微生物限度檢查——大腸埃希菌檢查主講老師：徐單單Microbiallimittest-EscherichiacolitestGuangdongFoodandDrugVocationalCollege廣東食品藥品職業(yè)學(xué)院大腸埃希菌檢查01

Escherichiacolitest01大腸埃希菌檢查Escherichiacolitest大腸埃希菌檢查Escherichiacolitest2020年版《中國藥典》規(guī)定口服制劑、口腔黏膜給藥、齒齦給藥、鼻用制劑、呼吸道吸入給藥制劑。每1g、或1ml、或10cm2供試品不得檢出大腸埃希菌。大腸埃希菌作為檢驗(yàn)供試品是否受糞便污染的指示菌。大腸埃希菌：口服藥必檢大腸埃希菌檢查原理麥康凱瓊脂(MacC)：特征性菌落革蘭染色：G-無芽孢短桿菌靛基質(zhì)試驗(yàn)：色氨酸→吲哚；

吲哚+靛基質(zhì)試劑→玫瑰紅吲哚(粉紅色)甲基紅試驗(yàn):葡萄糖→酸;+甲基紅→紅色,應(yīng)產(chǎn)酸陽性V-P試驗(yàn)：葡萄糖→乙酰甲基甲醇→二乙酰；+α-萘酚→紅色；應(yīng)不產(chǎn)生無紅色，陰性。枸鹽酸鹽利用試驗(yàn)：枸櫞酸鹽、銨鹽→堿性物質(zhì)，有菌生長；

+溴百里酚藍(lán)→深藍(lán)色;應(yīng)不利用無深藍(lán)色,陰性。確證試驗(yàn)大腸埃希菌檢查程序TSB增菌培養(yǎng)供試液的制備書寫檢驗(yàn)記錄配培養(yǎng)基和稀釋液MacC瓊脂平板

確證試驗(yàn)最終結(jié)果判斷MacC肉湯有菌落無菌落供試品大腸埃希菌檢查操作示意圖10g/10ml/100cm2供試品確證試驗(yàn)100ml供試液適宜體積TSB增菌液10ml營養(yǎng)瓊脂純培養(yǎng)100mlMacC肉湯18～24h1ml42～44℃

24～48hMacC平板報(bào)告未檢出10-1無菌落

18～72h有菌落陽性報(bào)告檢出

18～24h30～35℃特征:鮮桃紅色或微紅色，菌落中心呈深桃紅色，圓形，扁平，表面光滑，濕潤。培養(yǎng)基為麥康凱瓊脂(MacC)圖1.大腸埃希菌菌落大腸埃希菌檢查程序營養(yǎng)瓊脂斜面純培養(yǎng)18～24h革蘭染色、鏡檢G-,無芽孢桿菌生化試驗(yàn)乙酰甲基甲醇生成試驗(yàn)枸鹽酸鹽利用試驗(yàn)(C)靛基質(zhì)試驗(yàn)（I）甲基紅試驗(yàn)（M）靛基質(zhì)試驗(yàn):蛋白胨水24-48h(玫瑰紅:陽性)乙酰甲基甲醇生成試驗(yàn)

48±2h(無紅色:陰性)

枸櫞酸鹽利用試驗(yàn):24-48h(無菌綠色:陰性)

甲基紅試驗(yàn):磷酸鹽葡萄糖胨水48±2h(紅/橘紅:陽性)

圖2.大腸埃希菌生化試驗(yàn)確證結(jié)果確證試驗(yàn)結(jié)果判斷：IMViC試驗(yàn)為+/—＋——革蘭氏陰性短桿菌書寫檢驗(yàn)記錄報(bào)告檢出大腸埃希菌其余情況，判未檢出小結(jié)：在微生物限度檢查里，大腸埃希菌屬于口服藥必檢的項(xiàng)目，其作為檢驗(yàn)供試品是否受糞便污染的指示菌，對確保用藥安全十分重要。本次講授內(nèi)容從檢查原理