血液分析儀及其臨床應(yīng)用

hematologyanalyzerandclinicalapplication重點(diǎn):1、血液分析儀測(cè)定的原理、方法2、血液分析儀各參數(shù)臨床意義血液分析儀自動(dòng)血液分析儀（automatedhematologyanalyzer,AHA)，早年稱血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（bloodcellcounter)是目前國(guó)內(nèi)外臨床檢驗(yàn)最常用的篩檢儀器之一。1947年發(fā)明了利用電感應(yīng)區(qū)檢測(cè)顆粒大小和數(shù)目的庫(kù)爾特原理1953年，制造出世界上第一臺(tái)顆粒粒度分析儀，成為顆粒計(jì)數(shù)經(jīng)典方法1958年，庫(kù)爾特公司成立創(chuàng)辦庫(kù)爾特基金，熱心社會(huì)公益事業(yè)。03040201Coulter庫(kù)爾特（美國(guó)通用電氣公司員工）在上海工作時(shí)所拍照庫(kù)爾特與李俊的差別:社會(huì)價(jià)值觀的差別日照香爐生紫煙，疑似熊貓?jiān)跓恪?6年毒王“熊貓燒香”電腦病毒。病毒原始制作者25歲的網(wǎng)絡(luò)天才李俊。正確社會(huì)價(jià)值觀:敬業(yè)、愛(ài)心、責(zé)任感01血常規(guī)檢驗(yàn)多參數(shù)化02多功能合成擴(kuò)展03檢測(cè)速度的提高04方法的改進(jìn)和進(jìn)展05應(yīng)用的方便性血細(xì)胞分析儀近年來(lái)的發(fā)展變化檢測(cè)原理01電學(xué)02光學(xué)03電阻抗法04激光散射法05射頻電導(dǎo)法06分光光度法07P9308一血液分析儀檢測(cè)原理白細(xì)胞分類功能。擴(kuò)展功能。全血細(xì)胞計(jì)數(shù)功能。血液分析儀功能：2庫(kù)爾特原理圖電極和稀釋液構(gòu)成電流回路細(xì)胞通過(guò)小孔電極感應(yīng)電阻變化，將其轉(zhuǎn)換成脈沖脈沖的數(shù)量代表細(xì)胞數(shù)量脈沖大小反映細(xì)胞體積大小。脈沖檢測(cè)器電阻抗法原理（庫(kù)爾特原理）庫(kù)爾特原理利用電阻抗法測(cè)量細(xì)胞的數(shù)量和體積。血細(xì)胞是電的不良導(dǎo)體，當(dāng)一個(gè)細(xì)胞通過(guò)計(jì)數(shù)小孔時(shí)，會(huì)導(dǎo)致小孔兩端電阻的變化，將其轉(zhuǎn)化成脈沖，感應(yīng)器通過(guò)檢測(cè)脈沖的數(shù)量及大小，從而計(jì)算出通過(guò)小孔的細(xì)胞數(shù)量及體積。細(xì)胞體積越大，脈沖振幅越高；細(xì)胞數(shù)量越多，脈沖數(shù)量也越多。信號(hào)接收器 各種微粒通過(guò)檢測(cè)小孔產(chǎn)生電阻抗脈沖信號(hào)的檢測(cè)源。01放大器 將血細(xì)胞微弱脈沖信號(hào)放大以觸發(fā)電路系統(tǒng)。02閾值調(diào)節(jié)器 調(diào)節(jié)能區(qū)分不同群細(xì)胞合適的信號(hào)電平。03電阻抗法儀器的主要組成包括：3電阻抗法儀器的主要組成123甄別器 去除非參考電平的各種假信號(hào)以提高計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。整形器 將不一致的脈沖波形信號(hào)調(diào)整為標(biāo)準(zhǔn)的波形后觸發(fā)計(jì)數(shù)電路系統(tǒng)。計(jì)數(shù)系統(tǒng)將整形后的血細(xì)胞脈沖信號(hào)顯示為不同類群的細(xì)胞數(shù)。123二、激光散射法激光散射法應(yīng)用了流式細(xì)胞術(shù)(flowcytometry,FCM)檢測(cè)原理。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)原理：細(xì)胞通過(guò)激光束被照射時(shí)，產(chǎn)生與細(xì)胞特征相應(yīng)的各種角度的散射光。對(duì)經(jīng)信號(hào)檢測(cè)器接收的散射光信息進(jìn)行綜合分析，即可準(zhǔn)確區(qū)分正常類型的細(xì)胞。P94表3-13124低角度散射光（前向散射光）：反映細(xì)胞的數(shù)量和表面體積大小。高角度散射光（側(cè)向散射光）：反映細(xì)胞的內(nèi)部顆粒、細(xì)胞核等復(fù)雜性。P94激光散射法在區(qū)別體積相同而類型不同的細(xì)胞特征時(shí)，比電阻抗法分群更加準(zhǔn)確。故激光散射法已成為現(xiàn)代五分類血液分析儀的主要檢測(cè)原理之一。流式細(xì)胞儀在設(shè)計(jì)上采用了許多獨(dú)特的技術(shù)，比如液流系統(tǒng)、光路系統(tǒng)、信號(hào)測(cè)量和細(xì)胞分選方面都有自己的技術(shù)特點(diǎn)。鞘流原理流式細(xì)胞儀的技術(shù)特點(diǎn)雷諾系數(shù)ReRe＝dρν/ηd:管子的直徑ρ：液體的密度ν：液體的流速η：液體的粘滯系數(shù)Re<2300，液流處于穩(wěn)流狀態(tài)Re>2300，液流處于湍流狀態(tài)外面包被有高速流動(dòng)的鞘液，實(shí)現(xiàn)標(biāo)本與鞘液穩(wěn)定的同軸流動(dòng)狀態(tài)。同時(shí)利用液流聚焦原理，使標(biāo)本流直徑變小，通常只有10～20μm，避免細(xì)胞多個(gè)重疊進(jìn)入檢測(cè)區(qū)。通常把標(biāo)本流的流速控制在10m/s以內(nèi)，就能保持標(biāo)本流處于穩(wěn)流狀態(tài)。激光散射法系統(tǒng)基本組成光源 氣體（氦－氖）激光或固體（半導(dǎo)體）激光（單色光）；鎢光源（多色光）。鞘流 維持顆粒于液流中央，順序、單個(gè)、恒速向前流動(dòng)，即流體動(dòng)力學(xué)聚焦。1201細(xì)胞懸液 被檢測(cè)細(xì)胞（顆粒）的懸液，由氣壓導(dǎo)入流動(dòng)池。光檢測(cè)器 接受來(lái)自各種角度的散射光或吸收光信號(hào)，并轉(zhuǎn)換成相應(yīng)特征的電信號(hào)02三、射頻電導(dǎo)法

射頻（radiofrequency,RF)指射頻電流，是每秒變化大于10000次的高頻交流電磁波。高頻電流能通過(guò)細(xì)胞壁。用高頻電磁探針滲入細(xì)胞膜脂質(zhì)可測(cè)定細(xì)胞的導(dǎo)電性，提供細(xì)胞內(nèi)部化學(xué)成分、細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)、顆粒成分等特征信息。P94分析儀檢測(cè)Hb的原理：被稀釋的血液加入溶血?jiǎng)┖?，紅細(xì)胞溶解，釋放血紅蛋白，后者與溶血?jiǎng)┙Y(jié)合形成Hb衍生物，在特定波長(zhǎng)（530～550nm）下比色，吸光度的變化與液體中Hb含量成比例。01P9602四、分光光度法血紅蛋白血紅蛋白衍生物吸光度Hb濃度λ＝540nm溶血?jiǎng)?/p>

血液分析儀檢測(cè)參數(shù)原理

白細(xì)胞系列參數(shù)檢測(cè)原理160fl以上90～160f135—90f1根據(jù)電阻抗的原理，不同體積白細(xì)胞(35-450)fL產(chǎn)生脈沖大小的明顯差異而區(qū)分相應(yīng)的三群細(xì)胞：（一）電阻抗法儀器將體積為35～450fL的血細(xì)胞，分為256個(gè)通道（channel）。每個(gè)通道：1.64fl。根據(jù)細(xì)胞大小，分別置于不同的通道中，顯示血細(xì)胞體積分布直方圖(Histogram)。1經(jīng)溶血素處理脫水后，血細(xì)胞體積大小發(fā)生了變化！??！2白細(xì)胞通透性改變，胞質(zhì)滲出→胞膜緊緊裹在核或存在顆粒周?chē)?第一群（35～90fl）小細(xì)胞區(qū)：淋巴細(xì)胞（體積最小）。4第二群（90～160fl）單個(gè)核細(xì)胞區(qū)，（中間細(xì)胞）：?jiǎn)魏思?xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、原始、幼稚細(xì)胞、異常細(xì)胞等。5第三群（160fl以上）大細(xì)胞區(qū)：嗜中性粒細(xì)胞（體積最大）。1.分群2.白細(xì)胞分布直方圖3590160300400450(fl)三分群血液分析儀正常白細(xì)胞分類模式圖（直方圖）血細(xì)胞直方圖1血細(xì)胞直方圖概念：在細(xì)胞通過(guò)小孔計(jì)數(shù)時(shí)，感應(yīng)器收集脈沖的大小及數(shù)量，轉(zhuǎn)換為相應(yīng)的細(xì)胞體積和數(shù)量，并在坐標(biāo)上表示出來(lái)。坐標(biāo)的橫軸(x)代表體積

(FL)，縱軸(Y)代表相對(duì)數(shù)量，將各點(diǎn)用光滑的曲線相連，就是直方圖。即直方圖是可以表示出細(xì)胞群體體積分布情況的圖形。P106激光與細(xì)胞化學(xué)法容量、電導(dǎo)、光散射（VCS）法電阻抗與射頻法多角度偏振光散射法（二）光散射法白細(xì)胞分類體積、電導(dǎo)和光散射法（volume,conductivity,lightscatter,VCS)

VCS電阻抗技術(shù)細(xì)胞大小和內(nèi)部結(jié)構(gòu)細(xì)胞內(nèi)的顆粒性、核分葉性和細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)P96技術(shù)。應(yīng)用電阻抗原理測(cè)量細(xì)胞體積(Volume，V)01檢測(cè)的原理是：根據(jù)細(xì)胞壁能產(chǎn)生高頻電流的性能，采用高頻電磁探針，測(cè)量細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，即以細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的比例、細(xì)胞內(nèi)顆粒的大小和密度，來(lái)辨別體積相同、但性質(zhì)不同的兩個(gè)細(xì)胞群體，如淋巴細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞。應(yīng)用電導(dǎo)性（ConductivityC）技術(shù)。02VCS法原理01應(yīng)用光散射(Lightscatter，S)技術(shù)。02原理是：來(lái)自激光源的單色光直接掃描03進(jìn)入計(jì)數(shù)敏感區(qū)的每一個(gè)細(xì)胞，根據(jù)細(xì)04胞產(chǎn)生不同角度的散射光(10°一70°)，05可提供細(xì)胞形態(tài)、核結(jié)構(gòu)等光散射信息，06并能鑒別細(xì)胞顆粒的構(gòu)型和質(zhì)量，光散07射可區(qū)別粒細(xì)胞(中性粒細(xì)胞、嗜堿性08粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞)的類型。VCS法原理體積電導(dǎo)光散射P97圖VCS技術(shù)的代表機(jī)型Coulter公司的STKS型、MAXM型以及Gen.s型五分類血液分析儀2.多角度偏振光散射法（MAPSS)（1）白細(xì)胞計(jì)數(shù)用含DNA染料碘化丙啶試劑可破壞有核紅細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，只留下細(xì)胞核，裸核易于染色。染料對(duì)有活性的白細(xì)胞只有極小滲透性或無(wú)滲透性，故不出現(xiàn)細(xì)胞核染色。從而鑒別有核紅細(xì)胞和活性白細(xì)胞，計(jì)算活性白細(xì)胞比率。P990°,前向散射光：細(xì)胞大小、數(shù)量7°，側(cè)向散射光：細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)及核染色質(zhì)的復(fù)雜性MAPSS90°，垂直角度散射光：細(xì)胞內(nèi)部顆粒及分葉狀況90°D，垂直角度去偏振散射 光，鑒別E與N（2）白細(xì)胞分群MAPSS法可鑒別白細(xì)胞亞群、異常細(xì)胞類型，白細(xì)胞分類不受有核紅細(xì)胞干擾物質(zhì)影響。成熟紅細(xì)胞系列參數(shù)檢測(cè)原理電阻抗法紅細(xì)胞檢測(cè)原理

電阻抗法檢測(cè)紅細(xì)胞要注意白細(xì)胞增高干擾：稀釋血液中含有白細(xì)胞，當(dāng)血液進(jìn)入紅細(xì)胞檢測(cè)通道時(shí)，紅細(xì)胞檢測(cè)的各項(xiàng)參數(shù)中均含有白細(xì)胞因素。正常時(shí)，血液紅細(xì)胞與白細(xì)胞的比例約為500：1～750：l，因此，白細(xì)胞因素可忽略不計(jì)。當(dāng)病理情況下，如白血病時(shí)，白細(xì)胞數(shù)明顯增高，同時(shí)又伴有貧血時(shí)，使所得紅細(xì)胞參數(shù)可產(chǎn)生明顯誤差。紅細(xì)胞體積分布直方圖P108在36-360fl范圍內(nèi)分析紅細(xì)胞，正常紅細(xì)胞主要分布在50-200fl。正常直方圖上可見(jiàn)兩個(gè)細(xì)胞群體：50-125fl區(qū)域有一個(gè)幾乎兩側(cè)對(duì)稱、較狹窄的正態(tài)分布曲線；主峰右側(cè)約在125-200fl區(qū)域的細(xì)胞，為大紅細(xì)胞和網(wǎng)織紅細(xì)胞。光散射法紅細(xì)胞、血紅蛋白檢測(cè)原理01.低角度(2°～3°)：測(cè)量紅細(xì)胞體積。02.高角度(5°～15°)：測(cè)定紅細(xì)胞血紅蛋白濃度。03.（二）流式細(xì)胞術(shù)光散射法2、紅細(xì)胞散點(diǎn)圖是紅細(xì)胞體積與血紅蛋白濃度二維散點(diǎn)圖，反映光散射與細(xì)胞體積和血紅蛋白濃度之間的相互關(guān)系，能準(zhǔn)確區(qū)分小紅細(xì)胞等異常。線性體積/血紅蛋白濃度（V/HC)散點(diǎn)圖分為9個(gè)區(qū)。P108分光光度法血紅蛋白測(cè)定原理有關(guān)溶血?jiǎng)㊣CSH（internationalcouncilforstandardizationinhaematology國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)）推薦的氰化高鐵血紅蛋白法：最大吸收峰在540nm。試劑反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)，5分鐘，不適合全自動(dòng)儀器。另外，氰化血紅蛋白（CN-HB）：試劑成分氰化鉀（劇毒）。非氰化溶血?jiǎng)篐ICH-HB吸收光譜相似。避免試劑對(duì)檢驗(yàn)人員的潛在危害和對(duì)環(huán)境的污染10血小板檢測(cè)原理根據(jù)電阻抗法，血小板隨紅細(xì)胞在一個(gè)系統(tǒng)中進(jìn)行檢測(cè)，在紅細(xì)胞／血小板計(jì)數(shù)池中計(jì)數(shù)2fl～30fl的顆粒。102030(fl)血細(xì)胞分析儀的類型對(duì)白細(xì)胞分析程度二分群三分群五分類自動(dòng)化程度：半自動(dòng)儀器須手工稀釋標(biāo)本全自動(dòng)儀器可直接用抗凝血進(jìn)樣215檢測(cè)速度60～80個(gè)/h,可連續(xù)吸取樣本兩種溶血素，即白細(xì)胞溶血素和紅細(xì)胞溶血素SLS-Hb法（無(wú)毒）有質(zhì)控資料及標(biāo)本檢測(cè)資料貯存等軟件程序。4自動(dòng)化程度高,有自動(dòng)報(bào)警系統(tǒng)。3儀器線性范圍寬、重復(fù)性好、準(zhǔn)確性高、變異范圍小儀器性能全自動(dòng)三分群血細(xì)胞分析儀WBC；N#;N;L#;L;MID#;MID;RBC;Hb;HCT;MCV;MCH;MCHC;RDW-SD;RDW-CV;PLT;PDW;MPV;P-LCR;PCT檢測(cè)項(xiàng)目P102表代表儀器：CD-1700、CoulterONYX血細(xì)胞分析儀等。儀器性能全自動(dòng)五分類血細(xì)胞分析儀速度快，每小時(shí)110～150個(gè)標(biāo)本。具有檢測(cè)有核紅細(xì)胞的功能。專用幼稚細(xì)胞檢測(cè)通道和試劑。多種分類技術(shù)的使用使白細(xì)胞分類更加精確，達(dá)到最低分類鏡檢率。強(qiáng)大的網(wǎng)絡(luò)功能及完善的數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)，可開(kāi)展遠(yuǎn)程診斷，遠(yuǎn)程維護(hù)和質(zhì)控提供軟件支持。高效、自動(dòng)的標(biāo)本資料管理及強(qiáng)大的工作平臺(tái)。無(wú)錯(cuò)進(jìn)樣管理，包括穿刺進(jìn)樣，條碼識(shí)別和雙重樣本完整性探測(cè)器。檢測(cè)項(xiàng)目M;M#;E#;E;B;B#;未成熟白細(xì)胞NRBC;RET;IPF代表儀器SF-3000血細(xì)胞分析儀、EXCELTM22血細(xì)胞分析儀等。儀器類型和特點(diǎn)01儀器性能的評(píng)價(jià)02影響直方圖變化的因素03儀器方法學(xué)評(píng)價(jià)儀器類型和特點(diǎn)單純電阻抗法三分群血液分析儀特點(diǎn)檢測(cè)參數(shù)：約20項(xiàng)左右。白細(xì)胞分類：只能對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行三分群。12345報(bào)警功能：以文字和(或)圖標(biāo)提示異常檢測(cè)結(jié)果的信息。直方圖：3種直方圖。（一）儀器類型和特點(diǎn)（一）儀器類型和特點(diǎn)

2.綜合光學(xué)和電學(xué)等技術(shù)血液分析儀特點(diǎn)(1)檢測(cè)參數(shù)：約20至40項(xiàng)左右(2)白細(xì)胞分類：能對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行五分類。(3)直方圖和散點(diǎn)圖：3種直方圖和散點(diǎn)圖。(4)報(bào)警功能：以文字和(或)圖標(biāo)顯示異常檢測(cè)結(jié)果的信息。注意：各類型血液分析儀不具備識(shí)別異常細(xì)胞形態(tài)的能力，故不能完全代替鏡檢。（二）儀器性能的評(píng)價(jià)ICSH公布的對(duì)血液分析儀評(píng)價(jià)方案：

1可比性2準(zhǔn)確性3總重復(fù)性4精密度5線性范圍P116儀器性能的評(píng)價(jià)的基本概念準(zhǔn)確度(accuracy)和精密度(precision)準(zhǔn)確度是指測(cè)定值和真值之間的密切程度，準(zhǔn)確度只能用參考物來(lái)核對(duì)，參加室間質(zhì)量評(píng)價(jià)是另一種確認(rèn)準(zhǔn)確度的好方法。精密度指結(jié)果的重復(fù)性，由標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)來(lái)衡量。重復(fù)n次（最好31次）。計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。關(guān)于準(zhǔn)確度和精密度的注意點(diǎn)質(zhì)量是檢驗(yàn)工作的生命線，首先應(yīng)保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度在可接受范圍內(nèi)。結(jié)果可以重復(fù)稱為精密，但可以高度不準(zhǔn)確。精密度可以觀察到波動(dòng)，如更換試劑時(shí)，可由質(zhì)控圖反映出結(jié)果的波動(dòng)情況。標(biāo)準(zhǔn)物、參考物1標(biāo)準(zhǔn)物是一種化學(xué)物質(zhì)或物理材料，具有唯一的指定值，是代表國(guó)際或國(guó)家的參考標(biāo)準(zhǔn)。國(guó)際參考標(biāo)準(zhǔn)是國(guó)際組織(如WHO或

ICSH)決定的，可用于國(guó)家參考物或校準(zhǔn)物的控制，由于其生產(chǎn)量有限，不可能在常規(guī)工作中使用。2參考物是一種物質(zhì)(如參考血漿)或材料

(如參考濾光片)，符合國(guó)家或國(guó)際參考標(biāo)準(zhǔn)，可用于保證常規(guī)檢測(cè)工作的準(zhǔn)確性。質(zhì)控物、校準(zhǔn)物校準(zhǔn)物是一種物質(zhì)或材料，符合標(biāo)準(zhǔn)物的性能，適用于校準(zhǔn)儀器或調(diào)整測(cè)量值，以獲得準(zhǔn)確結(jié)果。質(zhì)控物是一種物質(zhì)(如質(zhì)控血漿)，適用于核查常規(guī)檢驗(yàn)的精密度。它必須和病人標(biāo)本同樣分析，也適用于核查結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)候，質(zhì)控物和校準(zhǔn)物一樣能用于檢查結(jié)果的準(zhǔn)確度，但必須能提供和校準(zhǔn)物同等的性能資料。評(píng)價(jià)儀器測(cè)定值與稀釋倍數(shù)是否呈01比例關(guān)系，可求出儀器的最佳線性范圍。02線性范圍檢測(cè)參數(shù)臨床意義三種直方圖的臨床應(yīng)用紅細(xì)胞參數(shù)白細(xì)胞參數(shù)血小板參數(shù)P120五臨床應(yīng)用為臨床提供直觀的檢驗(yàn)結(jié)果。為檢驗(yàn)人員監(jiān)控儀器工作狀態(tài)及檢測(cè)01結(jié)果提供了直觀的圖形。02P10703細(xì)胞直方圖作用正常血小板直方圖異常血小板直方圖峰右移左右側(cè)起點(diǎn)較高異常血小板直方圖LOGO右側(cè)呈脫尾狀峰左移直方圖的臨床應(yīng)用紅細(xì)胞直方圖在貧血中的應(yīng)用不同貧血紅細(xì)胞體積的變化，使紅細(xì)胞體積分布圖形發(fā)生變化，結(jié)合其它參數(shù)對(duì)鑒別診斷頗有價(jià)值（根據(jù)MCV和RDW可對(duì)貧血進(jìn)行分類）：1小細(xì)胞性貧血大細(xì)胞性貧血正細(xì)胞性貧血01紅細(xì)胞直