SNT 1961.6-2013 出口食品過敏原成分檢測 第6部分：實時熒光PCR方法檢測胡桃成分_第1頁
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出口食品過敏原成分檢測第6部分：實時熒光PCR方法I 第6部分：實時熒光PCR方法SN/T1961的本部分規(guī)定了食品中過敏原胡桃成分的實時熒光PCR檢測方法。本部分適用于食品原料或加工食品中過敏原胡桃成分的定性檢測。本部分所規(guī)定方法的最低檢出限(LOD)為0.01%(質量分數)。GB/T27403實驗室質量控制規(guī)范食品分子生物學檢測也稱核桃屬胡桃科的胡桃屬，共包括12個種。這1p個種又被分為4大類，包括英國胡/核桃2均用無DNA酶污染的容器分裝。名稱序列內參照探針5'-CCTGAGAAACGGCTACCAT-3’5'-CGTGTCAGGATTGGGTAAT-3’5'-(FAM)-TGCGCGCCTGCTGCCTTCCT-(TAMRA)-3’真核生物.18SrRNA基因胡桃5’端引物胡桃3’端引物胡桃探針5'-CGCGCAGAGAAAGCAGAG-3’5'-GACTCATGTCTCGACCTAATGCT-3’5'-FAM-TTGTGCCTCTGTTGCTCCTC5.2十六烷基三甲基溴化銨(cetyltrithylammonium5.3三羥甲基氨基甲烷(tris(hydroxymethyl)aminomethane,Tris)。5.4乙二胺四乙酸二鈉(disodiumethylenediaminetetraaceticacid,Na5.1070%乙醇。5.13蛋白酶K溶液(20mg/mL)。5.141.2mol/LNaCl溶液。5.150.1×TE緩沖液(pH8.0):1mmol/LTris,0.1mm6.3實時熒光PCR儀。36.9pH計。7.1.1將樣品用組織研磨器研碎后稱取1g~2g樣品于15mL離心管中，加入5mLCTAB提取緩沖7.1.2以2000g離心10min或更長時間直至懸浮部分幾近澄清，小心轉移上清液1mL至新的空白顛倒混勻，室溫20℃~25℃,孵育60min。異丙醇，顛倒混勻，室溫20℃~25℃,孵育至少20min,以14500g離心至少10min。c=A?6o×N×50當濃度為10μg/mL～100pg/mL,Az?0～A2g。比值在1.7～1.9之間時，適宜于實時熒光PCR7.3實時熒光PCR檢測7.3.1實時熒光PCR反應體系7.3.2實時熒光PCR反應參數4c)如35.0<Ct值<40.0,則重復一次。如再次擴增后Ct值仍為<40.0,則判定被檢樣品陽性；5(資料性附錄)過敏原胡桃成分的基因擴增靶標參考序列cgcgcagagaagcagaggccggg

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