePCR

D.Flowcytometry

2.基因擴(kuò)增技術(shù)中，哪個(gè)環(huán)節(jié)容易出現(xiàn)假陽(yáng)性？（）

A.DNA提取

B.引物設(shè)計(jì)

C.擴(kuò)增反應(yīng)

D.產(chǎn)物檢測(cè)

3.臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中，以下哪個(gè)是實(shí)時(shí)熒光定量PCR的優(yōu)點(diǎn)？（）

A.速度快

B.準(zhǔn)確性高

C.無(wú)需后續(xù)處理

D.成本低

4.以下哪個(gè)基因突變類型在基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中難以檢測(cè)？（）

A.Pointmutation

B.Deletion

C.Insertion

D.Inversion

5.關(guān)于PCR引物的設(shè)計(jì)，以下哪項(xiàng)描述是錯(cuò)誤的？（）

A.引物長(zhǎng)度一般為18-25個(gè)核苷酸

B.引物之間不能形成二級(jí)結(jié)構(gòu)

C.引物的Tm值應(yīng)相近

D.引物可以與模板DNA非特異性結(jié)合

6.在實(shí)時(shí)熒光定量PCR中，哪種熒光染料可以用于檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物？（）

A.Ethidiumbromide

B.SYBRGreenI

C.Propidiumiodide

D.Acridineorange

7.基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中，如何避免交叉污染？（）

A.使用一次性手套

B.實(shí)驗(yàn)室分區(qū)嚴(yán)格

C.避免使用公共設(shè)備

D.A和B

8.以下哪種疾病不適用于基因擴(kuò)增檢驗(yàn)？（）

A.癌癥

B.病毒感染

C.遺傳病

D.高血壓

9.關(guān)于臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的質(zhì)量控制，以下哪項(xiàng)措施是錯(cuò)誤的？（）

A.設(shè)置陰性對(duì)照

B.重復(fù)實(shí)驗(yàn)

C.使用不同批次的試劑

D.忽略實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的異?，F(xiàn)象

10.以下哪個(gè)不是基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的步驟？（）

A.DNA提取

B.引物設(shè)計(jì)

C.擴(kuò)增反應(yīng)

D.電泳分析

11.基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中，哪種因素可能導(dǎo)致擴(kuò)增失敗？（）

A.模板DNA降解

B.引物設(shè)計(jì)不合理

C.dNTP濃度過(guò)低

D.所有序列均可擴(kuò)增

12.關(guān)于PCR擴(kuò)增曲線，以下哪個(gè)描述是錯(cuò)誤的？（）

A.模板DNA的量與擴(kuò)增曲線的Ct值成反比

B.Ct值越低，模板DNA的量越多

C.擴(kuò)增效率高時(shí)，擴(kuò)增曲線更陡

D.擴(kuò)增失敗時(shí)，曲線呈水平直線

13.在基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中，以下哪個(gè)參數(shù)與擴(kuò)增效率無(wú)關(guān)？（）

A.引物的Tm值

B.dNTP濃度

C.循環(huán)次數(shù)

D.模板DNA的量

14.關(guān)于基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室要求，以下哪項(xiàng)是錯(cuò)誤的？（）

A.實(shí)驗(yàn)室需分區(qū)嚴(yán)格

B.需要有良好的通風(fēng)設(shè)備

C.可以與其他實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目共用實(shí)驗(yàn)室

D.需要定期清潔和消毒

15.以下哪個(gè)是基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中常用的自動(dòng)化設(shè)備？（）

A.高速離心機(jī)

B.PCR儀

C.電泳儀

D.生物安全柜

16.基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中，以下哪種情況可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果？（）

A.模板DNA降解

B.引物設(shè)計(jì)不合理

C.酶活性降低

D.A和B

17.在基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中，以下哪種方法可以用于定量分析？（）

A.Agarosegelelectrophoresis

B.SouthernBlot

C.Real-timePCR

D.NorthernBlot

18.以下哪個(gè)基因擴(kuò)增技術(shù)主要用于檢測(cè)RNA？（）

A.PCR

B.Real-timePCR

C.ReversetranscriptionPCR(RT-PCR)

D.NestedPCR

19.關(guān)于基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的臨床應(yīng)用，以下哪個(gè)描述是錯(cuò)誤的？（）

A.可以用于病原體檢測(cè)

B.可以用于癌癥基因檢測(cè)

C.可以用于遺傳病診斷

D.只適用于病毒感染

20.基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中，以下哪個(gè)環(huán)節(jié)可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失?。浚ǎ?/p>

A.模板DNA提取

B.引物設(shè)計(jì)

C.擴(kuò)增反應(yīng)

D.實(shí)驗(yàn)操作失誤

注意：請(qǐng)將答案填寫(xiě)在答題括號(hào)內(nèi)。祝您考試順利！

二、多選題（本題共20小題，每小題1.5分，共30分，在每小題給出的四個(gè)選項(xiàng)中，至少有一項(xiàng)是符合題目要求的）

1.基因擴(kuò)增技術(shù)包括以下哪些方法？（）

A.PCR

B.NorthernBlot

C.Real-timePCR

D.WesternBlot

2.以下哪些因素會(huì)影響PCR擴(kuò)增的效率？（）

A.引物的設(shè)計(jì)

B.模板DNA的純度

C.dNTP的濃度

D.酶的活性

3.在實(shí)時(shí)熒光定量PCR中，哪些因素會(huì)影響Ct值的大??？（）

A.模板DNA的初始濃度

B.擴(kuò)增效率

C.儀器設(shè)置

D.引物的親和力

4.以下哪些措施可以減少PCR交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)？（)

A.使用紫外線消毒

B.分區(qū)域操作

C.使用一次性實(shí)驗(yàn)室用品

D.定期清潔工作臺(tái)面

5.哪些疾病可以通過(guò)基因擴(kuò)增檢驗(yàn)進(jìn)行診斷？（）

A.艾滋病

B.唐氏綜合癥

C.肺炎

D.心臟病

6.以下哪些是基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中常用的定量方法？（）

A.Dotblot

B.Real-timePCR

C.NorthernBlot

D.ELISA

7.以下哪些情況下需要使用巢式PCR？（）

A.模板DNA濃度較低

B.需要高特異性

C.檢測(cè)稀有突變

D.快速檢測(cè)大量樣本

8.基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中，哪些因素可能導(dǎo)致擴(kuò)增偏差？（）

A.模板DNA的不均一性

B.引物結(jié)合位點(diǎn)的變異

C.dNTP的濃度變化

D.PCR儀的溫度波動(dòng)

9.在進(jìn)行基因擴(kuò)增檢驗(yàn)時(shí)，哪些操作步驟需要特別小心以避免污染？（）

A.DNA提取

B.引物配制

C.擴(kuò)增反應(yīng)混合

D.產(chǎn)物分析

10.哪些技術(shù)可以用于檢測(cè)PCR產(chǎn)物的特異性？（）

A.Agarosegelelectrophoresis

B.Meltingcurveanalysis

C.Sequenceanalysis

D.SouthernBlot

11.以下哪些是實(shí)時(shí)熒光定量PCR中的熒光染料？（）

A.SYBRGreen

B.TaqManprobes

C.Ethidiumbromide

D.Propidiumiodide

12.在基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中，哪些情況可能導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果？（）

A.污染

B.引物二聚體

C.模板DNA過(guò)量

D.酶的殘留活性

13.哪些因素會(huì)影響PCR反應(yīng)的退火溫度？（）

A.引物的Tm值

B.模板DNA的GC含量

C.體系中鹽的濃度

D.擴(kuò)增儀型號(hào)

14.基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中，哪些方法可以用于檢測(cè)突變？（）

A.Restrictionfragmentlengthpolymorphism(RFLP)

B.Allele-specificPCR

C.Pyrosequencing

D.Alloftheabove

15.以下哪些是基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中可能使用的酶？（）

A.DNApolymerase

B.Reversetranscriptase

C.RNaseH

D.Protease

16.在基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中，哪些因素可能影響擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性？（）

A.引物的選擇性

B.模板DNA的質(zhì)量

C.擴(kuò)增循環(huán)次數(shù)

D.擴(kuò)增反應(yīng)的溫度

17.哪些情況下需要對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化？（）

A.進(jìn)行序列分析

B.使用定量PCR

C.進(jìn)行克隆

D.所有上述情況

18.以下哪些疾病可以通過(guò)基因擴(kuò)增檢驗(yàn)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估？（）

A.遺傳性疾病

B.惡性腫瘤

C.慢性病

D.炎癥性疾病

19.基因擴(kuò)增檢驗(yàn)在法醫(yī)學(xué)中可以用于哪些方面？（）

A.身份確認(rèn)

B.痕跡分析

C.病原體檢測(cè)

D.藥物代謝分析

20.以下哪些因素會(huì)影響實(shí)時(shí)熒光定量PCR的準(zhǔn)確性？（）

A.檢測(cè)儀器

B.熒光染料的種類

C.反應(yīng)混合的比例

D.實(shí)驗(yàn)操作者的技能

三、填空題（本題共10小題，每小題2分，共20分，請(qǐng)將正確答案填到題目空白處）

1.PCR的全稱是_______。（）

2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR中，Ct值代表_______。（）

3.基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中，常用的DNA提取方法有_______。（）

4.為了提高PCR的特異性，引物的設(shè)計(jì)應(yīng)遵循_______原則。（）

5.基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中，用于檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物特異性的方法有_______。（）

6.在PCR反應(yīng)中，dNTP的作用是_______。（）

7.基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中，巢式PCR通常用于_______的檢測(cè)。（）

8.實(shí)時(shí)熒光定量PCR中，常用的熒光染料有_______和_______。（）

9.基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的質(zhì)量控制措施包括設(shè)置_______和_______。（）

10.基因擴(kuò)增檢驗(yàn)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用包括_______和_______。（）

四、判斷題（本題共10小題，每題1分，共10分，正確的請(qǐng)?jiān)诖痤}括號(hào)中畫(huà)√，錯(cuò)誤的畫(huà)×）

1.PCR反應(yīng)中，變性、退火和延伸三個(gè)步驟的溫度是固定的。（）

2.在基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中，模板DNA的量越多，擴(kuò)增效果越好。（）

3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR中，Ct值越小，模板DNA的初始濃度越高。（）

4.基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中，使用紫外線消毒可以有效防止交叉污染。（）

5.所有的基因突變都可以通過(guò)基因擴(kuò)增檢驗(yàn)來(lái)檢測(cè)。（）

6.在基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中，擴(kuò)增失敗可能是因?yàn)槟０錎NA降解。（）

7.引物的Tm值越高，PCR的特異性越強(qiáng)。（）

8.基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中，電泳分析是檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物最常用的方法。（）

9.交叉污染是導(dǎo)致基因擴(kuò)增檢驗(yàn)假陽(yáng)性的主要原因。（）

10.基因擴(kuò)增檢驗(yàn)可以用于病毒載量的定量分析。（）

五、主觀題（本題共4小題，每題5分，共20分）

1.請(qǐng)簡(jiǎn)述實(shí)時(shí)熒光定量PCR的原理及其在臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中的應(yīng)用。（）

2.描述基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中可能出現(xiàn)的污染類型，并說(shuō)明如何避免這些污染。（）

3.請(qǐng)解釋在基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中，為什么需要對(duì)引物進(jìn)行優(yōu)化設(shè)計(jì)，并列舉優(yōu)化引物設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)考慮的因素。（）

4.討論基因擴(kuò)增檢驗(yàn)技術(shù)在診斷遺傳性疾病和傳染病方面的優(yōu)勢(shì)和局限性。（）

標(biāo)準(zhǔn)答案

一、單項(xiàng)選擇題

1.D

2.A

3.B

4.D

5.D

6.B

7.D

8.D

9.D

10.B

11.C

12.A

13.A

14.C

15.B

16.D

17.C

18.C

19.D

20.D

二、多選題

1.A,C

2.A,B,C,D

3.A,B

4.B,C,D

5.A,B

6.B,C

7.A,B,C

8.A,B,C

9.A,B,C,D

10.A,B

11.A,B

12.A,B,C

13.A,B,C

14.A,B,C

15.A,B

16.A,B,C,D

17.A,B,C

18.A,B

19.A,B,C

20.A,B,C,D

三、填空題

1.聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）

2.循環(huán)閾值（Ct值）

3.石蠟沉淀法、離心柱法等

4.引物間不應(yīng)互補(bǔ)，Tm值相近

5.熔解曲線分析、凝膠電泳

6.提供PCR反應(yīng)的原料

7.低豐度目標(biāo)序列

8.SYBRGreen、TaqMan探針

9.陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照

10.病原體檢測(cè)、基因突變檢測(cè)

四、判斷題

1.×

2.×

3.√

4.√

5.×

6.√

7.×

8.×

9.√

10.√

五、主觀題（參考）

1.實(shí)時(shí)熒光