轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分定量檢測技術(shù)規(guī)范微流滴數(shù)字PCR法Technicalguidelinesforquantitativedetectionofgeneticallymodifiedplantsandderivedproducts—Dropletdigi2018-12-01實(shí)施2018-12-01實(shí)施天津市市場和質(zhì)量監(jiān)督管理委員會(huì)發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由天津市農(nóng)村工作委員會(huì)提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：天津市農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所、天津市東麗區(qū)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：蘭青闊、蘭璞、李亮、趙新、沈曉玲、王成、宛煜嵩、陳銳、黃鳳軍、李文、李益歌。1轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分定量檢測技術(shù)規(guī)范微流滴數(shù)字PCR法2通過試驗(yàn)確定適合的反應(yīng)體系(模板量、引物、探針濃度等)及反應(yīng)程序(退火溫度、循環(huán)數(shù)等),線性動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)的精密度用重復(fù)性相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSDr表示，應(yīng)≤25%。3由兩個(gè)不同操作人員，在兩個(gè)不同時(shí)間段，對包含不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的同批樣品(至少包括陽性樣品、陰性樣品和定量限樣品)進(jìn)行測試。測試結(jié)果與預(yù)期偏差RSD應(yīng)≤25%,表明方法再現(xiàn)性符合要求。否則，重新進(jìn)行相關(guān)測試。4.3實(shí)驗(yàn)室間方法確認(rèn)4.3.1經(jīng)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)方法確認(rèn)符合要求后，組織多家實(shí)驗(yàn)室對檢測方法的特異性、靈敏度和再現(xiàn)性進(jìn)行4.3.2實(shí)驗(yàn)室間方法確認(rèn)樣品應(yīng)包括陽性對照樣品、陰性對照樣品、特異性測試樣品和靈敏度測試樣4.3.3特異性測試樣品應(yīng)包括：——含有靶序列的轉(zhuǎn)基因植物材料；——不含有靶序列的轉(zhuǎn)基因植物材料；——不含靶序列的非轉(zhuǎn)基因植物材料。4.3.4靈敏度測試樣品應(yīng)包括定量限樣品。4.3.5至少重復(fù)3次試驗(yàn)，每次試驗(yàn)至少設(shè)置3個(gè)平行。4.3.6實(shí)驗(yàn)室間方法確認(rèn)不少于6個(gè)實(shí)驗(yàn)室提供有效數(shù)據(jù)。且至少重復(fù)3次試驗(yàn)，每次試驗(yàn)至少設(shè)置3個(gè)平行。4.3.7線性度、精密度、正確度按照5.2要求。4.3.8依據(jù)驗(yàn)證單位出具的驗(yàn)證報(bào)告，從以下方面對建立的方法進(jìn)行綜合分析：——特異性分析：陽性對照樣品和含有靶序列的樣品檢測出預(yù)期DNA片段，其他樣品中未檢測出預(yù)期DNA片段，表明方法的特異性符合要求；——定量限分析：根據(jù)驗(yàn)證單位的結(jié)果