1瀉白散，來(lái)源于《小兒藥證直訣》,其具有清瀉肺熱、平喘止咳的功用，本研究主旨在探討瀉白散的譜效關(guān)系，確定其有效成分及部位。1、建立了瀉白散高效液相指紋圖譜分析方法，標(biāo)定了色譜圖中的12個(gè)峰，并對(duì)其中11個(gè)峰進(jìn)行了歸屬。結(jié)果表明11個(gè)色譜峰中，1、2、3、4、5、10號(hào)峰為桑白皮的峰，6、7、8、9、11號(hào)峰為甘草的峰，色譜圖中沒(méi)有歸屬到地骨皮的相關(guān)峰。同時(shí)，確定了樣品的貯存方式以保證樣品的穩(wěn)定性，試驗(yàn)結(jié)果表明該樣品不能以溶液的形式貯存，而應(yīng)該以粉末的形式貯存。以溶液方式貯存，樣品在6h內(nèi)迅速新生成了一個(gè)峰，并且記錄其11個(gè)峰的峰面積，其RSD值最大可到49.1%;以粉末形式貯存，樣品在72h內(nèi)穩(wěn)定，RSD值小于5%,因此決定采用以粉末形式貯存，實(shí)驗(yàn)時(shí)即溶即用。2、采用相關(guān)分析和回歸分析對(duì)瀉白散的譜效關(guān)系進(jìn)行了研究。本文采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，共得9個(gè)處方。首先分別采用小鼠抗炎(二甲苯致小鼠耳腫脹法)和小鼠祛痰(小鼠氣管酚紅法)對(duì)其進(jìn)行祛痰和抗炎的藥效實(shí)驗(yàn)，同時(shí)進(jìn)行HPLC圖譜研究，將所得藥理數(shù)據(jù)和各色譜峰面積相關(guān)聯(lián)，探討復(fù)方中藥瀉白散的譜效關(guān)系。相關(guān)性分析結(jié)果表明在12個(gè)色譜峰中有5個(gè)與藥理數(shù)據(jù)密切相關(guān)的色譜峰與祛痰和抗炎作用呈正相關(guān)，其均來(lái)自于桑白皮?；貧w分析結(jié)果表明在12個(gè)色譜峰中有8個(gè)與藥理數(shù)據(jù)密切相關(guān)的色譜峰被引入回歸方程。它們依次為2、5、6、7、8、9、10、12號(hào)峰所代表的化學(xué)成分。其中2、5、10號(hào)峰來(lái)自于桑白皮，6、7、8、9號(hào)峰來(lái)自于甘草。綜合回歸分析和相關(guān)性分析結(jié)果，確定與瀉白散祛痰和抗炎作用密切相關(guān)的為2號(hào)峰和5號(hào)峰所代表的化學(xué)成分，其均來(lái)自于桑白皮。通過(guò)對(duì)其在紫外190-380nm下掃描可得其在290nm和325nm處有最大紫外吸收，通過(guò)對(duì)比文獻(xiàn)，判定其為二苯乙烯苷類成分。關(guān)鍵詞：瀉白散；HPLC;祛痰作用；抗炎作用；譜效關(guān)系2omXiaoErZhiZhfclearinglung,antitussiveandantiasthmatic.Inmyexperimentsthechrstoredinformofpowder.Storedinsolution,theh.andRSDvaluesof11peakswhichrecordedinHPLCweremaximumto49.13%;Thechromatographicpharmacodynamicsofxie-baipowdercorrelationanalysisandregressioactionandexpectorantactionwerestudiedbytheL?(3?)orthogonaldesign,arrange9combinations,3leversperformanceliquidchromatographswerealsostudiedbysameorthogoofCorrelationanalysisshowwithanti-inflammatoryanderegressionequation,whichwerepeak2,5,6,7,8,9,10,12.Amongofthem,PefromCortexMoriandpeak6,7,8,9,12werefromRadixetRh290nmand325nm.Bycomparingtheliterature,thetwochemica3t4中藥復(fù)方制劑是中醫(yī)藥的精髓和主流。中藥復(fù)方的功效已為幾千年的歷史和現(xiàn)代臨床療效所肯定。但如何采用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)手段來(lái)說(shuō)明中藥作用的本質(zhì)、作用機(jī)理、中藥藥性理論等豐富內(nèi)涵，使中藥復(fù)方能為國(guó)際市場(chǎng)所能接受，目前尚有一段差距。從中醫(yī)的觀點(diǎn)來(lái)看，中藥的功效是物質(zhì)群的整體作用結(jié)果，而黃連素和黃連、甘草酸和甘草、人參皂苷和人參是不能等同的，因此對(duì)指標(biāo)成分的控制難以真正控制中藥的藥效，要控制中藥藥效，不能只針對(duì)某一、二個(gè)化學(xué)成分，必須對(duì)方劑物質(zhì)整體予以控制?，F(xiàn)代物質(zhì)群指紋圖譜技術(shù)，展現(xiàn)了這種可能性。系統(tǒng)分析中藥復(fù)方的化學(xué)成分，闡明有效部位或有效成分的種類，建立全面反映其成分的指紋圖譜，將更加有效體現(xiàn)中藥復(fù)方成分的整體性和綜合作用，更好地評(píng)價(jià)中藥復(fù)方的質(zhì)量。因此，只有將標(biāo)示物質(zhì)群特征峰的中藥指紋圖譜與功效結(jié)果相對(duì)應(yīng)起來(lái)，將中藥指紋圖譜中化學(xué)成分的變化跟中和藥效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)提供規(guī)律性的科學(xué)依據(jù)，從而建立中藥產(chǎn)品與其療效基本一致的反映產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，真正對(duì)我國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代化、國(guó)際化起到積極的促進(jìn)作用。目前對(duì)中藥譜效關(guān)系的研究還停留在很初步的階段。傳統(tǒng)中藥名方“瀉白散”出自《小兒藥證直訣》,由桑白皮、地骨皮、甘草三味藥材組成，銼散后，入粳米一撮，水煎服。有瀉肺清熱，止咳平喘之功。瀉白散尚無(wú)質(zhì)量控制指標(biāo)，也并無(wú)與復(fù)方配伍相關(guān)的化學(xué)研究及藥理藥效研究的報(bào)道，本文應(yīng)用中藥指紋圖譜的方法來(lái)闡明瀉白散的藥效成分，試圖通過(guò)譜效關(guān)系的研究來(lái)確定有效部位或有效成分，為進(jìn)一步進(jìn)行瀉白散質(zhì)量控制研究奠定基礎(chǔ)。1、瀉白散的HPLC圖譜的研究，并通過(guò)組方中單味藥物的HPLC圖譜研究對(duì)復(fù)方2、采用小鼠酚紅法和小鼠耳腫脹法對(duì)瀉白散祛痰作用和抗炎作用進(jìn)行研究；采用相關(guān)性分析和回歸分析研究瀉白散的譜效關(guān)系，確定有效成分及有效部位。沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文瀉白散譜效關(guān)系的研究5瀉白散，來(lái)源于《小兒藥證直訣》,由桑白皮15g、地骨皮15g、甘草3g三味藥材組成，銼散后，入粳米一撮，水煎服，其具有清瀉肺熱、平喘止咳的功用，主治肺有伏火郁熱之證。肺主西方，屬金，其色應(yīng)白，“瀉白”,故瀉肺也。而仍云瀉者，有平肺之功”。方中桑白皮主入肺經(jīng)，傾瀉肺熱，平喘止咳，為君藥。地骨皮甘寒入肺，可助君藥瀉肺中伏火，且有養(yǎng)陰之功，君臣相合，清瀉肺火，以復(fù)肺氣之肅降。王子接《降雪園古方選注》卷中：“肺氣本辛，以辛瀉之，遂其欲也。遂其欲當(dāng)謂之補(bǔ)，而仍云瀉者，有平肺之功焉。桑皮、甘草，其氣俱薄，不燥不剛，雖瀉而不傷于嬌臟。《經(jīng)》言：肺苦氣上逆，急食苦以泄之，故復(fù)以地骨皮之苦，泄陰火，退虛熱，而平肺氣。使以粳米、甘草，緩桑、骨二皮于上，以清肺定喘?！北痉街攸c(diǎn)是清中有潤(rùn)、瀉中有補(bǔ)，既不是清透肺中實(shí)熱以治其標(biāo)，也不是滋陰潤(rùn)肺以治其本，而是清生理特點(diǎn)亦甚吻合。桑白皮為桑科植物桑(MorusalbaL.)的干燥根皮。甘、寒，歸肺經(jīng)，瀉肺平喘，利水消腫，可用于廢熱喘咳，水腫脹滿尿少，面目肌膚浮腫1]。主產(chǎn)于安徽、河南、浙“去肺中水氣，唾血，熱渴，水腫腹臚脹，利水道?！薄端幮哉摗分休d：“治肺氣喘中有水氣及肺火有余者宜之?！蹦媳背瘎⑺巍独坠谥苏摗氛J(rèn)為桑白皮在中藥中有獨(dú)特效用，“是它藥不替也”;《中國(guó)藥典》載：桑白皮性寒味甘，歸肺經(jīng)，用于肺熱咳喘、水腫脹滿鳥少及面目肌膚浮腫等癥。目前臨床上用于治療水腫、胸膜炎、百日咳、小兒流涎、糖尿病、氣管炎及鼻衄等。地骨皮為茄科植物枸杞LyciumchinenseMill和寧夏枸杞L.barbarumL.的根皮，性6寒，味甘、淡，歸肺、肝、腎經(jīng)，涼血除蒸，清肺降火。用于陰虛潮熱、骨蒸盜汗、肺熱咳嗽、咯血、衄血。分布于我國(guó)南北各地。其源于《本經(jīng)》,《本經(jīng)》中載“主五內(nèi)邪它列為上品。陶弘景云“此草最為眾藥之主，經(jīng)方少而不用者，猶如香中有沉香也，國(guó)藥中甘草為君，治療七十二種乳石毒，解一千二百余種草木毒，調(diào)和眾藥有功，故有國(guó)使之不爭(zhēng)，故熱藥得之緩其熱，寒藥得之緩其寒，寒熱相雜者，用之得其平”。甘草能稱，解百毒的作用。2瀉白散化學(xué)成分研究概況2.1桑白皮桑白皮主要含有黃酮類化合物、二苯乙烯類化合物、芳香苯駢呋喃衍生物，香豆素類化合物、N糖類、甾體類等多種成分。黃酮類化合物l2-2]桑酮(kuwanon)A-Z2-7、桑酮醇(kuwanol)A-EL2-8、桑根酮sangenon(A-T)?3、桑根酮醇sangen(A-0)091416、桑根呋喃sanggenofuranA?、芳香苯駢呋喃類化合物桑色呋喃mullberrofuran(A-Z)?,162324等.香豆素類化合物5,7-羥基香豆素(5,7-dihydroxycoumarin)、傘形花內(nèi)酯 (Umbelliferone)、東莨宕素(scopoletin)、skimming、東莨宕內(nèi)酯(6-甲氧基-7-羥基-聚糖[29]。此外還有N糖類27如1-deoxyno甾醇28、3β-[(m-methoxybenzoyloxy)Jurs-12-cn-28-oic-acid29、甾體及萜類如a-香樹7 脂醇、鞣質(zhì)和揮發(fā)油等。地骨皮主要含有有機(jī)酸類、二酰胺類、八肽、生物堿類以及酚類等化合物。有機(jī)酸類化合物[32-33]亞油酸、亞麻酸、蜂花酸以及肉桂酸等。二酰胺化合物3]地骨皮甲素(KukoamineA)以及枸杞酰胺(Lyciumamide)等。地骨皮甲素有明顯的降壓活性。八肽類化合物35-36]lyciuminA,lyciuminB,lyciumin在于第三個(gè)氨基酸是Trp而不是Tyr。它們均有抑制ACE活性和血管緊張肽原酶(renin)活性的作用。生物堿類化合物137-38]甜菜堿等。1990年Ymada等從地骨皮中分離出兩種生物堿，并命名為alkaloidA和alkaloidB,這兩種生物堿具有抑制葡萄糖苷酶，抗腫瘤、增強(qiáng)免疫力和抗病毒等作用。其他生物堿也包括阿托品(atropine)、東莨宕堿(scopolamine)從地骨皮中還分離出柳杉酚、色氨酸衍生糖苷(tryptophanderivativeglycoside)、β-谷甾醇(β-sitosterol)、東莨宕素(scopoletin)甘草中主要有三萜類化合物、黃酮類化合物等。三萜類化合物甘草甜素是甘草根及根莖中所含一種五環(huán)三萜皂苷；甘草次酸(Glycyrrhetinicacid)是甘草甜素的皂苷配基，也是甘草甜素的有效活性成分之一。黃酮類化合物甘草黃酮類物質(zhì)包括了甘草素(Liquiritigenin)、異甘草素(Isoliquirige甘草苷(Liquiritin)、異甘草苷(Neoliquiritin)、新甘草苷(Neoliquiritin)、新異甘草苷 近年來(lái)，并未見(jiàn)到對(duì)瀉白散復(fù)方的化學(xué)研究。藥物化學(xué)研究?jī)?nèi)容的局限，缺乏對(duì)瀉白散復(fù)方方藥效物質(zhì)或藥效成分的研究，同時(shí)瀉白散各單味藥及復(fù)方的質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)尚未建立。3.1桑白皮的藥理研究現(xiàn)代研究表明，桑白皮藥理活性比較廣泛，主要是有一定的降血壓、利尿及鎮(zhèn)靜作第一章瀉白散復(fù)方配伍的研究概況8桑白皮丙酮提取物能夠使豚鼠腸系毛細(xì)血管交叉數(shù)目明顯增加，改善血流狀態(tài)，增加血流速度；在離體條件下，顯著抑制苯腎上腺素引起的主動(dòng)脈血管環(huán)的收縮，在預(yù)加優(yōu)降糖或普萘洛爾孵育下，其對(duì)苯腎上腺素引起的主動(dòng)脈血管環(huán)的收縮作用仍然有舒張作用，并均具有量效關(guān)系，但引起去內(nèi)皮后大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)收縮；桑白皮非丙酮提取物能明顯增加血管內(nèi)NO含量，表明其擴(kuò)張血管作用是通過(guò)促進(jìn)血管CNOS的合成，增加血管NO含量，引起血管舒張。桑白皮乙醇提取物可以顯著延長(zhǎng)大鼠的凝血時(shí)間，對(duì)大鼠體內(nèi)血栓形成時(shí)間以及對(duì)凝血酶原時(shí)間未見(jiàn)明顯影響。其作用機(jī)理可能是桑白皮所含桑根素、氧二氫桑根素 (oxydihydromorusin)及桑酮C能夠抑制血小板環(huán)氧化酶合成血栓素B?的形成。桑酮(G、H)、桑呋喃(C、F、G)、桑根酮(C、D)等成分具有較為顯著的降血壓作用。桑白皮的甲醇提取物對(duì)組胺、5-腔色胺，緩激肽和透明質(zhì)酸等誘發(fā)的皮膚浮腫有抑制作用，同時(shí)又能抑制炎癥引起的蛋白滲出及白細(xì)胞游走，對(duì)植物如棉球誘發(fā)的肉芽腫、甲醛及佐劑關(guān)節(jié)炎也有療效。小鼠口服甲醇提取物的水溶性成分，能抑制醋酸誘導(dǎo)的扭體反應(yīng)，其提取物的水溶性部分和丁醇部分對(duì)壓迫刺激有鎮(zhèn)痛作用。桑白皮丙酮提取物高劑量組(3g/kg)對(duì)氨水引起的咳嗽有明顯的鎮(zhèn)咳作用，而低劑量(1.5g/kg)組則無(wú)明顯的鎮(zhèn)咳作用，但可以顯著性延長(zhǎng)咳嗽潛伏期，無(wú)論高劑量和低劑量均可顯著性增加小鼠支氣管酚紅排出量，并呈劑量依賴關(guān)系。桑白皮丙酮提取物高劑量組對(duì)乙酰膽堿引起的豚鼠痙攣性哮喘有明顯的平喘作用，并指出其遠(yuǎn)離可能是通過(guò)提高支氣管NO含量，松弛支氣管平滑肌來(lái)達(dá)到平喘作用。有研究表明，桑白皮60%乙醇提取液的丙酮萃取物通過(guò)劑量依賴對(duì)抗白三烯D4(LTD4)引起豚鼠氣管水腫(減少氣管組織重量和伊文思藍(lán)滲出量)以及LTD4和組胺引起豚鼠氣管痙攣收縮而產(chǎn)生平喘作3.1.4抗癌、抗病毒作用[41]桑根白皮素(morusin)、桑酮(kuwanonA、C、J、L)和桑根酮(sanggenonA、B、C、D)對(duì)金葡菌和枯草桿菌，糞鏈球菌，恥垢分支桿菌等有抗菌活性。羥二氫桑根皮沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文瀉白散譜效關(guān)系的研究9素，chalcomoracin等衍生物對(duì)研究發(fā)現(xiàn)，桑根白皮素(morusin)、桑呋喃G、桑酮(kuwanonG、M)和桑根酮 (sanggenonD)均可抑制十四烷酰氟波醇乙酸酯(TPA)與細(xì)胞受體結(jié)合。桑酮(KuwanonH)、桑根酮(sanggertonA、D)對(duì)促癌因子殺魚菌素的蛋白激酶C有劑量依賴的抑制作用，對(duì)促癌因子鳥氨酸脫羧酶(ODC)活性的誘導(dǎo)有抑制作用。一種被稱為MoranA的糖蛋白可能是桑白皮降血糖活性成分，因?yàn)镸oranA能明顯降桑白皮75%乙醇提取液能明顯抑制豬小腸蔗糖酶活性，從而使葡萄糖生成減少，同地骨皮中的酰胺類物質(zhì)如N-二氫咖啡酰酪氨、N一反咖啡酰酪胺、N一順咖啡酰酪地骨皮具有免疫調(diào)節(jié)作用，在不同的免疫狀態(tài)下具有不同的調(diào)節(jié)作用。其水煎劑對(duì)正常小鼠脾細(xì)胞產(chǎn)生白細(xì)胞介素-2(IL-2)有抑制作用，對(duì)環(huán)磷酰胺所致小鼠脾細(xì)胞IL-2是增強(qiáng)免疫功能的一條重要途徑。地骨皮的有效成分桂皮酸具有升高白細(xì)胞的作用，同時(shí)對(duì)受輻射損傷的白細(xì)胞減少、血小板減少都有明顯的提高作用地骨皮中所含的環(huán)戊烷并吡咯烷型生物堿是一中葡萄糖苷抑制劑，可用作免疫調(diào)節(jié)劑來(lái)殺死病毒和抑制腫瘤。藥理研究表明，地骨皮不僅能降低小鼠葡萄糖和腎上腺素性高血糖值，而且對(duì)四氧嘧啶(alloxan,ALX)致實(shí)驗(yàn)性糖尿病小鼠的血糖也有降低作用，作用與苯乙雙胍降糖效果相似，并有一定量效關(guān)系及時(shí)間依賴性，時(shí)間越長(zhǎng)或劑量越高，其作用越顯著。地骨皮解熱有效成分主要為甜菜堿。研究證明，地骨皮和枸杞對(duì)皮下注射角叉菜膠所致的大白鼠體溫升高均有明顯控制作用，解熱作用較強(qiáng)，藥效持久，強(qiáng)度可與解熱鎮(zhèn)通過(guò)扭體法、熱板法和齒髓致痛法等動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ捅砻鞯毓瞧た擅黠@抑制小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，提高小鼠熱致痛及家兔電刺激致痛痛閾值。從而表明其具有鎮(zhèn)痛作用。3.2.6降壓作用射、肌肉注射或灌胃均有明顯的降壓作用。其降壓作用的實(shí)現(xiàn)可能與地骨皮中含有眾多抑制血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)的成分有關(guān)。3.2.7抗生育作用5]地骨皮注射劑能顯著的興奮未孕大鼠與小鼠的離體子宮，可加強(qiáng)其收縮活動(dòng)，而宮縮是孕娠終止的一個(gè)方面，由此可看出地骨皮有抗生育的潛在作用。殷軍S21發(fā)現(xiàn)，地骨皮極性成分處于在水、30%醇層時(shí)對(duì)成骨樣細(xì)胞UMR106的增殖有明顯促進(jìn)作用，尤其實(shí)在水層中呈明顯量效關(guān)系，當(dāng)生藥濃度為200×102mg/mL時(shí)，平均增殖率為187%,作用最強(qiáng)。由此可知其內(nèi)含有直接刺激成骨樣細(xì)胞增殖的成分。還有研究表明地骨皮里含有褪黑激素(MT),可通過(guò)改變生物節(jié)律來(lái)有效地促進(jìn)生甘草甜素及甘草次酸等對(duì)健康人及多種動(dòng)物都有促進(jìn)鈉水潴留及鉀的排泄增加，長(zhǎng)期應(yīng)用可出現(xiàn)水腫及高血壓等癥狀。小劑量甘草素具有抗黃疸作用和免疫抑制作用，糖皮質(zhì)激素樣作用，大劑量時(shí)糖皮質(zhì)激素樣作用不明顯，只呈現(xiàn)鹽皮質(zhì)激素樣作用。甘草能提高機(jī)體的內(nèi)分泌調(diào)節(jié)能力，起到扶正固本的治療作用。3.3.2對(duì)消化系統(tǒng)的作用甘草次酸和總黃銅(FM100),有抑制胃酸分泌的作用，并可促進(jìn)潰瘍的愈合。臨床應(yīng)用甘草粉、甘草浸膏、甘草流浸膏、甘草次酸和FM100治療胃潰瘍均有較好的療效作用。甘草次酸藥(生胃酮)被西歐列為對(duì)上消化道潰瘍的治療藥物。其抗?jié)冏饔门c促進(jìn)纖維細(xì)胞合成纖維及基質(zhì)有關(guān)。FM100是甘草有效的解痙成分，甘草煎劑、甘草流浸膏、FM100及甘草素、異甘草素對(duì)離體腸管有明顯的抑制作用。其中以黃酮中類成分 沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文瀉白散譜效關(guān)系的研究的異甘草素作用最強(qiáng)。抗炎成分為甘草酸、甘草次酸及甘草黃酮類成分，具有糖皮質(zhì)激素樣作用，保太松或氫化可的松樣的抗氧作用。實(shí)驗(yàn)研究表明，甘草酸對(duì)大鼠腹腔巨噬細(xì)胞有選擇作用，甘草能抑制PGE2作用及減少內(nèi)源性PGE2的產(chǎn)生，并能明顯降低酵母糖及PGE2引起的cAMP升高，并可減少由酵母糖刺激巨噬細(xì)胞釋放的PGE2,。甘草次酸對(duì)大鼠棉球肉芽腫，甲醛性腳腫均有抑制作用，其抗炎效價(jià)為可的松或氫化可的松的1/10。甘草黃酮有抑制小鼠角叉菜膠腫和抑制敏感細(xì)胞釋放化學(xué)介質(zhì)的作用。甘草酸類化合物通過(guò)對(duì)多種病毒顆粒的直接作用和誘生干擾素，增強(qiáng)天然殺傷細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的活性等活化宿主免疫功能的間接作用，而發(fā)揮廣譜的抗病毒作用。甘草酸能抑制體外HIV的增殖作用，給艾滋病毒患者連續(xù)注射甘草甜素1個(gè)月，可使部分患者血清中病毒抗原濃度降至未能測(cè)出的水平。甘草甜素能抑制肝中單純皰疹I(lǐng)型病毒糖蛋白的合成，從而抑制病毒的復(fù)制。甘草多糖具有明顯的抗水泡病毒、單純皰疹I(lǐng)型病毒和牛痘病毒的活性。甘草次酸還具有干擾素誘導(dǎo)作用。甘草酸胺能提高小鼠NK細(xì)胞甘草的醇提物及甘草酸鈉在體外對(duì)金黃色葡萄球菌、結(jié)核桿菌、大腸桿菌、阿米巴原蟲均有抑制作用。3.3.6抗腫瘤作用實(shí)驗(yàn)研究表明β-甘草次酸較α-異構(gòu)體更有效的抑制強(qiáng)致癌物質(zhì)(苯并芘，黃曲霉素等)的致癌作用。甘草甜素和甘草次酸均有對(duì)人學(xué)中干擾誘導(dǎo)作用能力，生成γ一干擾素，能防止化學(xué)致癌物質(zhì)氨基偶氮苯引起的肝損害，還可預(yù)防肝癌的發(fā)生和由化學(xué)物質(zhì)引起的肝病變。甘草次酸及其衍生物3-0-18-α一甘草次酸對(duì)骨髓瘤有抑制作用，對(duì)小鼠移植性腫瘤也有良好的抑制作用。實(shí)驗(yàn)研究表明，甘草能增強(qiáng)細(xì)胞的解毒作用和抵抗力，也有抗白血病的作用。甘草甜素能抑制組胺釋解劑48/80引起的肥大細(xì)胞脫顆粒反應(yīng)，從而阻止了過(guò)敏介質(zhì)的釋放，還能抑制被動(dòng)皮膚過(guò)敏反映，并能拮抗組胺、乙酰膽堿及過(guò)敏慢性反應(yīng)物質(zhì) (SRS-A)對(duì)兔離體回腸和豚鼠離體氣管的收縮作用。甘草提取物L(fēng)X對(duì)小鼠過(guò)敏具有保護(hù)作用，并可明顯降低青霉噻唑致敏豚鼠的休克發(fā)生率和死亡率。甘草多糖具有激活小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖效應(yīng)，是一種很有希望得免疫調(diào)節(jié)劑。甘草酸給小鼠腹腔注射，能使抗體產(chǎn)生顯著增加；甘草多糖有激活小鼠淋巴細(xì)胞增殖作用。3.3.8解毒作用甘草流浸膏及甘草甜素對(duì)某些藥物中毒、食物中毒、細(xì)菌毒素、農(nóng)藥中毒、體內(nèi)代謝產(chǎn)物中毒都有一定的解毒作用。解毒機(jī)理為甘草甜素對(duì)毒物有吸收作用，甘草酸水解產(chǎn)生1個(gè)分子的甘草次酸和2個(gè)分子葡糖糖醛酸，而葡萄糖醛酸具有解毒作用，以及甘草甜素有腎上腺皮質(zhì)激素樣作用。甘草流浸膏及甘草酸對(duì)水合氯醛、士的寧、烏拉坦、可卡因、苯砷、升汞等毒性有較明顯的解毒作用；對(duì)印防己毒素、咖啡因、乙酰膽堿、毛果云香堿、煙堿、巴比妥等解毒作用次之；對(duì)阿托品、索佛拿、毒扁豆堿、嗎啡、銻劑則無(wú)效；對(duì)腎上腺素及麻黃堿反而有輕度增加其毒性的作用。甘草酸對(duì)河豚毒、蛇毒有解毒作用；還能解除白喉毒素、破傷風(fēng)毒素的致死作用。甘草制劑配合喜樹堿、農(nóng)吉利堿治療腫瘤可降低毒性并有增加療效作用。甘草酸銨與喜樹堿和環(huán)磷酰胺合用，可增加療效，并降低喜樹堿的毒性；甘草酸鈣對(duì)鏈霉素具有明顯的解毒作用。甘草酸及甘草次酸還能抑制四氯化碳生成游離基及過(guò)氧化脂質(zhì)。3.3.9鎮(zhèn)咳祛痰作用甘草黃酮、甘草次酸及其衍生物有鎮(zhèn)咳作用，其鎮(zhèn)咳作用是通過(guò)神經(jīng)中樞產(chǎn)生的，甘草次酸膽堿鹽是鎮(zhèn)咳作用最強(qiáng)的成分。甘草次酸氫化琥珀酸雙膽鹽的鎮(zhèn)咳作用與可待因接近。甘草能促進(jìn)咽喉支氣管的腺體分泌，具有祛痰作用。3.3.10降脂作用及抗動(dòng)脈粥樣硬化作用甘草甜素能促進(jìn)膽固醇含量降低、磷脂質(zhì)明顯下降，中性脂肪β-脂蛋白、游離脂肪酸亦有下降。甘草甜素可抑制機(jī)體和血管壁的炎癥反應(yīng)，可防止動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生及發(fā)展。 甘草酸有明顯的降脂作用，能阻止大動(dòng)脈及冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展，如甘草單胺 (MAG)對(duì)家兔和大鼠實(shí)驗(yàn)性動(dòng)脈粥樣硬化有明顯的降低血膽固醇、β-脂蛋白即三酸甘油脂作用；甘草酸鹽有抑制磷脂酶A?活性作用，也可以抑制血小板的凝集作用。3.3.11抗腦缺血作用甘草酸預(yù)先給藥20mg/mg,并連續(xù)給藥4mg/mg,1天2次，能明顯提高再灌注大犬3.3.12抗利尿作用甘草酸對(duì)大鼠有抗利尿作用，鈉排除量減少，鉀排除量也輕度減少；甘草增加腎小管對(duì)鈉和氯的重吸收，而呈現(xiàn)利尿作用，其作用方式與去氧皮質(zhì)酮不同，可能是對(duì)其腎小管的直接作用有關(guān)。3.3.13解痙鎮(zhèn)痛作用甘草對(duì)眼瞼肌痙攣、腸肌痙攣及血液透析出現(xiàn)的肌痙攣有效；FM100和異甘草素等黃酮類化合物，對(duì)動(dòng)物離體腸管有抑制作用，并能解除乙酰膽堿、氯化鋇、組胺所致的腸痙攣，具有罌粟堿樣特異性的解痙能力。3.3.14其他甘草酸能減輕鏈霉素對(duì)前庭神經(jīng)的損害，甘草酸與鏈霉素堿基結(jié)合生成甘草酸鏈霉素后，不影響其體外抗菌活性外，但能減輕鏈霉素對(duì)耳前庭神經(jīng)的損害；甘草次酸有提高豚鼠內(nèi)耳聽覺(jué)功能的作用。甘草次酸能引起假醛固酮增多，引起高血壓、水腫、低血鉀、低腎素、高醛固酮活性等。甘草能治療老年骨質(zhì)疏松癥。甘草附子湯對(duì)老年性腰背痛、胸椎腰椎壓迫性及疲勞性骨折的疼痛，或臥床翻身、排便困難者都有良好的止痛作用。近年來(lái)，并未見(jiàn)到對(duì)瀉白散復(fù)方的藥理學(xué)研究。4中藥譜效關(guān)系的研究概況[54中藥成分極其復(fù)雜，尤其是復(fù)方，測(cè)定少數(shù)幾種有效成分或指標(biāo)成分，不足以保證復(fù)方即制劑質(zhì)量[SS]。從中醫(yī)的觀點(diǎn)看，對(duì)指標(biāo)成分的控制，難以真正控制中藥藥效。黃連素與黃連、甘草酸與甘草、人參皂甙與人參等在中醫(yī)看來(lái)是兩回事。中藥的“補(bǔ)氣”、的整體作用結(jié)果。這些物質(zhì)群的整體情況，包括其所含的物質(zhì)數(shù)、物質(zhì)量和組成比例差異，都會(huì)對(duì)藥效發(fā)生影響。所以要控制中藥藥效，不能只針對(duì)某一、二個(gè)化學(xué)成分，必有效部位或有效成分的種類，建立全面反映其成分方成分的整體性和綜合作用，更好地評(píng)價(jià)中藥復(fù)方計(jì)量學(xué)的理論與方法，進(jìn)行數(shù)據(jù)解析和特征信息的立多模式多柱色譜、多元檢測(cè)、多水平評(píng)價(jià)的系統(tǒng)制劑的質(zhì)量，更具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。中藥復(fù)方指紋的中藥指紋圖譜與功效結(jié)果相對(duì)應(yīng)起來(lái)，將中藥指評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)提供規(guī)律性的科學(xué)依據(jù)，從而建立中藥產(chǎn)E質(zhì)量的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，真正對(duì)我國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代化、國(guó)際沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文瀉白散譜效關(guān)系的研究第二章瀉白散高效液相色譜分析方法的建立島津LC-ATvp高效液相色譜儀，包括：島津LC-Atvp泵系統(tǒng)，SPD-M10Avp二極管陣列檢測(cè)器(190～800nm),Class-VP色譜工作站；天平(北京光學(xué)儀器廠);ModelC3860超聲振蕩儀(天津開發(fā)區(qū)色譜分析儀器有限公司);微量進(jìn)樣器(美國(guó)HAMILTON公司);ZFQ85A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海醫(yī)械專機(jī)廠);1.2試劑與藥材色譜醇乙腈(天津市康科德科技有限公司);色譜甲醇(天津市康科德科技有限公司)娃哈哈純凈水(杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司);冰醋酸(分析純，沈陽(yáng)化學(xué)試劑廠)桑白皮、地骨皮、甘草藥材購(gòu)自沈陽(yáng)成大方圓藥店，經(jīng)劉曉秋教授鑒定為正品。桑白皮為?？浦参锷orusalbaL.的干燥根皮，地骨皮為茄科植物枸杞Lyciumchinense粉碎，過(guò)60目篩。色譜柱：AngilentTC-Ci?(150mm×4.6mm,5μm),安捷倫科技公司檢測(cè)波長(zhǎng)：274nm;分析時(shí)間：45min;0001.4樣品制備取處方量藥材，加10倍量水，加熱至沸，并保持微沸30分鐘，過(guò)程中隨時(shí)補(bǔ)水至足量。紗布過(guò)濾后，濾液濃縮至近干，加入95%乙醇，使含醇量達(dá)50%,靜置冷藏12h,過(guò)濾后回收乙醇并減壓低溫濃縮成浸膏粉末，用時(shí)配成10mg/mL濃度，離心并微孔濾膜過(guò)濾后進(jìn)樣。2條件選擇及方法考察2.1提取方式的選擇考慮到古方以水為提取溶媒，同時(shí)兼顧液相測(cè)定的具體條件，本試驗(yàn)選擇了3種提取方式：(1)取1/10處方量藥材，用10倍量50%乙醇回流提取30min,回收乙醇并定容至(2)取1/10處方量藥材，加10倍量水，加熱至沸，并保持微沸30分鐘，過(guò)程中隨時(shí)補(bǔ)水至足量。紗布過(guò)濾后，濾液濃縮至近干，加入95%乙醇，使含醇量達(dá)50%,靜置冷藏12h,過(guò)濾后回收乙醇并定容至25mL,立即進(jìn)樣。(3)取1/10處方量藥材，加10倍量水，加熱至沸，并保持微沸30分鐘，過(guò)程中隨時(shí)補(bǔ)水至足量。紗布過(guò)濾后，濾液濃縮至近干，加入95%乙醇，使含醇量達(dá)50%,靜置冷藏12h,過(guò)濾后回收乙醇，濃縮至近干，加入95%乙醇，使含醇量達(dá)85%,靜置冷藏12h,過(guò)濾后回收乙醇并定容至25mL,立即進(jìn)樣。試驗(yàn)結(jié)果表明50%乙醇提取物與水提醇沉相比水溶性成分減少且脂溶性成分干擾較大，因此選擇水提醇沉為提取方法；并且先醇沉至含醇量50%再沉至含醇量85%對(duì)樣品的峰數(shù)量及峰面積影響不大，因此選擇醇沉至含醇量50%即可。所以，本實(shí)驗(yàn)選擇(2)法為提取方法。2.2樣品貯存方式的選擇在本實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，HPLC研究和藥效學(xué)研究須為同一份樣品，考慮到藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)的周期較長(zhǎng)，因此樣品需要有較長(zhǎng)時(shí)間的穩(wěn)定性，因此本文考察了兩種樣品的貯存方式：(1)樣品以水溶液形式貯存。如項(xiàng)2.4.1所述提取樣品，于0、1、2、3、4、5、6h 進(jìn)樣20μL,記錄色譜圖。如圖2-1、2-2所示，在6個(gè)小時(shí)內(nèi)，新生成了9號(hào)峰。選擇圖2-x所示的11個(gè)峰為對(duì)象，讀取其峰面積，并計(jì)算上述峰的峰面積的RSD值如表2-2所示，結(jié)果顯示峰面積相差較大，樣品水溶液在6h內(nèi)不穩(wěn)定。1234567890(2)樣品以浸膏粉末形式貯存。于0、2、4、8、24、72h稱取樣品浸膏粉末0.1g,用水溶解并定容至25mL,進(jìn)樣20μL,記錄色譜圖如圖2-3。選取其中11個(gè)峰，以相對(duì)峰面積為對(duì)象，考察其72h內(nèi)的峰面積變化，其RSD值如表2-4所示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，以浸膏粉末形式保存，樣品穩(wěn)定性好，所以選擇以浸膏粉末形式保2.3流動(dòng)相的選擇分別考察了如下流動(dòng)相：甲醇-0.5%三乙胺水溶液；甲醇-1%冰醋酸水溶液；1%冰醋酸甲醇溶液一水溶液；乙腈-1%冰醋酸水溶液；乙腈-0.5%冰醋酸水溶液；乙腈-0.1%冰醋酸水溶液；實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，乙腈作為有機(jī)相能夠達(dá)到較好的分離效果，水相中加入冰醋酸能夠改善峰分離，但是與乙腈-水系統(tǒng)并無(wú)實(shí)質(zhì)改變，且水相中冰醋酸的濃度對(duì)分離的影響不大，考慮到酸對(duì)色譜柱有損害，因此選擇乙腈-水系統(tǒng)。320nm檢測(cè)波長(zhǎng)下瀉白散樣品溶液的指紋圖譜，結(jié)果在274nm下圖譜峰形好、信息多，分離效果好，因此選擇274nm波長(zhǎng)記錄保留時(shí)間和峰面積。2.5色譜柱的選擇本實(shí)驗(yàn)曾選用三種反相C18色譜柱：(1)DiamondC18(200mm×4.6mm,5μm),迪馬公司；(2)KromaisilC18(200mm×4.6mm,5μm),天津開發(fā)區(qū)色譜分析儀器有限公司；(3)AngilentTC-C18(150mm×4.6mm,5μm),安捷倫科技公司。試驗(yàn)結(jié)果表明，AngilentTC-C18(150mm×4.6mm,5μm)色譜柱的分離較好，保留時(shí)間適宜，因此選擇此色譜柱為本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)色譜柱。2.6進(jìn)樣量的選擇取同一樣品，分別進(jìn)樣10μL和20μL,比較色譜圖，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，進(jìn)樣量對(duì)指紋圖譜的結(jié)果影響不大，但加大進(jìn)樣量可以減弱梯度洗脫時(shí)的基線漂移程度。進(jìn)樣量為本實(shí)驗(yàn)為了取得較好的分離度，曾選擇了0.6mL/min、0.8mL/min、1.0mL/min,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明0.8mL/min的流速分離效果最好，因此選擇0.8mL/min為本實(shí)驗(yàn)的流速。2.8穩(wěn)定性試驗(yàn)分別于0、2、4、8、72小時(shí)精密稱取1號(hào)樣品浸膏0.1g,溶解并定容至25mL,吸取20μL進(jìn)樣，記錄保留時(shí)間(RT)和峰面積(A),結(jié)果保留時(shí)間、峰面積的RSD均小于5%,結(jié)果見(jiàn)表2-3、2-4。1234沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文瀉白散譜效關(guān)系的研究56789Tab.2-4Stabilityofdetermination(powder,peakarea)精密吸取5批1號(hào)樣品供試液，按上述色譜條件時(shí)間(RT)和峰面積(A)的RSD均小于5%,結(jié)果,分別進(jìn)樣，記錄色譜圖。見(jiàn)表2-5、2-6。12345678912345123456789實(shí)驗(yàn)表明，該色譜條件穩(wěn)定，能夠作為瀉白散HPLC圖譜的色譜條件。3高效液相色譜圖中峰的歸屬高效液相色譜圖共標(biāo)定12個(gè)峰，圖譜總分析時(shí)間為45分鐘。以2.1、2.2所述的樣品制備貯存方式制備各單味藥的樣品，對(duì)照各單味藥的色譜圖，對(duì)12個(gè)峰進(jìn)行歸屬，如圖2-4所示。結(jié)果表明，1、2、3、4、5、10號(hào)峰為桑白皮的峰，6、7、8、9、11號(hào)峰為甘草的峰。色譜圖中沒(méi)有歸屬到地骨皮的相關(guān)峰。記錄各峰的紫外掃描圖(190-380nm)如圖2-5所示。4小結(jié)與討論(1)由于樣品以溶液形式存在非常不穩(wěn)定，所以通過(guò)試驗(yàn)決定采用粉末形式保存，在進(jìn)樣前溶解測(cè)定。(2)通過(guò)試驗(yàn)建立了高效液相的色譜分析方法。(3)高效液相色譜中共標(biāo)定了12峰，并對(duì)其進(jìn)行了歸屬，1、2、3、4、5、10號(hào)峰為桑白皮的峰，6、7、8、9、11號(hào)峰為甘草的峰。色譜圖中沒(méi)有歸屬到地骨皮的相關(guān)峰，這可能是因?yàn)闃悠芬运芤盒问酱嬖?，多種成分互相作用下，影響了某些成分的穩(wěn)定性。。缺9號(hào)峰158526.4835.31Fig.2-1HPLCofsample'ssolution(Oh)Fig.2-2HPLCofsampl沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文瀉白散譜效關(guān)系的研究Fig.2-3HPLCofsample'spowder(0-7第二章瀉白散高效液相色譜條件的建立Fig.2-4AssignmentofXiebaiPowder'sHPLC(A:Recipe;B:CortexMori;C:Radixet瀉白散譜效關(guān)系的研究沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文瀉白散譜效關(guān)系的研究152637spectrumofpeaks48ContinuedFig.2-5UVscanningspectrum算機(jī)技術(shù)將化學(xué)數(shù)據(jù)與藥效學(xué)數(shù)據(jù)相關(guān)聯(lián)，得到該復(fù)方1藥效學(xué)試驗(yàn)昆明種小白鼠，體重20±2g,子性，由沈陽(yáng)藥科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。生理鹽水(自制);二甲苯(分析純，沈陽(yáng)試劑一廠);酚紅(天津博迪化工有限公司);桑白皮、地骨皮、甘草藥材購(gòu)自沈陽(yáng)成大方圓藥店，經(jīng)劉曉秋教授鑒定為正品。桑白皮為桑科植物桑MorusalbaL.的干燥根皮，地骨皮為茄科植物枸杞Lyciumchinense粉碎，過(guò)60目篩。小鼠灌胃器(自制);6mm打空器(自制);電子分析天平(北京光學(xué)儀器廠);微量移液器(美國(guó)HAMILTON公司);1ml注射器(常州醫(yī)療器材總廠);紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(UV9100,北京瑞利分析儀器有限公司);島津LC-ATvp高效液相色譜儀，包括：島津LC-Atvp泵系統(tǒng)，SPD-M10Avp二極管陣列檢測(cè)器(190～800nm),Class-VP色譜工作站；1.2藥理指標(biāo)的選擇方劑的藥理學(xué)研究是揭示中藥方劑組成原則和配伍變化的中藥方法，也是開發(fā)研究新的中藥制劑不可缺少的手段。瀉白散，具有清瀉肺熱、平喘止咳的功用，方中桑白皮主入肺經(jīng)，傾瀉肺熱，平喘止咳，為君藥。地骨皮甘寒入肺，可助君藥瀉肺中伏火，且有養(yǎng)陰之功，君臣相合，清瀉肺火，以復(fù)肺氣之肅降。呼吸系統(tǒng)藥物研究主要采用鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘等藥理實(shí)驗(yàn)方法，本文選擇了祛痰實(shí)驗(yàn)方法，同時(shí)，由于咳嗽普遍伴隨炎癥反應(yīng)，本文還選擇了抗炎實(shí)驗(yàn)方法對(duì)瀉白散進(jìn)行藥效研究。祛痰實(shí)驗(yàn)常用如下3種方法：(1)氣管酚紅法。常用小鼠或家兔，通過(guò)給動(dòng)物腹腔或靜脈注入一定量的酚紅，可部分的從氣管分泌排除，從動(dòng)物氣管中排泌酚紅的量，來(lái)確以一定時(shí)間內(nèi)吸取痰液量的多少，來(lái)判斷藥物的排痰效果。(3)氣管纖毛黏液流運(yùn)動(dòng)法：常用家鴿、家兔，以墨汁為標(biāo)記(也可用染料、炭粉、軟木粒等),觀察一定時(shí)間內(nèi)墨汁在氣管黏膜表面運(yùn)動(dòng)距離的長(zhǎng)短，判斷藥物的排痰效果。急性非特異性炎癥模型包括如下3種方法：(1)大鼠足跖腫脹法，實(shí)驗(yàn)常采用的致炎劑有角叉菜膠、酵母、瓊酯、右旋糖酐、甲醛、雞蛋清等致炎劑。此法形成的炎癥模型可靠。(2)鼠耳腫脹法，實(shí)驗(yàn)常采用二甲苯或混合致炎液致炎，本法復(fù)制成功率高，適用于新抗炎藥常規(guī)篩選。(3)白細(xì)胞游走法，以明膠引起小鼠腹腔中嗜中性白細(xì)胞數(shù)升高，觀察藥物的抗炎作用?？紤]到標(biāo)本兼治、中西醫(yī)結(jié)合等原則，結(jié)合藥效選擇了2個(gè)藥理指標(biāo)：抗炎(小鼠耳腫脹法)、祛痰(小鼠氣管酚紅法)。試驗(yàn)設(shè)計(jì)是試驗(yàn)過(guò)程的依據(jù)，也是試驗(yàn)研究質(zhì)量的一個(gè)重要保證。正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)是研究處理多因素試驗(yàn)的一種科學(xué)方法，它利用正交表(Orthogonallayout)安排試驗(yàn)，沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文瀉白散譜效關(guān)系的研究齊可比”的特點(diǎn)，“均勻分散”使被挑選的點(diǎn)具有代表性，“整齊可比”使結(jié)果便于分析。瀉白散由桑白皮30g,地骨皮30g,甘草6g組成。選擇處方中3味藥物構(gòu)成3個(gè)因試驗(yàn)，共進(jìn)行9次試驗(yàn)。各因素水平見(jiàn)表3-1,試驗(yàn)安排見(jiàn)表3-2C1623391234567891123312231A:CortexMori;B:Cortex取處方量藥材，加10倍量水，加熱至沸，并保持微足量。紗布過(guò)濾后，濾液濃縮至近干，加入95%乙醇，使含醇量達(dá)50%,靜置冷藏12h,1.5小鼠的抗炎試驗(yàn)(二甲苯致小鼠耳腫脹法)選取小鼠，體重20±2g,子性，隨機(jī)分組，每組10只，苦味酸標(biāo)記，累計(jì)給藥3天 稱量，計(jì)算腫脹度，抗炎抑制率(R),實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表3-3所示。 1234567891.6小鼠的祛痰試驗(yàn)(小鼠氣管酚紅法) 用721型分光光度計(jì)在546nm下測(cè)定OD值，計(jì)算祛痰指數(shù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表3-4所示。123456789**—p<0.01(和空白對(duì)照組比較)2樣品的制備及高效液相色譜分析采用反相高效液相色譜法對(duì)第二章中9個(gè)不同配比提取液在色譜系統(tǒng)條件下繪制指紋圖譜，獲得盡可能多的化學(xué)信息。樣品制備如3.1.4所述；儀器、試劑及色譜條件第二章1.3所述。對(duì)各處方色譜圖進(jìn)行分析，得到12個(gè)色譜峰，依次記為X1~X12,代表個(gè)色譜峰的峰面積。將此化學(xué)數(shù)據(jù)和表3-3、3-4的藥理數(shù)據(jù)組成原始數(shù)據(jù)矩陣，見(jiàn)表3-5。采用化學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)和計(jì)算機(jī)技術(shù)記性數(shù)據(jù)處理，確定該復(fù)方中藥的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。數(shù)據(jù)處理時(shí)將抗炎抑制率記為Y,將祛痰指數(shù)記為Y?。Tab.3-5Originalchemicalof9different1234567891234567893瀉白散譜效關(guān)系分析3.1相關(guān)分析第三章瀉白散藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的確定相關(guān)分析是研究變量之間密切程度的一種常用統(tǒng)計(jì)方法。它包含雙變量相關(guān)分析、偏相關(guān)分析和距離相關(guān)分析。當(dāng)分析多個(gè)事物之間的關(guān)系，而這種關(guān)系又往往是變量之間的數(shù)量關(guān)系時(shí)，可以用雙變量相關(guān)分析方法，并做出統(tǒng)計(jì)學(xué)推斷。利用社會(huì)科學(xué)軟件包SPSS中的雙變量相關(guān)分析可以輸出變量?jī)蓛砷g的皮爾遜相關(guān)系數(shù)(PearsonCorrelationCoefficients),肯德爾相關(guān)系數(shù)(KendallCorrelationCoefficients)和斯皮爾曼Window98/NT的雙變量相關(guān)分析方法處理所得Pearson相關(guān)系數(shù)，見(jiàn)表3-6、3-7。CTab.3-7PearsoncorrelC由表3-6、3-7可以看出：與祛痰藥理指標(biāo)密切相關(guān)的變量有：1、2、3、4、5號(hào)峰，均來(lái)自于桑白皮，它們與祛痰效應(yīng)呈正相關(guān)，有增強(qiáng)作用。與抗炎藥理指標(biāo)密切相關(guān)的變量有：1、2、3、4、5號(hào)峰，均來(lái)自于桑白皮，它們與抗炎效應(yīng)呈正相關(guān)，有增強(qiáng)作用?；貧w分析(Regression)是研究一個(gè)或多個(gè)自變量(Independents)與一個(gè)因變量 (Dependent)之間是否存在某種線性或非線性關(guān)系的一種統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法。根據(jù)多元回歸自變量選擇的不同，多元回歸可以有多種不同的計(jì)算方法，SPSSforWindows98/NT的多重線性回歸分析中提供了5種建立回歸方程的方法：強(qiáng)迫引入法(Enter)、逐步回歸法(Stepwise)、強(qiáng)迫剔除法(Remove)、后向逐步法(Backward)、前向逐步法(Forward)。沈陽(yáng)藥科大學(xué)碩士學(xué)位論文瀉白散譜效關(guān)系的研究利用強(qiáng)迫引入法(Enter)處理所得結(jié)果如表3-8所示。256789采用回歸分析一次分析化學(xué)數(shù)據(jù)和上述二項(xiàng)藥理指標(biāo)的關(guān)系，結(jié)果表明在12個(gè)色譜峰中有8個(gè)與藥理數(shù)據(jù)密切相關(guān)的色譜峰被引入回歸方程。它們依次為2、5、6、7、8、9、10、12號(hào)峰所代表的化學(xué)成分。其中2、5、10號(hào)峰來(lái)自于桑白皮，6、7、8、9號(hào)峰來(lái)自于甘草。綜合相關(guān)分析和回歸分析結(jié)果，12個(gè)色譜峰中的2、5號(hào)色譜峰所代表的化學(xué)成分(化學(xué)成分群)與藥理密切相關(guān)。通過(guò)對(duì)2號(hào)峰和5號(hào)峰的紫外掃描圖，如圖3-1所示。2號(hào)峰和5號(hào)峰所對(duì)應(yīng)化學(xué)成分均在290nm和325nm左右有紫外吸收。通過(guò)與文獻(xiàn)2對(duì)比，判斷其可能為二苯乙烯苷類成分。4小結(jié)與討論(1)通過(guò)實(shí)驗(yàn)得出了9組配方的高效液相色譜圖并與相對(duì)應(yīng)的處方進(jìn)行了祛痰作用和抗(2)相關(guān)性分析結(jié)果表明在12個(gè)色譜峰中有5個(gè)與藥理數(shù)據(jù)密切相關(guān)的色譜峰與祛痰和抗炎作用呈正相關(guān)，其均來(lái)自于桑白皮。(3)回歸分析結(jié)果表明在12個(gè)色譜峰中有8個(gè)與藥理數(shù)據(jù)密切相關(guān)的色譜峰被引入回歸方程。它們依次為2、5、6、7、8、9、10、12號(hào)峰所代表的化學(xué)成分。其中2、5、10號(hào)峰來(lái)自于桑白皮，6、7、8、9號(hào)峰來(lái)自于甘草。(4)綜合回歸分析和相關(guān)性分析結(jié)果，確定與瀉白散祛痰和抗炎作用密切相關(guān)的為2號(hào)峰和5號(hào)峰所代表的化學(xué)成分，其均來(lái)自于桑白皮。通過(guò)對(duì)其在紫外190-380nm下掃描可得其在290nm和325nm處有最大紫外吸收，通過(guò)對(duì)比文獻(xiàn)，判定其為二苯乙烯苷類成分。第三章瀉白散藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的確定與法，標(biāo)定了其中12個(gè)色譜峰，并對(duì)其中11個(gè)峰進(jìn):號(hào)峰為桑白皮的峰，6、7、8、9、11號(hào)峰為甘草的關(guān)峰，這可能是在樣品制備的過(guò)程中地骨皮成分損〔樣品制備方式所得的成分在紫外下沒(méi)有吸收所致；名的穩(wěn)定性。通過(guò)試驗(yàn)決定采用粉末形式保存，在進(jìn)在6個(gè)小時(shí)內(nèi)，色譜峰面積迅速發(fā)生變化，并且出舌以粉末形式保存，色譜峰面積在3天內(nèi)保持穩(wěn)定。:多種成分相互作用下，影響了某些成分的穩(wěn)定性。寫白散進(jìn)行祛痰作用和抗炎作用的研究，實(shí)驗(yàn)表明正炎、祛痰作用，并采用相關(guān)分析和回歸分析對(duì)瀉白果表明有5個(gè)與色譜峰與祛痰和抗炎作用呈正相關(guān)，乏明有8個(gè)與藥理數(shù)據(jù)密切相關(guān)的色譜峰被引入回歸3、10、12號(hào)峰所代表的化學(xué)成分。其中2、5、10號(hào)E自于甘草。綜合回歸分析和相關(guān)性分析結(jié)果，確定勻?yàn)?號(hào)峰和5號(hào)峰所代表的化學(xué)成分，其均來(lái)自于桑掃描可得其在290nm和325nm處有最大紫外吸收，通關(guān)成分。咳、祛痰、平喘等藥理實(shí)驗(yàn)方法，本文選擇了祛痰炎癥反應(yīng)，本文還選擇了抗炎實(shí)驗(yàn)方法對(duì)瀉白散進(jìn)對(duì)瀉白散譜效關(guān)系的報(bào)道，也無(wú)對(duì)瀉白散血漿移行[苯乙烯苷類成分進(jìn)行譜效關(guān)系的進(jìn)一步研究，確定[2]KazuhiroHirakura,ToshioFukai,YoshioHanonand,etal.ANatualDiel-AlderTypeRootBarkofMoursIhou[J].Phytochemistry,1985,24(1):159[3]JunkoIkuta,TohioFukai.ConsituentsofMorusalbaL.cellCultures[J].Chemical&PharmaceutBulletin,1986,34(6):2471-2478.[4]YoshioHano,Kazuhra.CompomentsofRootBarkofMorusIhou[J].PlantaMedica,1984,50(2):127-133.[5]ToshioFukai,YoshioHano.StructuresofaNovelDerivativefromtheCultivateBulletin,1985,33(10):428[6]KazuhiroHirakura,YoshioHano.StrucuresofthreeNewNaturalDiels-AlderPandX,andMulberrofuranJ,fromthPharmaceuticalBulletin,1985,33(3):1088-1096.[7]YoshioHano,HiromiTsubura,StruCultivatedMuberryTree(MorusalbaL.)[J].Heterocycles,1986BarkofaMulberryTree[J].Heterocycles,1989,29(4):807-813.[12]JinYinSun,YoshiMorusmonglicaSchneider[J].Heterocycles,1989,29(1):1[14]Ya-Qinshi,ToshioFukai.CytotoxicFlavonoidswithIsmonlica[J].JournalofNaturalProducts,2001,64(2):181-188.[15]ToshioFukai,Yue-Hupei.ComponentsoftheRootBarkofMorusHeterocycles,1996,43(2):425-436.[16]Shi,Ya-Qin,Fukai,Toshio.PhenolicConstituentsoftheRootBarkofChineseMorusaustrslis[J].NaturalMedicines(Tokyo,Japan),2001,55(3):143-146.[17]YoshioHano,TsuyoshiOkamoto.ComponetsoftheRootBarkofMorusinsignisBur[J].Heterocycles,1993,36(6):1359-1366.[18]YoshioHano,TsuyoshiOkamoto.ComponetsoftheRootBarkofMorusinsignisBur[J]