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DB34DB34/T3642—2020雞滑液囊支原體LAMP快速檢測(cè)技術(shù)規(guī)程TechnicalRegulationsofLAMPAssayforRapidDetectionofMycoplasmaSynoviae2020-06-22發(fā)布2020-07-22實(shí)施安徽省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I1MS(MycoplasmaSynoviae):雞滑液LAMP(Loop-mediatedIsothermalAmplificationAssay環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增4.5高壓蒸汽滅菌鍋25.320%十二烷基硫酸鈉(SDS)溶8.0)0.4mL,20%十二烷基硫酸鈉(SDS)溶液(pH7.2)5mL,5mol/L氯化鈉4mL,滅菌雙蒸水按照GenBank上公布的雞滑液囊支原體(MS)EF-TU基因序列(登錄號(hào)CP011096),應(yīng)用——F3:5'-CACAAATGGATGGTGCT——B3:5'-TACTGCGTCACCTTCA——FLP:5'-CGTGAACACATTCTTCTT無菌采集咽喉拭子,關(guān)節(jié)囊腫和胸部囊腫的內(nèi)部炎性分泌物,放入盛有3制備的樣品在2℃~8℃條件下保存應(yīng)不超過24h,如需長(zhǎng)期保存應(yīng)置-70℃以下,應(yīng)避免反復(fù)凍8.1.2每管加入待檢樣品(已研磨好的被檢樣品上清,陽性對(duì)照樣品和陰性對(duì)照樣品)100取出離心管,室溫融化,4℃,12000rpm離心15min。8.1.5棄上清,沿離心管開口方向管壁緩緩滴入1mL-28.1.6取出離心管,用50μL滅菌雙蒸從BstDNAPolymerase試劑盒中取出相應(yīng)的試劑,同時(shí)取出MSLAMP引物和雙蒸水。設(shè)所需PCR的檢測(cè)總數(shù)為n,其中n為被檢樣品、陽性對(duì)照與陰性對(duì)照之和,每個(gè)樣本測(cè)111124將8.2.2中離心后的PCR管編號(hào),放入65℃水浴鍋內(nèi)30~60min,之后置80℃溫育20min
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