ICS11.040.30CCSC30T/ZBAFORMTEXTXXXXX—FORMTEXTXXXX重組Fc受體蛋白技術(shù)應(yīng)用規(guī)范NormsfortheapplicationofrecombinantFcreceptorproteintechnology（征求意見稿）FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX發(fā)布FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX實(shí)施北京發(fā)明協(xié)會(huì)發(fā)布XX/TXXXXX—XXXXI重組Fc受體蛋白技術(shù)應(yīng)用規(guī)范范圍本文本規(guī)定了重組Fc受體蛋白技術(shù)所涉及的相關(guān)技術(shù)及其應(yīng)用規(guī)范。本文本適用于生物藥物（生物制藥、生命科學(xué)基礎(chǔ)研究、體外診斷、mRNA疫苗等）各業(yè)務(wù)場(chǎng)景。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。YY/T1888-2023《重組人源化膠原蛋白》YYT1849-2022重組膠原蛋白GB/T1.1-2000標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和表述規(guī)則ASTMF2131-21使用W-20小鼠基質(zhì)細(xì)胞系的重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（rhBMP-2）體外生物活性的標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)方法ASTMF2131-02(2012)使用W-20小鼠基質(zhì)細(xì)胞系的重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（rhBMP-2）的生物活性體外的生物學(xué)活性的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試方法ASTMF2131-02(2007)用W-20小鼠基質(zhì)細(xì)胞系測(cè)定重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（rhBMP-2）體外生物活性的標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)方法ASTMF2131-02(2007)e1用W-20小鼠基質(zhì)細(xì)胞系測(cè)定重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（rhBMP-2）體外生物活性的標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)方法ASTMF2131-02用W-20小鼠基質(zhì)細(xì)胞系測(cè)定重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（rhBMP-2）體外生物活性的標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)方法ASTMF2131-2002(2007)e1使用W-20老鼠基質(zhì)細(xì)胞系的重組體人骨形態(tài)形成蛋白-2(rhBMP-2)在實(shí)驗(yàn)室條件下的生物活性的標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)方法ASTMF2131-2002(2012)使用W-20老鼠基質(zhì)細(xì)胞系測(cè)定重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(rhBMP-2)體外生物活性的標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)方法ASTMF2131-2002使用W-20老鼠基質(zhì)細(xì)胞系的重組體人骨形態(tài)形成蛋白-2(rhBMP-2)在實(shí)驗(yàn)室條件下的生物活性的標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)方法ASTMF2131-02(2012)用W-20小鼠基質(zhì)細(xì)胞系測(cè)定重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（rhBMP-2）體外生物活性的標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)方法。術(shù)語和定義3.1下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1.1蛋白質(zhì)由氨基酸以“脫水縮合”的方式組成的多肽鏈經(jīng)過盤曲折疊形成的具有一定空間結(jié)構(gòu)的物質(zhì)，是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)。3.1.2重組蛋白運(yùn)用基因工程和細(xì)胞工程技術(shù)等技術(shù)獲得的蛋白質(zhì)。3.1.3非標(biāo)記重組蛋白運(yùn)用基因工程及細(xì)胞工程技術(shù)表達(dá)出結(jié)構(gòu)接近天然蛋白的重組蛋白，且未預(yù)先標(biāo)記熒光素、生物素標(biāo)記等標(biāo)記物質(zhì)。3.1.4標(biāo)記重組蛋白對(duì)重組蛋白采用不同的標(biāo)記技術(shù)，如將生物素、熒光染料、熒光蛋白、酶等標(biāo)記到重組蛋白，形成的偶聯(lián)復(fù)合物。3.1.5A/G/L蛋白A蛋白為StaphylococalProteinA、G蛋白為StreptococcalProteinG、L蛋白為PeptostreptococcusmagnusProteinL的簡(jiǎn)稱，由于三種蛋白與特定類型抗體分子具有特異性的結(jié)合能力，廣泛用于抗體的分離純化和分析檢測(cè)。3.1.6抗原能引起機(jī)體免疫反應(yīng)并產(chǎn)生抗體的物質(zhì)。3.1.7抗體機(jī)體由于抗原的刺激，由B細(xì)胞分化成的漿細(xì)胞所產(chǎn)生的、可與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白。3.1.8單克隆抗體/單抗由單一B細(xì)胞分化增殖的子代細(xì)胞所分泌的高度均質(zhì)性針對(duì)單一抗原決定簇的特異性抗體。3.1.9磁珠由核心金屬顆粒，外層包裹的高分子材料和最外層的功能配置組成，廣泛應(yīng)用于病理、生理、藥理、微生物、生化及分子遺傳學(xué)等各個(gè)領(lǐng)域，在免疫檢測(cè)、細(xì)胞分離、生物達(dá)成純化和分子生物學(xué)等起到重要作用。3.1.10培養(yǎng)基供給微生物以及植物、動(dòng)物的細(xì)胞或者組織生長(zhǎng)繁殖的，由不同營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。3.1.11核酸核酸是一類大分子聚合物，是所有已知生命形式必不可少的組成物質(zhì)，是生命體遺傳信息載體，為脫氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）的總稱。3.1.12DNA 脫氧核糖核酸，由脫氧核苷酸組成的大分子聚合物，能夠攜帶生命體的遺傳信息。3.1.13克隆載體攜帶目的基因進(jìn)入宿主細(xì)胞進(jìn)行復(fù)制、擴(kuò)增或表達(dá)的工具，即用于克隆、運(yùn)載和轉(zhuǎn)移目的基因并能自我復(fù)制的DNA分子。3.1.14質(zhì)粒細(xì)胞染色體外能夠自主復(fù)制的環(huán)狀DNA分子。3.1.15蛋白表達(dá)利用生物細(xì)胞將外源基因通過一系列機(jī)制最終合成蛋白的一種技術(shù)途徑。3.1.16蛋白表達(dá)系統(tǒng)在蛋白表達(dá)時(shí)，由宿主、外源基因、載體和輔助成分組成的體系，通過該體系可以實(shí)現(xiàn)外源基因在宿主中表達(dá)的目的。3.1.17純化從包含多種物質(zhì)的混合物中，根據(jù)不同分子的物理、化學(xué)、生物特性，通過一定技術(shù)手段，提取得到特定物質(zhì)的過程。3.1.18轉(zhuǎn)染將外源基因轉(zhuǎn)入真核細(xì)胞的過程。3.1.19原核沒有以核膜為界的細(xì)胞核，也沒有核仁，只有擬核，且不進(jìn)行有絲分裂、減數(shù)分裂、無絲分裂的原核生物細(xì)胞。3.1.20真核具有真正的由核膜包被的細(xì)胞核，細(xì)胞核內(nèi)含染色質(zhì)、核液和核仁，其染色體數(shù)在一個(gè)以上，能進(jìn)行有絲分裂的真核生物細(xì)胞。3.1.21人源細(xì)胞最初來源于人體組織的細(xì)胞。3.1.22鼠源細(xì)胞最初來源于鼠科動(dòng)物組織的細(xì)胞。3.1.23HEK293人胚胎腎細(xì)胞，衍生自人胚胎腎細(xì)胞的細(xì)胞系，廣泛用于生產(chǎn)蛋白、疫苗、抗癌試劑及重組腺病毒包被等。3.1.24CHO中國(guó)倉鼠卵巢細(xì)胞，廣泛地用來表達(dá)重組蛋白藥物。3.1.25靶點(diǎn)藥物治療針對(duì)的目標(biāo)分子，通常在疾病的病理過程中扮演重要作用，藥物通過抑制或激活該目標(biāo)分子的生物活性產(chǎn)生臨床藥效。3.1.26免疫檢查點(diǎn)免疫系統(tǒng)中表達(dá)的調(diào)節(jié)免疫激活程度的一系列分子。3.1.27靶向治療區(qū)別于傳統(tǒng)的化療、放療等，在細(xì)胞和分子水平上，特異性地作用于明確的靶點(diǎn)分子，從而達(dá)到對(duì)癌癥等疾病進(jìn)行治療的方式。3.1.28PD-1“ProgrammedDeath-1”的縮寫，程序性細(xì)胞死亡蛋白-1，一種重要的免疫抑制分子，為腫瘤治療藥物的靶點(diǎn)。3.1.29PD-L1PD-1Ligand1，指PD-1配體1，是PD-1的主要配體，其結(jié)合T細(xì)胞上的PD-1以抑制免疫應(yīng)答。3.1.30細(xì)胞因子由免疫細(xì)胞和某些非免疫細(xì)胞經(jīng)刺激而合成、分泌的一類具有在細(xì)胞間傳遞信息、具有免疫調(diào)節(jié)和效應(yīng)功能的蛋白質(zhì)或小分子多肽。3.1.31化學(xué)藥經(jīng)過化學(xué)合成而制得的藥物。3.1.32生物藥應(yīng)用普通的或者以基因工程、細(xì)胞工程、蛋白質(zhì)工程、發(fā)酵工程等生物技術(shù)獲得的微生物、細(xì)胞及各種動(dòng)物和人源的組織和液體等生物材料、用于人類疾病預(yù)防、治療和診斷的藥品。3.1.33創(chuàng)新藥區(qū)別于現(xiàn)有藥物或療法，具有新的結(jié)構(gòu)和機(jī)理或新的治療用途的藥物。3.1.34ElisaEnzymelinkedimmunosorbentassay，酶聯(lián)免疫反應(yīng)，一種敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)方法。3.1.35PCRPolymeraseChainReaction，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)。3.1.36CMC ChemicalManufacturingandControl，包括藥物生產(chǎn)工藝、雜質(zhì)研究、質(zhì)量研究及穩(wěn)定性研究等。3.1.37BLIBiolayerInterferometry，生物膜層光學(xué)干涉技術(shù)。3.1.38MALS/HPLC-MALS(Multi-AngleLightScattering/HighPerformanceLiquidChromatography-Multi-AngleLightScattering).多角度激光散射技術(shù)/高效液相色譜-多角度激光散射技術(shù)。3.1.39Nanodisc納米盤技術(shù)，由高密度脂蛋白發(fā)展而來的用于膜蛋白研究的新型類膜結(jié)構(gòu)。3.1.40ADAAnti-drugantibody，藥物進(jìn)入人體之后誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的抗藥性抗體。3.1.41CROContractResearchOrganization，合同研發(fā)組織，通過合同形式為制藥企業(yè)和研發(fā)機(jī)構(gòu)在藥物研發(fā)過程中提供專業(yè)化服務(wù)的一種學(xué)術(shù)性或商業(yè)性科學(xué)機(jī)構(gòu)。3.1.42體外診斷試劑在體外診斷過程中，單獨(dú)或者與儀器配合使用，在疾病的預(yù)防、診斷、治療監(jiān)測(cè)、預(yù)后觀察、健康狀態(tài)評(píng)價(jià)以及遺傳性疾病的預(yù)測(cè)過程中，用于對(duì)人體樣本進(jìn)行體外檢測(cè)的試劑、試劑盒、校準(zhǔn)品（物）、質(zhì)控品（物）等。3.1.43流式細(xì)胞術(shù)一種利用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞等生物粒子的理化及生物學(xué)特性（細(xì)胞大小、DNA/RNA含量、細(xì)胞表面抗原表達(dá)等）進(jìn)行定量、快速、多參數(shù)同步相關(guān)檢測(cè)分析的生物技術(shù)。3.1,44藥代動(dòng)力學(xué)藥物代謝動(dòng)力學(xué)，定量研究藥物在生物體內(nèi)吸收、分布、代謝和排泄規(guī)律，并運(yùn)用數(shù)學(xué)原理和方法闡述血藥濃度隨時(shí)間變化的規(guī)律的方法。3.1.45重組蛋白表達(dá)分泌水平將目的基因?qū)氲剿拗骷?xì)胞后，在細(xì)胞內(nèi)合成并分泌到細(xì)胞外重組蛋白的產(chǎn)量高低。3.1.46蛋白活性蛋白質(zhì)的生物學(xué)功能。3.1.47蛋白表達(dá)水平基因通過轉(zhuǎn)錄翻譯合成蛋白質(zhì)的產(chǎn)量高低。3.1.48困難表達(dá)蛋白因?yàn)榈鞍妆旧硇再|(zhì)，該類蛋白在外源性表達(dá)時(shí)，表達(dá)水平低或者無。3.1.49細(xì)胞治療利用正常或者生物工程改造過的患者自體（或異體）的成體細(xì)胞（或干細(xì)胞）對(duì)組織、器官進(jìn)行修復(fù)或者對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行抑制、殺傷的治療方法。3.1.50SPR表面等離子共振(SurfacePlasmonResonance,SPR)，它通過檢測(cè)生物傳感芯片上配位體與分析物之間的相互作用情況，進(jìn)而探測(cè)物質(zhì)的性質(zhì)和結(jié)構(gòu)。根據(jù)金屬表面偶聯(lián)的配體是否與分析物結(jié)合而產(chǎn)生不同的共振角，通過監(jiān)測(cè)共振角度的變化，可以推斷出生物分子相互作用的親和性、親合常數(shù)、結(jié)合動(dòng)力學(xué)等信息?？倓t為提升Fc受體蛋白質(zhì)量，對(duì)體外檢測(cè)相關(guān)抗體或Fc融合蛋白藥物與Fc受體蛋白的親和力更接近天然狀態(tài)，進(jìn)而評(píng)估相關(guān)藥物Fc段的免疫效應(yīng)的強(qiáng)弱及有無，提出利用SPR技術(shù)具有實(shí)時(shí)、無需標(biāo)記、穩(wěn)定、靈敏、高通量等優(yōu)勢(shì)，用于評(píng)價(jià)Fc受體蛋白質(zhì)量。本文本涉及的外觀、可溶性、蛋白純度、蛋白含量、與相關(guān)抗體或Fc融合蛋白藥物親和力除應(yīng)符合本文本外，尚應(yīng)符合國(guó)家現(xiàn)行有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。要求5.1外觀凍干粉，呈白色疏松體。5.2可溶性溶于水，重構(gòu)后濃度為600ug/ml，為無色透明液體,無肉眼可見沉淀。5.3蛋白純度十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰氨凝膠電泳電泳檢測(cè)，純度≥95%。(MALS)單體＞95%(MALS)5.4蛋白含量UV280蛋白含量測(cè)定方法檢測(cè)，蛋白原液標(biāo)準(zhǔn)范圍濃度為350-500ug/ml，重構(gòu)濃度為600ug/ml。序列：(Accession#P08637-1)Gly17-Gln208，C端具有HIS標(biāo)簽Buffer：PBS,pH7.4，10%-12%海藻糖理論分子量：MWof23.7kDa.活性：檢測(cè)方法：Hiscapture，檢測(cè)方法批檢方案Capture/ImmobilizedLevel(RU)AnalyteConc.(nM)擬合方式KD值（1uM=1*10-6）Rmax值SPRHiscapture24.561250-9.766nMKineticglobalfit(Twostatereaction）0.1uM+/-3倍60.662(±30%)通過HIS抗體的芯片偶聯(lián)我們產(chǎn)品HumanCD16a(V176),HisTag(Cat.No.CD8-H52H4)與上市藥物Herceptin的親和常數(shù)為0.1uM+/-3倍Protocol見附件我們產(chǎn)品突出特點(diǎn)高純度十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰氨凝膠電泳電泳檢測(cè)，純度≥95%。(MALS)單體＞95%(MALS)與經(jīng)典上市藥物的親和力批間一致性好5.5外部標(biāo)識(shí)和使用說明書5.5.1包裝瓶上的標(biāo)識(shí)應(yīng)符合8.1的規(guī)定；5.5.2使用說明書應(yīng)符合8.2的規(guī)定。6、試驗(yàn)方法6.1外觀目視檢查，應(yīng)符合5.1要求。6.2可溶性取小規(guī)格蛋白凍干品，加入無菌水中溶解，307ulml純水溶解100ug凍干粉，溫柔震蕩、混勻后靜置10分鐘，觀察為無色透明液體。6.3蛋白純度十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰氨凝膠電泳電泳檢測(cè)，應(yīng)符合4.3要求。MALS檢測(cè)應(yīng)符合要求。6.4蛋白含量BCA蛋白含量測(cè)定方法測(cè)定。6.5外部標(biāo)識(shí)和使用說明書目視檢查，應(yīng)符合5.6要求。7、檢驗(yàn)規(guī)則7.1生產(chǎn)批以一次凍干成型的產(chǎn)品為一個(gè)生產(chǎn)批。7.2出廠檢驗(yàn)7.2.1取樣：7.2.1.1通常情況下，從包裝好的最小規(guī)格產(chǎn)品中隨意抽取夠1次全檢量的樣品作為檢測(cè)