團體標準《食用油中對苯二甲酸二辛酯快速篩查表面增強拉曼光譜法》（征求意見稿）編制說明一、任務來源、起草單位、主要起草人根據(jù)《廣西標準化協(xié)會關于下達2024年第一批團體標準制修訂項目計劃的通知》（桂標協(xié)〔2024〕8號）文件精神，由防城港市檢驗檢測中心提出，防城港市檢驗檢測中心、武漢食品化妝品檢驗所、中國檢驗認證集團廣西有限公司、防城港楓葉糧油工業(yè)有限公司、廣西標準化協(xié)會、廣西食品藥品審評查驗中心、廣西一東盟食品檢驗檢測中心、湖北工業(yè)大學、廣西農業(yè)科學院農產品質量安全與檢測技術研究所、防城海關綜合技術服務中心、防城港澳加糧油工業(yè)有限公司、廣西港青油脂有限公司、廣西惠禹糧油工業(yè)有限公司、廣西渤海農業(yè)發(fā)展有限公司、中糧油脂(欽州)有限公司、大海糧油工業(yè)(防城港)有限公司、嘉里糧油(防城港)有限公司、海南澳斯卡國際糧油有限公司等單位共同起草的團體標準《食用油中對苯二甲酸二辛酯快速篩查表面增強拉曼光譜法》（項目編號：2024-0131）已獲批立項。為高質量編制團體標準《食用油中對苯二甲酸二辛酯快速篩查表面增強拉曼光譜法》，由起草單位成立標準編制工作組并進行如下分工：序號單位名稱主要起草人職務/職稱從事專業(yè)責任分工1防城港市檢驗檢測中心白永慶戴大雄姚成陳軍妃顏鋒路燕等工程師食品（食用農產品）、化工產品檢驗檢測1.統(tǒng)籌標準文本及編制說明的編寫、征求意見、審定及報批等工作；2.負責協(xié)調項目的整體推進；3.組織人員進行標準發(fā)布后的宣貫培訓。4.對標準實施情況進行總結分析，不斷對標準提出修正意見。2武漢食品化妝品檢驗所方慧文、何平、涂風琴等高級工程師食品檢驗檢測、風險監(jiān)測1.負責標準文本及編制說明的編寫；2.負責食用油中對苯二甲酸二辛酯快速篩查表面增強拉曼光譜法技術的設計、論證及驗證工作。3防城港楓葉糧油工業(yè)有限公司侯菲菲、羅新德工程師糧油生產、質量分析和控制1.參與標準文本及編制說明的編寫；2.負責驗證樣品提供及郵寄工作。4中國檢驗認證集團廣西有限公司張璐工程師化工產品檢驗檢測1.參與標準文本及編制說明的編寫；2.負責食用油中對苯二甲酸二辛酯快速篩查表面增強拉曼光譜法技術的論證及驗證工作5廣西標準化協(xié)會謝宏昭、蘇子華高級工程師/工程師標準化1.負責標準文本及編制說明的編寫、征求意見、審定及報批等工作；2.負責食用油中對苯二甲酸二辛酯快速篩查表面增強拉曼光譜法技術的論證、協(xié)調項目實驗設計及整體推進工作；3.負責標準發(fā)布后的宣貫培訓。6廣西食品藥品審評查驗中心段玉林主任技師標準制修訂、食品藥品檢驗檢測、風險評估及審評1.參與標準文本及編制說明的編寫；2.負責食用油中對苯二甲酸二辛酯快速篩查表面增強拉曼光譜法技術的設計、論證及驗證工作。7廣西—東盟食品檢驗檢測中心王海波主任藥師食品化學分析、污染物和有害因素監(jiān)測1.參與標準文本及編制說明的編寫；2.負責食用油中對苯二甲酸二辛酯快速篩查表面增強拉曼光譜法技術的設計、論證及驗證工作。8廣西農業(yè)科學院農產品質量安全與檢測技術研究所王天順高級工程師食品、農產品質量安全級產地環(huán)境修復調控研究1.參與標準文本及編制說明的編寫；2.負責食用油中對苯二甲酸二辛酯快速篩查表面增強拉曼光譜法技術的設計、論證及驗證工作。9湖北工業(yè)大學張科實驗師膠體化學1.負責標準文本及編制說明的編寫；2.納米溶膠的表征。10防城海關綜合技術服務中心陳延偉高級工程師食品、化工產品檢驗檢測、風險監(jiān)測1.參與標準文本及編制說明的編寫；2.負責食用油中對苯二甲酸二辛酯快速篩查表面增強拉曼光譜法技術的設計、論證及驗證工作。11中糧油脂(欽州)有限公司王旭紅、廖永平品控部總監(jiān)/工程師品控部經理糧油生產、質量分析和控制1.參與標準文本及編制說明的編寫；2.負責驗證樣品提供及郵寄工作。12海南澳斯卡國際糧油有限公司黃永樂品控部經理/工程師糧油生產、質量分析和控制1.參與標準文本及編制說明的編寫；2.負責驗證樣品提供及郵寄工作。13防城港澳加糧油工業(yè)有限公司李偉品控部負責人糧油生產、質量分析和控制1.參與標準文本及編制說明的編寫；2.負責驗證樣品提供及郵寄工作。14廣西港青油脂有限公司吳志國、馮曉執(zhí)行董事、總經理/工程師工程師糧油生產、質量分析和控制1.參與標準文本及編制說明的編寫；2.負責驗證樣品提供及郵寄工作。15廣西惠禹糧油工業(yè)有限公司武喜東王康等高級工程師/品控部經理糧油生產、質量分析和控制1.參與標準文本及編制說明的編寫；2.負責驗證樣品提供及郵寄工作。16廣西渤海農業(yè)發(fā)展有限公司覃劉冬工程師糧油生產、質量分析和控制1.參與標準文本及編制說明的編寫；2.負責驗證樣品提供及郵寄工作。17大海糧油工業(yè)（防城港）有限公司劉東強、黃翠云品控部經理QA主任糧油生產、質量分析和控制1.參與標準文本及編制說明的編寫；2.負責驗證樣品提供及郵寄工作。18嘉里糧油（防城港）有限公司黃耀炳品控部經理工程師糧油生產、質量分析和控制1.參與標準文本及編制說明的編寫；2.負責驗證樣品提供及郵寄工作。二、制定標準的必要性和意義自治區(qū)第十二次黨代會賦予防城港市“建設現(xiàn)代化臨港工業(yè)城市”的發(fā)展定位，防城港市委七屆四次全體（擴大）會議審議通過了《加快建設現(xiàn)代化臨港工業(yè)城市的決定》。防城港市委第七次黨代會提出“四大發(fā)展定位”和“12345”經濟社會發(fā)展思路，對防城港市建設現(xiàn)代化臨港工業(yè)城市進行了全面部署。防城港市依托億噸大港、國家糧食進口指定口岸等獨特優(yōu)勢，全力推動糧油加工及配套上下游產業(yè)集聚發(fā)展，打造糧油食品加工千億級支柱產業(yè)。2022年，防城港全市規(guī)上糧油加工企業(yè)達到11家，形成了年產超1000萬噸的糧油加工能力，實現(xiàn)規(guī)上工業(yè)總產值282.3億元，排名全區(qū)第一，成為國內最大的食用植物油籽加工基地之一。2023年1—10月，防城港市規(guī)模以上工業(yè)增加值同比增長14.7%，從產品產量增勢看，精制食用植物油增長28.8%，油渣餅增長17.9%，占比位列前三。全市擁有大海、嘉里、澳加、楓葉、惠禹等重點龍頭企業(yè)，產品銷往全國各地，可以說“全國每十桶食用油就有一桶產自防城港”，生產的產品也遠銷越南、韓國、菲律賓和歐盟等。就廣西北部灣經濟區(qū)而言，還分布有中糧油脂(欽州)、港青油脂、渤海農業(yè)等重點龍頭糧油企業(yè)，共同支撐廣西成為我國糧油加工重要產業(yè)基地。對苯二甲酸二辛酯（DOTP)(Dioctylterephthalate，C24H38O4，)是20世紀80年代，由美國Eastman公司研制成功并逐步發(fā)展起來的一種新型增塑劑，它與目前常用的鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)相比，具有耐熱、耐寒、難揮發(fā)、抗抽出、柔軟性和電絕緣性能好等優(yōu)點，DOTP不含鄰苯二甲酸鹽，不在歐盟及其他國家限制使用的鄰苯二甲酸增塑劑范圍內，目前越來越多的生產企業(yè)利用其來替代鄰苯類增塑劑，在制品中顯示出優(yōu)良的持久性、耐肥皂水性及低溫柔軟性，廣泛應用于耐電纜料、食品包裝材料等中。對于含油脂類食品的檢驗方法暫無報道；GB9685-2016中對DOTP在食品中的最大殘留量、特定遷移量、特定遷移總量限量均無特別限制，但其附錄規(guī)定特定遷移量、特定遷移總量限量均無限量的情況，添加劑的遷移量不得超過60mg/kg。食用油中的DEHP來自于使用PVC材料的生產、加工和包裝過程中的污染，主要檢測方法有：氣相色譜法（GC）、液相色譜法（HPLC）、紅外光譜法、熒光光譜法、大氣壓化學電離質譜法（APCI-MS）、氣相色譜-質譜聯(lián)用法（GC-MS）、石墨爐原子吸收光譜法（GF-AAS）、快速液相色譜法（LC-MS/MS）等，以上這些方法各有優(yōu)缺點，但都需要在實驗室條件下進行檢測，并由專業(yè)技術人員進行操作和解讀結果。而且，目前對于食品基質中增塑劑的檢測方法，我國只發(fā)布了針對鄰苯二甲酸酯類的檢測方法標準，DEHT和TOTM兩種大規(guī)模使用的增塑劑沒有對應檢測方法標準。采用表面增強拉曼光譜技術（SERS）具有廉價、快速的顯著特點，能夠很好的滿足企業(yè)日常監(jiān)控產品質量的需求，降低企業(yè)生產成本，應用推廣前景樂觀。因此，通過制定團體標準《食用油中對苯二甲酸二辛酯快速篩查表面增強拉曼光譜法》，以標準為抓手，重點解決糧油品質提升的難點痛點關鍵技術，對構建糧油精深加工全產業(yè)鏈和全價值鏈，推動傳統(tǒng)油料加工上檔升級，以質量提升促進全區(qū)糧油產業(yè)高質量發(fā)展具有重要的現(xiàn)實意義。三、主要起草過程（一）成立標準編制工作組團體標準《食用油中對苯二甲酸二辛酯快速篩查表面增強拉曼光譜法》項目任務下達后，防城港市檢驗檢測中心成立了標準編制工作組，起草單位制定了起草編寫方案與進度安排，明確任務職責，確定工作技術路線，開展標準研制工作。具體標準編制工作由防城港市檢驗檢測中心、武漢食品化妝品檢驗所、中國檢驗認證集團廣西有限公司、防城港楓葉糧油工業(yè)有限公司、廣西標準化協(xié)會、廣西食品藥品審評查驗中心、廣西一東盟食品檢驗檢測中心、湖北工業(yè)大學、廣西農業(yè)科學院農產品質量安全與檢測技術研究所、防城海關綜合技術服務中心、防城港澳加糧油工業(yè)有限公司、廣西港青油脂有限公司、廣西惠禹糧油工業(yè)有限公司、廣西渤海農業(yè)發(fā)展有限公司、中糧油脂(欽州)有限公司、大海糧油工業(yè)(防城港)有限公司、嘉里糧油(防城港)有限公司、海南澳斯卡國際糧油有限公司等單位負責人組成的標準編制工作組完成。編制工作組下設三個組，分別是資料收集組、草案編寫組、標準實施組。資料收集組負責國內外有關食用油中對苯二甲酸二辛酯篩查（檢測）的文獻資料的查詢、收集和整理工作，查閱前人對食用油中對苯二甲酸二辛酯篩查（檢測）的研究情況。草案編寫組負責起草標準草案、征求意見稿和標準編制說明、送審稿及編制說明的編寫工作，包括后期召開征求意見會、網(wǎng)上征求意見，以及標準的不斷修改和完善。標準實施組負責團體標準《食用油中對苯二甲酸二辛酯快速篩查表面增強拉曼光譜法》發(fā)布后，組織相關企事業(yè)單位開展標準宣貫培訓會，對標準進行詳細解讀，讓相關人員了解標準，并根據(jù)標準對食用油中對苯二甲酸二辛酯篩查（檢測）進行規(guī)范化操作，并對標準實施情況進行總結分析，不斷對團體標準提出修正意見。（二）收集整理文獻資料標準編制工作組收集了國內有關食用油中對苯二甲酸二辛酯篩查（檢測）相關文獻資料。主要有：《BJS202101氣質聯(lián)用法測定食品中對苯二甲酸二辛酯》黃孟麗,李雪銀,邢夢珂,等.氣相色譜-質譜法測定含油脂食品中新型增塑劑對苯二甲酸二辛酯[J].現(xiàn)代食品科技,2021,37(10):291-296+196.。（三）研討確定標準主體內容標準編制工作組在對收集的資料進行整理研究之后，2024年1月，標準編制工作組召開了標準編制會議，對標準的整體框架結構進行了研究，并對標準的關鍵性內容進行了初步探討。經過研究，標準的主體內容確定為原理、試劑和材料、儀器和設備、分析步驟、結果判定、質量控制。（四）調研及形成草案、征求意見稿2024年2月，標準起草工作小組進行了廣泛調研工作，查閱了大量的國內外文獻資料，對食用油中對苯二甲酸二辛酯篩查（檢測）的前人研究成果進行系統(tǒng)總結。形成了標準的基本構架，對主要內容進行了討論并對項目的工作進行了部署和安排。2024年3月-11月，在前期工作的基礎之上，通過理清邏輯脈絡，整合已有的參考資料中有關食用油中對苯二甲酸二辛酯篩查（檢測）要求，并結合食用油中對苯二甲酸二辛酯篩查（檢測）實際要求的基礎上，按照簡化、統(tǒng)一等原則編制完成團體標準《食用油中對苯二甲酸二辛酯快速篩查表面增強拉曼光譜法》（草案）。2024年11月-2025年1月，標準起草工作組到相關單位和科研機構進行調研，開展試驗驗證。并實際征求意見，通過收集反饋了大量意見，標準編制工作組多次召開會議，對標準草案進行了反復修改和研究討論。進一步討論完善標準草案，形成團體標準《食用油中對苯二甲酸二辛酯快速篩查表面增強拉曼光譜法》（征求意見稿）和（征求意見稿）編制說明。四、制定標準的原則和依據(jù)，與現(xiàn)行法律、法規(guī)的關系，與有關國家標準、行業(yè)標準的協(xié)調情況（一）編制原則1、實用性原則本文件是在充分收集相關資料和文獻，分析食用油中對苯二甲酸二辛酯篩查（檢測）當前現(xiàn)狀，在現(xiàn)有相關食用油中對苯二甲酸二辛酯篩查（檢測）要求的基礎上，結合編制單位多年相關經驗而總結起草的，符合當前食用油中對苯二甲酸二辛酯篩查（檢測）發(fā)展的方向，具有較強的實用性和可操作性。2、協(xié)調性原則本文件編寫過程中注意了與食用油中對苯二甲酸二辛酯篩查（檢測）相關法律法規(guī)的協(xié)調問題，在內容上與現(xiàn)行法律法規(guī)、標準協(xié)調一致。3、規(guī)范性原則本文件嚴格參照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》編寫本標準的內容，保證標準的編寫質量。4、前瞻性原則本文件在兼顧當前區(qū)內食用油中對苯二甲酸二辛酯篩查（檢測）現(xiàn)實情況的同時，還考慮到了食用油中對苯二甲酸二辛酯篩查（檢測）快速發(fā)展的趨勢和需要，在標準中體現(xiàn)了個別特色性、前瞻性和先進性條款，作為對食用油中對苯二甲酸二辛酯篩查（檢測）發(fā)展的指導。（二）編制依據(jù)本標準嚴格按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)則起草，標準主要內容參考相關標準文件并結合起草單位多年的相關經驗和實踐驗證情況總結進行起草。防城港市檢驗檢測中心承擔自治區(qū)、市（縣）本級的食品安全監(jiān)督抽檢、食品安全評價性抽檢及農產品風險監(jiān)測等任務，是防城港市市場監(jiān)管局、防城港市公安局指定行刑銜接檢驗實驗室，防城港市糧油安全與營養(yǎng)健康重點實驗室（籌建）依托單位，具有食品(含食用農產品)、藥品等CMA/CATL檢測資質1001項，CNAS認可項目72項，擁有UPLC-MS/MS、HS-GC-MS/MS、GC-MS/MS、LC-AFS、TLC等大批檢測設備。武漢食品化妝品檢驗所是全國食用油、油脂及其制品食品安全抽檢監(jiān)測牽頭機構，國家市場監(jiān)管重點實驗室（食用油質量與安全）依托單位，具備食品（含特殊用途食品）、食品添加劑等領域計1030類產品、4537項參數(shù)檢測能力。擁有HPLC-Q-TOF、GC-Q-TOF、ICP-MS、MALID-TOF等一大批先進科研設備，共承擔了各級科研項目24項，起草食用油相關檢測標準5項，其中一項國家標準GB/T35867-2018《糧油檢驗卵磷脂中磷脂含量的測定高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測法》已經發(fā)布。大海糧油工業(yè)(防城港)有限公司、嘉里糧油（防城港）有限公司、防城港澳加糧油工業(yè)有限公司分別位列2023年廣西企業(yè)100強中的第48、66、83，2023年廣西制造業(yè)企業(yè)100強，大海糧油、惠禹糧油、嘉里糧油、澳加糧油、楓葉糧油入圍并分別位列第26、29、34、49、52，展現(xiàn)了防城港糧油產業(yè)發(fā)展的強勁動力，同時作為食用油生產企業(yè)，產品類別齊全，作為企業(yè)標準制定者，可以為項目的開展和應用提供良好的樣品和基礎研究條件。（三）與現(xiàn)行法律、法規(guī)的關系，與有關國家標準、行業(yè)標準的協(xié)調情況本編制工作組承諾本標準內容與各項指標不違反相關法律法規(guī)要求，且不低于國家強制性標準、推薦性國家標準和行業(yè)標準要求。經查閱，目前對于食品基質中增塑劑的檢測方法，我國只發(fā)布了針對鄰苯二甲酸酯類的檢測方法標準，但對苯二甲酸二辛酯（DEHT）作為大規(guī)模使用的新型增塑劑尚沒有對應檢測方法標準。市場監(jiān)管總局的最新補充檢驗方法BJS202101《氣質聯(lián)用法測定食品中對苯二甲酸二辛酯》采用的是氣質聯(lián)用方法，設備價格昂貴，檢測時間也比較長，不能有效滿足食用油行業(yè)的質量控制需求，急需研制方便、廉價的DEHT檢驗方法，同時廣西也未制定有團體標準。本標準擬采用表面增強拉曼光譜技術（SERS）建立的檢測方法具有廉價、快速的顯著特點，能夠很好的滿足企業(yè)日常監(jiān)控產品質量的需求，降低企業(yè)生產成本，應用推廣前景樂觀。五、主要條款的說明與《BJS202101食品中對苯二甲酸二辛酯的測定》所給出的方法對比。在檢測用時上，BJS202101提取時間40分鐘，檢測時間約30分鐘，總時長70分鐘左右；本方法提取時間6分鐘，親水性修飾10分鐘，檢測時間不到1分鐘，總時長不到20分鐘，由此可以看出本法具有速度快的優(yōu)勢。此外，經過分析驗證兩種方法在統(tǒng)計學意義上的顯著性差異，評價兩種方法等效性、一致性，并進行線性回歸分析，證明兩種方法具有可比性，也體現(xiàn)了本方法的廉價、快速、方便的特點。本方法的意義在于陰性的檢出能夠極大縮減檢測時間，即使檢測出陽性也可以用氣質聯(lián)用進行驗證（測定對苯二甲酸二辛酯含量），不會出現(xiàn)其他物質在處理過程中轉換為苯二酸二肼而導致檢測結果不準確的問題。團體標準《食用油中對苯二甲酸二辛酯快速篩查表面增強拉曼光譜法》的主要章節(jié)內容包括：原理、試劑和材料、儀器和設備、分析步驟、結果判定、質量控制。本文件主要內容及依據(jù)來源說明如下：原理采用水合肼將對苯二甲酸二辛酯（DOTP）還原成對苯二酸二肼，進行拉曼光譜掃描。與標準譜圖庫中的對苯二酸二肼特征拉曼位移進行匹配識別，對樣品中的DOTP進行定性判定。其中，對苯二甲酸二辛脂與水合肼反應式如圖1所示。圖1.對苯二甲酸二辛脂與水合肼反應式試劑和材料1.在分析測試中，除非另有說明外，均使用優(yōu)級純試劑，實驗用水應符合GB/T6682中一級水的要求。2.試劑包括：（1）氯化鈉。（2）氯金酸（純度≥99.9％）。（3）檸檬酸鈉（純度≥99.0％）。（4）乙醇（色譜純）。（5）正己烷。（6）乙腈。（7）水合肼（85％）。3.標準品（1）DOTP標準品，CAS：6422-86-2，純度≥97.0％，或經國家認證并授予標準物質證書的標準品。（2）對苯二酸二肼標準品，CAS：136-64-1，純度≥96.0％，或經國家認證并授予標準物質證書的標準品。3.溶液配制（1）氯化鈉溶液：準確稱取11.7g氯化鈉于燒杯中，加水溶解，移入200mL容量瓶中，加水定容至刻度。（2）氯金酸溶液（0.01Wt％）：準確稱取0.1g氯金酸于燒杯中，加水溶解，移入1000mL容量瓶中，加水定容至刻度。（3）檸檬酸鈉溶液（1Wt％）：準確稱取0.1g檸檬酸鈉于燒杯中，加水溶解，移入10mL容量瓶中，加水定容至刻度。（4）納米金溶膠：將100mL氯金酸溶液煮沸，一次性快速加入0.75mL檸檬酸鈉溶液,待溶液變?yōu)榧t棕色后，保持煮沸30min，冷卻，備用。（5）DOTP標準儲備液：準確稱取100.0mgDOTP標準品于燒杯中，加乙醇溶解，移入100mL容量瓶中，加乙醇定容至刻度，配制成濃度為1mg/mL的標準儲備液。（6）DOTP標準工作溶液：吸取0.2mLDOTP標準儲備液于50mL容量瓶中，加乙醇定容至刻度，配制成濃度為4μg/mL標準工作溶液。（7）對苯二酸二肼標準儲備液：準確稱取10.0mg對苯二酸二肼標準品于燒杯中，加乙醇溶解，移入100mL容量瓶中，加乙醇定容至刻度，配制成濃度為100μg/mL的標準儲備液。（8）對苯二酸二肼標準工作溶液：吸取0.1mL對苯二酸二肼標準儲備液于100mL容量瓶中，加乙醇定容至刻度，配成濃度為0.1μg/mL工作溶液。儀器和設備使用的儀器和設備包括但不限于：拉曼光譜儀。穩(wěn)頻激光光源：發(fā)射波長為785nm±1nm，線寬＜0.1nm，能量≥250mW；光譜分辨率≤15cm-1；光譜響應范圍200cm-1～2000cm-1，或大于該響應范圍；氣相色譜質譜儀，配EI離子源；（3）電子天平：感量為0.1mg；（4）恒溫水浴鍋：溫度精度±1℃；（5）YST-36水浴氮吹儀；（6）高速離心機：最高轉速不低于4000r/min；（7）渦旋振蕩器；（8）固相萃取（SPE）裝置，SPE柱為SHIMSENStyraGlassPAEs復合填料玻璃柱(6mL)。分析步驟1.樣品處理準確稱取食用油樣品5g，依次加入3mL正己烷和5mL乙腈，渦旋提取1min后（必要時重復提取一次），以4000r/min離心5min，取上清液，待凈化。驗證過程如下：（1）樣品與正己烷、乙腈的加入量或比例試驗由于食用油本身會對DOTP的表面增強拉曼光譜法測定產生嚴重影響，因此試樣處理要盡量減少油脂的提取量，對正己烷和乙腈加入量進行優(yōu)化。稱取油脂樣品1、2、3、5g,加5mL乙腈振蕩提取1min，取1mL氮吹干稱重，同時做加0.5mL正己烷的對比試驗，考察已經加入量以及是否加入已經對提取液中油脂含量的影響，結果見表1。表1稱樣量和正己烷、乙腈的加入量對提取液中油脂含量的影響稱樣量/g僅加1ml乙腈提取后油脂含量/g每毫升乙腈提取液中油脂含量/g油脂減少量/g10.0090.01-0.00120.0110.0090.00230.0120.0110.00150.0120.0110.001由表1可以看出，隨著稱樣量的增加，提取液中油脂含量不斷增加，當稱樣量從1g增加至5g時（增加500%），油脂含量僅增加0.001g(10%)，為提高檢出限，稱樣量確定為5g。加入0.5mL正己烷后，平均可以減少提取液中約10%的油脂量。進一步優(yōu)化正己烷的加入量對提取液油脂含量的影響。稱取5g食用油樣品5份，分別加入正己烷0.5、1.0、2.0、3.0、5.0mL混勻，然后加入5mL乙腈振蕩提取1min，取1mL乙腈氮吹干稱重，結果見表2。表2正己烷的加入量對提取液中油脂含量的影響稱樣量/g加入不同體積的正己烷/mL每毫升乙腈提取液中油脂含量/g50.50.011510.010520.009530.008550.007由表2可以看出，隨著正己烷加入量的不斷增加，提取液中油脂含量逐漸減少。但是同時可能會減少DOTP的提取量。因此，需進一步考察正己烷加入量對DOTP提取的影響。稱取5g食用油，添加150ugDOTP標樣后，分別加入加正己烷0、0.5、1.0、3.0、5.0mL，加5mL乙腈振蕩提取1min，取50uL，定容至1mL，采用氣相色譜質譜法測定DOTP的峰面積,結果見表3。表3正己烷的加入量對提取液中DOTP含量的影響稱樣量/g加入不同體積的正己烷/mLDOTP加入量/μgDOTP峰面積50150368650.515045135115056235315010852551508754由表3可以看出，隨著正己烷加入量的增加，DOTP的峰面積先增加后減少，當正己烷為3mL時，DOTP峰面積達到最大。因此，正己烷的加入量定位3mL。（2）渦旋提取時間試驗為考察渦旋提取時間對回收率的影響，稱取5g食用油，添加50ugDOTP標樣后，分別加入加正己烷3.0mL，加5mL乙腈振蕩提取0.5、1、2、5min，取50uL，定容至1mL，采用氣相色譜質譜法測定DOTP的含量,結果見表4。表4渦旋提取時間對氣質檢測含量和回收率的影響提取時間/minDOTP加入量/ug氣質檢測含量/ug回收率/%0.55029.56ug59.1215038.25ug76.5025039.82ug79.6455039.18ug78.36由表4可知，提取時間在1min以上時DOTP的氣質檢測含量和回收率基本一致，提取2min時測含量和回收率最高，但考慮到本方法為快速篩查，因此確定渦旋提取時間為1min（必要時重復提取一次）。2.SPE凈化SPE柱中加入15mL乙腈活化，棄去流出液；取1mL待凈化液加入SPE柱，再加入2mL乙腈洗脫，收集洗脫液，于40℃水浴氮吹至近干，用100μL乙醇復溶，得到凈化液。驗證過程如下：（1）乙腈加入量試驗；SPE小柱的凈化方法在廠家給定的方法基礎上進行了優(yōu)化改進。廠家的方法為：活化：加入15mL乙腈，棄去流出液；上樣：加入待凈化液，收集流出液，控制流速在1mL/min；（3）洗脫：加入5mL乙腈，收集流出液，控制流速在1mL/min。實驗發(fā)現(xiàn)，廠家方法的洗脫液中油脂含量任然比較高，對后續(xù)SERS測定產生明顯影響。通過收集不同體積段的洗脫液，考察洗脫液中DOTP含量以及油脂含量。稱取5g油脂樣品，加入DOTP100ug，加入3mL正己烷混勻后，加入5mL乙腈振蕩提取1min，取1mL提取液進行SPE凈化，棄去流出液，加入7mL乙腈洗脫，并分段收集洗脫液，每段收集1mL，取0.5mL進行GCMS法測定DOTP的峰面積，剩下0.5mL氮吹干后觀察油脂殘留情況，結果見表5和圖2。表5各段洗脫液中DOTP的峰面積序號加入乙腈體積每毫升洗脫液中DOTP氣質峰面積油脂含量1第1mL5071無油脂2第2mL417893無油脂3第3mL148916有肉眼可見少量油脂4第4mL60315有明顯的油脂5第5mL14255有明顯的油脂6第6mL42675有肉眼可見少量油脂7第7mL9684有肉眼可見極少量油脂圖2各段洗脫液吹干后試管中油脂殘留情況由表4和圖2可見，前面流出的2mL洗脫液中幾乎無油，且DOTP含量最高的是第2mL，因此，本方法洗脫液體積選擇為2mL，并收集全部洗脫液供后續(xù)測定。此外，根據(jù)實驗室經驗，推薦的規(guī)格SPE小柱規(guī)格：SHIMSENStyraGlassPAEs，6mL。3.DOTP的親水性修飾移取100μL凈化液，加10μL水合肼溶液，于80℃水浴反應10min，40℃水浴氮氣吹干后用0.3mL水復溶，得到親水性修飾后的凈化液復溶液，待測。驗證過程/依據(jù)如下：采用水合肼將DOTP還原成對苯二酸二肼（反應式見圖1），進行拉曼光譜掃描。與標準譜圖庫中的對苯二酸二肼特征拉曼位移進行匹配識別，對樣品中的DOTP進行定性判定。（1）水合肼溶液與標準工作液、樣品提取溶液的加入量或比例試驗高濃度的水合肼有利于反應的進行，但過高的濃度不但價格較高且危險性較大，本研究采用80%水合肼作為親水性修飾試劑。進一步研究水合肼與DOTP的物質量之比對親水性修飾產物SERS的影響，結果如圖3所示，當n水合肼:nDOTP約為5:1時，SERS響應最高。這是因為隨著水合肼用量的增加，修飾產物的產率不斷提高，SERS響應隨之升高；但由于水合肼沸點較高，超過一定量后，氮吹時不易揮發(fā)最終殘留在待測溶液中，進而不同程度地抑制對苯二酸二肼與AuNPs表面SERS“熱點”的結合，導致SERS響應降低。圖3水合肼用量對親水性修飾產物SERS響應的影響2）反應溫度和時間試驗；水合肼與DOTP反應生成酰肼，為氧化還原反應，反應溫度和反應時間以及水合肼的濃度和用量對反應的進行均存在一定的影響。加熱可以加快反應的進行，但溫度超過80℃后，已經達到乙醇的沸點，會導致反應原料的明顯損失，且反應條件不利于現(xiàn)場快速檢測，本研究采用文獻（張學景,鄒永,魏文等.3,5-二硝基苯甲酸甲酯與水合肼的反應研究[J].化學試劑,2005,27(3):169-170,175；蔡可迎,丁明潔,宗志敏等.水中水合肼還原芳香族硝基化合物的研究[J].化學世界,2007,(4):232-234,251）中報道的溫度80℃。本研究考察了水合肼與DOTP的反應時間對產物測定結果的影響，分別在反應進行2、5、10min時進行測定，結果如圖4所示。隨著反應的進行，目標物的響應增加越來越緩慢，考慮到快速檢測的需要，反應時間定為10min。圖4不同反應時間對親水性修飾產物SERS響應的影響（3）納米金溶膠的表征及優(yōu)化不同尺寸的納米粒子激發(fā)出不同強度的局域表面等離子體共振，從而表現(xiàn)出不同的SERS性能。本研究按照文獻[錢立,表面增強拉曼光譜法用于食用油中苯并芘的快速測定[D].揚州:揚州大學,2021]的方法合成金納米溶膠，調整檸檬酸的用量，改變AuNPs的粒徑，進而獲得最佳的增強效果。向100mL氯金酸溶液中分別加入0.50、0.75、1.50、2.00mL檸檬酸，制得不同粒徑的金溶膠，溶膠呈現(xiàn)稍不同的顏色。在擬定的測定條件下，分別用以上4種溶膠在相同條件下測定對苯二酸二肼溶液，結果如圖5所示，當氯金酸溶液:檸檬酸溶液為200:1(V:V)時，對苯二酸二肼的SERS響應最高。對該溶膠進行紫外光譜測定和粒徑分析，結果見圖5a、b，溶膠的紫外吸收光譜在539nm出現(xiàn)了AuNPs的局域表面等離子體共振峰，溶膠中金納米粒徑主要分布在40-80nm之間，相對比較均勻，證實AuNPs合成成功，并能與對苯二酸二肼結合產生拉曼光譜增強效應。注:a.納米溶膠的紫外光譜圖、b.粒徑分布圖、c.不同粒徑納米金溶膠的對苯二酸二肼SERS光譜、d.制備的金溶膠圖5納米金溶膠的表征及優(yōu)化4.儀器參考條件參考條件如下。激發(fā)光源：785nm；功率：70w；掃描時間：3s；測定次數(shù)：3次。不同型號儀器，可根據(jù)實際情況調節(jié)。拉曼光譜儀的選擇參照T/HBIQA0002.7-2024《食品中非法添加物西布曲明的快速檢測拉曼光譜法》中的設備參數(shù)，具體為：穩(wěn)頻激光光源，發(fā)射波長為785nm±1nm，線寬<0.1nm，能量≥250mW;光譜分辨率≤15cm-1;光譜響應范圍200cm-1～2000cm-1，或大于該響應范圍。5.測定分別移取200μL對苯二酸二肼標準工作溶液）和親水性修飾后的凈化液復溶液，加入600μL納米金溶膠和200μL氯化鈉溶液，混合均勻，在7.4的條件下測定，獲取拉曼光譜圖。6.質控試驗為了確保試驗的質量，設置陰性對照和陽性對照試驗，其試驗方法如下：陰性對照：稱取空白試樣，按照7.1～7.5步驟與樣品同法操作。陽性對照：準確稱取空白試樣5g置于玻璃具塞離心管中，加入DOTP標準工作溶液，待測樣本濃度調整為10mg/kg，按照本標準測定步驟與樣品同法操作。結果判定1.定性分析將測試結果與對苯二酸二肼的拉曼光譜圖進行匹配識別，根據(jù)譜圖633±10cm-1、903±10cm-1、1016±10cm-1、1189±10cm-1、1322±10cm-1和1605±10cm-1處特征拉曼光譜，對樣品中的DOTP進行結果判定。當樣品的拉曼峰包含1605±10cm-1及其它任意1個特征峰判定為陽性。其中，陰性代表該樣品不含有DOTP或者低于檢出限，陽性則代表該樣品含有DOTP且大于等于檢出限。對苯二酸二肼和樣品中DOTP修飾產物的表面增強拉曼光譜圖見圖6和圖7。圖6對苯二酸二肼表面增強拉曼光譜圖圖7DOTP修飾產物表面增強拉曼光譜圖驗證過程/依據(jù)如下：在標準文本規(guī)定的測定條件下，分別測定了質量濃度為4μg/mL的DOTP標準溶液、不添加DOTP空白樣品的親水性修飾產物以及對苯二酸二肼的SERS譜圖，如圖8所示。DOTP標準溶液親水性修飾產物與對苯二酸二肼的SERS譜圖指紋信息基本一致，在633、903、1016、1189、1322和1612cm-1出現(xiàn)明顯的特征拉曼峰，而空白溶液的SERS譜圖沒有明顯的拉曼峰。圖8對苯二酸二肼溶液及對苯二甲酸二辛酯和空白樣品親水性修飾產物的SERS光譜進一步實驗發(fā)現(xiàn)，在1605±10cm-1處，DOTP的濃度與拉曼響應的線性相關性最好，線性方程為Y=622.89X+813.35，相關系數(shù)為0.993，如圖9所示。圖9DOTP的線性曲線當油脂樣品中DOTP濃度在檢出限附近時，1605±10cm-1峰的響應仍比較高，明顯高于其它位置峰拉曼響應，其低濃度范圍時特征性更明顯，見圖10。因此，當樣品的拉曼峰包含1605±10cm-1及其它任意1個特征峰判定為陽性樣品是比較適宜的。圖10加標濃度為10mg/kg和20mg/kg的油脂樣品的SERS光譜2.確證本方法為初篩方法，當檢測結果為陽性時，建議用氣相色譜質譜法進行確證。由此可知，本方法的意義在于陰性的檢出能夠極大縮減檢測時間，即使檢測出陽性也可以用氣質聯(lián)用進行驗證（測定對苯二甲酸二辛酯含量），不會出現(xiàn)其他物質在處理過程中轉換為苯二酸二肼而導致檢測結果不準確的問題。質量控制本方法檢出限為10mg/kg；靈敏度≥90％；特異性≥90％；假陰性率≤10％；假陽性率應≤5％；性能指標計算方法見表6。表6快速檢測方法性能指標計算表樣品情況a檢測結果b總數(shù)陽性陰性陽性N11N12N1.=N11+N12陰性N21N22N2.=N21+N22總數(shù)N.1=N11+N21N.2=N12+N22N=N1.+N2.或N.1+N.2顯著性差異（x2）x2=（∣N12-N21∣-1）2/（N12+N21），自