微生物食物中毒標(biāo)本采集

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)及結(jié)果分析概述一、標(biāo)本采集二、檢測(cè)項(xiàng)目確定三、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)四、結(jié)果解讀報(bào)告與分析五、案例分析細(xì)菌性食品中毒的主要特征及主要檢驗(yàn)標(biāo)本一、標(biāo)本采集（1）及時(shí)性原則（2）針對(duì)性原則（3）適量性原則（4）不污染原則規(guī)范采樣是獲得可靠檢測(cè)結(jié)果的重要保證合理的采樣時(shí)機(jī)和種類足夠的樣品采樣量多種樣品同時(shí)采集正確的采樣方法樣品妥善保存運(yùn)輸合理的采樣時(shí)機(jī)和種類傷寒病人樣本采集：血液：宜在病程1-2周發(fā)燒期內(nèi)骨髓：整個(gè)病程糞便：宜在病程3-4周內(nèi)，抗生素治療前或者停藥3天后采集，帶菌者以糞便采集為主。根據(jù)臨床癥狀確定樣品采集根據(jù)流行病學(xué)、衛(wèi)生學(xué)調(diào)查采集細(xì)菌性食品中毒的主要特征及主要檢驗(yàn)標(biāo)本正確采樣方法無菌操作防止采集的標(biāo)本受到影響多種樣品同時(shí)采集（一）

食品（二）水源（三）

臨床標(biāo)本糞便、血液、嘔吐物、手表面、尸體標(biāo)本（四）物體表面：

剛被稀便污染的尿布、衣服、床單等，炊事用具，其它可能被污染的物體表面（五）

宿主動(dòng)物（六）

昆蟲等媒介生物（一）食品標(biāo)本的采集方法用滅菌工具采取可疑食物，以及原配料、半成品等，置于滅菌容器中。如已無可疑食物，可用滅菌棉拭在可疑食物的容器內(nèi)涂抹，置于裝有少量生理鹽水的試管內(nèi)?？梢傻氖澄锖凶涌芍苯铀蜋z，如僅剩空盒，可將空盒送檢。（二）水源標(biāo)本的采集方法及注意事項(xiàng)以滅菌的500ml鹽水瓶采取水樣至少450ml，但不能讓水樣充滿整個(gè)瓶子，應(yīng)留有一定的空氣。一般在可疑污染的河流、池塘岸邊的30cm深度以內(nèi)的表層水采取水樣。連續(xù)采取多份水樣時(shí)，注意防止水樣間相互污染。采取的水樣應(yīng)立即放入冷藏箱中盡快送到實(shí)驗(yàn)室。不能在3小時(shí)內(nèi)送檢者，應(yīng)在采水點(diǎn)即將水樣加入培養(yǎng)基中，搖勻，室溫下運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室。（三）

臨床標(biāo)本的采集方法2.血液標(biāo)本（1）綁上止血帶，并用手觸摸，以確定固定住的靜脈位置。（2）用2%碘酒消毒皮膚，從穿刺點(diǎn)中心部位開始向外擴(kuò)大，消毒范圍不應(yīng)小于5cm（直徑）。（3）待皮膚干后，再75%酒精擦去碘酒，且不能用手指觸摸消毒后的皮膚。（4）皮膚酒精干后，穿刺采集血液，采血量成人5-10ml，嬰幼兒1-5ml。（5）根據(jù)需要，血標(biāo)本分為抗凝和不抗凝兩種，于采集后無菌操作分別注入市售抗凝和不抗凝采集管中。需做抗體檢測(cè)時(shí)，第二份血與第一份血采集時(shí)間一般相隔約2周，最短不能少于10天。（三）

臨床標(biāo)本的采集方法3.嘔吐物用無菌壓舌板或棉拭子挑取少量嘔吐物作為檢材，放入自封塑料袋中并封好袋口或置于滅菌帶蓋瓶中，然后蓋緊瓶蓋，立即置于冷藏箱中。（三）

臨床標(biāo)本的采集方法4.手表面用滅菌棉拭蘸以滅菌生理鹽水，涂抹手表面，立即置于采樣管中，蓋緊管蓋。（三）

臨床標(biāo)本的采集方法5.尸體標(biāo)本應(yīng)于死后盡可能早地?zé)o菌采取，放于無菌容器內(nèi)，不要使用防腐劑；對(duì)于各種器官標(biāo)本，解剖器材和盛裝容器要分開。（四）物體表面標(biāo)本的采集方法用滅菌棉拭蘸以滅菌生理水涂擦沾染糞便的衣物、床單等表面或食品表面或水生動(dòng)物體表，放入到采樣管中或直接置于增菌液中增菌。（五）

宿主動(dòng)物標(biāo)本的采集方法以無菌操作采集可疑宿主動(dòng)物新鮮糞便約5克，置于采樣袋中，立即置于冷藏箱中。標(biāo)本采集送檢注意事項(xiàng)送檢標(biāo)本時(shí)應(yīng)填寫“標(biāo)本送檢單”，寫明姓名、地址、發(fā)病時(shí)間、采集時(shí)間、臨床診斷等。標(biāo)本管/袋或瓶上標(biāo)記樣品編號(hào)。病人標(biāo)本含有大量病菌，標(biāo)本裝入試管或小瓶時(shí)，注意勿污染容器口外壁，必須妥善包裝以防破碎、滲漏等，放在堅(jiān)固的送檢箱內(nèi)由專人送往檢驗(yàn)室，運(yùn)送過程中注意安全。標(biāo)本的保存所有標(biāo)本采集后都應(yīng)立即置于冷藏箱中，盡快送往實(shí)驗(yàn)室。不能在3小時(shí)內(nèi)送達(dá)者，細(xì)菌標(biāo)本應(yīng)盡可能在現(xiàn)場(chǎng)接種；病毒標(biāo)本可臨時(shí)保存在4℃冰箱，但不能超過3天，如近期不能檢測(cè)，則應(yīng)直接在-20℃或-80℃下凍存，有條件的可將樣品分成幾小份，以避免以后接種標(biāo)本時(shí)的反復(fù)凍融。生物安全1.標(biāo)本采集時(shí)要嚴(yán)格執(zhí)行生物安全防護(hù)要求，防止污染、傳播和自身感染。2.標(biāo)本采集完畢，首先消毒，然后脫掉防護(hù)裝備。3.所有使用過的采樣相關(guān)物品要帶離現(xiàn)場(chǎng)，高壓滅菌消毒后丟棄。4.采樣箱每次用完后要及時(shí)消毒處理。二、檢測(cè)項(xiàng)目的確定流行病學(xué)——實(shí)驗(yàn)室樣本采集方案與檢測(cè)人員溝通，便于實(shí)驗(yàn)室分析處理。共同商定分析方案：現(xiàn)場(chǎng)工作人員或臨床醫(yī)務(wù)工作者要和實(shí)驗(yàn)室分析人員多溝通，對(duì)現(xiàn)場(chǎng)情況、所收集樣本的情況、現(xiàn)場(chǎng)工作的方向等進(jìn)行討論，確定應(yīng)該檢驗(yàn)的毒物種類以及是否需要定量，據(jù)此制定實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作方案。檢什么毒素檢測(cè)病原分離

細(xì)菌病毒寄生蟲血清學(xué)檢查抗原抗體急性期IgM抗體急性期和恢復(fù)期雙份靜脈血測(cè)定特異性IgG抗體。核酸檢測(cè)特征基因、毒力基因、溯源比較定性/定量怎么檢用什么方法（同時(shí)需要考慮方法靈敏度、準(zhǔn)確度、重現(xiàn)性、不同方法結(jié)果的可比較性、還需要考慮待測(cè)樣品（毒物、代謝物）、分析要求（定性、定量）、樣品類型、實(shí)驗(yàn)室條件，分析目的等因素，還要考慮時(shí)效性、準(zhǔn)確性、經(jīng)濟(jì)性等要求）用什么試劑

對(duì)重大事件的毒物鑒定或樣本檢測(cè)要同時(shí)送數(shù)家具有鑒定檢驗(yàn)資質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室同步開展工作，避免因?qū)嶒?yàn)室管理和技術(shù)因素對(duì)結(jié)果的影響。

采樣時(shí)，分裝N份，分別保存和送檢怎么檢快速靈敏方法的應(yīng)用儀器自動(dòng)化方法改進(jìn)分離培養(yǎng)方法怎么檢檢驗(yàn)流程：1. 樣品采集

↓2.初步檢驗(yàn)→（直接鏡檢、免疫快診、PCR。。。)↓3.分離培養(yǎng)

(包括增菌培養(yǎng)和直接平板培養(yǎng))↓4.初篩試驗(yàn)、純培養(yǎng)（快速診斷方法的使用）↓5.全面鑒定（菌株鑒定、毒素測(cè)定）（快速檢測(cè)方法）四、結(jié)果的報(bào)告與分析結(jié)果的報(bào)告與分析檢驗(yàn)結(jié)果的正確性不僅取決于實(shí)驗(yàn)室的條件和技術(shù)水平，同時(shí)還與檢驗(yàn)樣品的采集、保存、送樣方法等方面有關(guān)。因此在分析檢驗(yàn)結(jié)果時(shí)，除了應(yīng)考慮結(jié)果是否符合有關(guān)實(shí)驗(yàn)室判定標(biāo)準(zhǔn)外，還應(yīng)綜合考慮各種影響檢驗(yàn)結(jié)果的因素。結(jié)果的報(bào)告與分析陽性結(jié)果不一定能說明病原因子在爆發(fā)事件中的致病作用；反之陰性結(jié)果也不一定能完全否定某種病原因子的病因假設(shè).結(jié)果的報(bào)告與分析實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果是確定病因的重要依據(jù)，但實(shí)驗(yàn)室結(jié)果要和現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查情況、患者的臨床表現(xiàn)一起分析，才能確定病因。五、案例分析2010年9月8日起，四川某高職學(xué)院陸續(xù)有學(xué)生發(fā)病，癥狀以腹痛、腹瀉為主，部分學(xué)生伴惡心、嘔吐，個(gè)別有發(fā)熱等癥狀并到本校醫(yī)院進(jìn)行治療,疾病預(yù)防控制中心疫情處理人員于9月15日接到報(bào)告后趕赴現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查和采樣。問題1：現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查內(nèi)容？1）基本情況學(xué)校情況，食堂情況，飲用水情況2）發(fā)病情況3）臨床表現(xiàn)

4）治療情況

1）、基本情況該學(xué)院位于岷江二號(hào)橋旁，占地三百七十余畝，全院有教職工330人，學(xué)生4500人，學(xué)生均住校。8月23日新學(xué)期整體搬入該新校址。學(xué)院生活飲用水為自備式供水，水源位于岷江旁，取水點(diǎn)位于學(xué)院污水排污口下方200米；學(xué)校未集中供應(yīng)開水，學(xué)生寢室多配有飲水機(jī)，主要飲用“龍蓀泉”、“清心泉”牌桶裝礦泉水。學(xué)校的水處理廠沒有定期對(duì)水源水進(jìn)行消毒和監(jiān)測(cè)。同時(shí)，污水處理設(shè)備一直未啟用，且污水管道在鋪設(shè)時(shí)不符合標(biāo)準(zhǔn)，導(dǎo)致生活污水泄露，并蓄積在取水點(diǎn)上方的低洼地帶，該校生活飲用水取水點(diǎn)設(shè)置見圖1。2）、發(fā)病情況

9月8日以來陸續(xù)有學(xué)生發(fā)病，癥狀以腹痛、腹瀉為主，部分學(xué)生伴惡心、嘔吐，個(gè)別有發(fā)熱等癥狀。共計(jì)249例。病例在9月13日以后逐漸增多，9月14~16日發(fā)病人數(shù)達(dá)到高峰，17日以后發(fā)病人數(shù)有所下降，每日新增病例數(shù)見圖2。病例中男性72人，女性177人，性別比例1：2.46。學(xué)生243人，年齡在14~23歲之間；教師1人，食堂工作人員4人，工人1人?；疾W(xué)生廣泛分布于各個(gè)專業(yè)、班級(jí)3）、臨床表現(xiàn)

共對(duì)176例患者進(jìn)行了調(diào)查，97.7%（172人）出現(xiàn)腹瀉癥狀，89.8%（158人）在24小時(shí)內(nèi)腹瀉次數(shù)≥3次，腹瀉糞便形狀以水樣便為主（132人），33.0%（58人）有里急后重；21.6%（38人）出現(xiàn)嘔吐癥狀，55.1%（97人）有頭昏頭痛癥狀，15.9%（28人）出現(xiàn)發(fā)熱癥狀。4）治療情況醫(yī)生采取輸液、吃藥方式抗生素治療。結(jié)果：部分學(xué)生反復(fù)出現(xiàn)癥狀部分學(xué)生經(jīng)治療無效

樣本采集

問題2采集哪些樣本？樣本采集食堂廚師肛拭食堂樣本水源水經(jīng)學(xué)校消毒裝置消毒后的出廠水學(xué)生食堂管網(wǎng)末梢水學(xué)生宿舍飲用礦泉水病例糞便、肛拭、嘔吐物等實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)問題3：實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)什么項(xiàng)目？檢測(cè)項(xiàng)目細(xì)菌：腸道致病菌（致瀉性大腸埃希氏菌、沙門菌、志賀菌、致病性弧菌等）腹瀉病毒飲用水衛(wèi)生指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果1、細(xì)菌檢測(cè)結(jié)果：9例病人糞便樣品和3份水樣品致瀉性大腸菌毒素基因均為陽性。病原菌分離：檢測(cè)結(jié)果2、腹瀉病毒檢測(cè)結(jié)果病人糞便樣品杯狀病