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廣東省種子協(xié)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/XXXXXXX—XXXX

粉葛組培育苗技術(shù)規(guī)程

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（征求意見稿）

在提交反饋意見時(shí)，請(qǐng)將您知道的相關(guān)專利連同支持性文件一并附上。

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)施

廣東省種子協(xié)會(huì)發(fā)布

T/XXXXXXX—XXXX

粉葛組培育苗技術(shù)規(guī)程

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了粉葛組織培養(yǎng)過程中的術(shù)語和定義、環(huán)境及器具消毒、培養(yǎng)基制備、材料的處理，材

料的表面消毒、初代培養(yǎng)、芽增殖培養(yǎng)、芽伸長(zhǎng)和壯苗培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗和移栽等方面的技術(shù)規(guī)程。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于廣東省粉葛組織培養(yǎng)育苗。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB5084農(nóng)田灌溉水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)。

LY/T1882-2010林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程。

NY/T2306-2013花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程。

LY/T1000-2013容器育苗技術(shù)。

LY/T2700-2016花木栽培基質(zhì)。

NY/T1107-2010大量元素水溶肥料。

DB15/T1939—2020文冠果組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程。

DB15/T1588-2019元寶楓組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程。

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

粉葛Puerariamontanavar.thomsonii

粉葛為豆科葛屬多年生藤本植物。

外植體explant

參照NY/T2306-2013

消毒disinfection

參照NY/T2306-2013

滅菌sterilization

參照NY/T2306-2013

接種inoculation

參照NY/T2306-2013

增殖培養(yǎng)proliferationculture

將誘導(dǎo)的不定芽接種到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，增殖出較多的不定芽。

4環(huán)境及器具滅菌

準(zhǔn)備室消毒

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準(zhǔn)備室地面用巴氏消毒液拖地消毒，空間噴灑75%酒精消毒，保持干凈。

接種室消毒

接種室用紫外燈照射30min消毒。接種前開啟超凈工作臺(tái)紫外燈20min-30min后方可進(jìn)行操作。

超凈工作臺(tái)使用時(shí)用75%酒精擦拭臺(tái)面清潔消毒。超凈工作臺(tái)內(nèi)過濾膜定期檢查，清洗，更換，并在使

用超凈工作臺(tái)過程中嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行操作，確保超凈工作臺(tái)安全使用。

培養(yǎng)室消毒

培養(yǎng)室采用符合要求的二氧化氯組培室專用消毒劑定期熏蒸消毒。

接種器械消毒

接種之前，接種的剪刀，鑷子和解剖刀器械用報(bào)紙包好后高溫高壓進(jìn)行消毒，接種過程中，在酒精

燈上灼燒或在高溫消毒器內(nèi)進(jìn)行消毒。

5培養(yǎng)基制備

基本培養(yǎng)基的選擇

選擇MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基。

母液的配制

配制培養(yǎng)基前，先配制培養(yǎng)基母液。大量元素配制10倍，二水氯化鈣單獨(dú)配制。微量元素配制1000

倍，有機(jī)元素配制100倍，鐵鹽配制200倍，具體參數(shù)見附錄A。

植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑一般配制濃度為1mg/ml的母液，具體參數(shù)見附錄B。

母液的保存

母液配制好后貼上標(biāo)簽，標(biāo)簽信息包括名稱，配制時(shí)間，配制人，濃度，倍數(shù)等。放入4℃冰箱保

存?zhèn)溆?。使用前觀察有無沉淀或長(zhǎng)菌情況。若有異樣，須及時(shí)重新配制。

培養(yǎng)基的配制

5.4.1準(zhǔn)備

實(shí)驗(yàn)材料：燒杯，玻璃棒，移液管，標(biāo)簽紙，記號(hào)筆，蒸餾水，洗耳球，鑰勺，培養(yǎng)瓶，PH試紙。

實(shí)驗(yàn)試劑：配制的MS培養(yǎng)基母液。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑母液：6-BA，IBA，瓊脂粉，蔗糖。

調(diào)試儀器設(shè)備：移液器，電子天平，電爐，電磁爐，微波爐，灌裝機(jī)，高壓滅菌鍋。

5.4.2稱量

稱取蔗糖30g/L，瓊脂粉6g/L-7g/L,用700ml蒸餾水加熱溶解至澄清。

5.4.3量取母液

根據(jù)MS母液的倍數(shù)及配制培養(yǎng)基的體積，量取母液，具體吸取量見附錄A。根據(jù)配制培養(yǎng)基的配方，

體積及植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度吸取細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素。

5.4.4混合

將吸取的母液于溶解的蔗糖和瓊脂粉混合。

5.4.5定溶

加蒸餾水將培養(yǎng)基定溶至配制體積。

5.4.6調(diào)PH

充分?jǐn)嚢韬?，?mol/LHCl或1mol/LNaOH調(diào)節(jié)PH為5.8-6.0。

5.4.7分裝

2

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將培養(yǎng)基均勻的分裝到培養(yǎng)瓶中，一般培養(yǎng)基的厚度為1-1.5cm，避免培養(yǎng)基粘到培養(yǎng)瓶壁。

5.4.8密封

將培養(yǎng)瓶用蓋子進(jìn)行密封。

5.4.9滅菌

培養(yǎng)瓶放入高壓滅菌鍋中進(jìn)行高溫高壓滅菌，溫度為121℃，壓力為0.11kPa，滅菌時(shí)間為20min-

30min。

5.4.10冷卻

培養(yǎng)基冷卻凝固后，放入接種室備用。

6材料的處理

采集無病蟲害的粉葛藤條，去掉葉片，將藤條修剪為1.5-2.5cm小段，用洗潔凈或洗衣粉清洗10

min，再用流水沖洗1h。

7材料的表面消毒

將沖洗干凈的小段藤條用1:100的84消毒液浸泡并搖動(dòng)10min，在75％酒精中浸泡30s，無菌水清

洗3次，濃度為0.1%HgCl2浸泡消毒時(shí)間8min-10min，無菌水清洗4次。

8初代培養(yǎng)

取經(jīng)過表面消毒的小段藤條，將其上面的側(cè)芽或頂芽切掉，切成大小約0.5*0.5cm作為外植體，插

入接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)。

初代培養(yǎng)條件：置于培養(yǎng)室內(nèi)，培養(yǎng)溫度(25±2)℃，暗培養(yǎng)30d，誘導(dǎo)出不定芽。

誘導(dǎo)培養(yǎng)基的具體成分及含量：MS培養(yǎng)基（大量元素減半，其它不變）+0.5mg/L6-BA+0.1mg/L

IBA+2g/LPVP+30g/L蔗糖+6g/L-7g/L瓊脂粉。誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH為5.8-6.0。

9芽增殖培養(yǎng)

將粉葛藤條上的側(cè)芽或頂芽誘導(dǎo)的無菌芽，接于芽增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)。

增殖培養(yǎng)條件：置于培養(yǎng)室內(nèi)，培養(yǎng)溫度(25±2)℃、光照1800LX-2500LX、光照時(shí)間12h/d。培

養(yǎng)30d，誘導(dǎo)出“多芽體”。

增殖培養(yǎng)基的組分及其含量為：MS培養(yǎng)基+0.2mg/L6-BA+0.1mg/LIBA+30g/L蔗糖+6g/L-7g/L

的瓊脂粉。增殖培養(yǎng)基的pH為5.8-6.0。

10芽伸長(zhǎng)和壯苗培養(yǎng)

將增殖出的多芽切分后，每組含有2-3個(gè)芽，轉(zhuǎn)移到芽伸長(zhǎng)和壯苗培養(yǎng)基進(jìn)行芽的伸長(zhǎng)培養(yǎng)。

芽伸長(zhǎng)和壯苗培養(yǎng)條件：置于培養(yǎng)室內(nèi)，培養(yǎng)溫度(25±2)℃、光照1800LX-2500LX、光照時(shí)間12

h/d，培養(yǎng)30d。

芽伸長(zhǎng)和壯苗培養(yǎng)基的組份及其含量為：MS培養(yǎng)基+0.1mg/L6-BA+0.1mg/LIBA+8%椰子汁+30

g/L的蔗糖+6g/L-7g/L的瓊脂粉。芽伸長(zhǎng)和壯苗培養(yǎng)基的pH為5.8-6.0；

11生根培養(yǎng)

將伸長(zhǎng)約2-3cm不定芽切掉后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基，誘導(dǎo)根系產(chǎn)生。置于培養(yǎng)室，培養(yǎng)溫度(25±2)℃，

光照培養(yǎng)30d，光照1800LX-2500LX、光照時(shí)間12h/d。

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其中，將伸長(zhǎng)的的不定芽切掉后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基上，生根培養(yǎng)基的組份及其含量為：MS培養(yǎng)基(大量元

素減半，其它不變)+0.5mg/LIBA+30g/L蔗糖+6g/L-7g/L瓊脂粉。生根培養(yǎng)基的pH為5.8-6.0。

12出苗及田間管理

煉苗

生根培養(yǎng)后，選擇苗高4cm-6cm,有3片-5片葉子，根系有4條-5條，根長(zhǎng)5cm-10cm的組培苗，

從培養(yǎng)室拿出到溫室大棚進(jìn)行煉苗，煉苗的溫度為25±2℃、光照1500LX-2000LX。閉瓶煉苗1周，后開

瓶煉苗2d-3d。

洗苗

將組培苗小心從組培瓶里面出，盡量避免傷其根系，洗干凈根系上的培養(yǎng)基。用0.1%多菌靈溶液浸泡根

部30s-60s。

煉苗基質(zhì)

選用泥炭土：園土：珍珠巖=1:1:1混合的栽培基質(zhì)。栽培基質(zhì)符合LY/T2700-2016。

苗杯

選擇直徑為8cm,深度為8cm的普通的圓形塑料育苗杯進(jìn)行育苗。苗杯符合LY/T1000-2013。

填裝基質(zhì)

將混合好的基質(zhì)轉(zhuǎn)入苗杯里面，并澆水使基質(zhì)濕潤(rùn)。灌溉水符合GB5084。

栽植

將組培苗小心的栽植于苗杯中，栽植深度以根系上部覆蓋基質(zhì)1cm-2cm為宜，每杯1株，栽植后澆透

水為“定根水”。

田間管理

12.7.1澆水

定期澆水保持基質(zhì)濕潤(rùn)，保持基質(zhì)水分在30%-50%。

12.7.2施肥

根據(jù)組培苗的長(zhǎng)勢(shì)，每隔20d，可補(bǔ)澆含氮磷鉀(N15-P15-K15)或(N20-P20-K20)的水溶性肥料600

倍-800倍液。水溶性肥料符合NY/T1107-2010。

13出苗

當(dāng)組培苗的根系發(fā)達(dá)，高度在20cm，葉片為3片-4片以上，無病蟲害時(shí)可移至大田栽植。

4

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A

A

附錄A

（資料性）

MS培養(yǎng)基母液配方

給出MS培養(yǎng)基母液的配方。

表A.1MS培養(yǎng)基母液配方表

類別成分規(guī)定量/mg擴(kuò)大倍數(shù)/mL母液體積/mL稱量/mg吸取量/ml

NH4NO3165016500

KNO3190010100019000100

大量元素

KH2PO41701700

MgSO4.7H2O3703700

CaCl2.2H2O4401010004400100

KI0.83830

CoCl2.6H2O0.02525

H3BO36.26200

微量元素100010001

CuSO4.5H2O0.02525

MnSO4.4H2O22.322300

ZnSO4·7H2O8.68600

Na2MoO4·2H2O0.25250

鹽酸硫銨素0.15

鹽酸吡哆醇0.525

有機(jī)元素