團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《永福報(bào)春苣苔組培快繁技術(shù)規(guī)程》(征求意見(jiàn)稿)編制說(shuō)明一、項(xiàng)目來(lái)源根據(jù)桂標(biāo)協(xié)[2021]28號(hào)文件《廣西標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)關(guān)于下達(dá)2021年第十一批團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)制修定項(xiàng)目計(jì)劃的通知》，《永福報(bào)春苣苔組培快繁技術(shù)規(guī)程》列入2021年廣西團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)制定計(jì)劃中，序號(hào)為2021-1107，起草單位為廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所。二、項(xiàng)目背景及目的意義永福報(bào)春苣苔（Primulinayungfuensis）是苦苣苔科報(bào)春苣苔屬的多年生草本植物，為廣西特有種，主要分布在桂林市及周邊縣，如永福及臨桂。永福報(bào)春苣苔以其圓整、矮小的植株，復(fù)雜多變的葉面斑紋，頎長(zhǎng)的花葶，碩大卻清麗雅致的花朵被譽(yù)為“中國(guó)非洲紫羅蘭”的最佳代表，野生花期為5月，群體花期15-30d，是一著名的觀賞性較高的原種，同時(shí)也是一種不可多得的觀葉兼觀花的室內(nèi)盆花和育種材料。永福報(bào)春苣苔還具有豐富重要的藥用價(jià)值，應(yīng)用前景廣闊。近年來(lái)，根據(jù)植株大小、苗齡大小以及觀賞性的高低，永福報(bào)春苣苔每株售價(jià)從20元至百元不等，市場(chǎng)前景極好。但目前永福報(bào)春苣苔的盆栽多數(shù)源于野外挖掘，致使大量野生資源遭到破壞流失，嚴(yán)重影響了種群居群的更新發(fā)展。為了避免永福報(bào)春苣苔因?yàn)E采濫挖而產(chǎn)生的資源破壞和流失，同時(shí)也為了滿足其市場(chǎng)的需求，制定永福報(bào)春苣苔的組培快繁技術(shù)規(guī)程顯得尤為重要，不僅有利于永福報(bào)春苣苔的規(guī)?；a(chǎn)，且對(duì)其產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有重要促進(jìn)作用，對(duì)我區(qū)花卉產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有積極意義。三、國(guó)內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)制修訂情況目前國(guó)家暫無(wú)該屬植物的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，我區(qū)亦無(wú)該屬植物的標(biāo)準(zhǔn)頒布。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中，僅有《主要花卉產(chǎn)品等級(jí)第2部分：盆花》涉及了苦苣苔科大巖桐屬植物的盆花質(zhì)量等級(jí)劃分。在廣西地方標(biāo)準(zhǔn)上，已有《重瓣大巖桐組培快繁技術(shù)規(guī)程》（DB45/T1587-2017）、《重瓣大巖桐盆花生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程》（DB45/T1586-2017）兩套標(biāo)準(zhǔn)頒布實(shí)施。大巖桐和永福報(bào)春苣苔植物為同科不同屬的物種，原產(chǎn)地也不同，栽培方式、繁殖方法也有差異。本標(biāo)準(zhǔn)的擬定、頒布填補(bǔ)了這一空白。四、編寫(xiě)標(biāo)準(zhǔn)的原則和依據(jù)（一）原則1.以科學(xué)、準(zhǔn)確、權(quán)威為指導(dǎo)思想，堅(jiān)持可靠性、準(zhǔn)確性和實(shí)用性原則。標(biāo)準(zhǔn)起草過(guò)程中，查詢了大量的國(guó)內(nèi)技術(shù)資料，凝練了編制者多年的試驗(yàn)，并參考了我國(guó)近十多年來(lái)的科學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。結(jié)合苦苣苔產(chǎn)業(yè)當(dāng)前和長(zhǎng)遠(yuǎn)發(fā)展需要，考慮我區(qū)現(xiàn)有基礎(chǔ)，兼顧將來(lái)發(fā)展，提出的技術(shù)既有科學(xué)性、先進(jìn)性，又有實(shí)用性，可操作行強(qiáng)。2.堅(jiān)持先進(jìn)性、規(guī)范性原則本標(biāo)準(zhǔn)屬首次編制，采取了嚴(yán)肅認(rèn)真態(tài)度注意反復(fù)推敲和斟酌，通過(guò)廣泛征求意見(jiàn)，合理采納同行專家的寶貴意見(jiàn)，采納國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)中的合理、適宜的內(nèi)容，保證內(nèi)容和條款的先進(jìn)性和規(guī)范性。編寫(xiě)過(guò)程中，嚴(yán)格按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》，結(jié)合調(diào)研和試驗(yàn)研究的結(jié)果，組織標(biāo)準(zhǔn)的起草工作。3.堅(jiān)持盡量收集永福報(bào)春苣苔相關(guān)組織培養(yǎng)技術(shù)，使本標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)方法具有更好的可操作性，可以作為政府部門監(jiān)督、指導(dǎo)生產(chǎn)的依據(jù)，在生產(chǎn)上切實(shí)可行。（二）依據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草，參考《NY/T2306花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程》等相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)用前期研究成果、參考國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)資料，確定本標(biāo)準(zhǔn)的指標(biāo)設(shè)置和各項(xiàng)指標(biāo)要求。1.外植體的消毒和滅菌取無(wú)病蟲(chóng)害、生長(zhǎng)健壯的永福報(bào)春苣苔成熟葉片，經(jīng)洗潔精800倍液浸泡10min后在流水下沖洗10min，然后轉(zhuǎn)移到超凈工作臺(tái)上進(jìn)行滅菌操作。先用棉球蘸取75%乙醇溶液拭擦葉片正面和背面，無(wú)菌水沖洗2次；再將葉片在75%乙醇溶液中浸泡8~10s，無(wú)菌水沖洗5次；最后用0.1%氯化汞溶液進(jìn)行兩次浸泡，每次浸泡時(shí)間為6min，每次浸泡后用無(wú)菌水沖洗5次。乙醇溶液和氯化汞溶液浸泡過(guò)程中要輕輕震蕩使滅菌劑充分接觸葉片。在接種盤內(nèi)將葉片切成2~3cm×2~3cm大小的葉塊，以備用。2.初代培養(yǎng)將切好的葉片按葉片正面朝上、背面朝下的方式接入初代培養(yǎng)基中。每種培養(yǎng)基接種葉塊20塊，重復(fù)3次。經(jīng)過(guò)30d的培養(yǎng)后，發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)基上添加了一定濃度的6-BA和NAA有利于不定芽的誘導(dǎo)，并能在較短時(shí)間內(nèi)形成不定芽，適宜的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+3.0mg·L-16-BA+0.25mg·L-1NAA，獲得的不定芽長(zhǎng)勢(shì)良好。培養(yǎng)溫度為25~28°C，光照強(qiáng)度為12.5~30μmol·m-2·s-1，光照時(shí)間為12h·d-1，以下增殖培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)、生根培養(yǎng)的環(huán)境條件同初代培養(yǎng)。編號(hào)培養(yǎng)基6-BA/mg·L-1NAA/mg·L-1芽誘導(dǎo)率/%愈傷誘導(dǎo)率/%不定芽數(shù)/株誘導(dǎo)時(shí)間/d生長(zhǎng)情況Y1MS0041.67±2.887d015.00±2.000d29.00±1.000a長(zhǎng)勢(shì)差Y2MS1.00.1058.33±7.638cd026.33±3.786c26.00±1.000ab長(zhǎng)勢(shì)差Y3MS1.50.1068.33±16.073bc030.33±0.577bc26.67±0.577ab長(zhǎng)勢(shì)差Y4MS3.00.1073.33±7.638abc033.67±5.033abc25.67±2.082b長(zhǎng)勢(shì)良Y5MS1.00.2575.00±5.000abc037.33±1.115ab26.00±2.646ab長(zhǎng)勢(shì)良Y6MS1.50.2581.67±5.774ab038.67±5.508ab24.00±1.000bc長(zhǎng)勢(shì)良Y7MS3.00.2590.00±5.000a043.67±4.041a25.67±1.528b長(zhǎng)勢(shì)良Y8MS1.00.5078.33±5.774ab037.00±2.000ab23.33±1.528bc長(zhǎng)勢(shì)差Y9MS1.50.5080.00±21.794ab038.33±9.504ab23.33±2.887bc長(zhǎng)勢(shì)差Y10MS3.00.5090.00±5.000a041.33±10.017a21.33±1.528c長(zhǎng)勢(shì)差3.增殖培養(yǎng)將從葉片誘導(dǎo)得到的不定芽切取下來(lái)，以單個(gè)芽形式接入增殖培養(yǎng)基中。每種培養(yǎng)基接種不定芽20株，重復(fù)3次。培養(yǎng)30d后，發(fā)現(xiàn)適宜永福報(bào)春苣苔不定芽增殖的培養(yǎng)基為：MS+1.0~3.0mg·L-1ZT+0.25g·L-1IBA，不定芽健壯，無(wú)玻璃化，生根極少。編號(hào)培養(yǎng)基ZT/mg·L-1IBA/mg·L-1增殖系數(shù)生長(zhǎng)情況F1MS1.000.109.97±0.076e芽小，部分生根F2MS2.000.1011.37±0.858d芽小，部分生根F3MS3.000.1011.80±0.854cd芽小，少數(shù)生根F4MS1.000.2512.47±0.076bc芽健壯，少數(shù)生根F5MS2.000.2512.68±0.539bc芽健壯，少數(shù)生根F6MS3.000.2513.07±0.355ab芽健壯，少數(shù)生根F7MS1.000.5012.87±0.189ab芽健壯，生根較多，部分玻璃化F8MS2.000.5013.20±0.482ab芽健壯，生根較多，部分玻璃化F9MS3.000.5013.63±0.126a芽健壯，生根較多，部分玻璃化4.壯苗培養(yǎng)選擇具有一對(duì)以上葉片的植株，以單株形式接入附加了不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類和濃度的MS、1/2MS、1/4MS培養(yǎng)基中。每種培養(yǎng)基接種植株20株，重復(fù)3次。培養(yǎng)30d后，發(fā)現(xiàn)永福報(bào)春苣苔的適宜壯苗培養(yǎng)基為1/2MS+0.1mg·L-1IBA+0.1g·L-1活性炭，植株無(wú)玻璃化，長(zhǎng)勢(shì)好。編號(hào)培養(yǎng)基IBA/mg·L-1活性炭/g·L-1不定芽數(shù)/株生根率/%玻璃化生長(zhǎng)情況S1MS0024.67±1.528a66.67±7.638e較多長(zhǎng)勢(shì)一般S2MS0.1026.00±1.732a76.67±7.638cde較多長(zhǎng)勢(shì)一般S3MS0.10.123.67±2.082a81.67±2.887cd無(wú)長(zhǎng)勢(shì)一般S41/2MS0016.67±0.577b75.00±8.660cde極少長(zhǎng)勢(shì)好S51/2MS0.1017.00±1.732b95.00±0.000ab極少長(zhǎng)勢(shì)好S61/2MS0.10.115.33±2.517b100.00±0.000a無(wú)長(zhǎng)勢(shì)好S71/4MS0014.67±2.309b71.67±2.887de極少長(zhǎng)勢(shì)差S81/4MS0.1016.00±2.646b83.33±2.887bcd極少長(zhǎng)勢(shì)差S91/4MS0.10.115.00±2.646b85.00±13.229bc無(wú)長(zhǎng)勢(shì)差5.生根培養(yǎng)將經(jīng)過(guò)壯苗培養(yǎng)的、具有2對(duì)以上葉片的植株以單株形式接入生根培養(yǎng)基中。每種培養(yǎng)基接種植株20株，重復(fù)3次。培養(yǎng)30d后，發(fā)現(xiàn)適宜的生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.3mg·L-1IBA+0.5g·L-1活性炭，生根率為100.00%，生根時(shí)間最短，根數(shù)最多，根長(zhǎng)合適，長(zhǎng)勢(shì)好。處理培養(yǎng)基IBA/mg·L-1活性炭/g·L-1生根率/%生根時(shí)間/d根數(shù)/條根長(zhǎng)/cm生長(zhǎng)情況D11/2MS0.10.1100.0027.00±1.000a5.57±0.577c3.23±0.282cd長(zhǎng)勢(shì)好D21/2MS0.20.1100.0025.33±0.577abc6.33±0.577bc2.43±0.306e長(zhǎng)勢(shì)好D31/2MS0.30.1100.0024.67±0.577abcd7.33±0.577abc2.93±0.058d長(zhǎng)勢(shì)好D41/2MS0.10.5100.0025.67±0.577ab7.33±0.577abc4.00±0.100a長(zhǎng)勢(shì)好D51/2MS0.20.5100.0023.00±0.000bcd8.00±1.000ab3.90±0.200ab長(zhǎng)勢(shì)好D61/2MS0.30.5100.0021.67±1.155d8.67±0.577a3.63±0.493abc長(zhǎng)勢(shì)好D71/2MS0.11.0100.0024.67±4.509abcd7.00±1.000abc3.43±0.231bc長(zhǎng)勢(shì)良D81/2MS0.21.0100.0022.00±1.732cd6.00±1.000c3.47±0.306bc長(zhǎng)勢(shì)良D91/2MS0.31.0100.0021.67±2.082d6.67±1.528bc4.03±0.058a長(zhǎng)勢(shì)良6.煉苗移栽將生長(zhǎng)健壯、生根良好、具有2對(duì)以上葉片的組培苗，移出培養(yǎng)室后揭蓋在溫室中煉苗7~10d。煉苗的環(huán)境條件為溫度26~30°C，光照強(qiáng)度62.5μmol·m-2·s-1，室內(nèi)空氣相對(duì)濕度沒(méi)有要求，因?yàn)榻M培苗仍然在組培瓶里，此時(shí)組培瓶的濕度較高，足以維持其良好生長(zhǎng)。將組培苗小心取出并洗凈培養(yǎng)基，用50%多菌靈可濕性粉劑1000倍溶液浸泡10~15min，取出后在陰涼處晾置10min，再移栽到裝有基質(zhì)（腐殖土和粗沙的體積比為2:1）的50孔穴盤中，并澆透定根水。15d后，成活率達(dá)100.00%。移栽的環(huán)境條件為：溫度控制在15~28°C，空氣相對(duì)濕度維持在70％~80％，光照強(qiáng)度為50~80μmol·m-2·s-1。五、主要工作過(guò)程標(biāo)準(zhǔn)制定項(xiàng)目計(jì)劃下達(dá)后，標(biāo)準(zhǔn)起草單位組織主要編寫(xiě)人員對(duì)《永福報(bào)春苣苔組培快繁技術(shù)規(guī)程》的總體技術(shù)要求進(jìn)行了討論，研究制定了標(biāo)準(zhǔn)工作方案、技術(shù)路線、主要研究方法，標(biāo)準(zhǔn)的具體格式，確定了標(biāo)準(zhǔn)的總體框架和制定原則，明確了標(biāo)準(zhǔn)制定的具體工作計(jì)劃和進(jìn)展。主要工作過(guò)程如下：1.前期研究2017年開(kāi)始對(duì)永福報(bào)春苣苔進(jìn)行組培快繁研究，以永福報(bào)春苣苔的葉片為外植體，開(kāi)展附加了不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基對(duì)不定芽誘導(dǎo)、增殖培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)、生根培養(yǎng)的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，篩選出各培養(yǎng)階段的適宜培養(yǎng)基，建立其離體快繁體系。結(jié)果表明：適宜的不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.25mg/L；不定芽的增殖培養(yǎng)基為MS+ZT1.0-3.0mg/L+IBA0.25mg/L；適宜的壯苗培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.1mg/L+活性炭0.1g/L；適宜的生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.3mg/L+活性炭0.5g/L，生根率為100.00%；采用腐殖土和粗沙（體積比）為2:1為移栽基質(zhì)，移栽成活率達(dá)100.00%。除永福報(bào)春苣苔以外，目前為止已開(kāi)展了60個(gè)原生種以及30個(gè)園藝種的報(bào)春苣苔屬組培快繁研究。通過(guò)開(kāi)展組培實(shí)驗(yàn)，積累了豐富的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，收集了大量的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，并形成了成熟完善的組培技術(shù)，發(fā)表永福報(bào)春苣苔的組培快繁技術(shù)論文1篇，發(fā)表其他報(bào)春苣苔屬植物的組培快繁論文6篇。同時(shí)該技術(shù)率先在本單位進(jìn)行了應(yīng)用，取得了良好的效果。此外，2017年已完成了2項(xiàng)苦苣苔科植物的廣西地方標(biāo)準(zhǔn)的編制并獲頒布實(shí)施：《重瓣大巖桐組培快繁技術(shù)規(guī)程》（DB45/T1587-2017）、《重瓣大巖桐盆花生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程》（DB45/T1586-2017）。大量的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以及兩項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)的頒布實(shí)施為永福報(bào)春苣苔組培快繁技術(shù)規(guī)程的制定奠定了良好的基礎(chǔ)。2.人員組織標(biāo)準(zhǔn)任務(wù)下達(dá)后，我們積極組織技術(shù)骨干成立標(biāo)準(zhǔn)編制工作小組，工作組成員具有較豐富的專業(yè)知識(shí)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，熟悉業(yè)務(wù)，了解標(biāo)準(zhǔn)化工作的相關(guān)規(guī)定并具有較強(qiáng)的文字表達(dá)能力。工作組成立后，制定了工作計(jì)劃，明確了內(nèi)部分工及進(jìn)度要求，責(zé)任落實(shí)到人，具體人員分工（見(jiàn)表1）。表1主要編制人員與責(zé)任分工姓名工作單位職稱編制分工閆海霞廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所副研究員主筆、規(guī)程編制陶大燕廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所助理研究員產(chǎn)技術(shù)實(shí)施，試驗(yàn)研究關(guān)世凱廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所助理研究員生產(chǎn)技術(shù)實(shí)施，試驗(yàn)研究周錦業(yè)廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所高級(jí)工程師總體協(xié)調(diào)，協(xié)助主筆宋倩廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所高級(jí)工程師資料收集整理羅述名廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所研究員技術(shù)指導(dǎo)、監(jiān)督3.文獻(xiàn)資料的收集、調(diào)研和分析為了制定好《永福報(bào)春苣苔組培快繁技術(shù)規(guī)程》，我們首先收集和查閱了永福報(bào)春苣苔以及組織培養(yǎng)等方面的相關(guān)材料，其中包括我國(guó)在2013年頒布的《NY/T2306-2013花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程》、2017年廣西頒布的、《重瓣大巖桐組培快繁技術(shù)規(guī)程》（DB45/T1587-2017），廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所閆海霞發(fā)表的《永福報(bào)春苣苔離體快繁體系的建立》等國(guó)家、地方標(biāo)準(zhǔn)及論文。通過(guò)對(duì)資料的廣泛收集、整理、調(diào)