項(xiàng)目二血型檢測(cè)技術(shù)任務(wù)一紅細(xì)胞血型系統(tǒng)檢測(cè)技術(shù)一、紅細(xì)胞血型系統(tǒng)分類及命名紅細(xì)胞血型分類傳統(tǒng)分類器官組織血型分類ISBT分類紅細(xì)胞型ISBT命名紅細(xì)胞血型抗原的表達(dá)方法紅細(xì)胞血型表型的表述紅細(xì)胞血型等位基因和基因型命名紅細(xì)胞血型集合、系列表述二、ABO血型系統(tǒng)人類ABO基因位于第9號(hào)染色體，常染色體顯性遺傳。ABO血型受控于3個(gè)等位基因，即A、B、O基因，A、B是顯性基因，O是隱性基因。ABO基因通過(guò)編碼糖基轉(zhuǎn)移酶，轉(zhuǎn)移糖分子到前體物質(zhì)上形成ABO抗原。ABO血型遺傳符合孟德?tīng)栠z傳學(xué)規(guī)律，子代從親代各獲得一半的遺傳基因，產(chǎn)生相應(yīng)的血型抗原，可以根據(jù)雙親血型推斷子女可能的血型。二、ABO血型系統(tǒng)ABO血型遺傳示意圖二、ABO血型系統(tǒng)二、ABO血型系統(tǒng)ABO血型抗體出生前尚未產(chǎn)生抗體。出生后3-6個(gè)月出現(xiàn)ABO抗體，5-10歲時(shí)達(dá)高峰；成人隨年齡增長(zhǎng)而降低。新生兒抗體常來(lái)自母體IgG，偶爾自身產(chǎn)生的IgM。新生兒血型抗原少，抗體效價(jià)低，易誤定血型。抗-A、抗-B、抗-AB存在于所有缺乏相應(yīng)抗原的人的血清、唾液、乳汁、淚液等各種體液及分泌物中。二、ABO血型系統(tǒng)A型、B型：以IgM為主，有少量IgG、IgA抗體。O型：以IgG抗體為主，主要是抗-AB，不是抗-A和抗-B的混合，通過(guò)吸收放散試驗(yàn)予以證實(shí)。A亞型：可以出現(xiàn)抗-A1，A2B型產(chǎn)生抗-A1的概率高于A2型。抗-A1：多數(shù)是IgM抗體，可干擾血型鑒定和交叉配血試驗(yàn)。ABO抗體的特性二、ABO血型系統(tǒng)母胎不相容輸血不相容自身溶血性貧血隨著妊娠、輸血次數(shù)增加，IgG抗體產(chǎn)生增多。二、ABO血型系統(tǒng)A抗原：主要為A1和A2。其它A亞型：A3、Ax、Aend、Am、Ay、Amos、Aint、Aw和Ael。B亞型：一般比A亞型更少，B3、Bx、Bm、Bmos和Bel等。ABO亞型二、ABO血型系統(tǒng)A1和A2表型鑒別血型抗原抗-A抗-A1抗-ＢA1A、A1++-A2A+--A1BA、A1、B++

+二、ABO血型系統(tǒng)A1、A2血清學(xué)區(qū)別：抗-Al檢查有無(wú)Al抗原?？?A1試劑：B型人的血清制成，或?yàn)殡p花扁豆提取并稀釋的植物凝集素。凡與抗A1試劑發(fā)生凝集反應(yīng)者為A1，如果同時(shí)還與抗B凝集，則為A1B型；不與抗-A1試劑凝集者為A2或A2B型。A1、A2亞型的鑒定方法三、Rh血型系統(tǒng)Fisher-Race：CED表述Rhesus85%Rh命名ISBT：RH1(D)、RH2(C)、RH3(E)、RH4(c)、RH5(e)Wierner假說(shuō)：R1、R2、R0現(xiàn)代命名法：RHCE*CE、RhD三、Rh血型系統(tǒng)RH基因RHD和RHCE

1P34-36，分別編碼D和C/c、E/e抗原RHD基因，無(wú)等位基因d三、Rh血型系統(tǒng)Rh血型抗原50多種

D抗原最重要Rh陽(yáng)性：？Rh陰性：？85%99.6%Rh抗原紅細(xì)胞上含有D抗原者稱為Rh陽(yáng)性，不含D抗原者稱為Rh陰性。三、Rh血型系統(tǒng)Rh抗原強(qiáng)度：僅次于A及B抗原。常見(jiàn)抗原：D、C、c、E、e，只存在于人紅細(xì)胞膜。Rh抗原具有劑量效應(yīng)：純合子比雜合子抗原強(qiáng)度強(qiáng)（cDe/cDe比cDe/cde反應(yīng)性強(qiáng)）。Rh、Kidd、Duffy、MNS系統(tǒng)表現(xiàn)明顯ABO表現(xiàn)不明顯基因?yàn)榧兒献訒r(shí)，抗原位點(diǎn)多，與抗體反應(yīng)強(qiáng)基因?yàn)殡s合子時(shí)，抗原位點(diǎn)少，與抗體反應(yīng)弱三、Rh血型系統(tǒng)D抗原D抗原：正常D、-D-、Du等。

弱D（WeakD）

部分D（Partial

D）

放散（Del）Du三、Rh血型系統(tǒng)RHCE基因編碼C和/或c、E和/或e抗原。RHCE有50多種等位基因，易發(fā)生突變，突變后可導(dǎo)致抗原表達(dá)改變或減弱。（1）復(fù)合抗原：包括ce、cE、Ce、CE，在同一蛋白質(zhì)分子上表達(dá)。（2）變異體：RHCE基因突變，導(dǎo)致C、c、E、e抗原數(shù)量或質(zhì)量改變，其中C和e抗原改變較常見(jiàn)。c/C和E/e抗原三、Rh血型系統(tǒng)偶見(jiàn)天然抗-E、抗-CW,基本上都是通過(guò)輸血、妊娠等刺激產(chǎn)生的免疫性抗體?？贵w：抗-D、-E、-C、-c、-e、-DE、-DC、-Ce、-Ec等，為IgG抗體。約30%左右Rh陰性個(gè)體接受Rh陽(yáng)性血液后能產(chǎn)生抗體。受血者或孕婦血漿中含有Rh抗體時(shí)，當(dāng)再次接受相應(yīng)抗原陽(yáng)性血液，可引起嚴(yán)重的HTR和HDN?？?E產(chǎn)生的機(jī)率高于抗-D。Rh抗體四、紅細(xì)胞其他血型系統(tǒng)1H血型系統(tǒng)2Lewis血型系統(tǒng)3MNS血型系統(tǒng)4P血型抗原5I/I血型系統(tǒng)7Kell血型系統(tǒng)紅細(xì)胞其他血型系統(tǒng)8Kidd血型系統(tǒng)9Duffy血型系統(tǒng)6Lutheran血型系統(tǒng)10Diego血型系統(tǒng)四、紅細(xì)胞其他血型系統(tǒng)H血型系統(tǒng)ISBT命名為H，數(shù)字序號(hào)為018，只有1個(gè)H抗原。紅細(xì)胞或體液中的寡糖前體鏈→H抗原→A、B抗原。H抗原表達(dá)在紅細(xì)胞膜糖蛋白或糖脂上，以及體液、分泌液黏蛋白上。H抗原：由19號(hào)染色體上緊密連鎖的FUT1（H）和FUT2（Se）控制合成。FUT1和FUT2各自編碼一種L-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶（H酶），分別轉(zhuǎn)移巖藻糖到Ⅱ型、Ⅰ型寡聚糖鏈上。

四、紅細(xì)胞其他血型系統(tǒng)H基因→H酶，將紅細(xì)胞上的Ⅱ型寡糖鏈轉(zhuǎn)化為H抗原；Se基因→H酶，將分泌液中的Ⅰ型寡糖鏈轉(zhuǎn)化為分泌型H抗原，即體液中的H物質(zhì)。分泌型個(gè)體唾液腺細(xì)胞有Se和H基因，因此唾液中同時(shí)表達(dá)Ⅰ型、Ⅱ型H抗原，是分泌型個(gè)體形成A和/或B物質(zhì)的基礎(chǔ)；非分泌型個(gè)體為se隱性基因，唾液中不表達(dá)H抗原。四、紅細(xì)胞其他血型系統(tǒng)H抗原強(qiáng)弱趨勢(shì)：O>A2>B>A2B>A1>A1BH抗原四、紅細(xì)胞其他血型系統(tǒng)缺失H基因，即缺乏H酶，則無(wú)H物質(zhì)。孟買型個(gè)體攜帶的ABO基因可以遺傳給后代，無(wú)法遺傳給后代H基因和Se基因，所以后代也不能形成ABO抗原，故為隱性遺傳。血清學(xué)特征：①紅細(xì)胞上無(wú)ABH抗原，與抗-A、抗-B、抗-AB、抗-H均不反應(yīng)，易誤判為O型。②唾液無(wú)ABH物質(zhì)。③血清中有抗-A、抗-B、抗-H，在4～37℃有活性，能引起HTR。孟買型個(gè)體只能輸注孟買型血液。H抗原缺失表型--孟買型四、紅細(xì)胞其他血型系統(tǒng)缺乏H基因，有Se基因，紅細(xì)胞表面弱表達(dá)H抗原，與抗-H不反應(yīng)，與抗-A、抗-B凝集反應(yīng)很弱，可通過(guò)吸收放散試驗(yàn)證實(shí)紅細(xì)胞上有A和/或B抗原。分泌液及血漿中含有H物質(zhì)，可以形成少量A和/或B物質(zhì)，并吸附到紅細(xì)胞上，微弱表達(dá)A和/或B抗原。血清中存在著抗-A、抗-B、抗-H、抗-HI等。H抗原缺失表型—類孟買型五、ABO血型血清學(xué)鑒定無(wú)相應(yīng)ABO抗原、抗體有相應(yīng)ABO抗原、抗體紅細(xì)胞凝集懸浮于上層游離紅細(xì)胞下沉陽(yáng)性反應(yīng)陰性反應(yīng)微柱凝膠檢測(cè)卡法五、ABO血型血清學(xué)鑒定五、ABO血型血清學(xué)鑒定五、ABO血型血清學(xué)鑒定【質(zhì)量控制】1．標(biāo)本2．離心機(jī)3．凝膠卡五、ABO血型血清學(xué)鑒定五、ABO血型血清學(xué)鑒定六、RhD血型血清學(xué)鑒定Rh血型鑒定臨床較重要的血型系統(tǒng)，抗原性僅次于ABO血型。采用已知特異性抗體，如抗-D、抗-C、抗-E、抗-c、抗-e，檢查紅細(xì)胞上有無(wú)相應(yīng)的Rh血型抗原，尤其RhD抗原是臨床常規(guī)檢查項(xiàng)目。紅細(xì)胞膜上有D抗原為Rh陽(yáng)性，無(wú)D抗原者為Rh陰性。針對(duì)弱D、部分D或Del等D變異型需要應(yīng)用不同廠家或批號(hào)的試劑予以證實(shí)抗原有無(wú)。六、RhD血型血清學(xué)鑒定六、RhD血型血清學(xué)鑒定【質(zhì)量控制】1．標(biāo)本待檢者紅細(xì)胞要用生理鹽水充分洗滌，避免血清蛋白的干擾。2．對(duì)照每次試驗(yàn)應(yīng)需做陽(yáng)性、陰性對(duì)照。3．Rh陰性確認(rèn)試驗(yàn)若待檢紅細(xì)胞與抗D試劑在鹽水介質(zhì)中不凝集，一般使用3種以上IgG抗D試劑進(jìn)行間接抗球蛋白試驗(yàn)。若3種IgG抗D試劑抗球蛋白試驗(yàn)的結(jié)果均為陰性，即可判定為Rh陰性；如果抗球蛋白試驗(yàn)有一種或一種以上的IgG抗D試劑的結(jié)果為陽(yáng)性，則判斷結(jié)果為Rh陽(yáng)性，該個(gè)體為弱D表型。任務(wù)二白細(xì)胞抗原系統(tǒng)檢測(cè)技術(shù)一、人類白細(xì)胞血型抗原系統(tǒng)HLA復(fù)合體結(jié)構(gòu)圖白細(xì)胞血型抗原系統(tǒng)HLA復(fù)合體：指人類的主要組織相容性復(fù)合體，也稱為HLA系統(tǒng)、人類白細(xì)胞抗原。HLA等位基因的命名圖示一、人類白細(xì)胞血型抗原系統(tǒng)HLA分子結(jié)構(gòu)：依據(jù)HLA基因分類情況，其編碼的產(chǎn)物依次被稱為HLA-Ⅰ類分子、HLA-Ⅱ類分子和HLA-Ⅲ類分子。HLA分子結(jié)構(gòu)示意圖一、人類白細(xì)胞血型抗原系統(tǒng)HLA分子的組織分布HLA-Ⅰ類分子廣泛分布在有核細(xì)胞表面HLA-Ⅱ類分子主要表達(dá)在巨噬細(xì)胞等細(xì)胞表面HLA分子也分布在血、尿、唾液及精液中檢出一、人類白細(xì)胞血型抗原系統(tǒng)白細(xì)胞血型抗原的種類1．與紅細(xì)胞共有的血型抗原：ABO、P、LE、XG、Sc、Do等，但在白細(xì)胞上表達(dá)量少。2．與其他組織細(xì)胞共有的血型抗原：HLA除表達(dá)在白細(xì)胞上，也表達(dá)在表達(dá)在其他組織細(xì)胞上，如血小板表面存在HLA-A、HLA-B和HLA-C位點(diǎn)等HLA-Ⅰ類抗原。3．白細(xì)胞本身所特有的抗原：人類中性粒細(xì)胞抗原主要分布于中性粒細(xì)胞表面上。二、粒細(xì)胞抗原系統(tǒng)白細(xì)胞本身所特有的血型抗原主要有人類中性粒細(xì)胞抗原、中性粒前體細(xì)胞的特異性抗原和淋巴細(xì)胞上的Gr系統(tǒng)抗原等。HNA分子的命名原則：1．命名為HNA。2．?dāng)?shù)字編號(hào)表示抗原糖蛋白膜位點(diǎn)。3．小寫(xiě)英文字母表示同一位點(diǎn)上的不同抗原如HNA-1a、HNA-lb和HNA-1c等。4．新發(fā)現(xiàn)的粒細(xì)胞抗原暫時(shí)用字母縮寫(xiě)命名，直至正式命名。三、白細(xì)胞血型抗體1.HLA抗體：多為IgG類的群體反應(yīng)性抗體（panelreactiveantibodies，PRA），具有結(jié)合補(bǔ)體的淋巴細(xì)胞毒性質(zhì)。2.粒細(xì)胞抗體：粒細(xì)胞抗原免疫刺激機(jī)體后可以產(chǎn)生，與粒細(xì)胞抗原相對(duì)應(yīng)，多數(shù)為IgG類，也可能出現(xiàn)IgM類或者IgM與IgA的混合抗體。四、白細(xì)胞抗原系統(tǒng)檢測(cè)技術(shù)HLA系統(tǒng)檢測(cè)（一）HLA的血清學(xué)分型試驗(yàn)（二）HLA的細(xì)胞學(xué)分型試驗(yàn)（三）HLA的基因?qū)W分型試驗(yàn)粒細(xì)胞系統(tǒng)檢測(cè)（一）血清學(xué)技術(shù)（二）基因分型技術(shù)四、白細(xì)胞抗原系統(tǒng)檢測(cè)技術(shù)HLA的血清學(xué)分型試驗(yàn)HLA抗原檢測(cè)：微量淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)流式細(xì)胞儀方法ELISA方法HLA抗體檢測(cè)方法：淋巴細(xì)胞毒交叉配合試驗(yàn)Luminex檢測(cè)技術(shù)掌握不同方法的原理及其優(yōu)缺點(diǎn)四、白細(xì)胞抗原系統(tǒng)檢測(cè)技術(shù)HLA的基因?qū)W分型試驗(yàn)HLA分型技術(shù)：根據(jù)個(gè)體HLA遺傳學(xué)差異，檢測(cè)具有等位基因差異的HLA基因序列，本質(zhì)在于編碼相應(yīng)抗原的基因，常用PCR-SSP法、PCR-SSOP法、PCR-RFLP法、SBT法五、白細(xì)胞抗原系統(tǒng)檢測(cè)的臨床應(yīng)用HLA系統(tǒng)在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用HLA系統(tǒng)在移植醫(yī)學(xué)的應(yīng)用HLA系統(tǒng)在輸血醫(yī)學(xué)的應(yīng)用HLA系統(tǒng)在法醫(yī)學(xué)的應(yīng)用HLA系統(tǒng)在一些疾病的診斷上的應(yīng)用任務(wù)三

血小板血型系統(tǒng)檢測(cè)技術(shù)一、血小板血型系統(tǒng)抗原與抗體血小板相關(guān)抗原：與其他細(xì)胞表面或組織共有的抗原，紅細(xì)胞血型系統(tǒng)（ABO、Lewis、I、P)以及人類白細(xì)胞抗原(HLA)。血小板特異性抗原：由血小板膜結(jié)構(gòu)的一部分，特有的膜糖蛋白上的抗原決定簇，表現(xiàn)出血小板獨(dú)特的遺傳多態(tài)性，但在其他細(xì)胞和組織上也能發(fā)現(xiàn)。紅細(xì)胞相關(guān)抗原(紅細(xì)胞抗原)：A、B、H、Lea、Leb、I、i、P、Tja

組織相容性抗原：HLA-A、B位點(diǎn)，血小板上未發(fā)現(xiàn)有HLA-DR、DP、DQ等位點(diǎn)的抗原。一、血小板血型系統(tǒng)抗原與抗體血小板特異性抗原命名①人類血小板抗原系統(tǒng)用英文縮寫(xiě)HPA表示。②按發(fā)現(xiàn)時(shí)間的先后順序進(jìn)行數(shù)字編號(hào)。③“a”表示高頻等位基因?qū)?yīng)的抗原，“b”表示低頻等位基因?qū)?yīng)的抗原，而“w”則表示沒(méi)有對(duì)應(yīng)等位基因的抗原。一、血小板血型系統(tǒng)抗原與抗體依據(jù)人類血小板抗原免疫多態(tài)性數(shù)據(jù)庫(kù)（ImmunolPolymorphismDatabaseofhumanplateletantigen，IPD-HPA），截至2017年，通過(guò)免疫血清學(xué)已經(jīng)確定了35個(gè)血小板同種特異性抗原（HPA-1~29bw），其中12個(gè)對(duì)偶抗原已納入了6個(gè)系統(tǒng)，即HPA-1～HPA-5和HPA-15系統(tǒng)。血小板特異抗原的種類一、血小板血型系統(tǒng)抗原與抗體1.HLA抗體若患者輸注的血液制劑中含有足量的白細(xì)胞，由于白細(xì)胞表面上有HLA-Ⅰ、HLA-Ⅱ類抗原，可能導(dǎo)致患者出現(xiàn)初次同種免疫，當(dāng)患者再次接受含有少量HLA抗原的血小板，機(jī)體就會(huì)迅速產(chǎn)生大量的HLA抗體，導(dǎo)致輸入的血小板被破壞。2.血小板特異性抗體受血者因輸注與之不配合的血小板、多次妊娠或骨髓移植等免疫刺激，導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生抗血小板抗體，多為IgG型。3.血小板自身抗體由于體內(nèi)自身免疫系統(tǒng)失調(diào)，機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)自身血小板抗原的抗體，多為IgG或IgA型抗體。血小板血型系統(tǒng)抗體二、血小板血型檢測(cè)技術(shù)血清學(xué)檢測(cè)：1.簡(jiǎn)易致敏紅細(xì)胞血小板血清學(xué)技術(shù)－SEPSA2.微柱凝膠血小板定型試驗(yàn)3.血小板免疫熒光試驗(yàn)4.單克隆抗體特異的血小板抗原固定試驗(yàn)5.改進(jìn)的抗原捕獲酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)6.流式細(xì)胞儀檢測(cè)技術(shù)二、血小板血型檢測(cè)技術(shù)簡(jiǎn)易致敏紅細(xì)