我國體外診斷試劑教材CMD《北京市體外診斷試劑生產實施細則》宣貫培訓教材2007－2－27CMD培訓介紹用目錄第一章前言第二章產品分類第三章體外診斷試劑產品簡介一、概念：二、體外診斷試劑的分類：三、常見的臨床檢測方法：四、試劑常用的檢測儀器：五、體外診斷試劑的生產過程特點和控制要求：第四章企業(yè)開辦條件一、人員要求二、生產環(huán)境要求三、生產設備和倉儲區(qū)要求四、質量檢驗五、文件和記錄第五章北京市體外診斷試劑生產實施細則的簡要說明總則二、質量管理體系文件與記錄三、組織機構、人員與質量職責四、設施、設備與生產環(huán)境控制五、設計開發(fā)、驗證與過程確認六、采購控制七、生產過程控制八、檢驗與質量控制九、不合格品控制與糾正和預防措施十、不良事件、質量事故報告十一、產品銷售和服務第六章檢查評定第七章參考標準第一章前言體外診斷試劑是可單獨或與儀器、器具、設備或系統(tǒng)組合使用，對人體樣本在體外進行檢查，用于對樣本中的某個量進行檢測或測量的體外診斷檢驗程序的化學、生物學或免疫學物質。包括試劑、試劑盒、試劑用品、校準（品）物、控制（品）物。體外診斷試劑已廣泛用于醫(yī)學科研和臨床檢驗，質量穩(wěn)定可靠的體外診斷試劑不僅為醫(yī)學科研和診治疾病提供快捷、準確的依據，也為疾病的預防和控制提供了技術資料。體外診斷試劑的品種和種類繁多，從臨床專業(yè)分類可分為：臨床血液學、體液檢驗類試劑、臨床化學類試劑、臨床免疫學、微生物學、細胞組織學、遺傳性疾病、人類基因檢測、腫瘤標記物、免疫組化與變態(tài)反應原類及生物芯片等；從性狀上可分為液體、凍干、培養(yǎng)基、試劑條、檢測板條等；以方法學分類有酶免、放免、熒光和化學發(fā)光、分子生物學、免疫組化、免疫細胞化學等；從檢測性能上可分為定性、半定量、定量；從檢測方法上可分為化學顯色法試劑、免疫比濁法試劑、酶法試劑、ELISA法試劑、膠體金法試劑、培養(yǎng)基類試劑、核抗原多肽抗體譜免印跡試劑、流式分析儀配套用試劑、化學發(fā)光免疫測定和聚合酶鏈反應（PCR）反應等；以臨床應用上分類有初篩、初篩后確證、診斷和療效觀察等。由于體外診斷試劑的品種和種類繁多，其用途及其生產工藝的異同，各國政府對其實行的管理模式不盡相同。國際上，包括WHO在內也沒有有關體外診斷試劑管理方面的指南性文件。為此，各國政府均根據本國的具體情況確定其管理模式。從歸口管理角度而言，或是按藥品管理，或是按醫(yī)療器械管理。美國對像乙肝、艾滋病等的診斷試劑由美國FDA生物制品局管理，即按藥品管理；其它大部分試劑按醫(yī)療器械管理；加拿大也與美國的管理模式相同；歐盟則均將體外診斷試劑按醫(yī)療器械管理。我國目前除對血源篩查的試劑抗-HIV、抗HCV、HBsAg、梅毒螺旋體抗體、ABO血型定型和生物制品的免疫試劑按藥品進行管理外，其他體外診斷試劑均按醫(yī)療器械管理。由于體外診斷試劑的品種繁多，無統(tǒng)一的產品技術標準要求，缺少相對應的參考方法和標準品，使不同的企業(yè)即使生產同一種試劑，其對產品的質量要求也不盡相同；同時，又由于生產規(guī)模、生產模式也不盡相同，生產工藝差別較大，甚至有的家庭作坊式企業(yè)也在生產體外診斷試劑，致使產品質量參差不齊；另外由于診斷試劑的生產投資小、見效快，使許多投資者紛紛進入此行業(yè)，致使在市場上形成不規(guī)范競爭現象，甚至競相壓價銷售，使得一些劣質產品也充斥市場。基于以上的一些實際情況，為確保體外診斷試劑產品質量，規(guī)范生產企業(yè)的質量管理體系，國家食品藥品監(jiān)督管理局逐步出臺體外診斷試劑監(jiān)管措施，并于2005年開始組織制定了《體外診斷試劑注冊管理辦法》（征求意見稿）以及配套的一系列技術法規(guī)（《體外診斷試劑生產企業(yè)實施細則》征求意見稿），將就研發(fā)、生產、質量管理方面的技術性事宜作出明確的要求，但到目前為止尚未發(fā)布。北京市的藥品監(jiān)督管理部門也對體外診斷試劑的生產企業(yè)采取了一系列監(jiān)管措施，但由于目前關于體外診斷試劑的相關法規(guī)不完善，無統(tǒng)一、可具操作性的體外診斷試劑生產和監(jiān)管的規(guī)范，而隨著體外診斷試劑市場的發(fā)展，這一矛盾越發(fā)突出，亟待解決。為了進一步明確北京地區(qū)體外診斷試劑的生產企業(yè)市場準入條件，規(guī)范體外診斷試劑生產企業(yè)的質量管理體系，加強體外診斷試劑監(jiān)管工作，提高監(jiān)管的有效性，我局于２００６年８月成立了由醫(yī)療器械處牽頭，北京市醫(yī)療器械審評中心、北京市醫(yī)療器械檢測中心、北京國醫(yī)械華光認證有限公司等單位成員組成的《北京市體外診斷試劑生產企業(yè)監(jiān)督檢查要點》的課題組，負責起草制定北京市的體外診斷試劑生產企業(yè)的開辦條件和質量管理體系生產實施細則。課題組成立后，對北京市的體外診斷試劑生產企業(yè)進行了調研。截止到2006年11月，北京市生產體外診斷試劑的廠家有62家，經統(tǒng)計調查反饋的43家企業(yè)信息顯示，生產II類試劑的生產企業(yè)約27家，約占調查企業(yè)的62%，II類企業(yè)中同時生產或單獨生產III類試劑的生產企業(yè)共約26家，約占60%。以生產體外診斷試劑中臨床血液、體液檢測試劑的生產廠家約16家、生化試劑約16家、免疫試劑約11家，其他種類產品（如基因芯片、流體式細胞試劑）約有3家；有16家和13家企業(yè)分別生產質控品和校準品。體外診斷試劑生產企業(yè)具備凈化車間條件的生產企業(yè)共約24家（臨床血液、體液檢測試劑企業(yè)有7家，生化試劑企業(yè)有7家，免疫試劑企業(yè)有10家約），約占反饋企業(yè)的56%；生產過程中具備制水能力的共32家（其中臨床血液、體液檢測試劑企業(yè)8家，生化試劑企業(yè)14家，免疫試劑企業(yè)10家），約占反饋企業(yè)的75%。生產企業(yè)的規(guī)模也不盡相同，企業(yè)建筑面積低于100平方米的有2家，大于1000平方米的有17家，大于10000平方米的有4家；企業(yè)員工數低于20人的有16家（包括新開辦企業(yè)），大于100人的有9家；2005年全年銷售額低于100萬元的有10家（含新開辦企業(yè)），超過500萬元的有3家，超過1000萬元的有13家，超過5000萬元的有3家。以分裝試劑為主要生產模式的企業(yè)集中于生化試劑企業(yè)。課題組依據我局制定檢查要點的要求，結合北京地區(qū)體外診斷試劑生產企業(yè)的實際、產品特點以及臨床應用情況，有計劃有步驟地制定實施細則。課題組在制定細則過程中，自８月以來共組織實地走訪4次，共調研醫(yī)院3家、企業(yè)4家，并組織專家座談5次，包括14家三級醫(yī)院、6家二級醫(yī)院、1家臨檢中心、1家檢測中心、12家體外診斷試劑生產企業(yè)的專家和代表，廣泛聽取了對體外診斷試劑的臨床應用、產品質量狀況、生產企業(yè)的質量控制和管理、企業(yè)開辦條件等方面的意見和建議，并查閱了１００多份有關不同種類的體外診斷試劑的產品標準和相關的國家、行業(yè)技術標準。在分析調研結果后，課題組認為當前北京市的體外診斷試劑的生產企業(yè)主要存在以下問題：主要的產品質量問題：目前國家尚無統(tǒng)一的相關產品的技術標準，不同的企業(yè)即使生產同一種試劑，其對產品的質量要求也不盡相同；如甘油三酯試劑盒的產品標準中不同的企業(yè)規(guī)定的性能指標不同或規(guī)定的同一個性能其指標不一致；臨床醫(yī)院專家對試劑的質量提出的主要問題是：線性范圍不能滿足臨床要求、靈敏、準確性不高、穩(wěn)定性不強、批間差大、假陽性、假陰性等明顯的質量問題和差異，有些企業(yè)的產品說明書不能滿足臨床使用要求，如缺少適用機型、抗干擾性、對使用者的風險、有效期和開封后的有效期等企業(yè)的生產規(guī)模差別較大：調研中，發(fā)現有的企業(yè)的員工數不到10人，建筑面積不到100平方米的，年銷售額也有不到10萬元的。生產規(guī)模較大的企業(yè)有員工上百人，占地面積上萬平米，年銷售額近億元的。出廠檢驗要求不一致：有的企業(yè)出廠檢驗僅有外觀，沒有其他項目的檢測要求。有的企業(yè)在接收準則中缺少對檢測儀器、試劑、校準品、質控品和操作程序等各因素的綜合考慮。 4、質量管理體系的規(guī)范性較差：有的企業(yè)實施了藥品管理的GMP質量管理體系，有的企業(yè)實施了ISO9001《質量管理體系》或ISO13485：2003《醫(yī)療器械質量管理體系用于法規(guī)的專用要求》的質量管理體系，但有些企業(yè)在實施上述要求過程中不規(guī)范。其主要存在以下問題：有些企業(yè)的生產工藝不穩(wěn)定，致使產品質量不穩(wěn)定，批間差大；有的企業(yè)的設計開發(fā)過程控制非常薄弱，特別是有些分裝企業(yè)缺乏設計開發(fā)的技術資料，在設計開發(fā)和產品實現過程中的關鍵過程缺少驗證和確認，不能提供驗證和確認報告，如產品的配方的驗證、產品有效期和開封后效期的驗證、過程中的清洗等；風險管理存在較大差距，沒有依據YY/T0316-2003《醫(yī)療器械風險管理對醫(yī)療器械的應用》中有關體外診斷試劑的專用要求作為指南。大部分企業(yè)體外診斷試劑產品的銷售均通過經銷商或代理商完成，但對其控制不力，致使產品在交付過程中的運輸、貯存等環(huán)節(jié)引發(fā)質量問題。其他方面，主要包括：Ａ、對產品的留樣處理不能滿足可追溯性的要求；Ｂ、在市場流通環(huán)節(jié)上也存在市場需要而因量小不注冊或因科研或突發(fā)事件急需的特種試劑需要使用，以致在各實驗室之間流通卻又違反當前法規(guī)的現象。本細則是在根據我局的意見，結合課題組在調研過程中臨床專家和企業(yè)代表從不同角度對企業(yè)的規(guī)模、人員的技術能力、制水設備、生產環(huán)境、產品的線性范圍、穩(wěn)定性（有效期和啟蓋后的有效期）、批間差、運輸貯存條件、生產批的確定、質控品、校準品的控制等企業(yè)開辦資格和質量控制具體方面的意見和建議，并結合北京市的體外診斷試劑生產企業(yè)的實際情況，參考國家食品藥品監(jiān)督局的《體外診斷試劑生產實施細則》（征求意見稿）內容、YY/T0287-2003《醫(yī)療器械質量管理體系用于法規(guī)的要求》標準和產品標準基礎上制定的。課題組起草編制了：《北京市體外診斷試劑生產企業(yè)的開辦條件》；《北京市體外診斷試劑生產企業(yè)的質量管理體系的監(jiān)督檢查要點》。 本細則在制定過程中有不妥之處，請指正。 北京市藥品監(jiān)督管理局課題組２００６年１２月產品分類：本細則根據北京市生產企業(yè)產品種類的實際情況，將臨床使用的試劑分為五類，具體為：1、臨床血液、體液檢驗類試劑；2、臨床化學類試劑；3、臨床免疫學試劑；4、微生物學試劑；5、其他試劑（包括細胞組織學、遺傳性疾病、人類基因檢測、腫瘤標記物、免疫組化與變態(tài)反應原類及生物芯片等）。體外診斷試劑產品簡介（書上、網上查來資料供參考）概念：標準參考品：由美國國立標準化和技術學院（NIST）公布用于臨床實驗室的標準參考品（SRM），目前已有44種，都有明確的編號。大都SRM都能溯源到原始參考品，至少其化學和物理特性都十分明確，并由權威機構公布。目前，臨床正在使用的標準品，應源自標準參考品。原始參考品：是一種可以直接稱量、檢測、配制成任何濃度溶液的物質，可用以定標，國際理論及應用聯(lián)合會認為其純度可過99.98%質控品：

根據不同分類方法質控品可分為多種。根據血清物理性狀可有凍干質控血清和液體質控血清；根據血清靶值的確定與否可有定值和非定值質控血清；根據血清基質的來源可分為人血清基質、動物血清基質、人造基質質控血清等校準品：用來校準、分級或調整一種測定方法的或儀器稱為校準品。它必須來自國家（國際）制品或參考標準品。質控品一般用于進行試劑的精密度的控制，而校準品則是對試劑的準確度進行控制的。有時二者是不能有效區(qū)分的。則把它即用來控制精密度，也用于作為控制準確度。（校準品都屬于制造商提供的檢測系統(tǒng)專用的：從來沒有任何系統(tǒng)、試劑通用的校準品。）準確度：待測物的測定值與其真值的一致性程度。準確度是由系統(tǒng)誤差所決定的。它是反映測定結果的真實性或準確性的尺度。因此，準確度是衡量系統(tǒng)誤差大小的客觀指標。精密度：一般通過重復性試驗計算測定結果間的一致性。分析方法的精密度是由偶然誤差決定的。精密度是各測定值與平均值之間的關系，與真實值沒有關系。8、終點法：將樣品與一種或多種試劑混合，讓其充分發(fā)生反應，當生化反應達到平衡狀態(tài)（即終點）時，測定產物的吸光度，并計算待測樣品的濃度。終點法也分一點終點法和二點終點法。二點終點法：也稱固定時間法，可分為單試劑和雙試劑兩種類型。一點終點法的代表性的有總蛋白、清蛋白]葡萄糖氧化酶等P288。二點終點法的常見使用的此方法為苦味酸法測定肌酐等。速率法：又稱連續(xù)檢測法、動態(tài)分析法或動力學方法，是一種測定底物的消耗或產物生成速度的化學方法。速率法是在反應的線性期進行連續(xù)檢測，計算出單位時間內的吸光度值。其具體方法有兩點速率法和多點速率法。速率法的靈敏度與特異性優(yōu)于終點法，但終點法比速率法的穩(wěn)定性高。干化學分析法：是指將液體檢測樣品直接加到為不同項目特定生產的干燥試劑條上，以被測樣品的水分作為溶劑引起特定的化學反應，從而進行化學分析的方法。免疫層析法(immunochromatography)是近幾年來國外興起的一種快速診斷技術，其原理是將特異的抗體先固定于硝酸纖維素膜的某一區(qū)帶，當該干燥的硝酸纖維素一端浸入樣品（尿液或血清）后，由于毛細管作用，樣品將沿著該膜向前移動，當移動至固定有抗體的區(qū)域時，樣品中相應的抗原即與該抗體發(fā)生特異性結合，若用免疫膠體金或免疫酶染色可使該區(qū)域顯示一定的顏色，從而實現特異性的免疫診斷。（干化學分析法中的一種）膠體金法：免疫法：是基于抗體與抗原或半抗原之間的高選擇性反應而建立起來的分析方法。它具有很高的選擇性和很低的檢測限，可以應用于測定各種抗原、半抗原或抗體。免疫法有放射免疫法、熒光免疫法、酶聯(lián)吸附免疫法、（三大經典免疫檢測技術）發(fā)光免疫法、電化學免疫法（伏安免疫法和免疫傳感器）等。其中以放射免疫法的靈敏度最高。但由于放射免疫法涉及到示蹤原子的處理，在使用上受到限制。放射免疫法：是利用同位素標記的與未標記的抗原，同抗體發(fā)生競爭性抑制反應的方法，研究機體對抗原物質反應的發(fā)生、發(fā)展和轉化規(guī)律。放射免疫法，是一種靈敏度高、較簡便的測量法，幾乎可測定生物體內任何物質，包括生物體本身分泌的各種激素，病人口服或注射的各種藥物，一些病毒抗原等，已廣泛用于臨床常規(guī)檢驗。如放免儀FT-646A、放免儀GC-1200等。熒光免疫法：免疫熒光技術就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體（或抗原）上，與其相應的抗原（或抗體）結合后，在熒光顯微鏡下呈現一種特異性熒光反應。發(fā)光免疫法：是將化學發(fā)光或生物發(fā)光體系與免疫反應相結合，用于檢測微量抗原或抗體的一種新型標記免疫測定技術。其檢測原理與放射免疫（RIA）和酶免疫（EIA）相似，不同之處是以發(fā)光物質代替放射性核素或酶作為標記物，并借助其自身的發(fā)光強度直接進行測定。酶聯(lián)吸附免疫法（ELISA）（注：ELISA是酶聯(lián)免疫吸附測定Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay的簡稱）：現已成為免疫學檢驗的主流應用技術之一。是將酶催化的放大作用與抗原抗體反應相結合的一種微量分析技術。酶標記抗體或抗原后，既不影響抗體或抗原的免疫反應，也不改變酶本身的催化活性，在相應的反應底物參與下，標記的酶水解底物而呈色，這種有色物質可以通過肉眼、光學顯微鏡或電子顯微鏡進行觀察，也可用分光光度計加以測定。呈色反應代表了反應體系中被標記的抗原（或抗體）的存在，從而證明存在相應的免疫學反應。分類：酶免疫組織化學技術和酶免疫測定技術，前者用于檢測組織切片或細胞涂片或細胞涂片中的抗原或抗體，后者用于檢測液體樣本中可溶性抗原或抗體。其后者又因抗原和抗體結合后是否需要和游離的酶標記物進行分離，又可分為均相法和異相法兩種類型。均相法不需對酶標記物進行分離而直接測定，而后者需對酶標記物進行分離后再進行測定。免疫濁度法：散射光濁度法：在5-96角的方向上測量散射光強度和被測溶液中微粒關系的方法。透射濁度法：在0度亦即在直射角度上測定透射光強度和被測溶液中微粒濃度關系的方法。（大多為終點法）聚合酶鏈免疫（PCR）：流式細胞分析法：是一種對處在液流中的細胞或其他生物微粒（如細菌）逐個進行多參數定量分析的技術。換言之，流式細胞儀是測量細胞本身與染色細胞標記物熒光強度的細胞分析儀，是單個細胞分析和分選基礎發(fā)展起來的對細胞或化學性質，如大小、內部結構、DNA、RNA、蛋白質、抗原等，進行快速測量并可分類收集的技術。流式細胞術迅速地應用于臨床，成為最先進的定量分析細胞的技術。生物芯片：

生物芯片是將生物活性物質如細胞、DNA、蛋白質等以微陣列的方式有序地排布在固相載體上，在人工限定的條件下進行生化反應，用儀器讀取生物信息的器件。生物芯片的載體一般可用硅片，也可以用玻璃、塑料或尼龍。生物活性物質相當微小，有的要以納米計，以點陣的方式排列在硅基上，很像計算機的芯片，所以科學家形象地將它取名為“生物芯片”。單克隆抗體：單克隆抗體是將B淋巴細胞與骨髓瘤細胞相融合后，由所產生的雜交瘤細胞經體外培養(yǎng)可迅速增殖成為無性細胞系（通常稱為克?。┎⒎置诿庖邔W均一的一種抗體。這種由雜交瘤細胞的單一克隆所產生的抗體即是單克隆抗體。體外診斷試劑的分類：臨床血液、體液檢驗類試劑：臨床化學類試劑臨床免疫學試劑微生物學試劑其他試劑：包括細胞組織學、遺傳性疾病、人類基因檢測、腫瘤標記物、免疫組化與變態(tài)反應原類及生物芯片等備注：*1.ABO血型定型試劑（盒）*2.乙型肝炎表面抗原（HBsAg）試劑（盒）*3.丙型肝炎病毒（HCV）抗體試劑（盒）*4.人類免疫缺陷病毒HIV（1＋2型）抗體試劑（盒）人類免疫缺陷病毒抗原/抗體診斷試劑（盒）*5.梅毒螺旋體抗體試劑（盒）放免試劑(盒)：（參見意見稿）以上五個品種和放免試劑，預期用途為血源篩查使用，按藥品受理和審評。常見的臨床檢測方法：常見臨床檢測方法包括化學發(fā)光和熒光免疫、放射免疫、電化學、電泳、色譜和質譜、血氣分析、流式分析、染色技術、以及聚合酶鏈免疫（PCR）、基因分析等。以下主要介紹現在臨床常用的生化、免疫試劑使用的幾種檢測方法。（一）光譜分析技術：是基于物質與輻射能作用時，測量由物質內部發(fā)生量子化的能級之間的躍遷而產生的發(fā)射、吸收或散射輻射的波長和強度進行分析的方法。其按作用對象不同可分為原子光譜法（測量微量元素）和分子光譜法（分光光度計），按獲得方式不同分為吸收光譜法和發(fā)射光譜法。1、吸收光譜技術：吸光光度法是根據溶液中物質對光選擇性吸收而進行分析的方法。實踐證明，無論物質有無顏色，當一定波長的光通過該物質的溶液時，根據物質對光的吸收程度（吸光度），求出該物質的含量，這種方法稱為吸光光度法。吸光光度法可分為比色法和分光光度法兩大類。比色法又可分為目視比色法和光電比色法。分光光度法與光電比色法的原理類似，都是通過光電池或光電管測量溶液透光度的強度進行分析的方法。兩者主要的區(qū)別在于獲得單色光的方式不同。光電比色法使用濾光片所獲得的是一般光譜帶，分光光度法使用棱鏡或光柵得到波長范圍較窄的單色光，根據光源的不同，分光光度法又可分為可見光分光光度法、紫外光分光光度法和紅外光分光光度法三種。①比色法是以生成有色化合物的顯色反應為基礎，通過比較或測量有色物質溶液顏色深度來確定待測組分含量的方法。選擇適當的顯色反應和控制好適宜的反應條件，是比色分析的關鍵。常用的比色法有兩種：目視比色法和光電比色法。當利用比色法測定溶液中某種化學成分時，通常需加入某種顯色劑，使其產生有色化合物，而且其顏色的深淺與待測化學成分的含量成正比，據此測定待測物的濃度。顯色試劑有：無機顯色劑：KSCN（測Fe、Mo、W等）、鉬酸胺（測P、As等）、過氧化氫：測Ti、V等有機顯色劑：螯合劑（磺基水楊酸、二苯硫腙、結晶紫等）、絡合物、雜多酸、有色溶液對光線有選擇性的吸收作用，不同物質由于其分子結構不同，對不同波長線的吸收能力也不同，因此，每種物質都具有其特異的吸收光譜。有些無色溶液，光雖對可見光無吸收作光光度技術吸收用，但所含物質可以吸收特定波長的紫外線或紅外線。②分光光度法紫外可見分光光度技術（UV-Vis）是根據物質的吸收光譜及光的吸收定律（郎伯—比耳定律），對物質進行定性、定量分析的一種方法。其具體是通常是把溶液的厚度固定不變，通過光密度值表現溶質的濃度。若用待測物的純品配制不同的濃度，測出其光密度，繪出濃度對光密度的工作曲線，便可以此查得未知樣品的濃度，還可依據下列公式對未知樣品的濃度通過計算得出。紫外可見分光光度計：可見光區(qū)：400-750nm；紫外光區(qū)：200-400nm；遠紫外區(qū)：10-200nm（真空紫外區(qū)）。光源一般使用在可見光區(qū)用鎢燈，其輻射波長為320-2500nm；紫外區(qū)一般用氫、氘燈作為光源，其輻射波長為185-400nm.鎢燈一般適用于分光分度計，而自動生化儀多用鹵鎢燈。應用情況：臨床上可用無機化學、有機化學和生物化學（酶法）反應在紫外或可見光區(qū)顯色而測定（幾乎所有的無機離子和有機物都可直接或間接用可見光及紫外光分光光度法進行定量測定和純度分析），具體可用于：無機化學反應：如氯、鈣、鎂、磷、鐵離子的檢測；有機化學反應：血清總蛋白、血清清蛋白、葡萄糖、膽固醇、肌酐等的檢測；生物化學反應：葡萄糖、膽固醇、尿素氮、總膽汗酸等的酶法檢測。使用分光分度計的常用檢測方法：單組分定量方法；多組分定量方法；雙波長法（等吸收點法）2、發(fā)射光譜技術:是指通過測量物質的發(fā)射光譜的波長和強度進行定性和定量分析的方法。 熒光分析法：某些物質被紫外光照射后，物質分子吸收了輻射而成為激發(fā)態(tài)分子，若在返回到基態(tài)時伴隨著光子的輻射，則發(fā)射出比入射光波長更長的熒光，測量熒光的強度進行分析的方法稱為熒光分析法。常用于無機物和有機物（糖類、胺類、DNA、酶與維生素等）的元素測定。常用的儀器有：化學發(fā)光免疫分析儀ECLTA-IIA、化學發(fā)光免疫分析儀GloRunner等常見熒光試劑：四氯熒光素（測定Ag）、桑色素（AL）、熒光素+AgNO3（CL）、溴化乙啶（核酸）、乙二胺（腎上腺素）、曙紅y（蛋白質）等。3、散射光譜技術：光散射是電磁波經過一個樣品時作用于微粒的結果。其分析法主要測定光線通過溶液混懸顆粒后的光吸收或光散射程度的一類定量方法。主要用于免疫檢測系統(tǒng)中，常稱為免疫濁度法。其測定方式可分為：透射濁度法、散射光濁度法（終點、散射）、粒子強化免疫濁度測定法（乳膠法或稱凝集反應）。=1\*GB3①應用：主要用于各種蛋白質、載脂蛋白、半抗原及微生物等的檢測。=2\*GB3②分類及原理：散射光譜技術分為：散射光濁度法、透射濁度法；（按形成復合物的速度測定可發(fā)為終點濁度法、速率濁度法）A、散射光濁度法（有終點法與速率法之分）：在5-96角的方向上測量散射光強度和被測溶液中微粒關系的方法。當復合物較小時“（<3X10nm）時，透射與散射相當。當復合物大于入射光波的1/20,形成不對稱的前向散射，此時散射光的量代表復合物的量。速率散射濁度法，是在某單位時間內形成大于3X10nm以上的復合物的量。當儀器測定到某一時間內形成的速度下降時，即出現速率峰，忘該峰值的高低，即代表抗原的量。B、透射濁度法：在0度亦即在直射角度上測定透射光強度和被測溶液中微粒濃度關系的方法。（大多為終點法）測量方式是測定因反射、散射或吸收后的衰減，讀數以吸收光單位（A）表示，這種A值反映了透射光和入射光的比率。一般在測定過程中形成復合物慢的反應可加入促聚劑，如4%聚乙二醇。比濁一般復合物大于19s方可比濁。測定的復合物一般為35-100nm間。透射濁度法因結果準確，所用儀器多為全自動，且能與其他光度（如酶測定）測定結合。其在許多自動化儀器上皆有測試程序，大多為終點法。=3\*GB3③儀器和試劑（包括質控品、校準品）透射濁度分析儀：A、分光光度儀B、自動生化分析儀 散射濁度分析儀：A、離心式濁度分析儀B、氮氦激光分析儀 速率法濁度分析儀：=4\*GB3④產品過程及控制要求：因是用于散射光比濁的試劑，應在樣品制備過程中，防止能產生散射光的物質，如灰塵等。內部質控時需注意，應用合適的校正材料制備劑量-反應曲線。其曲線形狀取決于抗血清和促聚劑的濃度選擇，也與所用免疫濁度法類型、校正方法及校正材料的質量有關。制備和選取合適的質控材料，進行室內質控是必要的。濁度的中心問題是抗體的質量，關注抗體的原料采購及控制情況。（二）干化學分析法：是指建立在某些特殊固相支持物上的檢測分析技術，通常將測定某些項目所需的全部或部分試劑固定在具有一定結構的載體上，通過滴加液態(tài)樣品溶解載體上的試劑，并與樣品中的待測成分發(fā)生反應，在支持物的局部區(qū)域產生信號變化，再通過檢測以獲取等測物的濃度。干化學分析方法具有速度快、檢測靈敏度和準確度較高的特點，并可采用儀器進行檢測。結構可分為：雙層膜法、多層膜法（如膠體金、尿試紙等）等。應用：尿試紙、血糖、生化、免疫（如早早孕試紙）檢測項目等；檢測方法：=1\*GB3①免疫膠體金分析技術：應用：尿糖試紙、血糖、生化檢測項目：組成：多為五層膜；原理：是將抗原或抗體先固定于固體支持物如硝酸纖維素上，在與樣品（尿液或血液）中的特異性的抗體或抗原結合后，再與膠體金標記的第二抗體結合，在固定有抗原或抗體的特定區(qū)域顯色，從而實現對被測抗體或抗原進行特異性檢測，屬于定性或半定量分析。分類：常有免疫層析和斑點免疫金滲濾分析法3、干化學分析儀：干式尿液分析儀、干式血糖分析儀、干式血氨分析儀（日本I-READER?）、自動干式電解質分析儀（東亞SYSMEXFDC-800、上海瑞麥HDP-99新型干式電解質分析儀）、干式生化分析儀（強生、京都、羅氏公司：京都：SPOTCHEM?SP-4430全自動干式急診生化分析儀，其檢測項目達22個、羅氏公司Reflotron?Plus及Reflotron?sprint,可檢測17項、強生公司推出的VITROS-250、950等干式生化系統(tǒng)，最多可檢測50個項目）試劑常用的檢測儀器：紫外分光光度計：2450、島津UR450等血細胞分析儀：如SysmexXE-2100、Abbott-3700全自動分析儀等半自動生化儀：ZS-3、MICRLAB、PUS-2018、威圖300、CB171、6124、BT-224、GF-D200等等全自動生化儀：貝克曼beckman的synchronCX系列、LX系列；奧林巴斯olympus的AU400、600、640、1000、2700、5400；日立HITACHI7020、7060、7080、7170、7180、7189、7600；雅培Abbott的AxSYM、AEROSET系列；日本東芝40、德國A5等等全自動生化儀。酶標儀(配套洗板機)：酶標儀MK-3、酶標儀LABMK3、酶免檢測儀GE-ZS（通用公司）、全自動酶標儀（伯樂680、國產）、酶聯(lián)免疫檢測儀DG5031（國產）等全自動免疫分析儀：AxSYM、Luminex?100等干化學分析儀：干式尿液分析儀、干式血糖分析儀、干式血氨分析儀（日本I-READER?）、自動干式電解質分析儀等。體外診斷試劑的生產過程特點和控制要求：（一）、血液、體液檢驗試劑：1、用于血液分析儀的清洗液、稀釋液（即等滲電解質溶液）、溶血劑等生產流程：檢測檢測領料配料（投料、化料）攪拌過濾罐裝包裝、標識入庫制水2、過程特點及控制：在溶血劑的配制中，有涉及氰化鉀的配料成分，要關注其采購、供方、使用、保管的控制情況關注對純水的配制、使用要求。C、溶血劑的貯存環(huán)境3、使用儀器：顯微鏡、血細胞分析儀、尿液全自動分析儀等4、檢測方法：鏡檢、血細胞分析儀、尿液全自動分析儀（二）、生化試劑；1、生產流程：液體試劑的一般生產流程：工藝用水標識檢驗稱量配制分裝壓蓋貼標、裝盒入庫檢測留樣 凍干試劑的一般生產流程： 檢測檢驗過篩稱量配制凍干、分裝壓蓋、封膜貼標、包裝入庫凍干試劑的生產有液體試劑進行干粉生產，也有干粉直接配制的。過程特點及控制：基本按細則要求，除非有特殊原材料的，關注其控制情況（包括采購、貯存、使用等）3、使用儀器：分光光度計、半、全自動生化儀等4、檢測方法：比色法、終點法、速率法等（三）免疫試劑：基本同生化試劑（四）微生物檢驗試劑：1、培養(yǎng)基制作工藝流程（如營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基等）：冷卻至50度左右冷卻至50度左右添加輔料配制溶解調PH分裝濕熱滅菌添加輔料傾注冷卻包裝入庫 檢驗（質控菌株）注：“冷卻至50度左右”工序，可因不同需要而不必冷卻至50度，而直接冷卻至室溫至傾注，如制作血液增菌培養(yǎng)基。注：“添加輔料”這一過程是根據不同的培養(yǎng)基而加入不同的輔料，不需的就不用加入，如營養(yǎng)、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基等，也有加入脫纖維羊血等輔料的，例如制作血瓊脂培養(yǎng)基添加脫纖維羊血、制作GC、XV瓊脂培養(yǎng)基添加抗生素和輔酶。2、生產過程特點及控制：生產過程中實施濕熱滅菌為其生產微生物培養(yǎng)基的過程特點，關注濕熱滅菌的符合性和有效性；添加的中間原料，關注原料的特點，如脫纖維羊血的來源、采集等控制；檢驗其成品的性能符合性使用的質控菌株（有衛(wèi)生行業(yè)標準WS/T232-2002《商業(yè)性微生物培養(yǎng)基質量檢驗規(guī)程》），關注其采購來源、傳種（代）管理、貯存情況（至少低于-50度貯存，低于-70以上可無限期保存）、使用情況、工作環(huán)境要求和防護（如生物安全柜）等。培養(yǎng)基的潔凈環(huán)境要求至少10萬級以上。3、使用儀器：顯微鏡、染色、分光光度計、半、全自動生化儀、免疫分析儀等4、檢測方法：鏡檢、比色法、分析儀的終點法、速率法、免疫分析法等（五）干化學分析法：1、試紙生產流程（以尿試紙為例）：原料加入純水調合雙面膠PVC加入干燥劑 浸漬干燥裁切復合分裝裝瓶標識包裝濾紙檢驗檢驗=1\*GB3①生產過程特點及控制：關注對特殊原料（如抗原、單克隆抗體等）的采購控制；包括對工藝用水的要求；關注對浸漬干燥等過程的確認；關注對環(huán)境的控制（干燥）；浸漬容器的清場控制；留樣、抽樣的符合性。=2\*GB3②使用儀器：干化學法分析儀（尿液全自動干化學分析儀等）=3\*GB3③檢測方法：目測、干化學法分析儀2、膠體金產品生產流程：（五層膜構成）處理聚酯膜 制備金標點金標檢驗檢驗 配液點膜組裝大卡切割內外包裝入庫 貼膜 處理樣品墊 濾紙 不干膠=1\*GB3①生產過程特點及控制：膠體金制備使用的還原劑氯金酸易潮解，應干燥、避光保存，注意其貯存條件；膠體金的原料中涉及單克隆抗體，關注其采購來源及控制情況；用于制備膠體金的蒸餾水應是雙蒸餾水或者是高質量的去離子水<0.2μs/cm。制備膠體金的玻璃容器必須是絕對清潔的，關注其清場的確認情況；制備環(huán)境要求在30萬級中的潔凈間里進行；（要求制備環(huán)境中的塵粒要盡量減少，否則實驗的結果將缺乏重復性。）干化學試紙的生產過程必須嚴格控制室內的濕度，一般要求其相對濕度：<40%.膠體金試紙的貯存要求干燥和避光。=2\*GB3②使用儀器：干化學分析儀=3\*GB3③檢測方法：目測、終點、速率等企業(yè)開辦條件一人員要求1從事生產、技術和質量管理的部門負責人應具有醫(yī)學檢驗、臨床醫(yī)學或藥學等相關專業(yè)的大專（或相當于大專以上）學歷，并熟悉本部門業(yè)務，有生產、技術和質量管理的實踐經驗。生產管理部門與質量管理部門負責人不得互相兼任。2具有醫(yī)療器械質量管理體系內審員證書的內審員不少于兩名。3相關專業(yè)中級以上職稱或者大專以上學歷的專職技術人員不少于兩名。二生產環(huán)境要求1體外診斷試劑應在潔凈環(huán)境或受控環(huán)境條件下生產。2酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑、免疫熒光試劑、免疫發(fā)光試劑、聚合酶鏈反應（PCR）試劑、干化學法試劑、培養(yǎng)基、校準品與質控品等產品生產應在10萬級潔凈車間進行；3膠體金類產品、酶類、抗原、抗體和其他活性類組分的配制及分裝應在30萬級潔凈車間進行；4有潔凈等級要求的車間，應當提供生產環(huán)境第三方檢測報告。三生產設備和倉儲區(qū)要求1生產液體試劑的企業(yè)應配備制水設備，制水設備應滿足工藝用水的要求并通過驗證。企業(yè)應配備符合工藝要求的生產設備，并建立設備臺帳。保存設備檔案。3倉儲區(qū)應與生產規(guī)模相適應，各類物資分類存放。四質量檢驗體外診斷試劑生產企業(yè)應設立產品質量檢驗部門，明確質量職責。質量檢驗部門應有專職檢驗人員并配備與產品標準相適應的檢驗設備、校準品、質控品。五文件和記錄

1質量手冊、質量方針、質量目標。2生產企業(yè)應至少建立、實施、保持以下程序文件：1文件控制程序；2記錄控制程序；3管理職責；4設計和驗證控制程序；5采購控制程序；6生產過程控制程序；7檢驗控制程序；8產品標識和可追溯性控制程序；9生產作業(yè)環(huán)境和產品清潔控制程序10數據統(tǒng)計與分析控制程序；11內部審核控制程序；12管理評審控制程序；13不合格品控制程序；14糾正和預防措施控制程序；15用戶反饋與售后服務控制程序；16質量事故與不良事件報告控制程序。3生產企業(yè)應至少建立、實施保持以下基本規(guī)程和記錄：1廠房、設施、設備的驗證、使用、維護、保養(yǎng)等管理制度和記錄；2環(huán)境、廠房、設備、人員等衛(wèi)生管理制度和記錄；3菌種、細胞株、試驗動物、血清等物料的保管、使用、儲存等管理制度和記錄；4安全防護規(guī)定和記錄；（見X.X條）5倉儲與運輸管理制度和記錄；6采購與供方評估管理制度和記錄；7工藝流程圖、工藝標準操作規(guī)程、8各級物料檢驗標準操作規(guī)程；9批生產、批包裝、批檢驗記錄；10試樣管理制度及記錄；11工藝用水規(guī)程和記錄；12批號管理制度及記錄；13標識管理制度14校準品/質控品管理規(guī)程及記錄；15檢測儀器管理及計量器具周期檢定制度和記錄；16留樣管理制度及記錄；17內審和管理評審記錄；18不合格品評審和處理記錄；19物料退庫和報廢、緊急情況處理等制度和記錄；20用戶反饋與處理規(guī)程及記錄；21環(huán)境保護及無害化處理制度；22產品退貨和召回的管理制度；23人員管理、培訓規(guī)程與記錄；第五章北京市體外診斷試劑生產實施細則的簡要說明說明：文件內容與國藥局二○○六年五月《體外診斷試劑生產實施細則》（征求意見稿）大體一致，只是個別條款在征求專家和企業(yè)意見基礎上做了調整，如膠體金類產品(做金、噴膜)應在30萬級潔凈車間進行；（國家局文件膠體金類產品是在10萬級環(huán)境）國藥局要求生產環(huán)境沒有空氣凈化要求的體外診斷試劑產品，應人流物流分開。（計劃刪減）說明書要求中增加了開封后有效期的內容對校準品和質控品的性能進行復驗，多數企業(yè)認為沒有必要？主要因為定值方法不易重復。改為對貯存條件變化時監(jiān)控要求2．文件結構按YY/T0287－2003的順序編排一、總則二、質量管理體系文件與記錄2.1質量手冊2.2體系文件（16個文件）2.3文件與記錄的控制（23個規(guī)程和記錄）三、組織機構、人員與質量職責3.1組織機構3.2人員要求（從事生產、技術和質量管理的部門負責人應具有醫(yī)學檢驗、臨床醫(yī)學或藥學等相關專業(yè)的大專（或相當于大專以上）學歷，并熟悉本部門業(yè)務，有相關產品的生產、技術和質量管理的實踐經驗。專職檢驗員應具有專業(yè)知識背景或相關從業(yè)經驗，并且考核合格后方可上崗。對從事生物活性、高毒性、強傳染性、強致敏性等有特殊要求的產品生產和質量檢驗的人員是否進行登記并保存相關記錄。企業(yè)應有至少一名醫(yī)療器械內審員；三類企業(yè)必須有二名內審員。直接接觸物料和產品的操作人員每年至少應體檢一次，）3.3管理評審和內部質量審核四、設施、設備與生產環(huán)境控制4.1廠址、廠區(qū)4.2生產廠房（企業(yè)應明確空氣凈化等級和環(huán)境控制要求）。a酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑、免疫熒光試劑、免疫發(fā)光試劑、聚合酶鏈反應（PCR）試劑、干化學法試劑、培養(yǎng)基、校準品與質控品等產品生產應在10萬級潔凈車間進行。b膠體金類產品、酶類、抗原、抗體和其他活性類組分的配制及分裝應在30萬級潔凈車間進行c除上述體外診斷試劑產品外，其它的均應在受控環(huán)境條件下進行。4.3潔凈廠房：生產激素類試劑組分、操作放射性物質的潔凈室（區(qū)）應采用獨立的專用的空氣凈化系統(tǒng)，且凈化空氣不得循環(huán)使用。強毒微生物操作區(qū)、芽胞菌制品操作區(qū)應與相鄰區(qū)域保持相對負壓，配備獨立的空氣凈化系統(tǒng)，排出的空氣不得循環(huán)使用。4.4非潔凈等級廠房要求（生產環(huán)境沒有空氣凈化要求的體外診斷試劑產品）：應有防塵、通風、以及防蠅、蚊、蟑螂、鼠和防異物混入等措施。人員進入生產車間前應有換鞋、穿戴工作服帽、洗手、消毒等設施。生產場地的地面應便于清潔，墻、頂部應平整、光滑，無顆粒物脫落。操作臺是否光滑、平整、無縫隙，便于清洗、消毒，不應使用木質或油漆臺面。應對生產車間的溫濕度進行控制。4.5特殊產品環(huán)境（9種情況）4.6倉儲區(qū)要求：對各類物料的倉儲環(huán)境及控制應符合規(guī)定的儲存要求，并定期監(jiān)測。物料應按照先進先出的原則運行。應明確規(guī)定中間品的儲存時間和條件。已被取樣的包裝應有取樣標記。4.7生產設備（與試劑直