免疫學(xué)檢測技術(shù)常德職業(yè)技術(shù)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)系病原生物學(xué)與免疫學(xué)教研室第三節(jié)免疫學(xué)檢測技術(shù)一、抗原抗體的檢測

抗原-抗體反應(yīng)是指抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外發(fā)生特異性結(jié)合，其結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)為抗原表位與抗體V區(qū)抗原結(jié)合位點的結(jié)構(gòu)互補。體外的抗原-抗體反應(yīng)又稱血清學(xué)反應(yīng)，可用已知的特異性抗體檢測未知的抗原，也可用已知的抗原檢測未知的抗體，可以是定性、定量或定位檢測。第三節(jié)免疫學(xué)檢測技術(shù)

抗原-抗體反應(yīng)的特點1、特異性：抗原-抗體的結(jié)合具有高度特異性。2、可逆性：抗原抗體結(jié)合是非共價鍵結(jié)合，可解離。3、階段性：抗原抗體反應(yīng)可分為兩個階段：特異性結(jié)合階段，可見的反應(yīng)階段。4、可見性：抗原和抗體兩者的比例適當(dāng)，結(jié)合后出現(xiàn)肉眼可見反應(yīng)。

（一）第三節(jié)免疫學(xué)檢測技術(shù)

影響抗原-抗體反應(yīng)的因素

1、電解質(zhì)：抗原-抗體反應(yīng)通常應(yīng)用0.85%的氯化鈉作為稀釋液，以供給適應(yīng)濃度的電解質(zhì)。2、溫度：一般常使用反應(yīng)在37℃水浴或孵育箱中進行。3、酸堿度：抗原-抗體反應(yīng)適應(yīng)的酸堿度

為PH6~8。

（二）第三節(jié)免疫學(xué)檢測技術(shù)抗原-抗體反應(yīng)的類型和檢查方法

（三）

根據(jù)抗原的性質(zhì)、參與反應(yīng)的成分和反應(yīng)呈現(xiàn)的結(jié)果，抗原-抗體反應(yīng)的主要類型包括：

1、凝集反應(yīng)

2、沉淀反應(yīng)

3、免疫標(biāo)記技術(shù)第三節(jié)免疫學(xué)檢測技術(shù)1、凝集反應(yīng)

細(xì)菌、紅細(xì)胞等顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后，在一定條件下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集團現(xiàn)象，稱為凝集反應(yīng)，包括直接凝集反應(yīng)、間接凝集反應(yīng)和間接凝集抑制試驗。凝集反應(yīng)是一種定性的檢測方法，也可以進行半定量檢測。由于凝集反應(yīng)方法簡便，目前在臨床檢驗中仍被廣泛應(yīng)用。第三節(jié)免疫學(xué)檢測技術(shù)

（1）直接凝集反應(yīng)顆粒性抗原直接與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象。1）玻片法：為定性實驗，簡潔快速，常用于細(xì)菌的鑒定和人紅細(xì)胞ABO血型的測定。2）試管法：為半定量實驗，以抗原抗體結(jié)合出現(xiàn)可見反應(yīng)的最大血清稀釋倍數(shù)為血清抗體的效價，表示被檢血清中相應(yīng)抗體的含量，即滴度或效價，如臨床診斷腸熱癥的肥達試驗等。第三節(jié)免疫學(xué)檢測技術(shù)

（2）間接凝集反應(yīng)將可溶性抗原或抗體結(jié)合于某些顆粒載體表面，再與相應(yīng)抗體或抗原進行反應(yīng)出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象，稱為間接凝集反應(yīng)。常用的顆粒載體有紅細(xì)胞或聚苯乙烯乳膠顆粒等，根據(jù)載體的不同可將間接凝集反應(yīng)分為：間接血凝試驗、間接乳膠凝集試驗及間接乳膠凝集抑制試驗。間接乳膠凝集試驗如檢測類風(fēng)濕因子(RF),乳膠間接凝集抑制試驗用于妊娠的早期診斷。第三節(jié)免疫學(xué)檢測技術(shù)

2、沉淀反應(yīng)

可溶性抗原（如細(xì)菌培養(yǎng)濾液、外毒素、血清蛋白等）與相應(yīng)的抗體結(jié)合，在一定條件（適量的電解質(zhì)，合適的酸堿度和溫度）下，形成肉眼可見的沉淀物或儀器可檢出的沉淀現(xiàn)象，稱為沉淀反應(yīng)。

第三節(jié)免疫學(xué)檢測技術(shù)

2、沉淀反應(yīng)

在液體中進行的沉淀反應(yīng)目前所用的有免疫比濁法。沉淀反應(yīng)大多在半固體凝膠中進行，可溶性抗原和抗體在凝膠中擴散，在比例合適處相遇形成肉眼可見的白色沉淀現(xiàn)象。將瓊脂擴散試驗與電泳技術(shù)結(jié)合又衍生出對流免疫電泳等多種檢測方法。

(1)單向瓊脂擴散測定血清中IgG、IgM、IgA和補體C3等的含量。(2)雙向瓊脂擴散用于抗原或抗體的定性檢測和兩種抗原的相關(guān)分析。(3)免疫電泳是常用于血清蛋白的種類分析。(4)免疫比濁快速簡便，適用于大批量標(biāo)本的測定。

第三節(jié)免疫學(xué)檢測技術(shù)3、免疫標(biāo)記技術(shù)

是指用酶、熒光素、放射性同位素、膠體金及化學(xué)化光物質(zhì)等標(biāo)記抗體或抗原進行的抗原、抗體反應(yīng)。具有高度敏感性和特異性，應(yīng)用廣泛。其中應(yīng)用較廣的是免疫熒光及放射免疫測定。但免疫熒光費時，不能定量及自動化；放射免疫技術(shù)所需的自動化儀器價格昂貴，所用試劑半衰期短、能危及人體健康。免疫酶技術(shù)則是敏感、快速、簡便、應(yīng)用范圍廣、不需特殊設(shè)備、易于把握的一項新技術(shù)。第三節(jié)免疫學(xué)檢測技術(shù)3、免疫標(biāo)記技術(shù)(1)酶免疫測定分酶聯(lián)免疫吸附試驗和免疫組化技術(shù)：①酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)：是酶免疫測定技術(shù)中應(yīng)用最廣的技術(shù)。有雙抗體夾心法和間接法，前者用于檢測大分子抗原，后者用于測定特異抗體。②免疫組化技術(shù)：包括酶免疫組化、免疫膠體金技術(shù)和免疫電鏡技術(shù)。免疫膠體金技術(shù)廣泛應(yīng)用斑點金免疫層析試驗（DICA，又稱一步金法）檢測尿中的絨毛膜促性腺激素（HCG），作為妊娠的早期診斷。第三節(jié)免疫學(xué)檢測技術(shù)3、免疫標(biāo)記技術(shù)(2)免疫熒光法又分直接法和間接法。(3)放射免疫測定法(RIA)(4)發(fā)光免疫測定法用于血清中超微量物質(zhì)如激素的測定。(5)免疫印跡法是檢測蛋白質(zhì)特性、表達與分布的一種最常用的方法。第三節(jié)免疫學(xué)檢測技術(shù)二、免疫細(xì)胞的檢測

(一)免疫細(xì)胞的類型與數(shù)量檢測1、外周血單個核細(xì)胞的分離2、E花結(jié)試驗?zāi)苄纬苫ńY(jié)的細(xì)胞(即T細(xì)胞)約60%～80%。3、免疫磁珠分離法4、流式細(xì)胞術(shù)(FCM)可分類收集所需細(xì)胞，且能保持細(xì)胞活性以供進一步使用。第三節(jié)免疫學(xué)檢測技術(shù)

(二)免疫細(xì)胞功能測定