PAGEPAGE1第三節(jié)動物的克隆1．簡述動物細(xì)胞、組織培育。(重點)2.描述細(xì)胞系及細(xì)胞株的含義。3．簡述動物的克隆培育法。4.駕馭動物細(xì)胞核移植的概念和核移植的程序。(難點)一、動物細(xì)胞的培育和克隆形成1．動物細(xì)胞培育(1)將動物體內(nèi)的一部分組織取出，經(jīng)過機械消化或胰酶消化，使其分散成單個的細(xì)胞，然后，在人工限制的培育條件下，使這些細(xì)胞得以生存并保持生長、分裂乃至接觸抑制和有規(guī)律的蒼老、死亡等生命活動現(xiàn)象。(2)動物細(xì)胞培育的流程：取動物組織塊(動物胚胎或幼齡動物的器官或組織)→剪碎→用胰蛋白酶處理分散成單個細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入特別培育液中進行原代培育→貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶處理分散成單個細(xì)胞接著傳代培育。2．動物組織培育動物組織在體外及人工條件下維持生活狀態(tài)或生長特性。由于細(xì)胞的運動、變更和培育物的組織成分發(fā)生變更，長期的培育結(jié)果最終成了簡潔的細(xì)胞培育。綜合細(xì)胞培育和組織培育的含義和規(guī)律，兩者在確定程度上可以看作是同義語，因此可將它們統(tǒng)稱為組織培育(組培)。3．細(xì)胞系與細(xì)胞株細(xì)胞系泛指可傳代的細(xì)胞，細(xì)胞株是具有特別性質(zhì)的細(xì)胞系。1．動物細(xì)胞培育中，出現(xiàn)遺傳物質(zhì)變更的細(xì)胞被稱為什么？提示：細(xì)胞系。4．克隆培育法(1)概念：把一個單細(xì)胞從群體中分別出來單獨培育，使之繁衍成一個新的細(xì)胞群體的技術(shù)。(2)細(xì)胞克隆的最基本要求：必需確定所建成的克隆來源于單個細(xì)胞。(3)提高細(xì)胞克隆形成率的措施：選擇相宜的培育基、添加血清、以滋養(yǎng)細(xì)胞支持生長、激素刺激、運用CO2培育箱、調(diào)整pH等。二、細(xì)胞的融合技術(shù)及其應(yīng)用1．細(xì)胞融合與細(xì)胞雜交(1)細(xì)胞融合①概念：是指將兩個或多個動物細(xì)胞融合為一個細(xì)胞的現(xiàn)象。②原理：細(xì)胞膜的流淌性。③誘導(dǎo)融合的方法a．物理方法和化學(xué)方法：電激法、聚乙二醇等。b．生物方法：滅活的病毒(如仙臺病毒)。(2)細(xì)胞雜交①概念：基因型不同的細(xì)胞間的融合就是細(xì)胞雜交。②過程③應(yīng)用：由于細(xì)胞雜交中染色體簡潔丟失，利用雜交細(xì)胞檢測特定染色體丟失與特定基因產(chǎn)物(蛋白質(zhì))削減的對應(yīng)關(guān)系可以進行基因定位。2．單克隆抗體的制備(1)過程(如圖)eq\b\lc\\rc\}(\a\vs4\al\co1(B淋巴細(xì)胞（能產(chǎn)生抗體）,骨髓瘤細(xì)胞（能無限增殖）))eq\o(→,\s\up7(用滅活的病毒誘導(dǎo)),\s\do5(細(xì)胞融合并篩選))多種雜種細(xì)胞eq\o(→,\s\up7(細(xì)胞培育),\s\do5(篩選))能產(chǎn)生專一抗體的且可無限增殖的細(xì)胞群。(2)eq\a\vs4\al(單克隆抗,體的獲得)eq\b\lc\{(\a\vs4\al\co1(體外培育：從細(xì)胞培育液中提取抗體,體內(nèi)培育：從動物腹水中提取抗體))(3)應(yīng)用在疾病診斷、治療與預(yù)防方面與常規(guī)抗體相比具有特異性強、靈敏度高的特點。單抗可作為特異探針，探討相應(yīng)抗原蛋白的結(jié)構(gòu)、細(xì)胞學(xué)分布及其功能。三、動物的克隆繁殖1．動物細(xì)胞全能性的表現(xiàn)程度(1)受精卵及其第一次卵裂所得的2個子細(xì)胞，都可發(fā)育成完整個體。(2)有的細(xì)胞只具有分化出多種組織細(xì)胞的潛能，這樣的細(xì)胞叫做多能細(xì)胞。例如多能造血干細(xì)胞，可分化為紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板等。(3)有的只能分化為一種細(xì)胞，如單能造血干細(xì)胞。(4)有的已經(jīng)分化，不再分化為其他細(xì)胞，甚至終生不再分裂，如高度分化的神經(jīng)細(xì)胞。(5)低等動物細(xì)胞的全能性一般比較簡潔體現(xiàn)。2．動物難以克隆的根本緣由動物細(xì)胞的細(xì)胞分化使得細(xì)胞發(fā)生了基因的差異表達，有的開放，有的關(guān)閉，細(xì)胞中合成了專一的蛋白質(zhì)?；蚪M中基因的活動很不完全，不能像受精卵那樣發(fā)揮細(xì)胞的全能性。3．動物細(xì)胞核移植的概念和程序(1)概念：所謂核移植，就是利用一個細(xì)胞的細(xì)胞核(供體核)來取代另一細(xì)胞中的細(xì)胞核，形成一個重建的“合子”。(2)程序(以克隆羊多莉為例)首先，將未受精卵細(xì)胞的細(xì)胞核吸出。然后，將供體細(xì)胞細(xì)胞核取出與去核的卵細(xì)胞融合，形成重組細(xì)胞，促使其發(fā)育為早期胚胎，到確定程度時，植入母體子宮中，發(fā)育成個體。2．克隆出來的動物個體和親本完全一樣嗎？提示：不完全一樣。要受核基因、質(zhì)基因和外界環(huán)境的影響。動物細(xì)胞的培育1．動物細(xì)胞培育過程中的幾個重要概念(1)細(xì)胞貼壁和接觸抑制懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。細(xì)胞數(shù)目不斷增多，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互抑制時，細(xì)胞就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。當(dāng)細(xì)胞癌變后，就失去接觸抑制的特點，而無限增殖。(2)原代培育：原代培育有兩種表述：①細(xì)胞懸浮液第一次在瓶中培育，沒有分瓶之前的細(xì)胞培育；②第1代細(xì)胞的培育與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞培育統(tǒng)稱為原代培育。兩種表述沒有本質(zhì)區(qū)分。(3)傳代培育：傳代培育同樣有兩種表述：①細(xì)胞懸浮液培育一段時間后，分瓶再進行的細(xì)胞培育；②傳10代以后的細(xì)胞培育，統(tǒng)稱為傳代培育。(4)細(xì)胞系：原代培育物經(jīng)首次傳代勝利即稱為細(xì)胞系，因此細(xì)胞系可泛指一般可傳代的細(xì)胞。其中能夠連續(xù)傳代的細(xì)胞叫做連續(xù)細(xì)胞系，不能連續(xù)培育的稱為有限細(xì)胞系。(5)細(xì)胞株：通過確定的選擇或純化方法，從原代培育物或細(xì)胞系中獲得的具有特別性質(zhì)的細(xì)胞稱為細(xì)胞株。細(xì)胞株一般具有恒定的染色體組型、同功酶類型、病毒敏感性和生化特性等。細(xì)胞株是具有特別性質(zhì)的細(xì)胞系，可以連續(xù)多代傳代的細(xì)胞株稱為連續(xù)細(xì)胞株，可傳代次數(shù)有限的細(xì)胞株稱為有限細(xì)胞株。2．動物細(xì)胞培育過程圖解動物細(xì)胞培育的幾個留意點(1)動物細(xì)胞培育的原理是細(xì)胞的增殖，其目的是獲得細(xì)胞株或細(xì)胞系，其他動物細(xì)胞工程技術(shù)均建立在此基礎(chǔ)之上。(2)原代培育的材料一般取自動物胚胎或誕生不久的幼齡動物的器官或組織，因為這些器官或組織上的細(xì)胞生命力旺盛，分裂實力強。(3)原代培育中用胰酶分散細(xì)胞是因為細(xì)胞之間有許多膠原纖維，但由于細(xì)胞膜的主要成分之一也是蛋白質(zhì)，因此處理時間不行太長。把組織細(xì)胞分散開制成懸浮液，有利于養(yǎng)分物質(zhì)的汲取和代謝廢物的排出。如圖為動物細(xì)胞培育過程中細(xì)胞增殖狀況的變更曲線，圖中B、E兩點表示經(jīng)篩選、分裝后接著培育。下列推斷錯誤的是()A．B點之前的培育稱為原代培育，之后的培育稱為傳代培育B．接觸抑制現(xiàn)象主要發(fā)生在AB段和DE段C．分瓶后的每個培育瓶中的細(xì)胞群稱為一個克隆D．E點后的細(xì)胞大多數(shù)具有異倍體核型，可連續(xù)傳代[解析]人們通常將動物組織消化后的初次培育稱為原代培育，分瓶后的培育稱為傳代培育，B點之后細(xì)胞接著生長，可見B點之后進行了傳代培育，A正確；當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時，細(xì)胞就會停止分裂增殖，即會發(fā)生接觸抑制現(xiàn)象，在AB段和DE段細(xì)胞幾乎生長停滯，可能發(fā)生了接觸抑制，B正確；細(xì)胞克隆的最基本要求是必需保證分別出來的是一個細(xì)胞而不是多個細(xì)胞，C錯誤；已獲無限繁殖實力能持續(xù)生存的細(xì)胞系，稱連續(xù)細(xì)胞系或無限細(xì)胞系，無限細(xì)胞系大多已發(fā)生異倍化，具異倍體核型，D正確。[答案]C[思維升華](1)把動物組織塊分散成單個細(xì)胞所用的胰蛋白酶能否換成胃蛋白酶？提示：不能。因為胃蛋白酶的最適pH呈酸性，環(huán)境不適合。(2)為什么細(xì)胞系或細(xì)胞株中有些細(xì)胞可無限傳代？這些細(xì)胞為癌細(xì)胞嗎？提示：這些細(xì)胞往往具有異倍體核型，使其能夠無限傳代。能夠無限傳代的細(xì)胞有的仍保留接觸抑制現(xiàn)象，一般不是癌細(xì)胞。eq\a\vs4\al()植物組織培育和動物細(xì)胞培育的比較項目原理培育基結(jié)果培育目的植物組織培育細(xì)胞的全能性固體；養(yǎng)分物質(zhì)，激素培育成植株快速繁殖動物細(xì)胞培育細(xì)胞的增殖液體；養(yǎng)分物質(zhì)，動物血清等培育成細(xì)胞系或細(xì)胞株獲得細(xì)胞的產(chǎn)物或細(xì)胞下列關(guān)于動物細(xì)胞和組織培育的敘述，錯誤的是()A．動物細(xì)胞和組織培育是動物克隆技術(shù)的基礎(chǔ)B．用于培育的細(xì)胞最好取自健康動物體內(nèi)的組織細(xì)胞C．動物組織經(jīng)過機械消化也能分散成單個細(xì)胞D．動物細(xì)胞、組織通過培育最終在體外能發(fā)育成一個新個體解析：選D。動物細(xì)胞的全能性隨分化程度的提高而受到限制，分化潛能變?nèi)?。動物?xì)胞和組織在體外不能發(fā)育為成熟的動物個體。動物細(xì)胞融合和單克隆抗體1．動物細(xì)胞融合(1)動物細(xì)胞融合是指兩個或多個動物細(xì)胞結(jié)合形成一個細(xì)胞的現(xiàn)象。融合后形成的具有原來兩個或多個細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞。(2)動物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的原理基本相同，誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的方法與植物原生質(zhì)體融合的方法類似，常用的誘導(dǎo)因素有聚乙二醇、滅活的病毒、電融合等。(3)動物細(xì)胞融合的意義：克服了遠緣雜交的不親和性，成為探討細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育的重要手段。2．單克隆抗體及其制備過程與原理(1)單克隆抗體的概念由單個雜交瘤細(xì)胞進行無性繁殖，形成細(xì)胞群(稱為克隆)，由這樣的細(xì)胞群產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體稱為單克隆抗體。(2)制備單克隆抗體的基本方法(3)制備過程中要經(jīng)過兩次篩選第一次篩選：B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合之后，兩兩融合有三種狀況，B淋巴細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合、骨髓瘤細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合、B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合。而只有B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合的細(xì)胞才是須要的雜種細(xì)胞。其次次篩選：在雜交瘤細(xì)胞中篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。(4)單克隆抗體的應(yīng)用單抗作為探針，探討相應(yīng)抗原蛋白的結(jié)構(gòu)，細(xì)胞學(xué)分布及其功能等。關(guān)于應(yīng)用動物細(xì)胞工程技術(shù)獲得單克隆抗X抗體的詳細(xì)操作步驟如下，其中對單克隆抗體制備的相關(guān)敘述不正確的是()①將X抗原注入小鼠體內(nèi)，獲得能產(chǎn)生抗X抗體的B淋巴細(xì)胞②從患骨髓瘤的小鼠體內(nèi)獲得骨髓瘤細(xì)胞③利用促細(xì)胞融合因子使兩種細(xì)胞發(fā)生融合④將雜交瘤細(xì)胞注入小鼠腹腔中培育⑤篩選出能產(chǎn)生抗X抗體的雜交瘤細(xì)胞⑥從腹水中提取抗體A．試驗依次應(yīng)當(dāng)是①②③⑤④⑥B．④過程中產(chǎn)生多個雜交瘤細(xì)胞的過程也屬于克隆C．③過程中獲得的細(xì)胞均可無限增殖D．③到⑤過程中通常要經(jīng)過兩次篩選[解析]誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合后，B淋巴細(xì)胞自身融合的細(xì)胞不能無限增殖。[答案]C[思維升華](1)融合后的細(xì)胞，在培育時通過什么方式進行繁殖？細(xì)胞中染色體數(shù)目與淋巴細(xì)胞相比有何不同？提示：有絲分裂。融合后細(xì)胞內(nèi)染色體數(shù)目加倍。(2)篩選過程中對細(xì)胞克隆培育時，在特定培育基上使每個孔一個細(xì)胞的目的是什么？提示：使每個孔內(nèi)不多于一個細(xì)胞，達到單克隆培育的目的(或單一細(xì)胞培育以保證抗體的純度)。eq\a\vs4\al()漿細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞的比較細(xì)胞類型來源特點漿細(xì)胞由B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后增殖分化而來能產(chǎn)生單一抗體，但不能無限增殖骨髓瘤細(xì)胞從骨髓腫瘤中提取能無限增殖，但不能產(chǎn)生抗體雜交瘤細(xì)胞漿細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合而成既能產(chǎn)生抗體，又能無限增殖將特定藥物與單克隆抗體相結(jié)合制成的“生物導(dǎo)彈”，能夠用于殺死人類某些癌細(xì)胞，其過程如圖所示。下列有關(guān)敘述錯誤的是()A．①過程的原理和植物原生質(zhì)體融合的原理基本相同B．經(jīng)①形成的雜交瘤細(xì)胞都能無限增殖并產(chǎn)生特定抗體C．②過程須要篩選并克隆單個雜交瘤細(xì)胞D．抗體的靶向作用使③過程具有高度特異性答案：B動物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動物1．概念：動物核移植是將動物的一個細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體。用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物。2．種類eq\b\lc\{(\a\vs4\al\co1(胚胎細(xì)胞核移植：易,體細(xì)胞核移植：難))由于動物胚胎細(xì)胞分化程度低，復(fù)原其全能性相對簡潔，而動物體細(xì)胞分化程度高，復(fù)原其全能性非常困難。因此，動物體細(xì)胞核移植的難度明顯高于胚胎細(xì)胞核移植。3．動物克隆的一般過程下圖表示通過核移植等技術(shù)獲得某種克隆哺乳動物(二倍體)的流程?；卮鹣铝袉栴}：(1)圖中A表示正常細(xì)胞核，染色體數(shù)為2n，則其性染色體的組成可為__________________。過程①表示去除細(xì)胞核，該過程一般要在卵母細(xì)胞培育至適當(dāng)時期再進行，去核時常采納______________的方法。②代表的過程是____________。(2)經(jīng)過多次傳代后，供體細(xì)胞中____________________的穩(wěn)定性會降低。因此，選材時必需關(guān)注傳代次數(shù)。(3)若獲得的克隆動物與供體動物性狀不完全相同，從遺傳物質(zhì)的角度分析其緣由是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(4)與克隆羊“多莉”培育勝利一樣，其他克隆動物的勝利獲得也證明白________________________________________________________________________。[解析](1)核移植過程中，供體的體細(xì)胞中性染色體組成可為XX或XY；去核時常采納顯微操作的方法；圖示②過程表示胚胎移植。(2)細(xì)胞培育過程中，經(jīng)過多次傳代培育，細(xì)胞中遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定性會降低。(3)由于卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)會對克隆動物的性狀產(chǎn)生影響，所以克隆動物與供體性狀不完全相同。(4)克隆動物的勝利獲得證明白已分化的動物體細(xì)胞的細(xì)胞核具有全能性。[答案](1)XX或XY顯微操作胚胎移植(2)遺傳物質(zhì)(3)卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)會對克隆動物的性狀產(chǎn)生影響(4)動物已分化體細(xì)胞的細(xì)胞核具有全能性eq\a\vs4\al()(1)在核移植時，一般不選擇生殖細(xì)胞作為供核細(xì)胞，因為生殖細(xì)胞與正常體細(xì)胞相比，遺傳物質(zhì)減半。(2)克隆動物的性狀與核供體生物的性狀基本相同，而不是完全相同，因為：①克隆動物的細(xì)胞質(zhì)遺傳物質(zhì)來自受體卵細(xì)胞。②生物的性狀不僅與遺傳物質(zhì)有關(guān)，還受環(huán)境的影響。右圖為哺乳動物(羊)的生殖過程，下列敘述不正確的是()A．個體2為克隆動物，c為高度分化的體細(xì)胞B．個體2的遺傳性狀與供應(yīng)c細(xì)胞的羊不完全相同C．產(chǎn)生動物個體1與動物個體2的生殖方式是不同的D．e細(xì)胞為完成減數(shù)分裂的卵細(xì)胞解析：選D。在核移植過程中，去核受體細(xì)胞一般選用處于減數(shù)其次次分裂中期的次級卵母細(xì)胞，而不是完成減數(shù)分裂的卵細(xì)胞。[隨堂檢測]1．下列關(guān)于動物細(xì)胞培育的說法，正確的是()A．連續(xù)細(xì)胞系不具有異倍體核型B．動物組織細(xì)胞間的膠原纖維可用纖維素酶水解C．原代培育細(xì)胞、有限細(xì)胞系比無限細(xì)胞系、腫瘤細(xì)胞更簡潔克隆D．提高動物細(xì)胞克隆形成率須要以滋養(yǎng)細(xì)胞支持生長及激素刺激等條件解析：選D。連續(xù)細(xì)胞系大多數(shù)具有異倍體核型；動物組織細(xì)胞間的膠原纖維的主要成分是膠原蛋白，可以用胰蛋白酶水解，不能用纖維素酶水解；在進行細(xì)胞克隆時，原代細(xì)胞、有限細(xì)胞系通常不如無限細(xì)胞系、腫瘤細(xì)胞簡潔克隆。2．某探討小組為測定藥物對體外培育細(xì)胞的毒性，打算對某種動物的肝腫瘤細(xì)胞(甲)和正常肝細(xì)胞(乙)進行動物細(xì)胞培育。下列說法不正確的是()A．在利用兩種肝組織塊制備肝細(xì)胞懸液時，也可用胃蛋白酶處理B．為了防止細(xì)胞培育過程中細(xì)菌的污染，可向培育液中加入適量的抗生素C．細(xì)胞培育應(yīng)在含確定CO2濃度的恒溫培育箱中進行，CO2的作用是維持培育液的pHD．將數(shù)量相等的甲、乙細(xì)胞分別置于相同相宜條件下培育，一段時間后，會視察到甲細(xì)胞數(shù)量比乙細(xì)胞數(shù)量多解析：選A。胃蛋白酶相宜的pH環(huán)境為強酸性；抗生素可以殺菌，在培育液中加入適量的抗生素可以防止細(xì)菌污染；腫瘤細(xì)胞具有無限增殖實力，且其分裂速度也快于正常細(xì)胞。3．試驗小鼠皮膚細(xì)胞培育(非克隆培育)的基本過程如圖所示。下列敘述錯誤的是()eq\x(試驗小鼠)eq\o(→,\s\up7(甲))eq\x(皮膚組織)eq\o(→,\s\up7(乙))eq\x(皮膚細(xì)胞)eq\o(→,\s\up7(丙))eq\x(培育細(xì)胞1)eq\o(→,\s\up7(丁))eq\x(培育細(xì)胞2)A．甲過程須要對試驗小鼠進行消毒B．乙過程對皮膚組織可用胰蛋白酶消化C．丙過程得到的細(xì)胞大多具有異倍體核型D．丁過程得到的細(xì)胞具有異質(zhì)性解析：選C。分析圖示技術(shù)流程，結(jié)合動物細(xì)胞培育的基礎(chǔ)學(xué)問作答。甲過程表示從試驗小鼠身上取皮膚組織小塊，該過程須要對小鼠進行消毒，故A項正確。乙過程表示將皮膚組織分散為單個細(xì)胞，可用胰蛋白酶進行酶解消化，故B項正確。丙過程表示由組織細(xì)胞培育到細(xì)胞系的過程，小鼠細(xì)胞是二倍體細(xì)胞，其細(xì)胞系大多數(shù)為有限細(xì)胞系，能接著培育下去具有異倍體核型的連續(xù)細(xì)胞系很少，故C項錯誤。丁過程表示通過選擇或純化從細(xì)胞系中獲得具有特別性質(zhì)的細(xì)胞株的過程，細(xì)胞株具有異質(zhì)性，故D項正確。4．下列對動物核移植技術(shù)的描述，不正確的是()A．動物體細(xì)胞核移植的難度明顯高于胚胎細(xì)胞的B．體細(xì)胞核移植的過程中可通過顯微操作去核法去除卵母細(xì)胞中的核C．細(xì)胞核移植的供體細(xì)胞一般選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞D．通過體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動物是對供體100%的復(fù)制解析：選D。早期胚胎細(xì)胞作細(xì)胞核的供體細(xì)胞時妊娠勝利率最高，體細(xì)胞核移植的難度高于胚胎細(xì)胞核移植的；在核移植前一般要先用顯微操作法去除卵母細(xì)胞的細(xì)胞核，獲得卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)；核移植時作供核一方的一般是傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，緣由是此種細(xì)胞能保持正常的二倍體核型，遺傳物質(zhì)不發(fā)生變更；通過細(xì)胞核移植方法獲得的重組細(xì)胞，細(xì)胞核遺傳物質(zhì)來自供體核，細(xì)胞質(zhì)遺傳物質(zhì)來自受體的細(xì)胞質(zhì)，所以用核移植的方法得到的動物不是對供體動物100%的復(fù)制。5．如圖表示抗人體胃癌細(xì)胞的單克隆抗體的制備過程，下列有關(guān)敘述錯誤的是()A．圖中甲可能是人體胃癌細(xì)胞的特異性抗原B．可利用PEG、活的病毒或電激等方法誘導(dǎo)細(xì)胞融合C．丙、丁分別表示雜交瘤細(xì)胞和能分泌抗胃癌抗體的雜交瘤細(xì)胞D．丁的大規(guī)模培育可以在培育基中進行，也可以在小鼠腹腔內(nèi)進行解析：選B。甲注射小鼠，產(chǎn)生能分泌特異性抗體的B淋巴細(xì)胞，則甲屬于抗原，A正確；可利用PEG、滅活的病毒或電激等方法誘導(dǎo)細(xì)胞融合，B錯誤；丙、丁分別表示雜交瘤細(xì)胞和能分泌抗胃癌抗體的雜交瘤細(xì)胞，C正確；丁的大規(guī)模培育可以在培育基中進行，也可以在小鼠腹腔內(nèi)進行，D正確。6．回答下列有關(guān)動物細(xì)胞培育的問題：(1)在動物細(xì)胞培育過程中，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到細(xì)胞表面________時，細(xì)胞會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的______。此時，瓶壁上形成的細(xì)胞層數(shù)是________。要使貼壁的細(xì)胞從瓶壁上分別下來，須要用酶處理，可用的酶是________。(2)隨著細(xì)胞傳代次數(shù)的增多，絕大部分細(xì)胞分裂停止，進而出現(xiàn)________________的現(xiàn)象；但極少數(shù)細(xì)胞可以連續(xù)增殖，其中有些細(xì)胞會因遺傳物質(zhì)發(fā)生變更而變成______細(xì)胞，該種細(xì)胞的黏著性________，細(xì)胞膜表面蛋白質(zhì)(糖蛋白)的量________。(3)現(xiàn)用某種大分子染料，對細(xì)胞進行染色時，視察到死細(xì)胞被染色，而活細(xì)胞不被染色，緣由是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(4)檢查某種毒物是否能變更細(xì)胞染色體的數(shù)目，最好選用細(xì)胞分裂到________期的細(xì)胞用顯微鏡進行視察。(5)在細(xì)胞培育過程中，通常在________條件下保存細(xì)胞。因為在這種條件下，細(xì)胞中________的活性降低，細(xì)胞________的速率降低。(6)給患者移植經(jīng)細(xì)胞培育形成的皮膚組織后，發(fā)生了排斥現(xiàn)象，這是因為機體把移植的皮膚組織當(dāng)作________進行攻擊。解析：(1)動物細(xì)胞培育過程中具有貼壁生長和接觸抑制的特點，若要傳代培育應(yīng)先用胰蛋白酶處理，使其從瓶壁上分別下來。(2)在傳代培育過程中，隨著傳代次數(shù)的增多，絕大多數(shù)細(xì)胞停止分裂，進而出現(xiàn)蒼老甚至死亡，極少數(shù)細(xì)胞遺傳物質(zhì)發(fā)生變更，克服細(xì)胞壽命的自然極限，獲得不死性，這種細(xì)胞黏著性降低，細(xì)胞膜表面的糖蛋白削減。(3)活細(xì)胞的細(xì)胞膜具有選擇透性，而死細(xì)胞的細(xì)胞膜則沒有這種特性，所以大分子染料可以對死細(xì)胞染色而不能對活細(xì)胞染色。(4)若要視察染色體的數(shù)目，最好選擇細(xì)胞分裂中期的細(xì)胞。因為分裂中期染色體螺旋程度最高，形態(tài)固定，數(shù)目清楚。(5)低溫可以抑制酶的活性，從而降低細(xì)胞的新陳代謝速率。(6)皮膚移植后發(fā)生排斥反應(yīng)，是因為機體把移植的皮膚組織當(dāng)作抗原進行攻擊。答案：(1)相互接觸接觸抑制單層(或一層)胰蛋白酶(2)蒼老甚至死亡不死性降低削減(3)活細(xì)胞的膜具有選擇透性，大分子染料不能進入活細(xì)胞內(nèi)，故活細(xì)胞不能著色(或死細(xì)胞的膜丟失了選擇透性，大分子染料能夠進入死細(xì)胞內(nèi)而著色)(4)中(5)冷凍(或超低溫、液氮)酶新陳代謝(6)抗原[課時作業(yè)]一、選擇題1．動物細(xì)胞培育過程的依次是()①原代培育②傳代培育③胰蛋白酶處理組織，形成分散的懸浮液A．①②③ B．①③②C．②③① D．③①②解析：選D。動物細(xì)胞培育是通過胰蛋白酶處理動物的組織制成細(xì)胞懸浮液，再通過原代培育和傳代培育得到細(xì)胞系或細(xì)胞株。2．在動物細(xì)胞培育過程中，運用胰蛋白酶的目的是()A．使動物組織分散成為單個細(xì)胞進行培育B．去掉細(xì)胞壁成為原生質(zhì)體C．去掉細(xì)胞膜暴露出原生質(zhì)體便于細(xì)胞融合D．促進蛋白質(zhì)水解為多肽解析：選A。在動物細(xì)胞培育前，先用胰蛋白酶使細(xì)胞相互分散開，以增加與培育液的接觸面積，便于培育。3．將源自同品系小鼠的癌細(xì)胞和正常成纖維細(xì)胞融合，所獲雜種細(xì)胞的后代只要保留成纖維細(xì)胞的某些染色體就可表現(xiàn)為正常表型，但若這些染色體丟失則會重新惡變?yōu)榘┘?xì)胞。下列敘述不正確的是()A．雜種細(xì)胞的后代保留的成纖維細(xì)胞的某些染色體上有抑制細(xì)胞惡性增殖的基因B．利用滅活病毒可以誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合C．雜種細(xì)胞重新惡變后將失去接觸抑制現(xiàn)象D．染色體數(shù)目的變異會抑制細(xì)胞的癌變答案：D4．如圖是單克隆抗體制備過程示意圖，其中①過程注射的物質(zhì)和A細(xì)胞的名稱分別是()A．抗體、T淋巴細(xì)胞 B．抗原、T淋巴細(xì)胞C．抗體、B淋巴細(xì)胞 D．抗原、B淋巴細(xì)胞答案：D5．關(guān)于下面制備單克隆抗體過程示意圖的敘述，不正確的是()A．①表示B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞均是從小鼠的脾臟中提取的B．④中的篩選是通過抗原—抗體反應(yīng)進行的C．②促進細(xì)胞融合的方法可以利用聚乙二醇作介導(dǎo)D．⑤是可以無限增殖的雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞解析：選A。單克隆抗體是B淋巴細(xì)胞和小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合得到的雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的，B淋巴細(xì)胞也可以從血漿中提取。細(xì)胞融合時，運用的化學(xué)方法是用聚乙二醇誘導(dǎo)；④中的篩選是通過抗原—抗體反應(yīng)進行的，假如有反應(yīng)說明表達了抗體；融合細(xì)胞具有雙親的特點，既能無限增殖又能產(chǎn)生單一抗體。6．下列與動物細(xì)胞培育有關(guān)的表述中，不正確的是()A．動物細(xì)胞培育用到的酶是胰蛋白酶B．將細(xì)胞從一個培育瓶轉(zhuǎn)移到另一個培育瓶稱為傳代培育C．細(xì)胞克隆的最基本要求是必需保證分別出來的細(xì)胞是一個D．放入CO2培育箱中培育動物細(xì)胞主要目的是為了滿意細(xì)胞對CO2的需求解析：選D。二氧化碳培育箱是通過在培育箱內(nèi)模擬形成一個類似細(xì)胞或組織在生物體內(nèi)的生長環(huán)境，如穩(wěn)定的溫度(37℃)、穩(wěn)定的CO2水平(5%)、恒定的酸堿度(pH：7.2～7.4)等，來對細(xì)胞或組織進行體外培育的一種裝置，其中的CO2起到維持pH在相宜的范圍內(nèi)的作用。7．下列有關(guān)克隆技術(shù)的敘述，錯誤的是()A．在培育液中加入NaCl，不能篩選出耐鹽突變體B．長期植物組織培育過程中，培育物全能性下降的可能緣由是發(fā)生了變異C．長期的動物組織培育，結(jié)果常常只能使單一類型的細(xì)胞保存下來D．動物細(xì)胞培育獲得的連續(xù)細(xì)胞系大多數(shù)具有異倍體核型答案：A8．為提高大熊貓細(xì)胞克隆的形成率，下列實行的措施中不恰當(dāng)?shù)氖?)A．選擇相宜的培育基 B．用激素刺激C．添加確定量的血清 D．用濃H2SO4調(diào)整pH解析：選D。提高大熊貓細(xì)胞克隆形成率的措施有選擇相宜的培育基，添加血清，激素刺激，用CO2培育箱調(diào)整pH等，不能用濃H2SO4調(diào)整pH，因為濃H2SO4為強酸，具有腐蝕性。9．美國杜克高校醫(yī)療中心的一個探討小組利用成年豬的動脈血管細(xì)胞和模擬胚胎環(huán)境的新型生物反應(yīng)器，勝利地在試驗室里培育出新的動脈血管。這種血管的外形和功能都與真的血管一樣，這一探討成果是生物組織培育工程領(lǐng)域的重大進展。下列關(guān)于以上技術(shù)的敘述中，不正確的是()A．屬于“克隆”B．可能要利用去核卵細(xì)胞C．關(guān)鍵是激發(fā)血管細(xì)胞的“全能性”D．關(guān)鍵是激發(fā)血管細(xì)胞發(fā)育成血管的潛能解析：選C。該技術(shù)屬于動物細(xì)胞克隆，離體后供應(yīng)相宜的培育環(huán)境，激發(fā)體細(xì)胞發(fā)育成各種組織、器官的潛能。10．生物技術(shù)的發(fā)展速度很快，已滅亡生物的“復(fù)生”將不再是神話。假如世界上最終一只野驢剛死亡，以下較易勝利“復(fù)生”野驢的方法是()A．將野驢的體細(xì)胞取出，利用組織培育，培育成新個體B．將野驢的體細(xì)胞兩兩融合，再經(jīng)組織培育技術(shù)經(jīng)脫分化、再分化，培育成新個體C．取出野驢的體細(xì)胞核移植到母家驢的去核卵細(xì)胞中，經(jīng)孕育培育成新個體D．將野驢的基因?qū)爰殷H的受精卵中，培育成新個體解析：選C。用體細(xì)胞進行動物克隆，目前只能通過核移植技術(shù)實現(xiàn)，該技術(shù)要將體細(xì)胞核轉(zhuǎn)移到去核卵細(xì)胞中，形成重組細(xì)胞，再經(jīng)動物細(xì)胞培育和胚胎移植，最終培育成新個體。二、非選擇題11．華南虎是原產(chǎn)中國的老虎品種，已有近30年沒有野生華南虎出現(xiàn)的報告，野生華南虎也被一些專家認(rèn)為已經(jīng)