ICS65.020DB22CCSB05吉林省地方標(biāo)準(zhǔn)DB22/T3333—2022雜交大豆RN型“三系”恢保快速鑒定規(guī)程CordofpracticeforrestorerlineormaintainerlineofhybridsoybeanRNthree-line吉林省市場(chǎng)監(jiān)督管理廳發(fā)布DB22/T3333—2022前言本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件中的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由吉林省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。本文件起草單位：吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院。本文件主要起草人：張井勇、張春寶、趙麗梅、彭寶、閆昊、張偉、林春晶、王鵬年、丁孝羊、李慧、孫寰、劉大壯、姚福山。IDB22/T3333—2022雜交大豆RN型"三系"恢?？焖勹b定規(guī)程1范圍本文件確立了雜交大豆RN型“三系”恢?？焖勹b定的程序，規(guī)定了測(cè)交材料準(zhǔn)備、測(cè)交、測(cè)交結(jié)果的鑒定等階段的操作指示，描述了記錄與檔案等追溯方法。本文件適用于雜交大豆RN型“三系”恢保快速鑒定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。NY/T1299-2007農(nóng)作物品種區(qū)域試驗(yàn)技術(shù)規(guī)程大豆DB22/T2209-2014DB22/T3177-2020雜交大豆種子雜交大豆質(zhì)核互作雄性不育系鑒定規(guī)程雄蕊發(fā)育退化或敗育，不能產(chǎn)生有功能的花粉，但它的雌蕊發(fā)育正常，能接受正?；ǚ鄱芫Y(jié)實(shí)，由細(xì)胞質(zhì)基因與核基因互作控制的雄性不育系類型，是廣泛存在于高等植物中的一種自然現(xiàn)象。在農(nóng)作物的雜種優(yōu)勢(shì)利用上具有重要價(jià)值。按照雄性不育花粉的敗育過程，可分為孢子體不育和配子體不不育細(xì)胞質(zhì)來源為大豆地方品種“汝南天鵝蛋”的雄性不育系、對(duì)應(yīng)保持系和恢復(fù)系，簡(jiǎn)稱RN型“三系”。利用育成的穩(wěn)定不育系為母本，待測(cè)種質(zhì)為父本進(jìn)行雜交，測(cè)驗(yàn)大豆種質(zhì)的恢復(fù)或保持特性。1DB22/T3333—2022參與雜交的親本之一，也指不同植株的花進(jìn)行異花傳粉時(shí)，接收花粉的植株，本標(biāo)準(zhǔn)中，母本指測(cè)交用RN型大豆不育系。3.6父本themaleparent參與雜交的親本之一，在植物中是雄性個(gè)體或產(chǎn)生雄性生殖細(xì)胞的個(gè)體，本標(biāo)準(zhǔn)中為提供花粉的個(gè)體，本標(biāo)準(zhǔn)中，父本指待測(cè)大豆種質(zhì)。3.7花粉敗育率pollenabortionrate不育花粉數(shù)占總花粉數(shù)的百分比。[來源：DB22/T3177-2020，2.5]3.8恢復(fù)系restorerline大豆品種或品系，它的特殊功能是用它的花粉授給不育系，所產(chǎn)生的雜交種育性恢復(fù)正常，能自交結(jié)實(shí)，如果該雜交種有優(yōu)勢(shì)，可用于生產(chǎn)。[來源：DB22/T2209-2014，3.3，有修改]3.9保持系maintainerline保持系可以保持不育系的不育特性，和不育系雜交，當(dāng)代可以結(jié)實(shí)，但是子代仍然是不育系，可以讓不育系得到繁殖，保有不育系材料。[來源：DB22/T2209-2014，3.2]雜交大豆RN型“三系”恢?？焖勹b定規(guī)程包括4個(gè)階段，其中測(cè)交結(jié)果鑒定分3種情況（7.2.2～圖1雜交大豆RN型“三系”恢?？焖勹b定流程圖2DB22/T3333—20225“三系”測(cè)交材料準(zhǔn)備5.1新種質(zhì)資源引進(jìn)根據(jù)不同育種目標(biāo)，有針對(duì)性的引進(jìn)、收集及創(chuàng)制優(yōu)良品種或品系。5.2新種質(zhì)性狀登記整理及編號(hào)5.2.1對(duì)新種質(zhì)的種子進(jìn)行去雜去劣，登記種子的特征特性，包括種皮色、粒形、種臍色，并對(duì)其進(jìn)行統(tǒng)一編號(hào)。5.2.2種植及田間性狀調(diào)查5.2.2.1在田間播種新種質(zhì)，株距10cm，行距60cm～65cm。5.2.2.2出苗期至成熟期觀察下胚軸顏色、葉形、花色、抗病蟲性、抗逆性、成熟期、株型、莢形、結(jié)莢習(xí)性、茸毛色、株高整齊度，按照NY/T1299-2007規(guī)定執(zhí)行。5.2.3考種成熟后，在行中間位置選連續(xù)不缺苗5株進(jìn)行考種，考種項(xiàng)目包括株高、節(jié)數(shù)、底莢高度、分枝數(shù)、單株有效莢數(shù)、莢形、莢皮色、單株粒數(shù)、單株粒重、百粒重、粒形、粒色、種臍色、籽粒光澤等。6測(cè)交6.1測(cè)交組合配制6.1.1測(cè)交母本的選擇6.1.1.1母本1RN型易被恢復(fù)不育系，以JLSCMS82A為代表，這類不育系，可被所有恢復(fù)系恢復(fù)，且多數(shù)F1花粉敗育率在0%～10%。RN型難被恢復(fù)不育系，以JLSCMS89A為代表，這類不育系，只能被極少數(shù)恢復(fù)系恢復(fù)，絕大多數(shù)F1花粉敗育率為61.0%以上。人工雜交授粉方式的田間播種3DB22/T3333—2022按小區(qū)播種，小區(qū)大小為1.2m×1.2m，在小區(qū)內(nèi)按行播種父本2穴、母本1及母本2各2穴，穴距30cm～40cm，穴保苗2株，在開花期罩上大小為1.2m×1.2m×1.5m微型網(wǎng)室。6.3雜交6.3.1雜交授粉6.3.1.1人工雜交授粉取待測(cè)種質(zhì)當(dāng)天新鮮花粉，分別對(duì)母本1、母本2進(jìn)行不去雄雜交授粉，并標(biāo)記授粉花蕾。6.3.1.2昆蟲傳粉開花期，在播種母本1、母本2、任一待測(cè)種質(zhì)（父本）的微型網(wǎng)室內(nèi)，投放3頭～5頭苜蓿切葉蜂或50頭～100頭蜜蜂傳粉。6.3.2種子收獲分別收獲母本不育系植株上的雜交種子和父本植株上的種子。7測(cè)交結(jié)果的鑒定7.1測(cè)交F1雜種的種植在田間播種測(cè)交F1種子，行長(zhǎng)2.0m，單株株距10cm，行距60cm～65cm，保證至少獲得5株以上F1植株。在F1植株盛花期，從5個(gè)單株主莖上、中、下各個(gè)部位各取2個(gè)未開放花蕾，鑒定方法采用1%I2-KI染色法鑒定花粉敗育率，可被染色花粉視為正?？捎ǚ?，未被染色花粉視為敗育花粉，按照附錄A1.3公式（A.1）計(jì)算花粉敗育率，統(tǒng)計(jì)花粉敗育率，用平均值表示。7.2.2新恢復(fù)系的鑒定7.2.2.1當(dāng)F1植株花粉敗育率為0%～70.0%時(shí)，可確定待測(cè)種質(zhì)為恢復(fù)系；7.2.2.2依據(jù)母本1和母本2測(cè)交F1植株花粉敗育率的共同表現(xiàn)，按照附錄B中表B.1確定其恢復(fù)力：a)由母本1測(cè)交獲得F1植株花粉敗育率為0%～10.0%，同時(shí)由母本2測(cè)交獲得F1植株花粉敗育率0%～50.0%時(shí)，確定該待測(cè)種質(zhì)為強(qiáng)恢復(fù)系；b)由母本1測(cè)交獲得F1植株花粉敗育率為10.1%～30.0%，同時(shí)由母本2測(cè)交獲得F1植株花粉敗育率為50.1%～90.0%時(shí)，確定該待測(cè)種質(zhì)為一般恢復(fù)系；c)由母本1測(cè)交獲得F1植株花粉敗育率為10.1%～50.0%，同時(shí)由母本2測(cè)交獲得F1植株花粉敗育率為90.1%～99.0%時(shí)，確定該待測(cè)種質(zhì)為弱恢復(fù)系。7.2.3新保持系的鑒定當(dāng)由母本1和母本2測(cè)交獲得F1植株花粉敗育率均為95.0%以上時(shí)，可確定被檢測(cè)種質(zhì)為新保持系。4DB22/T3333—20227.2.4非恢復(fù)系、非保持系的鑒定由母本1測(cè)交獲得F1植株花粉敗育率為70.1%～90.0%，同時(shí)由母本2測(cè)交獲得F1植株花粉敗育率為70.1%～100%時(shí)，確定該待測(cè)種質(zhì)為即非恢復(fù)系、也非保持系。8記錄與檔案應(yīng)對(duì)鑒定的過程和關(guān)鍵步驟進(jìn)行及時(shí)詳盡記錄，并按時(shí)歸檔。檔案保存期限不低于2年。5DB22/T3333—2022AA附錄A（規(guī)范性）雜交大豆RN型“三系”恢保關(guān)系鑒定A.1花粉育性鑒定A.1.1花粉鏡檢F1植株始花期每株取主莖上、中、下各個(gè)部位3個(gè)未開放花蕾各2朵，用70%的酒精溶液固定，然后取出花藥置于0.56%的I2-KI染色液的載玻片上，搗碎花藥擠出花粉，使花粉均勻分布，在160倍顯微鏡下進(jìn)行全視野觀察后，再選3個(gè)有代表性視野計(jì)數(shù)各類花粉的數(shù)量，凡染色花粉較多的植株復(fù)檢一次。為防止人為誤差，要求同一品種材料由同一個(gè)人完成花粉鏡檢，并保持操作的一致性。A.1.2花粉類型根據(jù)在顯微鏡下觀察花粉可被染色花粉視為正?？捎ǚ郏幢蝗旧ǚ垡暈閿∮ǚ?。A.1.3花粉敗育率經(jīng)I2-KI染色液染色后，大豆花粉未被染色花粉數(shù)占總花粉數(shù)的百分比。花粉敗育率計(jì)算按公式（A.1）SNTN100................................(A.1)6DB22/T3333—2022BB附錄B（規(guī)范性）雜交大豆RN型“三系”恢保關(guān)系鑒定表B.1給出了雜交大豆RN型“三系”恢、保關(guān)系分類。表B.1恢保關(guān)系分類表恢保分類保持系測(cè)交母本JLCMS8