《藥品微生物檢驗技術》模塊二藥品安全性檢查項目八溶血與凝聚檢查

任務注射用葛根素的溶血與凝聚檢查

目錄項目八溶血與凝聚檢查任務注射用葛根素的溶血與凝聚檢查

任務引入請思考

2021年11月30日，國家藥監(jiān)局發(fā)布了《國家藥監(jiān)局關于修訂甘油果糖氯化鈉注射液藥品說明書的公告》。此次修訂中，多次標注了甘油果糖氯化鈉注射液具有引起溶血的不良反應。在“不良反應”項中增加了溶血，在“注意事項”中注明了“本品滴注過快可發(fā)生溶血，如患者出現(xiàn)血紅蛋白尿（醬油色尿），立即停止滴注”。如何判斷注射液的溶血與凝聚檢查是否合格呢？

某制藥企業(yè)生產(chǎn)了一批注射用葛根素，需要進行溶血與凝聚檢查。藥物是否會引發(fā)溶血與凝聚并不能通過觀察藥物外觀直接做出判斷，應該采用什么方法呢？

任務分析本任務以注射用葛根素的溶血與凝聚檢查為例，介紹2%紅細胞懸液制備、供試品溶液制備、試驗方法和結果判斷，工作內容及要求見下表。工作內容工作要求關鍵點2%兔紅細胞懸液制備濃度正確、配制正確脫纖、分離、洗滌、混懸供試品溶液制備稱量準確、稀釋操作準確稱量、溶解、定容、稀釋試驗方法方法正確、完成試驗加入試劑、溫育、觀察現(xiàn)象結果判斷結果判斷正確對照管的選擇相關知識-溶血與凝聚反應1．溶血反應

溶血是指紅細胞胞破裂和血紅蛋白逸出的現(xiàn)象，又稱紅細胞溶解，簡稱溶血。人血漿的等滲溶液為0.9%NaCl溶液，紅細胞在低于0.45%NaCl溶液中，因水滲入而膨脹破裂，血紅蛋白逸出。多種中草藥（如人參、桔梗、遠志和甘草等）含有皂甙，可引起溶血。2．凝聚反應

凝聚反應本質是一種免疫學反應，是顆粒性抗原（完整的病原微生物或紅細胞等）與相應抗體結合，在有電解質存在的條件下，經(jīng)過一定時間，出現(xiàn)肉眼可見的凝集小塊。任務實施一、制訂工作計劃序號工作內容完成時間成員負責人12%兔紅細胞懸液制備

2供試品溶液制備

3溶血與凝聚檢查

4結果判斷根據(jù)任務要求，制定合理工作進度計劃，并根據(jù)小組成員的特點進行分工。任務實施二、試驗前準備設備、器材、試劑規(guī)格數(shù)量用途生理氯化鈉溶液

制備紅細胞懸液兔血

制備紅細胞懸液錐形瓶、玻璃珠

振搖兔血離心機、離心管

分離紅細胞電子天平

稱量試劑試管、試管架

容器、支架恒溫箱

恒溫溫育補充1：

補充2：

任務實施三、試驗操作序號步驟操作內容1取兔血取健康家兔血液

毫升于含有玻璃珠的錐形瓶中2振搖脫纖振搖

分鐘，或用玻璃棒攪動血液，以除去纖維蛋白原3離心分離加入0.9%氯化鈉溶液約

倍量，搖勻，每分鐘

轉離心

分鐘，除去上清液，留沉淀4充分洗滌沉淀的紅細胞再用0.9%氯化鈉溶液按上述方法洗滌

次，至上清液不顯紅色為止5混懸紅細胞洗滌后的紅細胞用0.9%氯化鈉溶液制成濃度為

%的混懸液2%兔紅細胞懸液制備任務實施三、試驗操作序號步驟操作內容1稱量供試品稱量供試品

毫克2溶解稀釋用0.9%氯化鈉溶液溶解稀釋至

毫升供試品溶液制備任務實施三、試驗操作試管編號1、23452%紅細胞懸液/mL0.9%氯化鈉溶液體積/mL純化水體積/mL供試品溶液體積/mL溶血與凝聚檢查

取潔凈玻璃試管5只，編號，1、2號管為供試品管，3號管為陰性對照管，4號管為陽性對照管，5號管為供試品對照管。按表8-2-3所示依次加入2%紅細胞懸液、0.9%氯化鈉溶液、純化水，混勻后，立即置37±0.5℃的恒溫箱中進行溫育。3小時后觀察溶血和凝聚反應。

現(xiàn)象觀察：如試管中的溶液呈澄明紅色，管底無細胞殘留或有少量紅細

胞殘留，表明有溶血發(fā)生；如紅細胞全部下沉，上清液無色澄明，或上

清液雖有色澄明，但1、2號管和5號管肉眼觀察無明顯差異，則表明無溶血發(fā)生。若溶液中有棕紅色或紅棕色絮狀沉淀，輕輕倒轉3次仍不分散，表明可能有紅細胞凝聚發(fā)生，應進一步置顯微鏡下觀察，如可見紅細胞聚集為凝聚。三、試驗操作溶血與凝聚檢查任務實施三、試驗操作試管編號3小時現(xiàn)象是否發(fā)生溶血或凝聚結果判斷1□合格□不合格2345結果判斷任務測評序號考核內容考核標準配分得分12%兔紅細胞懸液制備能對血液振搖脫纖5

能離心分離到紅細胞5

紅細胞洗滌充分5

能正確選用試劑配制紅細胞懸液5

紅細胞懸液濃度準確10

2供試品溶液制備能準確稱量供試品10

能正確選用、量取試劑5

溶解充分5

3試驗操作能在規(guī)定時間按要求的配比量依次有序加入各試劑10

溫育溫度、時間正確5

能按規(guī)定時間觀察試驗現(xiàn)象5

任務測評序號考核內容考核標準配分得分4結果判