蛋白質(zhì)分子量測定 液相色譜-飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用法 征求意見稿_第1頁
蛋白質(zhì)分子量測定 液相色譜-飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用法 征求意見稿_第2頁
蛋白質(zhì)分子量測定 液相色譜-飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用法 征求意見稿_第3頁
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3蛋白質(zhì)分子量測定液相色譜-飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用法本文件規(guī)定了使用液相色譜-飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用法進行蛋白質(zhì)分子量的測量以及對測量數(shù)據(jù)進行分本文件適用于重組蛋白質(zhì)、組織提取蛋白質(zhì)以及合《中國藥典》三部-人用重組單克隆抗體制品總論GB/T37849-2019液相色譜飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用儀性能測定方法根據(jù)分子式，按組成元素的平均原子量計算所得的分子量。如碳元素按12.0107計算，氫元素按43.6飛行時間質(zhì)譜儀time-of-flightmassspectrometer飛行時間質(zhì)譜儀采用飛行時間質(zhì)量分析器進行離子質(zhì)荷比分離。由離子源產(chǎn)生的離子在加速電場作用后以恒定速度經(jīng)過高真空無場離子漂移管到達離子接收器。離子的速度與離子的質(zhì)荷比平方根成以離子阱作為質(zhì)量分析器的質(zhì)譜分析儀器。離子阱質(zhì)量分析器是基于四極場理論對帶電粒子進行3.8質(zhì)量軸校準calibration質(zhì)譜儀采集數(shù)據(jù)時掃描的質(zhì)荷比范圍，測定時應(yīng)根據(jù)待測蛋白質(zhì)的分子量大小及離子化特性選擇蛋白的原始質(zhì)譜圖通過軟件算法，將一系列連續(xù)多價態(tài)帶正電荷的質(zhì)譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換成不帶電荷的蛋4分析方法原理到蛋白的多價態(tài)質(zhì)譜數(shù)據(jù)，并經(jīng)解卷積化處理后獲得蛋白55.1水5.4標準物質(zhì)5.5色譜柱6.2質(zhì)譜儀6.3安裝環(huán)境及儀器性能為保證儀器測量結(jié)果穩(wěn)定，安裝環(huán)境溫度應(yīng)控制在15-28℃,溫度波動在2℃以內(nèi)；相對濕度必須中的蛋白組分進行相對定量分析，還需避免處理過6選擇反相分離模式，應(yīng)根據(jù)蛋白性質(zhì)選擇合適的色8.2測試前準備8.3進樣選擇合適的進樣量，一般進樣量為1~10μg。為避免多余樣品對質(zhì)譜儀的污染，原則上應(yīng)在可獲得8.4數(shù)據(jù)分析解卷積化等處理，獲得蛋白的實測分子量（單同位素分子量或平均分子量知分子量的類似蛋白質(zhì)參照物進行分子量測定以排除儀器可能存在的問題；還可結(jié)合相關(guān)研究數(shù)據(jù)評9數(shù)據(jù)質(zhì)量的保證9.2.1.2原始質(zhì)譜圖79.2.1.3

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