ICS65．020.202301IDB2301/T156—2024 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4圃地選擇 5抗病性鑒定 5.1接種體準(zhǔn)備 5.2資源建植 5.3接種 5.4病情調(diào)查 5.5抗性評價 6生產(chǎn)檔案 DB2301/T156—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別這些專利的責(zé)任。本文件由哈爾濱市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣總站提出。本文件由哈爾濱市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局歸口。本文件起草單位：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)、哈爾濱市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣總站、嫩江農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心、哈爾濱市農(nóng)業(yè)科學(xué)院、哈爾濱市雙城區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心、哈爾濱市呼蘭區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心。本文件主要起草人：李永剛、劉金鑫、曹寶祥、洪峰、金羽、高偉超、柴赫男、李愛華、張立微、胡海江。DB2301/T156—20241藍(lán)靛果鏈格孢屬葉斑病抗性鑒定技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了藍(lán)靛果鏈格孢屬葉斑病抗性鑒定的術(shù)語和定義和藍(lán)靛果鏈格孢屬葉斑病抗性鑒定的圃地選擇、抗病性鑒定、生產(chǎn)檔案等要求。本文件適用于藍(lán)靛果育種資源和品種抗鏈格孢屬葉斑病的人工接種鑒定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB15618土壤環(huán)境質(zhì)量農(nóng)用地土壤污染風(fēng)險管控標(biāo)準(zhǔn)DB23/T2981藍(lán)靛果綠枝扦插育苗技術(shù)規(guī)程DB23/T3124黑龍江藍(lán)靛果種質(zhì)資源圃營建技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1藍(lán)靛果鏈格孢屬葉斑病Alternarialeafspotofbluehoneysuckle藍(lán)靛果鏈格孢屬葉斑病是由極細(xì)鏈格孢（Alternariatenuissima）和鏈格孢(A.alternata)復(fù)合侵染造成的一種真菌病害，受感染葉片最初表現(xiàn)為小的棕色和不規(guī)則的病變，后沿葉緣擴(kuò)大為不規(guī)則的斑點，在適宜發(fā)病條件下，受感染葉片逐漸枯萎并從植株上脫落。4圃地選擇4.1抗病鑒定圃應(yīng)選擇光照充足、排灌方便、土質(zhì)疏松、土壤pH5.0～pH7.0的平緩地塊。4.2圃地土壤環(huán)境質(zhì)量應(yīng)符合GB15618的規(guī)定。5抗病性鑒定5.1接種體準(zhǔn)備5.1.1菌種來源應(yīng)選用在當(dāng)?shù)夭杉?、分離并經(jīng)柯赫氏法則驗證后，通過形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定后的極細(xì)鏈格孢（Alternariatenuissima）和鏈格孢(A.alternata)或者實驗室內(nèi)保存的有代表性的菌株。5.1.2菌種保存DB2301/T156—20242將生長于馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）菌種置于6～8℃冰箱中短期（3～6個月）保存或液氮長期保存。5.1.3接種體繁殖5.1.3.1選取無雜菌，菌落暗灰色，在培養(yǎng)基上擴(kuò)散生長，菌體在PDA培養(yǎng)基上擴(kuò)繁7天后，打成菌蝶（0.7cm），備用。5.1.3.2將高粱粒用水煮20min后，撈出后稍瀝干水稱量100g后至于250ml三角瓶中，121℃滅菌30min，冷卻后備用。5.1.3.3轉(zhuǎn)移5個菌蝶至高粱粒的三角瓶內(nèi)，26℃恒溫箱中黑暗培養(yǎng)5天，每天搖晃一次使高粱粒表面均勻長滿菌絲，置于4℃?zhèn)溆谩?.2資源建植5.2.1每待測品種或資源應(yīng)要插條45株定植，并按DB23/T2981的規(guī)定執(zhí)行。5.2.2種植感病品種30株作為對照。5.2.3施肥、澆水等田間管理按DB23/T3124的規(guī)定執(zhí)行。5.2.4定植完成后，應(yīng)繪制定植圖，標(biāo)明每份品種或資源在鑒定圃內(nèi)的具體位置。5.3接種5.3.1接種宜在建植第二年7月進(jìn)行，選擇生長均勻一致的30株進(jìn)行抗病性鑒定。5.3.2將擴(kuò)繁好的帶有極細(xì)鏈格孢（Alternariatenuissima）和鏈格孢(A.alternata)的高粱粒用無菌水分別沖洗配制孢子懸浮液，用滅菌的雙層紗布過濾，備用。5.3.3用血球計數(shù)板稀釋至106個孢子/mL等量混和，備用。5.3.4用噴霧器在下午4時后進(jìn)行接種，噴至葉片表面和背面孢子懸浮液飽和。5.3.5接種后用塑料布封閉保濕48h后移除塑料布，常規(guī)管理。5.4病情調(diào)查5.4.1調(diào)查周期每3天觀察1次接種植株發(fā)病情況，待感病對照品種表現(xiàn)感或高感后，進(jìn)行不同品種或育種資源調(diào)查。5.4.2調(diào)查方法5.4.2.1每份育種資源或品種調(diào)查30株。5.4.2.2調(diào)查分級標(biāo)準(zhǔn)以葉斑病的數(shù)量及病斑所占面積的比例為依據(jù)，調(diào)查主要是根據(jù)分級標(biāo)準(zhǔn)目測每份鑒定材料群體的發(fā)病狀況。5.4.2.3藍(lán)靛果育種資源或品種抗鏈格孢屬葉斑病病情級別及劃分標(biāo)準(zhǔn)見表1。表1藍(lán)靛果育種資源或品種抗鏈格孢屬葉斑病病情級別劃分標(biāo)準(zhǔn)病情級別1植株葉片上無病斑或病斑占葉面積少于或等于5%3植株少數(shù)葉片上有少量病斑，占葉面積6%~10%5植株大部分葉片有病斑，且病斑占葉面積11%~25%7植株絕大部分葉片有病斑，且病斑占葉面積26%~50%9全株葉片基本為病斑覆蓋，且病斑占葉面積大于51%或葉片全部枯死DB2301/T156—202435.5抗性評價5.5.1當(dāng)對照材料達(dá)到其相應(yīng)感病程度（7或9級），該批次鑒定視為有效5.5.2抗病鑒定材料發(fā)病程度（病情級別）確定其抗性水平，藍(lán)靛果育種資源和品種抗鏈格孢屬葉斑病的評價標(biāo)準(zhǔn)見表2。表2藍(lán)靛果育種資源和品種抗鏈格孢屬葉斑病的評價標(biāo)準(zhǔn)病情級別抗性1高抗Highlyresistant（HR）3抗Resistant（R）5中抗Moderatelyresistant（MR）7感Susceptible（S）9高感Highlysusceptib