《藥品微生物檢驗技術(shù)》模塊二藥品安全性檢查項目七過敏反應(yīng)的測定

任務(wù)一豚鼠的挑選與飼養(yǎng)

任務(wù)二右旋糖酐鐵注射液過敏反應(yīng)的測定

目錄項目七過敏反應(yīng)的測定

任務(wù)一豚鼠的挑選與飼養(yǎng)

任務(wù)引入請思考

過敏反應(yīng)檢查系將一定量的供試品溶液注入豚鼠體內(nèi)，間隔一定時間后靜脈注射供試品溶液進(jìn)行激發(fā)，觀察動物出現(xiàn)過敏反應(yīng)的情況，以判定供試品是否引起動物全身過敏反應(yīng)。

動物的質(zhì)量是試驗的重要影響因素之一。豚鼠的挑選與飼養(yǎng)有什么特殊要求呢?相關(guān)知識-過敏反應(yīng)

一、過敏反應(yīng)概念

過敏反應(yīng)又稱變態(tài)反應(yīng)，是身體對一種或多種物質(zhì)的不正常反應(yīng)，而這些物質(zhì)對大多數(shù)人是無害的。其主要起因是患者體內(nèi)產(chǎn)生了過多的特殊抗體，稱免疫球蛋白(Ig)。它可以和環(huán)境中的致敏物質(zhì)(變應(yīng)原)如粉塵、食物、藥物、寄生蟲等起反應(yīng)，刺激機(jī)體過量產(chǎn)生、釋放某些化學(xué)物質(zhì)，引起組織損傷或生理功能紊亂，繼而產(chǎn)生各種癥狀。二、過敏反應(yīng)檢查的原理

將一定量的供試品溶液注入豚鼠體內(nèi)致敏，間隔一定時間后再靜脈注射供試品溶液進(jìn)行激發(fā)，觀察動物出現(xiàn)過敏反應(yīng)的情況，以判定供試品能否引起全身過敏反應(yīng)。任務(wù)實施一、制訂工作計劃序號工作內(nèi)容完成時間成員負(fù)責(zé)人1試驗前準(zhǔn)備

2豚鼠的挑選

3豚鼠的飼養(yǎng)

根據(jù)任務(wù)要求，制定合理工作進(jìn)度計劃，并根據(jù)小組成員的特點進(jìn)行分工。任務(wù)實施二、試驗前準(zhǔn)備設(shè)備、器材規(guī)格數(shù)量用途天平

豚鼠稱重豚鼠固定器、支架

固定豚鼠飼養(yǎng)箱、飼料、食盆、墊材

豚鼠飼養(yǎng)裝置任務(wù)實施

供試用的豚鼠應(yīng)同來源、同品系。挑選時，首先要檢查豚鼠的身體是否健康完好。檢查豚鼠的眼睛是否有眼屎，鼻子是否流鼻涕。如果有眼屎或者流鼻涕的情況，那么就不能選擇。同時，用手觸摸豚鼠的身體，檢查耳朵、四肢是否完好，是否出現(xiàn)過骨折等情況。檢查豚鼠的牙齒是否伸到外面，如果有，表示豚鼠的牙齒咬合不正常，也不能選擇。仔細(xì)檢查豚鼠身體上是否有寄生蟲或者膿包等，檢查豚鼠是否有掉毛的情況。如果有，表示豚鼠身體不健康，也不能選擇。在挑選豚鼠時，可以適當(dāng)?shù)靥舳弘嗍?，以便觀察豚鼠的性格，以及行走的步態(tài)否正常。

供試用的豚鼠應(yīng)健康合格，飼養(yǎng)條件保持一致，體重為250～350g,試驗稱重前自然飽腹，雌鼠應(yīng)無孕。在試驗前和試驗過程中，均應(yīng)按正常飼養(yǎng)條件飼養(yǎng)。做過本試驗的豚鼠不得重復(fù)使用。三、豚鼠的挑選要求任務(wù)實施1.飼養(yǎng)箱：豚鼠專用飼養(yǎng)箱只有一層，開口在上方。飼養(yǎng)時內(nèi)部必須鋪上木屑、鋸末等，且必須經(jīng)常打掃，更換墊材。飼養(yǎng)箱要足夠?qū)挸ǎ苊怆嗍笠蜻\動量不足而發(fā)胖，以及出現(xiàn)精神緊張等問題，多只飼養(yǎng)時更是如此。存放地點注意避開貓、狗，避免日光直射和風(fēng)吹雨淋，注意通風(fēng)。2.食盆：食盆應(yīng)避免選擇塑料或其他會被啃食的材料。應(yīng)當(dāng)選擇陶瓷或者不銹鋼質(zhì)地，有一定分量而不容易被打翻的食盆。3.飲水：為了保持飼養(yǎng)箱內(nèi)的干燥，建議使用舔食方式的給水器。4.墊材：墊材的作用是吸收排泄物的水分和異味，讓豚鼠覺得舒適?？梢赃x用木屑、鋸末、干草、碎布等，貓砂也是很好的選擇。四、豚鼠的飼養(yǎng)任務(wù)實施

豚鼠比較膽小，容易受驚，在抓取等過程中要穩(wěn)、準(zhǔn)和迅速，防止強(qiáng)烈刺激使豚鼠受驚。抓取幼小的豚鼠，只需要雙手捧起來即可；抓取已經(jīng)成年的豚鼠時，先用手掌扣住鼠背，然后用拇指和食指環(huán)握住豚鼠的頸部，并抓住豚鼠的肩胛骨上方，切忌力度過大導(dǎo)致豚鼠無法呼吸，另一只手托住豚鼠臀部。如果在操作過程中，豚鼠掙扎劇烈，可以用紗布將豚鼠頭部蒙住，把豚鼠置于實驗臺上，稍微用力按住豚鼠，然后進(jìn)行操作。

固定豚鼠時，只需抓取豚鼠放入豚鼠固定器中即可，或?qū)㈦嗍蟊巢砍拢潭ㄔ谀景迳?。五、豚鼠的抓取與固定任務(wù)實施六、豚鼠挑選原始記錄動物品種來源數(shù)量性別體重毛色是否健康無外傷狀態(tài)是否活潑飼養(yǎng)環(huán)境室溫：℃相對濕度：%檢驗人員日期任務(wù)測評考核內(nèi)容考核標(biāo)準(zhǔn)配分得分試驗前準(zhǔn)備能判斷試驗需要的設(shè)備、器材是否準(zhǔn)備好15豚鼠的挑選與飼養(yǎng)能按要求正確挑選豚鼠15能正確飼養(yǎng)豚鼠15豚鼠的抓取與固定能正確抓取豚鼠15能正確使用固定器固定豚鼠15豚鼠的稱量能按要求對豚鼠進(jìn)行體重稱量15清場能按要求完成清場10合計100項目七過敏反應(yīng)的測定

任務(wù)二右旋糖酐鐵注射液過敏反應(yīng)的測定

任務(wù)引入請思考

右旋糖酐鐵注射液適用于不能口服鐵劑或口服鐵劑治療效果不良的缺鐵患者，可肌內(nèi)、靜脈注射或靜脈滴注。右旋糖酐鐵注射液的主要不良反應(yīng)為過敏反應(yīng)，可在給藥后的幾分鐘內(nèi)發(fā)生，因此需要對其進(jìn)行過敏反應(yīng)檢查。

某藥企生產(chǎn)了一批右旋糖酐鐵注射液，根據(jù)《中國藥典》2020年版要求需要進(jìn)行過敏反應(yīng)檢查。將供試品注入豚鼠體內(nèi)，間隔一定時間后靜脈注射供試品溶液進(jìn)行激發(fā)，觀察動物出現(xiàn)過敏反應(yīng)的情況，以判定供試品是否引起動物全身過敏反應(yīng)。任務(wù)分析(1)致敏的途徑應(yīng)盡可能模擬臨床給藥途徑。

(2)按照《中國藥典》2020年版的規(guī)定，確定右旋糖酐鐵注射液的檢驗數(shù)量、檢驗量，保證供試品抽樣的客觀性，完成供試品檢查。在規(guī)定時間內(nèi)觀察動物有無過敏反應(yīng)癥狀，判斷供試品是否合格。相關(guān)知識-過敏反應(yīng)檢查

一、過敏反應(yīng)檢查

豚鼠過敏屬于I型過敏反應(yīng)，過敏反應(yīng)檢查是一個經(jīng)典的動物過敏性試驗。此型過敏反應(yīng)發(fā)生迅速，具有嚴(yán)格的特異性以及明顯的個體差異特點。過敏反應(yīng)過程中肥大細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞等細(xì)胞釋放多種血管活性介質(zhì)，作用于靶器官，引起特有癥狀。本試驗主要觀察豚鼠的過敏反應(yīng)現(xiàn)象，重復(fù)性好，穩(wěn)定，過敏現(xiàn)象明顯，方法簡單。相關(guān)知識-過敏反應(yīng)檢查

二、過敏反應(yīng)檢查的目的及適用范圍

某些生物制品(如各器官提取物、植物及微生物的提取物等)的制備過程中，?？赡芑烊胍恍┚哂锌乖缘漠愋缘鞍纂s質(zhì)；一些化學(xué)藥品的組成成分中也可能包含具抗原性的物質(zhì)(如低分子右旋糖酐)。臨床使用這些制劑時，容易導(dǎo)致患者出現(xiàn)多種過敏反應(yīng)，輕者皮膚出現(xiàn)紅斑或丘疹，嚴(yán)重者甚至出現(xiàn)窒息、發(fā)紺、血管神經(jīng)性水腫、血壓下降、休克和死亡。

因此，對那些有可能存在變應(yīng)原的藥品，應(yīng)按要求進(jìn)行過敏反應(yīng)的檢查，以確保產(chǎn)品質(zhì)量和用藥的安全性。任務(wù)實施一、制訂工作計劃序號工作內(nèi)容完成時間成員負(fù)責(zé)人1供試豚鼠的挑選

2試驗前準(zhǔn)備

3供試品的檢查

4結(jié)果判斷根據(jù)任務(wù)要求，制定合理工作進(jìn)度計劃，并根據(jù)小組成員的特點進(jìn)行分工。任務(wù)實施二、試驗前準(zhǔn)備設(shè)備、器材、試劑規(guī)格數(shù)量用途潔凈室

操作場所天平

豚鼠稱重棉球

止血75%乙醇

擦拭消毒無菌注射器

注射供試品右旋糖酐鐵注射液

供試品注射用水、氯化鈉注射液或其他規(guī)定的溶劑

稀釋供試品豚鼠固定器、支架

固定豚鼠飼養(yǎng)箱、飼料、食盆、墊材

豚鼠飼養(yǎng)裝置任務(wù)實施三、試驗操作步驟操作內(nèi)容供試品的制備取右旋糖酐鐵注射液稀釋成每1mL中含2mg(按Fe計)的溶液，配制供試品溶液的過程應(yīng)無菌操作豚鼠的挑選取6只豚鼠，用天平稱量體重，標(biāo)記豚鼠并記錄給藥致敏注射：上述6只豚鼠，隔日每只每次經(jīng)腹腔注射供試品溶液0.5mL,共注射3次激發(fā)注射：再次稱量豚鼠體重，將上述豚鼠分成2組，每組3只，分別在首次注射的第14天和第21天靜脈注射供試品溶液1mL,進(jìn)行激發(fā)觀察記錄觀察激發(fā)后30min內(nèi)動物有無過敏反應(yīng)癥狀結(jié)果判斷靜脈注射供試品溶液30min內(nèi)，不得出現(xiàn)過敏反應(yīng)。如果同一只動物出現(xiàn)豎毛、發(fā)抖、干嘔、連續(xù)噴嚏3聲、連續(xù)咳嗽3聲、紫癜和呼吸困難等現(xiàn)象中的2種或2種以上，或出現(xiàn)大小便失禁、步態(tài)不穩(wěn)或倒地、抽搐、休克、死亡現(xiàn)象之一，判定供試品不符合規(guī)定任務(wù)實施四、檢查報告檢品名稱生產(chǎn)廠家檢品規(guī)格生產(chǎn)批號檢品數(shù)量包裝和外觀有效期檢查項目過敏反應(yīng)檢查檢查依據(jù)《中國藥典》2020年版第四部通則1147任務(wù)實施四、檢查報告檢查方法實驗動物來源實驗動物數(shù)量實驗動物性別實驗動物平均體重檢驗結(jié)果：記錄靜脈注射供試品溶液30min內(nèi)，豚鼠有無明顯過敏反應(yīng)檢驗結(jié)論：檢驗人

復(fù)核人

室溫

相對濕度

檢驗日期：

續(xù)表：任務(wù)測評考核內(nèi)容考核標(biāo)準(zhǔn)配分得分豚鼠的挑選能按要求正確挑選豚鼠5能判斷選用的豚鼠是否符合要求5試驗前準(zhǔn)備能判斷試驗需要的設(shè)備、器材、試劑是否準(zhǔn)備好5能將與供試品接觸的試驗用器皿進(jìn)行