人工合成著色劑大多以萘、苯、甲苯等化工產(chǎn)品為原料，經(jīng)過磺化、硝化、鹵化、偶氮化等一系列有機反應(yīng)制成[1]，有的含有β-萘胺和α-氨基萘酚等致癌物，過多食用會危害人體健康。五色糯米飯是壯族地區(qū)的傳統(tǒng)風味小吃，因糯米飯呈黑、紅、黃、白、紫5種色彩而得名，又稱“烏飯”[2]。每逢農(nóng)歷三月三節(jié)日前后，廣西各族（尤其是壯族）人民都要制作食用五色糯米飯，這一風味美食與祭祖娛神活動融合在一起，充滿著民族、地方情趣。飽含植物清香的五色糯米飯十分誘人，看之色澤鮮艷、五彩繽紛；食之清香彌漫、沁人心脾，其不僅美觀美味，還具有滋補等一定的保健作用，深受廣西壯家人的喜愛，被看作吉祥如意、五谷豐登的象征。面對如此色鮮味美的食物，是否會有商家違規(guī)使用添加劑？市民能否放心食用？針對這個問題，本研究開展了五色糯米飯專項風險監(jiān)測工作。目前，《食品中合成著色劑的測定》（GB/T5009.35—2016）采用聚酰胺吸附法測定合成著色劑，操作較為煩瑣、耗時，且主要適用于酒類、汽水類、糖類、蜜餞類等食品[3]。五色糯米飯與標準適用的這些食品有所不同，其含有大量的淀粉等天然水溶性成分，這些成分由于容易吸附著色劑而干擾測定[4-6]，所以該方法不太適用于五色糯米飯等成品糧中合成色素的測定。因此，本研究采用最大吸收波長檢測的方法，操作簡單省時，靈敏度和準確度均得以提高，對五色糯米飯中合成著色劑的測定可靠、實用。1材料及測定方法1.1儀器與試劑耗材1.1.1儀器超高效液相色譜儀（WatersAcquityUPLCH-Class），PDA檢測器；十萬分之一電子天平（梅特勒-托利多XS205DU）；超聲波清洗器（昆山市超聲波儀器有限公司）；離心機（Sigama）。1.1.2試劑耗材（1）乙酸銨溶液（0.02mol/L）；檸檬酸溶液；甲醇-甲酸溶液（6+4）；氨水；乙醇－氨水溶液。（2）OASISWAX柱（6cc/150mg）固相萃取柱。1.1.3標準品取胭脂紅、莧菜紅、新紅、檸檬黃、日落黃、亮藍標準溶液，濃度均為1000μg·mL-1，混合并稀釋成不同濃度的標準曲線溶液。1.2色譜條件資生堂MGⅢ-C18，直徑×長度（mm）：（2.0×150）mm；PDA檢測器，檢測波長（檸檬黃430nm，新紅、莧菜紅、胭脂紅、日落黃520nm，亮藍625nm）；流動相，以乙腈為B、以0.02mol·L-1乙酸銨溶液為A，進行梯度洗脫（0～4min：A96%～80%；4～7min：A80%～5%；7～10min：A5%～96%）；流速：0.5mL·min-1；柱溫30℃；進樣量10μL。1.3樣品預處理稱取5.000g（精確至0.001g）粉碎樣品，置于50mL刻度離心管中，加入乙醇-氨溶液10mL，渦旋5min，5000rpm離心5min，將上清液過濾，殘渣再重復提取1次，合并上清液作為樣品溶液。將樣品溶液置于預處理過的固相萃取柱中，待試樣全部流出，依次用5mL10%甲酸甲酯溶液、5mL水清洗，棄去全部流出液，再用5mL25%氨化甲醇洗脫，收集洗脫液，置50℃濃縮至近干，用水溶解并定容至25mL，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，濾液上機分析。1.4測定法精密吸取標準曲線溶液和樣品提取液各10μL，注入超高效液相色譜儀測定。2結(jié)果與分析2.1波長選取GB5009.35—2016方法中采用254nm的波長進行測定，存在很多雜峰，往往會干擾目標物質(zhì)的檢測。本研究針對各合成著色劑標準品溶液，用紫外－可見分光光度計進行光譜掃描，發(fā)現(xiàn)目標物質(zhì)在可見光范圍內(nèi)有更大的吸收值，最終確定6種合成著色劑（胭脂紅、莧菜紅、新紅、檸檬黃、日落黃、亮藍），檢測波長如表1所示。同時，6種合成著色劑標準溶液在3個波長通道（430、520、625nm）的色譜圖，如圖1所示。圖1合成著色劑色譜圖2.2檢出限的確定在最低濃度標準溶液液相色譜圖中，按3倍信噪比濃度作為檢出限。采用本方法處理，6種合成著色劑在不同波長測定時的檢出限見表2。由表2可以看出，在多波長下測定的檢出限，均較254nm單波長下要低，尤其是亮藍。由此可見，本研究設(shè)定的波長可以用來測定這6種合成色素，有效提高檢測靈敏度。2.3標準曲線繪制將標準溶液分別稀釋為0.25、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0mg·L-1，精密吸取10μL注入超高效液相色譜儀。以濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標做標準曲線進行線性回歸，結(jié)果見表3。表3標準曲線結(jié)果表由表3可以看出，在0.25～20mg·L-1的范圍內(nèi)，6種合成著色劑均具有較好的線性關(guān)系。2.4加標回收測定精確配制6種合成著色劑濃度均為10.0mg·L-1的混合標準溶液，加入空白五色糯米飯樣品基質(zhì)中進行加標回收實驗，結(jié)果見表4。表4樣品加標回收試驗結(jié)果表由表4可以看出，本方法回收率為83%～104%，且實驗所得回收率較穩(wěn)定。因此，該方法具有較高的準確度和重現(xiàn)性。3結(jié)語本研究確立了五色糯米飯中6種合成著色劑的高效液相色譜檢測方法，用添加乙醇的堿化試液，提取五色糯米飯中的合成著色劑，并進行固相萃取柱凈化。用0.02mol·L-1醋酸銨溶液作為流動相A、甲醇作為流動相B，進行梯度洗脫，并采用不同波長同時測定提取液中的6種合成著色劑（胭脂紅、莧菜紅、新紅、檸檬黃、日落黃、亮藍）。該方法中，6種合成著色劑的檢出限分別為檸檬黃0.4mg·kg-1、胭脂紅0.