ICS65.150CCSB5215IDB1504/T1045—2024前言 32規(guī)范性引用文件 33術(shù)語和定義 34大銀魚產(chǎn)卵場的識別 44.1調(diào)查內(nèi)容 44.2調(diào)查方法 45產(chǎn)卵場適宜性評價(jià) 65.1評價(jià)內(nèi)容 65.2評價(jià)方法 65.3評價(jià)指標(biāo) 65.4產(chǎn)卵群體 75.5劃分權(quán)重 75.6單因子評價(jià) 75.7產(chǎn)卵場適宜性指數(shù)(HSI)計(jì)算 85.8產(chǎn)卵場適宜性評價(jià)與分級 85.9產(chǎn)卵場環(huán)境安全 96繁殖保護(hù)方法 96.1禁漁措施 96.2生境保護(hù)措施 96.3人工增殖放流 97監(jiān)測評估 9附錄A（規(guī)范性）漁獲物和環(huán)境DNA記錄表 附錄B（規(guī)范性）產(chǎn)卵場環(huán)境因子記錄表 11參考文獻(xiàn) DB1504/T1045—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由赤峰市農(nóng)牧技術(shù)推廣中心提出。本文件由赤峰市農(nóng)牧局歸口。本文件起草單位：赤峰市農(nóng)牧技術(shù)推廣中心、中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心。本文件主要起草人：王欣然、尤洋、楊子龍、周彥鋒、孫毅、黃國成、李延軍、韓潮遠(yuǎn)、周依帆、王利、朱向琦、張文明、梁智杰、車璐、尹繼偉、鄭佳航、靜柏青、董靜亞、沈喜東、郭世越、仝則乾、朱坤朗。3DB1504/T1045—2024大銀魚繁殖保護(hù)技術(shù)規(guī)范本文件規(guī)定了大銀魚產(chǎn)卵場的識別、評價(jià)、繁殖保護(hù)方法和監(jiān)測評估要求。本文件適用于湖泊和水庫大銀魚產(chǎn)卵場的評價(jià)、繁殖保護(hù)的技術(shù)管理。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB11607漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)HJ91.2地表水環(huán)境質(zhì)量監(jiān)測技術(shù)規(guī)范SC/T1057銀魚移植、增殖技術(shù)規(guī)范大銀魚移植、增殖技術(shù)SC/T9102.3漁業(yè)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測規(guī)范第3部分：淡水SC/T9402淡水浮游生物調(diào)查技術(shù)規(guī)范3術(shù)語和定義GB/T15919和SC/T9401界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1產(chǎn)卵場spawningground大銀魚集群產(chǎn)卵的場所。［來源：GB/T15919-2010，6.23，有修改］3.2環(huán)境DNA（e-DNA）調(diào)查法environmentalDNAsurevy按照規(guī)范方法采集產(chǎn)卵場中的水樣和泥樣，經(jīng)抽濾分離eDNA，采用大銀魚特異性引物的PCR進(jìn)行擴(kuò)增，測序分析環(huán)境中大銀魚的存在與否及標(biāo)定豐度的方法。3.3適宜性評價(jià)evaluationofsuitability構(gòu)建生物分布狀況與環(huán)境特征變量的關(guān)聯(lián)，進(jìn)而確定其生境適宜等級的評價(jià)方法。3.44DB1504/T1045—2024單位捕撈努力量漁獲量catchperunitofeffort(CPUE)在限定的時(shí)間內(nèi)，平均一個(gè)作業(yè)單位捕獲的重量或數(shù)量。［來源：GB/T15919-2010，7.29］3.5增殖放流proliferationandrelease通過將人工繁育的苗種放回江河、湖泊等自然水域，以增加其種群和個(gè)體數(shù)量，改善和優(yōu)化水域的群落結(jié)構(gòu)的活動。［來源：SC/T9401-2010，3.3，有修改］4大銀魚產(chǎn)卵場的識別4.1調(diào)查內(nèi)容4.1.1繁殖群體的數(shù)量與豐度使用刺網(wǎng)捕撈，記錄不同樣點(diǎn)的雌雄個(gè)體總數(shù)量，統(tǒng)計(jì)IV～V期成熟個(gè)體在總數(shù)量中的比例值。4.1.2性腺發(fā)育指標(biāo)包括記錄性腺發(fā)育情況和個(gè)體繁殖力情況。4.1.3e-DNA分析指標(biāo)不同樣點(diǎn)間的e-DNA濃度差異比對。4.2調(diào)查方法4.2.1樣線布設(shè)按下列要求進(jìn)行樣線布設(shè)：a）樣點(diǎn)布設(shè)區(qū)域應(yīng)沿湖灣、庫灣等典型生境類型區(qū)域；b）布設(shè)時(shí)間應(yīng)包括產(chǎn)卵、孵化、仔魚發(fā)生時(shí)期；c）布設(shè)方法應(yīng)沿岸線垂直設(shè)置樣線，每條樣線樣點(diǎn)間隔300m～500m，設(shè)置3～5個(gè)樣點(diǎn)，累計(jì)1km～3km。4.2.2刺網(wǎng)捕撈法4.2.2.1采樣點(diǎn)調(diào)查依照4.2.1設(shè)置采樣點(diǎn)，調(diào)查結(jié)果記錄在附錄A中表A.1。4.2.2.2捕撈對象大銀魚的繁殖個(gè)體。4.2.2.3捕撈時(shí)間5DB1504/T1045—202411月中下旬至1月下旬。4.2.2.4捕撈網(wǎng)具根據(jù)水庫情況及大銀魚規(guī)格選擇合適的專用銀魚刺網(wǎng)，網(wǎng)目1.6cm～2.0cm。4.2.2.5作業(yè)方法選擇大銀魚產(chǎn)卵區(qū)垂直敷設(shè)并固定刺網(wǎng)，使刺網(wǎng)懸掛水體中。翌日收網(wǎng)，手工摘除親魚。4.2.3魚獲數(shù)據(jù)4.2.3.1單位捕撈努力量漁獲量（CPUE）CPUE是由每個(gè)樣點(diǎn)的大銀魚繁殖個(gè)體總數(shù)量除以放置時(shí)間，刺網(wǎng)面積和刺網(wǎng)個(gè)數(shù)得到，并按公式（1）計(jì)算。式中：CPUE——單位捕撈努力量漁獲量;.......................................W——每個(gè)樣點(diǎn)捕撈的所有大銀魚重量，單位為千克（kgS——刺網(wǎng)面積，單位為平方米（m2T——下網(wǎng)放置時(shí)間，單位為小時(shí)（hN——每個(gè)樣點(diǎn)刺網(wǎng)個(gè)數(shù)，單位為個(gè)。4.2.3.2性腺發(fā)育等級目測法確定性腺成熟度，根據(jù)性腺不同發(fā)育階段的外觀形態(tài)特征，將性腺成熟度劃分為5期：a)卵巢的分期：1）I期：卵巢為透明細(xì)線狀，表面無血管或甚細(xì)弱,看不到卵粒;2）II期：卵巢多呈扁帶狀，有血管分布于卵巢上,卵粒中尚未沉積卵黃，肉眼尚看不清卵粒;3）III期：卵巢體積因卵粒生長而增大，卵巢血管發(fā)達(dá),肉眼可見積累卵黃的卵粒;4）IV期：卵巢中卵粒充滿卵黃，表面的血管十分發(fā)達(dá),擠壓腹部可流出少量卵粒;5）V期：為產(chǎn)卵期，卵巢已完全成熟，呈松軟狀；卵粒易從卵巢褶皺上脫落，提起親魚或輕壓腹部即有成熟卵從泄殖孔中流出。b)精巢的分期：1）I期：精巢為透明細(xì)線狀，表面無血管或甚細(xì)弱;2）II期：呈線狀或細(xì)帶狀腺體，半透明或不透明，表面血管不顯著;3）III期：呈肉紅色圓桿狀，擠壓魚的腹部或剪開精巢都沒有精液流出;4）IV期：呈乳白色，表面血管顯著，擠壓魚腹有白色精液流出，精液入水后可散;5）V期：為生殖期，精巢形態(tài)飽滿，月牙形，乳白色,擠壓腹部有精液流出。6DB1504/T1045—20244.2.4環(huán)境DNA（e-DNA)調(diào)查法按下列程序進(jìn)行采樣、處理：a）依照4.2.1設(shè)置采樣點(diǎn)，每個(gè)采樣點(diǎn)取e-DNA水樣和泥樣，每個(gè)樣點(diǎn)三個(gè)重復(fù)。采集方法為：采用消毒液清洗并用湖水潤洗后的容器（1L塑料瓶），取表中層水樣；使用10ml離心管，取采泥器抓取的底泥樣。樣本保存方法：底泥樣現(xiàn)場液氮保存，室內(nèi)轉(zhuǎn)存-80℃冰箱中。水樣使用孔徑為0.45μm的濾膜真空抽濾，收取濾膜放入凍存管中，置于-80℃冰箱中保存；b）PCR擴(kuò)增：使用魚類eDNA宏條形碼分析大銀魚引物L(fēng)CO1490（5-GGTCAACAAATCATAAAGATATTTTGG-3’)和HCO2198(5’-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3’)擴(kuò)增線粒體COI基因，擴(kuò)增序列長度約313bp。每個(gè)樣品進(jìn)行3次重復(fù)擴(kuò)增，并將同一樣品的擴(kuò)增產(chǎn)物混合，使用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物。所有陰性對照均無目的條帶，表明無外源魚類DNA污染；c）檢測與數(shù)據(jù)處理：將PCR擴(kuò)增后的96孔板放入QX200TM微滴式數(shù)字PCR儀的微滴分析器中，將QuantaSoft軟件設(shè)定為ABS檢測模式，儀器自動分析每個(gè)樣品每個(gè)微滴的FAM熒光信號，完成對數(shù)據(jù)的自動處理，進(jìn)而得到每微升樣本對應(yīng)的拷貝數(shù)；d）產(chǎn)卵場識別特征：水樣和泥樣中eDNA濃度均顯著高于其他點(diǎn)位的位置即為產(chǎn)卵場；e）調(diào)查結(jié)果記錄在附錄A中表A.1。5產(chǎn)卵場適宜性評價(jià)5.1評價(jià)內(nèi)容依據(jù)產(chǎn)卵場等級的劃分，對產(chǎn)卵場適宜性進(jìn)行評價(jià)定級，產(chǎn)卵場等級劃分應(yīng)符合表3的規(guī)定。5.2評價(jià)方法通過調(diào)查和收集與產(chǎn)卵場顯著相關(guān)的關(guān)鍵環(huán)境因子；層次分析法賦值每個(gè)因子的權(quán)重，計(jì)算其環(huán)境適宜標(biāo)準(zhǔn)值，計(jì)算方法按5.7計(jì)算。5.3評價(jià)指標(biāo)5.3.1水質(zhì)類型監(jiān)測調(diào)查繁殖前中后期的水深、水溫、濁度、高錳酸鹽指數(shù)、亞硝酸鹽和葉綠素a指標(biāo)，按照HJ91.2規(guī)定的檢測方法執(zhí)行，調(diào)查結(jié)果記錄在附錄B中表B.1。5.3.2底質(zhì)類型監(jiān)測調(diào)查產(chǎn)卵場底質(zhì)類型和組份，并與歷史狀況進(jìn)行對比。調(diào)查結(jié)果記錄在附錄B中表B.1。5.3.3水生生物類型監(jiān)測調(diào)查早期發(fā)育各階段的浮游動物生物量、浮游植物生物量，按照SC/T9402的規(guī)定測定。調(diào)查結(jié)果記錄在附錄B中表B.1。7DB1504/T1045—20245.4產(chǎn)卵群體5.4.1相對豐度值計(jì)算按照4.2.3.1的要求。5.4.2成熟度等級按照4.2.3.2的要求。5.5劃分權(quán)重產(chǎn)卵場各關(guān)鍵環(huán)境因子權(quán)重見表1。表1參數(shù)權(quán)重表km-℃葉綠素a5.6單因子評價(jià)單因子評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)值見表2。8DB1504/T1045—2024表2單因子評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)值＜110>15>15>90亞硝酸鹽(NO)>0.5>10>10表示一般適宜；[0.6,0.8)；[0.8,1表某個(gè)因子實(shí)測值大于等于x，小于y；(x,y)代表某個(gè)因子實(shí)測值大于x，小于y。5.7產(chǎn)卵場適宜性指數(shù)(HSI)計(jì)算產(chǎn)卵場適宜性指數(shù)的計(jì)算按下列公式（2）計(jì)算：HSI=k1×f(1)+k2×f(2)+…+kn×f(n)………（2）式中：HSI——產(chǎn)卵場適宜性指數(shù)；f(n)——第n個(gè)因子的適宜度，取值0～1，0為完全不適宜狀態(tài)，1為最適宜狀態(tài)，中間值表示物種對該因子的適宜程度；Kn——第n個(gè)因子的權(quán)重，總和為1。5.8產(chǎn)卵場適宜性評價(jià)與分級產(chǎn)卵場適宜性等級評價(jià)見表3。表3等級評價(jià)表產(chǎn)卵場適宜性評價(jià)指數(shù)在0.2～0.4之間，性腺Ⅴ期的個(gè)體占比0～50%。產(chǎn)卵場適宜性評價(jià)指數(shù)在0～0.2之間，無大銀魚性腺發(fā)育等級為Ⅴ期的個(gè)體。9DB1504/T1045—20245.9產(chǎn)卵場環(huán)境安全按下列方法判斷產(chǎn)卵場環(huán)境是否安全：——以純淡水靜置條件下受精卵孵化率為對照，如在產(chǎn)卵場實(shí)際水質(zhì)中孵化率有明顯下降的，為不安全；——產(chǎn)卵場的水質(zhì)監(jiān)測數(shù)據(jù)應(yīng)符合GB11607的規(guī)定，無超標(biāo)項(xiàng)為安全。6繁殖保護(hù)方法6.1禁漁措施在11月至翌年1月的大銀魚繁殖和孵化期間，在產(chǎn)卵場范圍內(nèi)不應(yīng)使用網(wǎng)眼小于3cm的網(wǎng)具。6.2生境保護(hù)措施保護(hù)產(chǎn)卵場內(nèi)的水草和底質(zhì)，通過生態(tài)調(diào)水維持2m～5m水深。6.3人工增殖放流6.3.1適用原則產(chǎn)卵場等級為“一般適宜”及以下的產(chǎn)卵場，應(yīng)適度實(shí)施增殖放流措施。6.3.2放流地點(diǎn)宜選擇冬季，光照充分、餌料生物更優(yōu)的淺岸水域。一般與產(chǎn)卵場區(qū)域重疊度較高。6.3.3受精卵投放受精卵的獲得及投放按照SC/T1057的規(guī)定執(zhí)行。6.3.4仔魚階段管理冬季水域的生物環(huán)境在全年中最為匱乏，適度使用生態(tài)制劑，可提高魚苗的存活率。生態(tài)制劑施用方法按照SC/T1057規(guī)定執(zhí)行。7監(jiān)測評估基于產(chǎn)卵場對大銀魚繁殖、種群規(guī)模維護(hù)的重要性，應(yīng)堅(jiān)持開展產(chǎn)卵場保護(hù)為目標(biāo)的監(jiān)測工作，根據(jù)監(jiān)測結(jié)果，動態(tài)評估產(chǎn)卵場的安全質(zhì)量與保護(hù)效果。對于未知的產(chǎn)卵場，需要進(jìn)行識別，識別確定產(chǎn)卵場后進(jìn)行生境適宜性評估，不適宜的場所采取對應(yīng)的繁殖保護(hù)措施。對于已知的產(chǎn)卵場，在繁殖期間按照本文件進(jìn)行監(jiān)測評估，按照SC/T9102.3的規(guī)定執(zhí)行。DB1504/T1045—2024（規(guī)范性）漁獲物和環(huán)境DNA記錄表漁獲物和環(huán)境DNA調(diào)查結(jié)果記錄表見表A.1。表A.1漁獲物和環(huán)境DNA記錄表水庫名稱：gg度編號DB1504/T1045—2024產(chǎn)卵場環(huán)境因子記錄表產(chǎn)卵場環(huán)境因子調(diào)查結(jié)果記錄表見表B.1。表B.1產(chǎn)卵場環(huán)境因子記錄表水庫名稱：