CCSB46T/ZNZ浙江省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全學(xué)會發(fā)布IT/ZNZ278—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由浙江省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全學(xué)會提出并歸口。本文件起草單位：綠城農(nóng)科檢測技術(shù)有限公司、杭州譜育科技發(fā)展有限公司、杭州市臨平區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心、浙江方圓檢測集團股份有限公司。本文件主要起草人：徐冰潔、王馨瑜、曾雪梅、鄭劍峰、胡陵、倪娟楨、王忠、王偉、桑力青、楊晨璐、沈雄雅、俞璐萍、劉靜、陶楊勻、趙月鈞、王天琦。1T/ZNZ278—2024飼料中氯霉素的快速檢測膠體金免疫層析法本文件規(guī)定了飼料中氯霉素膠體金免疫層析快速檢測方法。本文件適用于配合飼料、濃縮飼料及添加劑預(yù)混合飼料中氯霉素的快速篩查檢測。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T14699.1飼料采樣GB/T20195動物飼料試樣的制備農(nóng)業(yè)部2483號公告-8-2016《飼料中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理本法采用競爭抑制免疫層析法，飼料中的氯霉素經(jīng)乙酸乙酯提取，甲醇水凈化后與膠體金標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合，抑制抗體與試紙條檢測線（T線）上人工抗原的結(jié)合，從而使控制線（C線）和檢測線（T線）顏色深淺發(fā)生變化。通過控制線（C線）和檢測線（T線）顏色深淺比較，對樣品進行定性判5試劑和材料除特殊注明外，本法所用試劑均為分析純，水為符合GB/T6682規(guī)定的二級水。5.1乙酸乙酯（C4H8O2）。5.2氯霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（C11H12Cl2N2O5CAS號56-75-7，分子量為323.129，純度大于98%。5.3氯霉素標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：精確稱取10mg氯霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用甲醇溶解，定容到100mL，配成100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，于-20℃保存，有效期6個月。5.4氯霉素標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：移取適量標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，用甲醇稀釋成10ng/mL，于-20℃保存，有效期6個月。5.5氯霉素免疫膠體金快速檢測試劑卡：密封包裝，干燥陰涼處保存，使用前恢復(fù)至室溫，即開即用。2T/ZNZ278—20246儀器和設(shè)備6.1電子天平：感量0.01g和0.1mg。6.2渦旋混勻儀：轉(zhuǎn)速≥2500r/min。6.3離心機：轉(zhuǎn)速≥8000r/min。6.4氮氣或空氣吹干儀。6.5微量移液器：100-1000μL，0.5-10mL。7測定步驟7.1試樣制備按GB/T14699.1的規(guī)定抽取具有代表性的樣品，用四分法縮減取樣，按照GB/T20195的規(guī)定制備樣品，粉碎過0.45mm孔徑篩，混合均勻，裝入磨口瓶中備用。7.2提取稱取試樣8.00g(±0.10g)于50mL離心管中，加入16mL乙酸乙酯，劇烈振蕩1min，8000r/min離心3min，吸取8mL上清液于10mL刻度管中，40℃水浴氮吹至近干，加入200μL甲醇：水（1:4）復(fù)溶，待測。7.3測定取出氯霉素免疫膠體金快速檢測試劑卡，恢復(fù)至室溫，置于水平臺面上。吸取7.2中待測液的下層溶液120μL（8-10滴），加至氯霉素免疫膠體金快速檢測試劑板的加樣孔中，在8～40min內(nèi)讀取檢測結(jié)果。7.4質(zhì)控試驗7.4.1空白對照：每批樣品需做一空白對照，按7.2、7.3進行。7.4.2陰性對照：稱取空白樣品，按7.2、7.3進行。7.4.3陽性對照：在空白樣品加入一定量氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液（其氯霉素含量≥檢測下限），按7.2、7.3進行。8結(jié)果判斷及表述8.1試劑板有效性判定8.1.1有效檢測試劑板：空白對照控制線（C線）出現(xiàn)紅色條帶（如圖1、圖2），則檢測試劑板有效，可進行檢測。8.1.2失效檢測試劑板：空白對照控制線（C線）不出現(xiàn)紅色條帶（如圖3），則檢測試劑板失效，不能進行檢測。8.1.38.2目視結(jié)果通過對比控制線（C線）和檢測線（T線）的顏色深淺進行結(jié)果表示，目視結(jié)果示意圖見圖1、圖2、圖3，結(jié)果有以下幾種。3T/ZNZ278—20248.2.1無效結(jié)果：控制線（C線）不顯色，無論檢測線（T線）是否顯色，均表示實驗結(jié)果無效（如8.2.2陰性結(jié)果：控制線（C線）顯色，若檢測線（T線）顏色深于控制線（C線），表示試樣中不含待測組分或其含量低于方法檢出限，視為陰性（如圖1）。8.2.3陽性結(jié)果：控制線（C線）顯色，若檢測線（T線）不顯色或顏色淺于控制線（C線），表示試樣中含有待測組分且其含量高于方法檢出限，視為陽性（如圖2）。8.3質(zhì)控要求當(dāng)平行樣的檢測結(jié)果完全一致，且陰性控制樣品和陽性質(zhì)控樣的結(jié)果準(zhǔn)確時，判定該批檢測數(shù)據(jù)有9性能指標(biāo)檢測限0.5μg/kg。10結(jié)果確證本方法檢測結(jié)果為陽性的樣品，需要重新檢測；若重新檢測結(jié)果仍為陽性，需要采用現(xiàn)行有效的參比方法（LC-MS/MS方法或GC-MS/M