請同學(xué)們自主閱讀教材P11-13，完成優(yōu)化學(xué)案P10-111.相關(guān)概念：培養(yǎng)物？純培養(yǎng)物？純培養(yǎng)？（P11）2.什么是菌落？單菌落？（P12）3.獲得單菌落的方法？（P12）4.酵母菌的純培養(yǎng)的基本步驟？（注意倒平板和接種的具體操作）任務(wù)三：純培養(yǎng)物培養(yǎng)物純培養(yǎng)在微生物學(xué)中，將接種于培養(yǎng)基內(nèi)，在合適條件下形成的含有特定種類微生物的群體。獲得純培養(yǎng)物的過程。由單一個體繁殖所獲得的微生物群體。配制培養(yǎng)基滅菌倒平板接種和分離培養(yǎng)制備培養(yǎng)基三、微生物純培養(yǎng)酵母菌的純培養(yǎng)

分散的微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，這就是菌落。采用平板劃線法和稀釋涂布平板法能將單個微生物分散在固體培養(yǎng)基上，之后經(jīng)培養(yǎng)得到的單菌落一般是由單個微生物繁殖形成的純培養(yǎng)物。下面，我們嘗試在馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基上進(jìn)行酵母菌的純培養(yǎng)。

目的要求1.學(xué)會配制培養(yǎng)酵母菌的培養(yǎng)基并倒平板。2.

學(xué)會進(jìn)行無菌操作。3.嘗試通過平板劃線操作來獲得純化的酵母菌菌落。

材料用具酵母菌培養(yǎng)液、馬鈴薯、葡萄糖(或蔗糖)、瓊脂、蒸餾水、天平、小刀、紗布、燒杯、錐形瓶、棉塞、牛皮紙(或報紙)、皮筋、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、酒精燈、超凈工作臺、高壓蒸汽滅菌鍋、干熱滅菌箱和恒溫培養(yǎng)箱等。實驗：酵母菌的純培養(yǎng)接種和分離培養(yǎng)酵母菌制備培養(yǎng)基1.制備培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基滅菌倒平板方法步驟（1）配制培養(yǎng)基1、制備培養(yǎng)基(四).實驗步驟稱取去皮的馬鈴薯200g切成小塊加水1000mL，加熱煮沸至馬鈴薯軟爛。用紗布過濾濾液中加入20g葡萄糖，15~20g瓊脂。用蒸餾水定容至1000mL得到濾液三、微生物純培養(yǎng)（2）滅菌1、制備培養(yǎng)基(四).實驗步驟將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加棉塞。包上牛皮紙，并用皮筋勒緊。壓力100kPa、溫度為121℃的條件下，滅菌15~30min。取5~8套培養(yǎng)皿培養(yǎng)皿疊成一束用幾層牛皮紙包緊放入干熱滅菌箱內(nèi)，160~170℃滅菌2h。三、微生物純培養(yǎng)培養(yǎng)基冷卻到50℃左右，在酒精燈火焰附近倒平板。1拔出錐形瓶的棉塞。2將瓶口迅速通過火焰。3用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿（10～20mL），立即蓋上皿蓋。4等待培養(yǎng)基冷卻凝固后，將培養(yǎng)皿倒過來放置。1.防止培養(yǎng)基水分過快蒸發(fā)。2.防止皿蓋上冷凝水滴落，造成污染。通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。不能完全打開，以免雜菌污染培養(yǎng)基。（3）倒平板：1、制備培養(yǎng)基可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺溫度下降到剛剛不燙手即可。三、微生物純培養(yǎng)倒平板①培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？②在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？③平板冷凝后，為什么要將平板倒置？④怎么確定所倒平板未被雜菌污染？可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺溫度下降到剛剛不燙手時即可。最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。防止空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠。將平板倒置，既可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，又可以避免培養(yǎng)基中的水分過快地?fù)]發(fā)。將所倒平板放入37℃的恒溫箱中培養(yǎng)，觀察是否有菌落存在以確定是否被污染或滅菌是否徹底。(四).方法步驟

通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。經(jīng)過數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到單菌落。連續(xù)劃線法分區(qū)劃線法2、接種和分離酵母菌平板劃線法分離的方法：三、微生物純培養(yǎng)平板劃線法單個細(xì)胞微生物群單個菌落連續(xù)劃線稀釋分散生長繁殖①灼燒接種環(huán)，直至接種環(huán)金屬絲燒紅。⑤試管口通過火焰，并塞上棉塞。

②在火焰旁冷卻接種環(huán)，拔出酵母菌培養(yǎng)液試管的棉塞。

③試管口通過火焰。

④在火焰附近用接種環(huán)蘸取一環(huán)菌液。

⑦灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一次劃線的末端開始作第二次劃線。重復(fù)以上操作，作第三、四、五次劃線。⑥將皿蓋打開一條縫隙，將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃3-5條平行線，蓋上皿蓋。三、微生物純培養(yǎng)12345【平板劃線法注意事項】1.接種環(huán)只蘸一次菌液，但要在培養(yǎng)基不同位置連續(xù)劃線多次。2.劃線不要將最后一次的劃線與第一次的劃線相連。3.每次劃線前灼燒接種環(huán)進(jìn)行滅菌；劃線操作結(jié)束后，仍需灼燒接種環(huán)。將聚集的菌種進(jìn)行稀釋，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。思考：為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)的原因。分區(qū)劃線法（1）取菌種前灼燒：（2）每次劃線前灼燒：（3）接種結(jié)束后灼燒：

滅菌，殺死接種環(huán)上原有微生物。殺死上次劃線時殘留菌種，使下一次劃線的菌種直接來源上次劃線的末端，從而使每次劃線時菌種數(shù)目逐漸減少，直至得到單個細(xì)胞。殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。三、微生物純培養(yǎng)問題思考與分析：1.在灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻再進(jìn)行劃線，目的是什么？3.為什么劃線時要注意不能劃破培養(yǎng)基？2.除第一次劃線外，每次劃線都從上一次劃線的末端開始，目的是什么？避免溫度過高殺死菌種將聚集的菌種進(jìn)行稀釋，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。①一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；②存留在劃破處的單個細(xì)胞無法形成規(guī)矩的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個條狀的菌落。三、微生物純培養(yǎng)3.培養(yǎng)酵母菌

完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的平板和一個未接種的平板倒置，放入28℃左右（培養(yǎng)溫度因酵母菌種類的不同而稍有差異）的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24~48h。在實驗室中，切不可吃東西、喝水，離開實驗室時一定要洗手，以防止被微生物感染。使用后的培養(yǎng)基在丟棄前一定要進(jìn)行滅菌處理，以免污染環(huán)境。警示對照：說明培養(yǎng)基是否被雜菌污染。(四).方法步驟劃3個平板（重復(fù)實驗）和1個不劃線（空白對照）防止皿蓋上冷凝水滴落，造成污染。三、微生物純培養(yǎng)1.在未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長？如果有，說明了什么？

結(jié)果分析與評價

若有菌落生長，則說明培養(yǎng)基被污染或滅菌不徹底；若無，則說明培養(yǎng)基未被污染且已徹底滅菌，培養(yǎng)基可以使用2.在接種酵母菌的培養(yǎng)基上，你是否觀察到了單菌落？這些菌落的顏色、形狀和大小是否一致？如果你觀察到了不同形態(tài)的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的嗎？在接種酵母菌的培養(yǎng)基上可觀察到單菌落。如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合酵母菌菌落的特點，則說明純化酵母菌的操作成功；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他形態(tài)的菌落，則說明在純化過程中，無菌操作還未達(dá)到要求，可能所用菌液不純，或者在實驗操作過程中被雜菌污染3.你是如何記錄實驗結(jié)果的？可以在培養(yǎng)12h和24h后，觀察菌落的大小、形狀、顏色。培養(yǎng)24h后，菌落的大小、形狀是否發(fā)生變化，菌落顏色是否加深，光澤度是否增加，等等）一、概念檢測

1.微生物的純培養(yǎng)既需要適宜的培養(yǎng)基，又要防止雜菌污染。判斷下列相關(guān)表述是否正確。

（1）培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)濃度越高，對微生物的生長越有利。（）（2）消毒和滅菌的殺菌程度存在差異。（）（3）微生物的純培養(yǎng)物就是不含有代謝廢物的微生物培養(yǎng)物。（）×√×練習(xí)與應(yīng)用

2.日常生活中保存食品的方法有哪些？這些方法是如何阻止或抑制微生物生長的？干制——降低食品的水分含量；腌制——通過食鹽、糖等制造高滲環(huán)境，從而抑制微生物的生長和繁殖；低溫儲存——通過降低微生物的代謝速率來抑制微生物的生長和繁殖。二、拓展應(yīng)用

1.某同學(xué)將5個手指尖在貼有“洗手前”標(biāo)簽的培養(yǎng)基上輕輕按一下。然后用肥皂將該手洗干凈，再將5個指尖在貼有“洗手后”標(biāo)簽的同種培養(yǎng)基上輕輕按一下。將這兩個培養(yǎng)皿放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，發(fā)現(xiàn)貼有“洗手后”標(biāo)簽的培養(yǎng)皿中菌落較少。請分析回答下列問題。（1）這個實驗中需要進(jìn)行滅菌處理的材料用具有________________。（2）“將指尖在培養(yǎng)基上輕輕按一下”相當(dāng)于微生物培養(yǎng)中的哪一步操作？（3）從實驗結(jié)果來看，洗手后我們就能進(jìn)行無菌操作了嗎？操作時，我們可以采用什么方法來避免手上微生物的污染？練習(xí)與應(yīng)用培養(yǎng)皿和培養(yǎng)基接種洗手后手上還有一些微生物，不能直接進(jìn)行無菌操作。可以通過用酒精棉球擦拭雙手，或戴消過毒的手套等方法來避免手上微生物的污染。

2.某生物興趣小組將從葡萄皮上成功分離來的野生酵母菌分別接種于3個盛有等量同種液體培養(yǎng)基的錐形瓶中，并放置在搖床上培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速分別為210r/mi