安徽省定遠育才實驗學(xué)校2025屆高三壓軸卷生物試卷考生請注意：1．答題前請將考場、試室號、座位號、考生號、姓名寫在試卷密封線內(nèi)，不得在試卷上作任何標記。2．第一部分選擇題每小題選出答案后，需將答案寫在試卷指定的括號內(nèi)，第二部分非選擇題答案寫在試卷題目指定的位置上。3．考生必須保證答題卡的整潔?？荚嚱Y(jié)束后，請將本試卷和答題卡一并交回。一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個選項符合題目要求）1．基因在表達過程中如有異常mRNA會被細胞分解，如圖是S基因的表達過程，則下列有關(guān)敘述正確的是（）A．異常mRNA的出現(xiàn)是基因突變的結(jié)果B．圖中所示的①為轉(zhuǎn)錄，②為翻譯過程C．圖中②過程使用的酶是反轉(zhuǎn)錄酶D．S基因中存在不能翻譯成多肽鏈的片段2．下列有關(guān)人體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)及其調(diào)節(jié)的敘述，正確的是（）A．癌胚抗原和甲胎蛋白會出現(xiàn)在正常人的內(nèi)環(huán)境中B．人手和腳上出現(xiàn)的“水泡”中的液體主要是細胞內(nèi)液C．人體的腦組織細胞內(nèi)液中O2與與CO2的比值大于組織液中的D．人體的血漿中不可能出現(xiàn)淀粉、蔗糖及果糖等物質(zhì)3．下列關(guān)于基因頻率、基因型頻率與生物進化的敘述正確的是（）A．因色盲患者中男性數(shù)量多于女性，所以男性群體中色盲的基因頻率大于女性群體B．—個種群中，控制一對相對性狀的基因型頻率改變說明物種在進化C．基因型Aa的個體逐代自交后代所形成的種群中，A基因的頻率大于a基因的頻率D．在一個種群中，控制一對相對性狀的各種基因頻率之和為14．細胞是多種元素和化合物構(gòu)成的生命系統(tǒng)，下列相關(guān)敘述，正確的是（）A．C、H、O、N等化學(xué)元素是構(gòu)成細胞中主要化合物的基礎(chǔ)，在細胞中含量豐富B．內(nèi)環(huán)境中發(fā)生的丙酮酸氧化分解給細胞提供能量，有利于生命活動的進行C．酶、激素、抗體和神經(jīng)遞質(zhì)等都是細胞中的微量高效物質(zhì)，作用后都立即被分解D．同一生物體內(nèi)不可能具有兩種無氧呼吸方式的一系列酶5．橘小實蠅為害多種水果和蔬菜。在治理蟲害時，農(nóng)業(yè)技術(shù)員先使用性引誘劑誘殺雄性成蟲，再釋放不育雄性成蟲，使其與田間雌蟲交配，產(chǎn)下不能孵化的卵，最后引入它的天敵——寄生蜂，進一步消滅橘小實蠅。下列相關(guān)分析，正確的是A．應(yīng)使用標志重捕法估算橘小實蠅的種群密度 B．使用性引誘劑不會破壞橘小實蠅的性別比例C．釋放不育雄性成蟲會降低橘小實蠅的出生率 D．引入的寄生蜂和橘小實蠅形成互利共生關(guān)系6．下列關(guān)于現(xiàn)代生物進化理論的說法，不正確的是（）A．環(huán)境適應(yīng)，種群基因頻率將不發(fā)生改變B．基因突變、基因重組和自然選擇可導(dǎo)致某大腸桿菌種群基因頻率發(fā)生變化C．生殖隔離是新物種形成的標志D．生物多樣性與生物之間的共同進化密切相關(guān)二、綜合題：本大題共4小題7．（9分）為探討妊娠期糖尿病患者與甲狀腺激素水平的關(guān)系，某醫(yī)院以收治的452例妊娠期糖尿病患者作為研究對象，與正常孕婦相比，檢測結(jié)果如下?；卮鹣铝袉栴}：檢測項目妊娠期糖尿病患者正常孕婦組甲狀腺激素（μg/L）4．732．24促甲狀腺激素（mg/mmol）3．984．62（l）甲狀腺激素的作用有__（答出2點即可）。（2）根據(jù)檢測結(jié)果推測，妊娠期糖尿病患者體內(nèi)的促甲狀腺激素釋放激素比正常孕婦組____（填“高”或“低”），原因是____。（3）臨床研究表明：大多妊娠期糖尿病患者體內(nèi)的甲狀腺激素分泌不足，導(dǎo)致胰島素對組織細胞的識別能力降低，從而影響組織細胞對葡萄糖的____。8．（10分）蘋果醋具有營養(yǎng)豐富，增強機體免疫力，護膚養(yǎng)肝等多種功效。以鮮蘋果汁為原料利用發(fā)酵瓶制作果酒和果醋的過程簡圖如圖1，請分析回答：（1）過程甲中使用的微生物是______，發(fā)酵溫度控制在18℃～25℃，經(jīng)過10～12天后，樣液中是否產(chǎn)生酒精，可以用______來檢驗。（2）利用鮮蘋果制作果酒的原理（寫化學(xué)反應(yīng)方程式）是______。（3）過程乙中使用的醋酸菌可以從食醋中分離純化獲得。圖3操作是分離純化過程中利用______法進行接種，在操作過程中應(yīng)注意的事項有下列哪幾項？______（填序號）。①每次劃線前和結(jié)束時都需要灼燒接種環(huán)；②灼燒接種環(huán)后，待其冷卻后再劃線；③第二次及以后的劃線，要從上一次劃線的末端劃線；④最后一次劃線不能和首次劃的線相接觸。（4）為了保持菌種的純凈，對于長期需要保存的菌種，可以采用______的方法。（5）某同學(xué)嘗試自己利用圖2裝置制果醋。制作過程中進氣口應(yīng)______；排氣口要通過一個長而彎曲的膠管與瓶身相連，這樣做的原因是______。9．（10分）我們?nèi)粘３缘拇竺字需F含量極低，科研人員通過基因工程等技術(shù)，培育出了鐵含量比普通大米高60%的轉(zhuǎn)基因水稻，改良了稻米的營養(yǎng)品質(zhì)。下圖為培育轉(zhuǎn)基因水稻過程示意圖，請分析回答。（1）重組Ti質(zhì)粒中，鐵結(jié)合蛋白基因作為______基因，潮霉素抗性基因作為______基因。（2）構(gòu)建重組Ti質(zhì)粒時，鐵結(jié)合蛋白基因應(yīng)插入到_______中，以便后續(xù)隨之整合到________。（3）將含有重組Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌與水稻愈傷組織共同培養(yǎng)時，通過培養(yǎng)基2的篩選培養(yǎng)___________，以獲得愈傷組織細胞；利用培養(yǎng)基3培養(yǎng)的目的是___________。（4）將基因工程生產(chǎn)的鐵結(jié)合蛋白與天然的鐵結(jié)合蛋白的功能活性進行比較，以確定轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的功能活性是否與天然產(chǎn)品相同，這屬于________水平的檢測。10．（10分）蜘蛛絲是自然界中機械性能最好的天然蛋白纖維，其強度高于制作防彈衣的凱夫拉纖維，有廣泛的應(yīng)用前景，但如何大量獲取蜘蛛絲纖維的問題一直未解決。近期，中國科學(xué)家利用基因工程技術(shù)成功的在家蠶絲腺細胞中大量表達蜘蛛絲蛋白。（1）在轉(zhuǎn)基因過程中，若利用圖所示質(zhì)粒構(gòu)建基因表達載體，需要用_____________酶來切割目的基因，該切割方法的優(yōu)點是_____________________________________________(答出一點即可)。（2）為獲取大量的蜘蛛絲基因，常采用_______________技術(shù)對該基因進行擴增。擴增蜘蛛絲基因前，需根據(jù)目的基因的核苷酸序列設(shè)計__________種引物。進行擴增時需先加熱至90～95℃，加入引物后冷卻至55~60℃，以上調(diào)控溫度操作的目的是____________________。（3）載體中的啟動子是____________酶的識別結(jié)合位點，以便于驅(qū)動遺傳信息的表達過程；而載體本身的擴增，需借助于載體上的_________________；載體上的標記基因的作用是_____________________________。（4）研究人員發(fā)現(xiàn)若將蛛絲蛋白31號位的色氨酸替換為酪氨酸，蛛絲韌性可提高50％，這項成果用到的生物工程技術(shù)為____________________________。11．（15分）有機農(nóng)藥苯磺隆是一種除草劑，長期使用會污染環(huán)境?？蒲腥藛T通過人工篩選獲得高效的苯磺隆降解菌，將其擴大培養(yǎng)后投入污染土壤中，可將土壤中的苯磺隆降解。請回答下列問題：（1）欲選擇性獲得能降解苯磺隆的降解菌，可在被有機農(nóng)藥苯磺隆污染的土壤中取樣，并在含有_______、________及水和無機鹽等的基本培養(yǎng)基上添加_______進行選擇培養(yǎng)。（2）若要測定培養(yǎng)液中選定菌種的菌體數(shù)，可在顯微鏡下用血細胞計數(shù)板直接計數(shù)，也可選用________方法統(tǒng)計活菌數(shù)目。（3）將篩選的苯磺隆降解菌固定在一定的空間內(nèi)定殖于土壤中能提高降解效率，固定苯橫隆降解菌的一般方法為包埋法，不使用化學(xué)結(jié)合法和物理吸附法的原因是__________。（4）研究人員從苯磺隆降解菌中分離出苯磺隆降解酶，分離該降解酶的常用方法有凝膠色譜法和__________。凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的原理是根據(jù)____________進行分離。

參考答案一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個選項符合題目要求）1、D【解析】由圖可以直接看出異常mRNA出現(xiàn)是對前體RNA剪切出現(xiàn)異常造成的，不是基因突變的結(jié)果，A錯誤；圖示②為對前體RNA剪切的過程，不需要反轉(zhuǎn)錄酶，BC錯誤；S基因轉(zhuǎn)錄形成的RNA前體需經(jīng)過剪切才能指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成，說明S基因中存在不能翻譯多肽的序列，D正確。2、A【解析】

內(nèi)環(huán)境也即細胞外液，包括血漿、淋巴和組織液；水腫是組織液增多，減少來，促進走，會消除水腫；O2與CO2過膜的方式是自由擴散?！驹斀狻緼.癌胚抗原和甲胎蛋白是機體合成的兩種糖蛋白，存在于人體血清等內(nèi)環(huán)境中，A正確；B.人手和腳上出現(xiàn)的“水泡”中的液體主要是組織液，B錯誤；C.人體的腦組織細胞內(nèi)液中O2與CO2的比值小于組織液中的才有利于氣體交換，C錯誤；D.果糖屬于單糖，人體的血漿中可能出現(xiàn)果糖，但不可能出現(xiàn)淀粉、蔗糖，D錯誤。故選A?！军c睛】明確內(nèi)環(huán)境的成分是解答本題的關(guān)鍵!3、D【解析】

1、基因頻率及基因型頻率：（1）在種群中一對等位基因的頻率之和等于1，基因型頻率之和也等于1；（2）一個等位基因的頻率=該等位基因純合子的頻率+雜合子的頻率。2、現(xiàn)代生物進化理論的基本觀點：種群是生物進化的基本單位，生物進化的實質(zhì)在于種群基因頻率的改變。突變和基因重組、自然選擇及隔離是物種形成過程的三個基本環(huán)節(jié)，通過它們的綜合作用，種群產(chǎn)生分化，最終導(dǎo)致新物種的形成。其中突變和基因重組產(chǎn)生生物進化的原材料，自然選擇使種群的基因頻率發(fā)生定向的改變并決定生物進化的方向，隔離是新物種形成的必要條件?！驹斀狻緼、男性患者的性染色體組型是XY，Y染色體上沒有色盲基因及其等位基因，因此男患者多于女患者，而非男性群體中色盲的基因頻率大于女性群體，男性群體中色盲的基因頻率與女性群體中色盲的基因頻率相等，A錯誤；B、物種形成的標志是產(chǎn)生生殖隔離，生物進化的實質(zhì)是種群基因頻率的改變，而不是基因型頻率的改變，因此控制一對相對性狀的基因型頻率改變不能說明物種在進化，B錯誤；C、基因型為Aa的個體自交，如果沒有突變、選擇、遷入和遷出等，基因頻率不會發(fā)生改變，C錯誤；D、由種群基因頻率的概念和計算方法可知，一個種群中，控制一對相對性狀的一對等位基因的頻率之和為1，D正確。故選D。4、A【解析】

1、激素是由內(nèi)分泌器官（或細胞）分泌對生命活動有調(diào)節(jié)作用的化學(xué)物質(zhì)，激素調(diào)節(jié)的三個特點：微量和高效；通過體液運輸；作用于靶器官、靶細胞。

2、酶是活細胞產(chǎn)生的具有催化作用的蛋白質(zhì)（或RNA），具有高效性、專一性等特點。

3、神經(jīng)遞質(zhì)由突觸前膜釋放后，作用于突觸后膜的神經(jīng)元，作用于相應(yīng)的靶細胞。

4、抗體的化學(xué)本質(zhì)為蛋白質(zhì)，主要分布在血清中。5、生命活動的主要承擔(dān)者是蛋白質(zhì)，其基本組成元素是C、H、O、N四種；脂質(zhì)包括脂肪、磷脂和固醇，脂肪和固醇組成元素為C、H、O，磷脂是細胞膜的主要成分，其組成元素為C、H、O、N、P；糖類只由C、H、O組成；核酸是遺傳信息的攜帶者，由C、H、O、N、P五種元素組成?！驹斀狻緼、由分析可知，C、H、O、N等化學(xué)元素是構(gòu)成細胞中主要化合物的基礎(chǔ)，在細胞中含量豐富，A正確；B、丙酮酸的氧化分解，在有氧存在時發(fā)生在線粒體中，在無氧時發(fā)生在細胞質(zhì)基質(zhì)中，B錯誤；C、激素一經(jīng)靶細胞接受并起作用后就被滅活了，神經(jīng)遞質(zhì)與突觸后膜上的特異性受體結(jié)合發(fā)生作用后立即被分解或被相應(yīng)的細胞回收，酶是生物催化劑，發(fā)揮催化作用后不被滅活，抗體和抗原特異性結(jié)合后可形成沉淀或細胞集團，進而被吞噬細胞吞噬消化，C錯誤；D、馬鈴薯塊莖無氧呼吸產(chǎn)乳酸，其植株的葉片無氧呼吸產(chǎn)物為酒精，D錯誤。故選A?！军c睛】本題考查學(xué)生對元素和化合物的理解，要求考生把握知識的內(nèi)在聯(lián)系，形成知識網(wǎng)絡(luò)，并結(jié)合題干信息進行推理、判斷。5、C【解析】

1、生物防治的方法：引入天敵；散播性引誘劑，干擾正常交尾；引入寄生生物，以毒攻毒。2、種群的特征：【詳解】橘小實蠅的幼蟲活動范圍有限，活動能力弱，應(yīng)使用樣方法估算橘小實蠅的種群密度，對于橘小實蠅的成蟲采用誘捕的方法調(diào)查種群密度，A錯誤；使用性引誘劑誘殺雄性成蟲，因此會破壞橘小實蠅的性別比例，B錯誤；根據(jù)題意，釋放不育雄性成蟲與田間雌蟲交配，產(chǎn)下不能孵化的卵，因此會降低橘小實蠅的出生率，C正確；根據(jù)題意，引入的寄生蜂和橘小實蠅形成寄生關(guān)系，D錯誤。6、A【解析】

現(xiàn)代生物進化理論的基本觀點：種群是生物進化的基本單位；生物進化的實質(zhì)在于種群基因頻率的改變；突變和基因重組、自然選擇及隔離是物種形成過程的三個基本環(huán)節(jié)，通過它們的綜合作用，種群產(chǎn)生分化，最終導(dǎo)致新物種的形成?！驹斀狻緼、影響種群基因頻率的因素有突變和基因重組、自然選擇等，因此若環(huán)境適應(yīng)，種群的基因頻率可能會發(fā)生改變，A錯誤；B、自然選擇、突變和基因重組（人為條件下大腸桿菌也可發(fā)生）都會導(dǎo)致種群基因頻率發(fā)生改變，B正確；C、出現(xiàn)生殖隔離是新物種形成的標志，C正確；D、共同進化是生物與生物之間、生物與無機環(huán)境之間相互影響、共同發(fā)展，生物共同進化形成生物多樣性，D正確。故選A?！军c睛】解答此題要求考生識記現(xiàn)代生物進化理論的主要內(nèi)容，能運用所學(xué)的知識準確判斷各選項。二、綜合題：本大題共4小題7、促進細胞代謝、增加產(chǎn)熱，促進生長發(fā)育，提高神經(jīng)系統(tǒng)的興奮性等高甲狀腺激素水平較低，通過負反饋調(diào)節(jié)對下丘腦的抑制作用減弱攝取、利用儲存【解析】

甲狀腺激素的分泌存在分級調(diào)節(jié)和反饋調(diào)節(jié)。下丘腦分泌促甲狀腺激素釋放激素，促使垂體分泌促甲狀腺激素，促甲狀腺激素隨血液運輸?shù)郊谞钕伲偈辜谞钕僭黾蛹谞钕偌に氐暮铣珊头置?。血液中甲狀腺激素含量增加到一定程度時，又反過來抑制下丘腦和垂體分泌相關(guān)激素，進而使甲狀腺激素分泌減少。分析表格數(shù)據(jù)可知，妊娠期糖尿病患者的甲狀腺激素水平低于正常孕婦組，但促甲狀腺激素水平高于正常孕婦組?！驹斀狻浚?）甲狀腺激素的作用有促進細胞代謝、增加產(chǎn)熱，促進生長發(fā)育，提高神經(jīng)系統(tǒng)的興奮性等。（2）妊娠期糖尿病患者體內(nèi)甲狀腺激素水平較低，通過負反饋調(diào)節(jié)對下丘腦的抑制作用減弱，故推測下丘腦分泌的促甲狀腺激素釋放激素比正常孕婦組高。（3）胰島素的作用是促進葡萄糖進入細胞氧化分解提供能量、合成糖原和轉(zhuǎn)化為非糖類物質(zhì)。臨床研究表明：大多妊娠期糖尿病患者體內(nèi)的甲狀腺激素分泌不足，導(dǎo)致胰島素對組織細胞的識別能力降低，從而影響組織細胞對葡萄糖的攝取、利用、儲存。【點睛】本題考查甲狀腺激素的作用、反饋調(diào)節(jié)過程以及胰島素的功能，關(guān)鍵是理解甲狀腺激素的反饋調(diào)節(jié)機制。8、酵母菌（酸性）重鉻酸鉀溶液C6H12O62C2H5OH（酒精）+2CO2+少量能量平板劃線①②③④甘油管藏充入空氣防止空氣中微生物的污染【解析】

據(jù)題文的描述和圖示分析可知：該題考查學(xué)生對果酒和果醋的制作、微生物的實驗室培養(yǎng)等相關(guān)知識的識記和理解能力，以及識圖分析能力?！驹斀狻?1)過程甲為果酒發(fā)酵，使用的微生物是酵母菌。橙色的重鉻酸甲溶液在酸性條件下與酒精發(fā)生化學(xué)反應(yīng)變成灰綠色，因此，樣液中是否產(chǎn)生酒精，可以用（酸性）重鉻酸鉀溶液來檢驗。(2)果酒發(fā)酵是利用酵母菌進行無氧呼吸產(chǎn)生酒精的原理，其化學(xué)反應(yīng)方程式如下：。(3)依圖3呈現(xiàn)的接種環(huán)可知：其接種微生物的操作方法為平板劃線法。在該操作過程中應(yīng)注意：①每次劃線前和結(jié)束時都需要灼燒接種環(huán)，以殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免污染培養(yǎng)物；②灼燒接種環(huán)后，待其冷卻后再劃線，以避免高溫導(dǎo)致菌種死亡；③第二次及以后的劃線，要從上一次劃線的末端劃線，以保證每次劃線菌種來自上次劃線末端；④最后一次劃線不能和首次劃的線相接觸，以達到得到單菌落（分離菌種）的目的。(4)對于需要長期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。(5)利用圖2裝置制果醋，因發(fā)揮作用的菌種——醋酸菌是一種好氧菌，所以制作過程中進氣口應(yīng)充入空氣。為了防止空氣中微生物的污染，排氣口要通過一個長而彎曲的膠管與瓶身相連?！军c睛】解答本題的關(guān)鍵是識記和理解果酒和果醋的制作原理、流程、注意事項及影響因素等相關(guān)基礎(chǔ)知識，掌握實驗室中微生物的純化培養(yǎng)的方法及保存等相關(guān)知識。在此基礎(chǔ)上，結(jié)合問題情境，從題意和圖示中提取有效信息進行相關(guān)問題的解答。9、目的標記Ti質(zhì)粒的T-DNA中水稻細胞染色體DNA中含有目的基因的水稻使含有目的基因的水稻愈傷組織細胞培養(yǎng)成水稻植株個體生物學(xué)【解析】

根據(jù)題意和圖示分析可知：重組Ti質(zhì)粒中鐵結(jié)合蛋白基因稱為目的基因，潮霉素抗性基因為標記基因；將重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入受體細胞的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；將開花后未成熟的胚進行植物組織培養(yǎng)，脫分化形成愈傷組織，作為受體細胞，最終培育形成轉(zhuǎn)基因水稻?！驹斀狻浚?）據(jù)分析可知，鐵結(jié)合蛋白基因是目的基因，潮霉素抗性基因是標記基因。（2）將目的基因?qū)胫参锛毎２捎棉r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，構(gòu)建重組Ti質(zhì)粒時，鐵結(jié)合蛋白基因應(yīng)插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA中，以便后續(xù)隨之整合到水稻細胞染色體DNA中。（3）質(zhì)粒上的標記基因為潮霉素抗性基因，因此通過培養(yǎng)基2的篩選培養(yǎng)含有目的基因的水稻，可以獲得含有重組質(zhì)粒的愈傷組織。利用培養(yǎng)基3培養(yǎng)的目的是使含有目的基因的水稻愈傷組織細胞培養(yǎng)成水稻植株。（4）將基因工程生產(chǎn)的鐵結(jié)合蛋白與天然的鐵結(jié)合蛋白的功能活性進行比較，以確定轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的功能活性是否與天然產(chǎn)品相同，這屬于在個體生物學(xué)水平上的檢測?！军c睛】本題考查基因工程中培育轉(zhuǎn)基因水稻的相關(guān)知識，意在考查學(xué)生理解的知識要點、獲取信息以及識圖分析能力和運用所學(xué)知識分析問題、解決問題的能力。10、XbaI和SacI防止目的基因自身環(huán)化、防止目的基因反向連接PCR2使DNA解鏈，然后使引物結(jié)合到互補DNA鏈上RNA聚合酶復(fù)制原點重組DNA的鑒別與選擇蛋白質(zhì)工程【解析】

1、基因工程的操作步驟包括：目的基因的獲取、基因表達載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)胧荏w細胞、目的基因的檢測與鑒定。其中基因表達載體的構(gòu)建是基因工程的核心步驟?；虮磉_載體的構(gòu)建：①過程：一般用同一種限制酶切割目的基因和運載體，再用DNA連接酶將目的基因和運載體連接形成重組DNA分子。②目的：使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在并且可以遺傳給下一代并表達和發(fā)揮作用。③基因表達載體的組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因。（1）啟動子在基因的首段，它是RNA聚合酶的結(jié)合位點，能控制著轉(zhuǎn)錄的開始；（2）終止子在基因的尾端，它控制著轉(zhuǎn)錄的結(jié)束；（3）標記基因便于目的基因的鑒定和篩選。2、PCR擴增技術(shù)：PCR由變性--退火--延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：（1）模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準備。（2）模板DNA與引物的退火（復(fù)性）：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結(jié)合。（3）引物的延伸：DNA模板--引物結(jié)合物在Taq酶的作用下，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復(fù)制鏈?！驹斀狻浚?）識圖分析可知，構(gòu)建基因表達載體時，目的基因需要插入到啟動子和終止子之間，圖中啟動子和終止子之間存在XbaI和SacI的酶切位點，因此需要用XbaI和SacI限制酶切割目的基因，以產(chǎn)生與質(zhì)粒相同的末端，相比用同一種酶進行酶切，用兩種酶切割可以防止目的基因自身環(huán)化或防止目的基因反向連接。（2）為獲取大量的蜘蛛絲基因，常采用PCR擴增技術(shù)擴增目的基因。利用PCR技術(shù)擴增蜘蛛絲基因前，需根據(jù)目的基因的核苷酸序列設(shè)計2種引物分別與2條模板鏈結(jié)合；進行PCR時需加熱至90~95℃然后冷卻至55~60