分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)知識(shí)要點(diǎn)姓名_________________________地址_______________________________學(xué)號(hào)______________________密封線1.請(qǐng)首先在試卷的標(biāo)封處填寫(xiě)您的姓名，身份證號(hào)和地址名稱。2.請(qǐng)仔細(xì)閱讀各種題目，在規(guī)定的位置填寫(xiě)您的答案。一、選擇題1.下列哪項(xiàng)不是PCR技術(shù)的特點(diǎn)？

a.高效性

b.靈活性

c.特異性

d.穩(wěn)定性

2.DNA測(cè)序中常用的Sanger測(cè)序法是基于以下哪個(gè)原理？

a.DNA聚合酶鏈反應(yīng)

b.DNA合成酶活性

c.DNA分子雜交

d.DNA片段大小差異

3.以下哪種核酸分子雜交技術(shù)可以用來(lái)檢測(cè)基因突變？

a.Southernblot

b.Northernblot

c.Westernblot

d.Southernblot和Northernblot

4.逆轉(zhuǎn)錄PCR（RTPCR）的目的是什么？

a.從RNA合成cDNA

b.從cDNA合成RNA

c.從DNA合成cDNA

d.從RNA合成DNA

5.限制性內(nèi)切酶識(shí)別的序列特點(diǎn)是？

a.無(wú)規(guī)律性

b.有規(guī)律性

c.單一性

d.多樣性

6.以下哪項(xiàng)不是質(zhì)粒的常見(jiàn)性質(zhì)？

a.自我復(fù)制

b.高拷貝數(shù)

c.可選擇性標(biāo)記

d.高穩(wěn)定性

7.以下哪種方法是蛋白質(zhì)純化的常用技術(shù)？

a.凝膠電泳

b.離子交換層析

c.膜分離

d.以上都是

8.以下哪種技術(shù)可以用來(lái)檢測(cè)蛋白質(zhì)的表達(dá)水平？

a.Westernblot

b.Northernblot

c.Southernblot

d.DNA測(cè)序

答案及解題思路：

1.答案：d.穩(wěn)定性

解題思路：PCR技術(shù)以其高效性、靈活性和特異性著稱，但并不以穩(wěn)定性見(jiàn)長(zhǎng)。穩(wěn)定性通常與實(shí)驗(yàn)條件、反應(yīng)體系等因素有關(guān)。

2.答案：d.DNA片段大小差異

解題思路：Sanger測(cè)序法是通過(guò)鏈終止法測(cè)序，利用不同終止子產(chǎn)生不同長(zhǎng)度的DNA片段，通過(guò)電泳分離來(lái)測(cè)序。

3.答案：a.Southernblot

解題思路：Southernblot用于檢測(cè)特定DNA序列，通過(guò)探針與目的DNA雜交，可以檢測(cè)基因突變。

4.答案：a.從RNA合成cDNA

解題思路：RTPCR通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄酶將RNA轉(zhuǎn)化為cDNA，以便于后續(xù)的PCR擴(kuò)增。

5.答案：b.有規(guī)律性

解題思路：限制性內(nèi)切酶識(shí)別特定的DNA序列，這些序列具有規(guī)律性，以便酶能夠特異性地切割。

6.答案：d.高穩(wěn)定性

解題思路：質(zhì)粒通常具有自我復(fù)制、高拷貝數(shù)和可選擇性標(biāo)記等性質(zhì)，但并不一定具有高穩(wěn)定性。

7.答案：d.以上都是

解題思路：蛋白質(zhì)純化可以通過(guò)多種技術(shù)實(shí)現(xiàn)，包括凝膠電泳、離子交換層析和膜分離等。

8.答案：a.Westernblot

解題思路：Westernblot用于檢測(cè)蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，通過(guò)特異性抗體與目標(biāo)蛋白質(zhì)結(jié)合，并通過(guò)電泳和顯色來(lái)檢測(cè)。二、填空題1.PCR技術(shù)中，變性、退火和延伸三個(gè)步驟的英文縮寫(xiě)分別是______、______和______。

答案：Denaturation、Annealing、Extension

解題思路：PCR（聚合酶鏈反應(yīng)）的基本步驟包括變性、退火和延伸。變性步驟的英文縮寫(xiě)是Denaturation，退火步驟的英文縮寫(xiě)是Annealing，延伸步驟的英文縮寫(xiě)是Extension。

2.DNA聚合酶在PCR過(guò)程中的作用是______。

答案：催化DNA的合成

解題思路：DNA聚合酶在PCR過(guò)程中負(fù)責(zé)在引物的指導(dǎo)下，從引物的3'端開(kāi)始合成新的DNA鏈，因此其作用是催化DNA的合成。

3.逆轉(zhuǎn)錄酶在逆轉(zhuǎn)錄PCR中的作用是______。

答案：將RNA模板逆轉(zhuǎn)錄成cDNA

解題思路：逆轉(zhuǎn)錄酶是一種能夠?qū)NA模板逆轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)DNA（cDNA）的酶，在逆轉(zhuǎn)錄PCR中，它將RNA模板轉(zhuǎn)化為cDNA，以便進(jìn)行后續(xù)的PCR擴(kuò)增。

4.限制性內(nèi)切酶識(shí)別的序列稱為_(kāi)_____。

答案：限制性酶切位點(diǎn)

解題思路：限制性內(nèi)切酶能夠識(shí)別并切割雙鏈DNA中的特定序列，這些序列被稱為限制性酶切位點(diǎn)。

5.質(zhì)粒是一種______，常用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中。

答案：小型環(huán)狀DNA分子

解題思路：質(zhì)粒是一種獨(dú)立于染色體的小型環(huán)狀DNA分子，它可以在細(xì)胞內(nèi)自主復(fù)制，常用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中作為載體。

6.Westernblot是一種______技術(shù)，用于檢測(cè)蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。

答案：蛋白質(zhì)印跡

解題思路：Westernblot是一種蛋白質(zhì)印跡技術(shù)，通過(guò)電泳分離蛋白質(zhì)，然后利用抗體檢測(cè)特定蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。

7.Southernblot是一種______技術(shù)，用于檢測(cè)目的DNA片段。

答案：DNA印跡

解題思路：Southernblot是一種DNA印跡技術(shù)，用于檢測(cè)特定的DNA片段，通過(guò)將DNA片段轉(zhuǎn)移到固相支持物上，然后與探針雜交來(lái)檢測(cè)目的DNA。

8.Northernblot是一種______技術(shù)，用于檢測(cè)目的RNA分子。

答案：RNA印跡

解題思路：Northernblot是一種RNA印跡技術(shù)，用于檢測(cè)特定RNA分子的存在和表達(dá)水平，與Southernblot類(lèi)似，但針對(duì)的是RNA分子。三、判斷題1.PCR技術(shù)具有特異性。

2.逆轉(zhuǎn)錄酶可以將RNA模板逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

3.限制性內(nèi)切酶識(shí)別的序列具有多樣性。

4.質(zhì)粒是一種環(huán)狀DNA分子。

5.Westernblot可以用來(lái)檢測(cè)蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。

6.Southernblot可以用來(lái)檢測(cè)目的DNA片段。

7.Northernblot可以用來(lái)檢測(cè)目的RNA分子。

8.膜分離是一種蛋白質(zhì)純化技術(shù)。

答案及解題思路：

1.答案：正確

解題思路：PCR（聚合酶鏈反應(yīng)）技術(shù)是一種高度特異性的分子生物學(xué)技術(shù)，它能夠針對(duì)特定的DNA序列進(jìn)行擴(kuò)增。這種特異性來(lái)源于引物的設(shè)計(jì)，引物必須與目標(biāo)DNA序列精確匹配。

2.答案：正確

解題思路：逆轉(zhuǎn)錄酶是一種能夠?qū)NA模板逆轉(zhuǎn)錄成cDNA（互補(bǔ)DNA）的酶。這種酶在分子生物學(xué)中廣泛應(yīng)用于從RNA模板合成cDNA，以便進(jìn)行PCR擴(kuò)增或其他后續(xù)分析。

3.答案：正確

解題思路：限制性內(nèi)切酶識(shí)別并切割特定的DNA序列，這些序列通常是4到6個(gè)核苷酸長(zhǎng)。由于DNA序列的多樣性，限制性內(nèi)切酶能夠識(shí)別多種不同的序列。

4.答案：正確

解題思路：質(zhì)粒是細(xì)菌或其他微生物中的一種小型環(huán)狀DNA分子，它們能夠在細(xì)胞內(nèi)自主復(fù)制。質(zhì)粒常用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中作為載體。

5.答案：正確

解題思路：Westernblot是一種蛋白質(zhì)檢測(cè)技術(shù)，通過(guò)電泳將蛋白質(zhì)分離，然后使用特異性抗體檢測(cè)特定蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。

6.答案：正確

解題思路：Southernblot是一種DNA檢測(cè)技術(shù)，通過(guò)將電泳分離的DNA片段轉(zhuǎn)移到膜上，然后使用標(biāo)記的探針來(lái)檢測(cè)特定的DNA片段。

7.答案：正確

解題思路：Northernblot是一種RNA檢測(cè)技術(shù)，與Southernblot類(lèi)似，但它用于檢測(cè)特定的RNA分子。

8.答案：正確

解題思路：膜分離是一種基于分子大小、電荷或親和力的分離技術(shù)，常用于蛋白質(zhì)純化。不同的膜可以用來(lái)分離不同大小的蛋白質(zhì)。四、簡(jiǎn)答題1.簡(jiǎn)述PCR技術(shù)的原理和應(yīng)用。

答案：

PCR（聚合酶鏈反應(yīng)）是一種體外擴(kuò)增特定DNA片段的技術(shù)。其原理基于DNA雙鏈復(fù)制過(guò)程，包括三個(gè)主要步驟：變性、退火和延伸。變性步驟是通過(guò)加熱使DNA雙鏈分開(kāi)；退火步驟是在適溫下使引物與單鏈DNA結(jié)合；延伸步驟是在DNA聚合酶的作用下，引物沿模板鏈合成新的DNA鏈。

應(yīng)用包括：

基因克隆

基因測(cè)序

基因表達(dá)分析

病原體檢測(cè)

法醫(yī)鑒定

解題思路：

解釋PCR技術(shù)的三個(gè)基本步驟：變性、退火、延伸。

列舉PCR技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域。

2.簡(jiǎn)述逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)的原理和應(yīng)用。

答案：

逆轉(zhuǎn)錄PCR（RTPCR）技術(shù)是將RNA模板逆轉(zhuǎn)錄成cDNA的過(guò)程，再進(jìn)行PCR擴(kuò)增。其原理是利用逆轉(zhuǎn)錄酶將RNA模板上的核苷酸序列轉(zhuǎn)錄成DNA序列。

應(yīng)用包括：

mRNA表達(dá)水平檢測(cè)

病毒RNA檢測(cè)

轉(zhuǎn)錄因子活性分析

解題思路：

描述逆轉(zhuǎn)錄PCR的基本原理，即逆轉(zhuǎn)錄和PCR的聯(lián)合應(yīng)用。

列舉逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域。

3.簡(jiǎn)述限制性內(nèi)切酶在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的作用。

答案：

限制性內(nèi)切酶是能夠識(shí)別特定的DNA序列并在該序列上切割雙鏈DNA的酶。在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，限制性內(nèi)切酶主要用于：

DNA片段的切割和連接

基因克隆

基因表達(dá)載體的構(gòu)建

基因突變分析

解題思路：

解釋限制性內(nèi)切酶的切割原理。

列舉限制性內(nèi)切酶在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用。

4.簡(jiǎn)述質(zhì)粒的常見(jiàn)性質(zhì)和應(yīng)用。

答案：

質(zhì)粒是細(xì)菌等原核生物中的小型環(huán)狀DNA分子，具有以下性質(zhì)：

獨(dú)立復(fù)制

可攜帶外源基因

可被特定內(nèi)切酶切割

應(yīng)用包括：

基因克隆

基因表達(dá)

抗生素抗性標(biāo)記

染色體工程

解題思路：

描述質(zhì)粒的基本性質(zhì)。

列舉質(zhì)粒在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用。

5.簡(jiǎn)述Westernblot技術(shù)的原理和應(yīng)用。

答案：

Westernblot技術(shù)是一種檢測(cè)特定蛋白質(zhì)的技術(shù)，原理是利用抗體與蛋白質(zhì)特異性結(jié)合，通過(guò)電泳和轉(zhuǎn)移將蛋白質(zhì)從細(xì)胞膜或凝膠轉(zhuǎn)移到固相支持物上，再通過(guò)抗體檢測(cè)蛋白質(zhì)的存在。

應(yīng)用包括：

蛋白質(zhì)定量和定性分析

蛋白質(zhì)功能研究

蛋白質(zhì)表達(dá)分析

解題思路：

解釋W(xué)esternblot技術(shù)的基本原理，包括電泳、轉(zhuǎn)移和抗體檢測(cè)。

列舉Westernblot技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域。

6.簡(jiǎn)述Southernblot技術(shù)的原理和應(yīng)用。

答案：

Southernblot技術(shù)是檢測(cè)特定DNA片段的技術(shù)，原理是將經(jīng)限制性內(nèi)切酶切割的DNA片段通過(guò)電泳分離，轉(zhuǎn)移到固相支持物上，再通過(guò)探針與目標(biāo)DNA結(jié)合進(jìn)行檢測(cè)。

應(yīng)用包括：

基因定位

基因克隆

病原體檢測(cè)

解題思路：

描述Southernblot技術(shù)的基本原理，包括電泳、轉(zhuǎn)移和探針結(jié)合。

列舉Southernblot技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域。

7.簡(jiǎn)述Northernblot技術(shù)的原理和應(yīng)用。

答案：

Northernblot技術(shù)是檢測(cè)特定RNA分子的技術(shù)，原理是將RNA通過(guò)電泳分離，轉(zhuǎn)移到固相支持物上，再通過(guò)探針與目標(biāo)RNA結(jié)合進(jìn)行檢測(cè)。

應(yīng)用包括：

mRNA表達(dá)水平檢測(cè)

轉(zhuǎn)錄因子活性分析

基因調(diào)控研究

解題思路：

描述Northernblot技術(shù)的基本原理，包括電泳、轉(zhuǎn)移和探針結(jié)合。

列舉Northernblot技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域。

8.簡(jiǎn)述膜分離技術(shù)在蛋白質(zhì)純化中的應(yīng)用。

答案：

膜分離技術(shù)是一種利用半透膜的選擇透過(guò)性來(lái)分離混合物中不同組分的技術(shù)。在蛋白質(zhì)純化中，常用的膜分離技術(shù)包括：

滲透壓差過(guò)濾（納濾、反滲透）

膜濾過(guò)（超濾、微濾）

膜吸附（離子交換、親和層析）

應(yīng)用包括：

蛋白質(zhì)濃縮

蛋白質(zhì)分離

蛋白質(zhì)純化

解題思路：

描述膜分離技術(shù)的基本原理。

列舉膜分離技術(shù)在蛋白質(zhì)純化中的應(yīng)用。五、論述題1.論述PCR技術(shù)在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用。

解題思路：

簡(jiǎn)要介紹PCR技術(shù)的原理和基本步驟。

闡述PCR技術(shù)在基因克隆、基因突變分析、基因表達(dá)分析等領(lǐng)域的應(yīng)用。

結(jié)合具體案例，如PCR技術(shù)在新冠病毒檢測(cè)中的應(yīng)用。

2.論述逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用。

解題思路：

介紹逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)的原理和基本步驟。

討論逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)在cDNA合成、基因表達(dá)分析、基因克隆等實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用。

提及逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)在研究病毒基因表達(dá)中的作用。

3.論述限制性內(nèi)切酶在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用。

解題思路：

描述限制性內(nèi)切酶的原理和作用機(jī)制。

討論限制性內(nèi)切酶在基因克隆、基因工程、DNA片段分析等實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用。

舉例說(shuō)明限制性內(nèi)切酶在構(gòu)建基因表達(dá)載體的應(yīng)用。

4.論述質(zhì)粒在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用。

解題思路：

介紹質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和功能。

闡述質(zhì)粒在基因克隆、基因表達(dá)、基因編輯等實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用。

分析質(zhì)粒在構(gòu)建基因庫(kù)和基因敲除等研究中的應(yīng)用。

5.論述Westernblot技術(shù)在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用。

解題思路：

解釋W(xué)esternblot技術(shù)的原理和步驟。

討論Westernblot技術(shù)在蛋白質(zhì)檢測(cè)、蛋白質(zhì)定量、蛋白質(zhì)相互作用分析等實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用。

舉例說(shuō)明Westernblot技術(shù)在研究腫瘤標(biāo)志物和細(xì)胞信號(hào)通路中的應(yīng)用。

6.論述Southernblot技術(shù)在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用。

解題思路：

介紹Southernblot技術(shù)的原理和步驟。

討論Southernblot技術(shù)在DNA檢測(cè)、基因定位、基因突變分析等實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用。

分析Southernblot技術(shù)在基因組學(xué)研究和基因診斷中的應(yīng)用。

7.論述Northernblot技術(shù)在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用。

解題思路：

解釋Northernblot技術(shù)的原理和步驟。

討論Northernblot技術(shù)在mRNA檢測(cè)、基因表達(dá)分析、基因調(diào)控研究等實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用。

提及Northernblot技術(shù)在研究腫瘤和病毒感染等疾病中的應(yīng)用。

8.論述膜分離技術(shù)在蛋白質(zhì)純化中的應(yīng)用。

解題思路：

介紹膜分離技術(shù)的原理和類(lèi)型。

討論膜分離技術(shù)在蛋白質(zhì)純化、多肽分離、生物大分子分離等實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用。

分析膜分離技術(shù)在生物制藥和食品工業(yè)中的應(yīng)用。

答案及解題思路：

1.PCR技術(shù)廣泛應(yīng)用于基因克隆、基因突變分析、基因表達(dá)分析等領(lǐng)域。例如在新冠病毒檢測(cè)中，PCR技術(shù)可以快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)病毒核酸，為疫情防控提供重要依據(jù)。

2.逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)在cDNA合成、基因表達(dá)分析、基因克隆等實(shí)驗(yàn)中發(fā)揮重要作用。例如在研究病毒基因表達(dá)時(shí)，逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)可以將病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，便于后續(xù)的基因克隆和表達(dá)分析。

3.限制性內(nèi)切酶在基因克隆、基因工程、DNA片段分析等實(shí)驗(yàn)中具有廣泛應(yīng)用。例如在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，限制性內(nèi)切酶可以精確地切割DNA，實(shí)現(xiàn)基因的插入和重組。

4.質(zhì)粒在基因克隆、基因表達(dá)、基因編輯等實(shí)驗(yàn)中具有重要應(yīng)用。例如在構(gòu)建基因庫(kù)和基因敲除研究中，質(zhì)?？梢宰鳛檩d體將目的基因?qū)爰?xì)胞。

5.Westernblot技術(shù)在蛋白質(zhì)檢測(cè)、蛋白質(zhì)定量、蛋白質(zhì)相互作用分析等實(shí)驗(yàn)中具有重要應(yīng)用。例如在研究腫瘤標(biāo)志物和細(xì)胞信號(hào)通路時(shí)，Westernblot技術(shù)可以檢測(cè)蛋白質(zhì)的表達(dá)水平和相互作用。

6.Southernblot技術(shù)在DNA檢測(cè)、基因定位、基因突變分析等實(shí)驗(yàn)中發(fā)揮重要作用。例如在基因組學(xué)研究過(guò)程中，Southernblot技術(shù)可以檢測(cè)特定基因的存在和突變。

7.Northernblot技術(shù)在mRNA檢測(cè)、基因表達(dá)分析、基因調(diào)控研究等實(shí)驗(yàn)中具有重要應(yīng)用。例如在研究腫瘤和病毒感染時(shí)，Northernblot技術(shù)可以檢測(cè)特定基因的表達(dá)水平。

8.膜分離技術(shù)在蛋白質(zhì)純化、多肽分離、生物大分子分離等實(shí)驗(yàn)中具有廣泛應(yīng)用。例如在生物制藥和食品工業(yè)中，膜分離技術(shù)可以高效地分離和純化蛋白質(zhì)和生物大分子。六、計(jì)算題1.計(jì)算PCR擴(kuò)增過(guò)程中，若DNA模板長(zhǎng)度為1000bp，循環(huán)次數(shù)為30次，求擴(kuò)增后的DNA產(chǎn)物長(zhǎng)度。

解答：

每個(gè)PCR循環(huán)可以將一個(gè)DNA模板擴(kuò)增為2個(gè)，所以每個(gè)循環(huán)的產(chǎn)物長(zhǎng)度是2倍的模板長(zhǎng)度。

第1次循環(huán)后，有2個(gè)1000bp的DNA片段。

第2次循環(huán)后，有4個(gè)，依此類(lèi)推。

公式：擴(kuò)增后的DNA產(chǎn)物長(zhǎng)度=初始模板長(zhǎng)度2^(循環(huán)次數(shù)1)

計(jì)算：

擴(kuò)增后的DNA產(chǎn)物長(zhǎng)度=1000bp2^(301)=1000bp2^29

2.計(jì)算RTPCR擴(kuò)增過(guò)程中，若RNA模板長(zhǎng)度為500nt，循環(huán)次數(shù)為20次，求擴(kuò)增后的cDNA產(chǎn)物長(zhǎng)度。

解答：

與PCR類(lèi)似，RTPCR每循環(huán)也將模板擴(kuò)增為2倍。

初始RNA模板長(zhǎng)度為500nt，擴(kuò)增后的cDNA長(zhǎng)度也應(yīng)該是這個(gè)值。

計(jì)算：

擴(kuò)增后的cDNA產(chǎn)物長(zhǎng)度=500nt2^(201)=500nt2^19

3.計(jì)算限制性內(nèi)切酶識(shí)別序列長(zhǎng)度為6bp，若DNA片段長(zhǎng)度為1000bp，求酶切后的DNA片段數(shù)量。

解答：

如果酶切位點(diǎn)在序列中的分布是隨機(jī)的，那么平均來(lái)說(shuō)，每1000/6=166.67bp會(huì)有一個(gè)酶切位點(diǎn)。

因此，理論上可以產(chǎn)生166個(gè)酶切片段（如果完全切割）加上未切割的片段。

計(jì)算：

酶切后的DNA片段數(shù)量≈166個(gè)

4.計(jì)算質(zhì)粒的拷貝數(shù)為100，求在100mL培養(yǎng)液中質(zhì)粒的總數(shù)。

解答：

每個(gè)細(xì)菌含有100個(gè)質(zhì)粒，培養(yǎng)液體積為100mL。

假設(shè)每毫升培養(yǎng)液有1×10^9個(gè)細(xì)菌（典型值）。

計(jì)算：

質(zhì)粒的總數(shù)=拷貝數(shù)/細(xì)菌數(shù)量=100/1×10^9×100mL×1×10^9

質(zhì)粒的總數(shù)=100個(gè)

5.計(jì)算Westernblot中，若蛋白質(zhì)分子量為50kDa，抗體親和力為1ng/mL，求所需抗體的量。

解答：

抗體的親和力表示1mL抗體溶液中能夠結(jié)合的蛋白質(zhì)量，這里是1ng的蛋白質(zhì)。

我們需要計(jì)算50kDa的蛋白質(zhì)對(duì)應(yīng)多少ng。

計(jì)算：

所需抗體的量=蛋白質(zhì)分子量（kDa）/抗體親和力（ng/mL）

所需抗體的量=50kDa/1ng/mL

答案及解題思路：

1.擴(kuò)增后的DNA產(chǎn)物長(zhǎng)度=1000bp2^29≈5.36×10^10bp

解題思路：利用指數(shù)增長(zhǎng)公式計(jì)算PCR擴(kuò)增后的DNA長(zhǎng)度。

2.擴(kuò)增后的cDNA產(chǎn)物長(zhǎng)度=500nt2^19≈5.24×10^9nt

解題思路：使用指數(shù)增長(zhǎng)公式計(jì)算RTPCR擴(kuò)增后的cDNA長(zhǎng)度。

3.酶切后的DNA片段數(shù)量≈166個(gè)

解題思路：計(jì)算酶切位點(diǎn)分布并假設(shè)完全切割來(lái)估計(jì)酶切片段數(shù)量。

4.質(zhì)粒的總數(shù)=100個(gè)

解題思路：通過(guò)細(xì)菌密度和質(zhì)?？截悢?shù)計(jì)算總質(zhì)粒數(shù)。

5.所需抗體的量