2025屆河南省平頂山，許昌市，汝州市高三第一次模擬考試生物試卷注意事項:1．答題前，考生先將自己的姓名、準考證號碼填寫清楚，將條形碼準確粘貼在條形碼區(qū)域內(nèi)。2．答題時請按要求用筆。3．請按照題號順序在答題卡各題目的答題區(qū)域內(nèi)作答，超出答題區(qū)域書寫的答案無效；在草稿紙、試卷上答題無效。4．作圖可先使用鉛筆畫出，確定后必須用黑色字跡的簽字筆描黑。5．保持卡面清潔，不要折暴、不要弄破、弄皺，不準使用涂改液、修正帶、刮紙刀。一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個選項符合題目要求）1．消毒和滅菌是微生物培養(yǎng)中常用的操作方法。下列說法正確的是（）A．微生物接種技術的方法各不相同，但核心都是要防止雜菌污染，保證培養(yǎng)物的純度B．在100℃煮沸5-6分鐘屬于滅菌方法，可殺死微生物細胞和一部分芽孢C．在滅菌后倒平板前，加入一定量的緩沖液以調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值D．高壓蒸汽滅菌，只有當壓力表的壓力降到一個標準大氣壓時，才能打開蓋子2．分泌蛋白S在人胚胎發(fā)育過程中起重要的調(diào)控作用，由基因Shh控制合成。固醇類復合物是該基因轉(zhuǎn)錄所必需的。翻譯后的產(chǎn)物，只有在切除羧基端的一部分氨基酸后才有活性。下列敘述合理的是（）A．基因Shh表達時，RNA聚合酶與mRNA上的起始密碼子結合B．切除羧基端一部分氨基酸，可能發(fā)生在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)或高爾基體C．患者體內(nèi)缺乏分泌蛋白S是由于遺傳信息改變導致的D．固醇類復合物是通過控制RNA聚合酶的活性來影響分泌蛋白S的合成3．小麥種子萌發(fā)過程中，α-淀粉酶在糊粉層的細胞中合成，在胚乳中用于分解淀粉。該酶從糊粉層細胞排到細胞外的方式是（）A．萌發(fā)過程中氧氣是否充足不會影響其排出B．逆濃度梯度經(jīng)協(xié)助擴散排出C．需要細胞膜上的載體蛋白協(xié)助D．含該酶的囊泡與細胞膜融合排出4．高等植物細胞內(nèi)元素轉(zhuǎn)移的過程，只能發(fā)生在細胞器中的是（）A．CO2中的碳元素轉(zhuǎn)移到葡萄糖 B．H2O中的氫元素轉(zhuǎn)移到葡萄糖C．丙酮酸中的氧元素轉(zhuǎn)移到CO2 D．ATP中的磷元素轉(zhuǎn)移到RNA5．下列有關HIV的敘述，正確的是()A．HIV的特異性受體只存在于人體的輔助性T淋巴細胞表面B．HIV的遺傳物質(zhì)不能直接整合到宿主細胞的染色體中C．HIV感染者細胞免疫下降，但體液免疫基本不受影響D．HIV主要通過性接觸、血液、昆蟲等途徑傳播6．下列有關赤霉素的敘述，正確的是（）A．赤霉素僅存在于高等植物體內(nèi)，是一種植物激素B．赤霉素主要分布于植物的根尖、休眠的種子中C．赤霉素使大麥無須發(fā)芽就能產(chǎn)生α-淀粉酶D．赤霉素和生長素均能促進細胞生長，并具有兩重性二、綜合題：本大題共4小題7．（9分）錦鯉皰疹病毒是一種雙鏈DNA病毒。下圖為TaqMan熒光探針技術的原理示意圖，探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時該探針被Taq酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增1個DNA分子，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。請回答下列問題：（1）在基因工程中，目前獲取目的基因的常用方法除了利用PCR技術擴增外，還有___________和_________兩種類型。（2）引物的化學本質(zhì)是_________，其與模板DNA的結合具有_________性。（3）通常情況下，探針中的GC含量比引物中的略高，這有利于保證退火時_________與模板DNA結合。（4）用TaqMan熒光探針技術檢測錦鯉皰疹病毒時，在反應體系中要加相應的病毒遺傳物質(zhì)、引物、探針和_________、_________酶等，其中酶發(fā)揮的具體作用是延伸DNA鏈和_________。（5）若最初該反應體系中只有一個病毒DNA分子，經(jīng)n次循環(huán)后，需要消耗TaqMan熒光探針_________個。8．（10分）轉(zhuǎn)染是指利用一定手段使外源基因進入細胞中并穩(wěn)定表達的過程。腺病毒載體常用于外源基因的轉(zhuǎn)染，這在基因治療、疫苗研發(fā)和動物細胞培養(yǎng)的可視化監(jiān)控方面有著廣闊的應用前景?；卮鹣铝袉栴}。（l）腺病毒營____活，用作轉(zhuǎn)染的腺病毒載體上具有____識別和結合的部位，是外源基因在受體細胞中啟動表達的關鍵。（2）構建腺病毒載體時，先用同種限制酶對腺病毒DNA和外源基因進行切割，可獲得相同的____，再用DNA連接酶恢復被限制酶切開的兩個核苷酸之間的___。（3）通過腺病毒載體將藍色熒光基因轉(zhuǎn)染山羊耳緣成纖維細胞，利用藍色熒光直觀監(jiān)控細胞的體外培養(yǎng)過程。首先將山羊耳緣組織塊用胰蛋白酶或_______處理得到單個成纖維細胞，培養(yǎng)至貼滿瓶壁時，細胞就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為________。這時，重新用胰蛋白酶等處理，然后分瓶繼續(xù)進行_______培養(yǎng)。培養(yǎng)時使用的合成培養(yǎng)基，通常需加入___等一些天然成分，以滿足細胞對營養(yǎng)物質(zhì)的全面需求。9．（10分）果蠅的灰身（A）與黑身（a）、直毛（B）與分叉毛（b）是兩對相對性狀。兩只雌雄果蠅雜交，F(xiàn)1表現(xiàn)型及數(shù)量如下表：灰身黑身直毛分叉毛雌蠅（只）75261010雄蠅（只）74255049回答下列問題：（l）這兩對基因的遺傳遵循___定律。（2）F1灰身直毛雌果蠅的基因型有____種，雜合子的比例為____。（3）若F1中的灰身雄果蠅與黑身雌果蠅雜交，則后代中黑身果蠅所占比例為____。（4）為測定F1中某只雄蠅（甲）的基因型，可將其與基因型為____的果蠅測交，若后代表現(xiàn)型及比例為___，則雄果蠅（甲）的基因型為AaXBY。10．（10分）癌細胞表面蛋白“PDL-1”與T細胞表面蛋白“PD-1”特異性結合后，可抑制T細胞活性并啟動其凋亡，導致腫瘤細胞發(fā)生免疫“逃逸”。研究者對“PD-1”基因進行克隆、表達及生物學活性鑒定，為制備抗體打基礎。研究中所用引物α和β堿基序列見圖1、幾種常用限制酶名稱及識別序列與酶切位點見圖2：α鏈：5'-TCACTCGAGACCATGCAGATCCCACAGGCGCCC-3'β鏈：5'-CTCGAATTCTCAGAGGGGCCAAGAGCAGTG-3'圖1（1）首先提取細胞中的mRNA反轉(zhuǎn)錄生成____________________作為模板；設計含有不同的限制酶切點的α和β序列為引物，通過____________________技術擴增目的基因。（2）選用圖1中的兩種名稱分別為____________________的限制酶將“pIRES2-EGFP質(zhì)?！陛d體進行雙切，再用DNA連接酶將其與目的基因拼接，構建表達載體。該表達載體的組成，除了目的基因、標記基因抗卡那霉素基因外，還必須具有____________________等。（3）而后一定溫度下，與經(jīng)過處理的感受態(tài)大腸桿菌混合培養(yǎng)在含有_____________培養(yǎng)基中，可篩選出已經(jīng)完成轉(zhuǎn)化的大腸桿菌，繼續(xù)培養(yǎng)該種大腸桿菌以擴增重組DNA。（4）將擴增后的“pIRES2-EGFP載體/PD-1重組DNA”轉(zhuǎn)入可高度表達外源基因的原代293T細胞。一段時間后，為確定PD-1基因是否表達，檢測細胞膜表面是否具有____________________。為判斷其是否具有生物學活性和功能，則可裂解293T細胞，提取該物質(zhì)看能否與____________________發(fā)生結合，從而阻斷“PD-1與PDL-1信號通路”。研究中還會有一步驟，只將“pIRES2-EGFP載體”轉(zhuǎn)入293T細胞，其目的是_________________________。11．（15分）2019-nCov是2019年在武漢首次發(fā)現(xiàn)導致肺炎的新型冠狀病毒（RNA病毒），世衛(wèi)組織將其引發(fā)的疾病正式命名為2019冠狀病毒病?；卮鹣铝袉栴}。（1）2019-nCov能和細胞膜上的結合位點血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2結合從而入侵細胞。從細胞膜控制物質(zhì)進出功能方面分析，該現(xiàn)象說明____________。（2）2019-nCov入侵機體后，引發(fā)機體產(chǎn)生_____細胞并與靶細胞結合，使靶細胞裂解死亡，吞噬細胞在特異性免疫過程中的作用______________。（答出2點即可）。（3）病愈后的病人在短期內(nèi)一般不會再被感染的原因是___________。一段時間后，制備出的該病毒疫苗不一定能發(fā)揮作用，其原因是____________。

參考答案一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個選項符合題目要求）1、A【解析】

消毒是能是指使用較為溫和的物理或化學方法殺死物體表面和內(nèi)部的部分微生物（不包括芽孢和孢子），滅菌是指用強烈的理化因素殺死物體表面和內(nèi)部的所有微生物，包括芽孢和孢子。常用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法，稀釋涂布平板法常用來統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目。【詳解】A、微生物接種技術的方法各不相同，但核心都是要防止雜菌污染，保證獲得純凈的培養(yǎng)物，A正確；B、在100℃煮沸5-6分鐘屬于煮沸消毒法，可殺死微生物細胞和一部分芽孢，B錯誤；C、在滅菌前，加入一定量的緩沖液以調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值，B錯誤；D、高壓蒸汽滅菌，只有當壓力表的壓力降到零時，才能打開排氣閥，擰松螺栓，打開蓋子，D錯誤。故選A。2、B【解析】

解答本題的關鍵是緊扣題干信息“分泌蛋白S在人胚胎發(fā)育過程中起重要的調(diào)控作用，由Shh基因控制合成，固醇類復合物是該基因轉(zhuǎn)錄所必需的”、“分泌蛋白S合成后并沒有生物活性，只有在切除羧基端的一部分氨基酸后才有活性”答題?！驹斀狻緼、RNA聚合酶是轉(zhuǎn)錄時所需要的，應與基因Shh的啟動子相結合，A錯誤；B、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體對分泌蛋白都具有加工作用，B正確；C、缺乏分泌蛋白，可能是基因突變，也可能是蛋白質(zhì)翻譯后的加工、分泌等出問題，C錯誤；D、題干信息無法確定固醇類復合物是如何影響轉(zhuǎn)錄的，D錯誤。故選D。3、D【解析】

小分子物質(zhì)進出細胞方式包括自由擴散、協(xié)助擴散、主動運輸，利用的是細胞膜的選擇透過性；大分子物質(zhì)和顆粒物質(zhì)進出細胞的方式是胞吞和胞吐，利用的是細胞膜的流動性。根據(jù)題干信息分析，α-淀粉酶化學本質(zhì)是蛋白質(zhì)，是生物大分子，生物大分子進出細胞的方式是胞吞胞吐，因此既不是順濃度梯度也不是逆濃度梯度，更不是通過離子通道排出，而是通過囊泡包裹與細胞膜融合以胞吐方式排出，該過程需要消耗能量，借助于細胞膜的流動性完成?！驹斀狻緼、根據(jù)以上分析已知，α-淀粉酶排到細胞外的方式為胞吐，需要消耗能量，而氧氣參與有氧呼吸供能，因此α-淀粉酶的排出與氧氣是否充足有關，A錯誤；B、α-淀粉酶排到細胞外的方式為胞吐，而不是協(xié)助擴散，B錯誤；C、α-淀粉酶排到細胞外的方式為胞吐，利用的是細胞膜的流動性，不需要載體蛋白的協(xié)助，C錯誤；D、α-淀粉酶是通過囊泡包裹與細胞膜融合以胞吐方式排出的，D正確。故選D。4、A【解析】

光合作用的場所是葉綠體，包括光反應和暗反應階段；有氧呼吸分為三個階段，第一階段在細胞質(zhì)基質(zhì)，二、三階段在線粒體進行?！驹斀狻緼、CO2中的碳元素通過光合作用的暗反應過程轉(zhuǎn)移到葡萄糖（CO2→C3→葡萄糖），該反應的場所是葉綠體基質(zhì)，A正確；B、二糖分解為葡萄糖的過程需要水參與，發(fā)生在細胞質(zhì)基質(zhì)，不需要細胞器的參與，B錯誤；C、丙酮酸中的氧元素轉(zhuǎn)移到CO2可發(fā)生在酵母菌等無氧呼吸的第二階段，場所為細胞質(zhì)基質(zhì)，C錯誤；D、ATP脫去兩分子磷酸基團，形成AMP即可作為合成RNA的原料，RNA的合成可發(fā)生在細胞核中，D錯誤。故選A?！军c睛】解答此題需要明確光合作用與呼吸作用中物質(zhì)的關系，熟記ATP與RNA的關系，進而結合選項分析作答。5、B【解析】

A、人體對抗艾滋病靠特異性免疫和非特異性免疫，因此吞噬細胞表面以及T細胞表面都有受體，A錯誤；B、HIV的遺傳物質(zhì)通過逆轉(zhuǎn)錄形成DNA后整合到宿主細胞的染色體中，B正確；C、IV感染者細胞免疫下降，體液免疫降低，C錯誤；D、艾滋病的傳播途徑有：性接觸傳播、血液傳播和母嬰傳播等，艾滋病不會通過昆蟲傳播，D錯誤。故選B。【點睛】艾滋病是因為感染人類免疫缺陷病毒（HIV）后導致的免疫缺陷?。瓾IV是一種逆轉(zhuǎn)錄病毒，主要攻擊和破壞的靶細胞為T淋巴細胞，隨著T淋巴細胞的大量死亡，導致人體免疫力降低，病人大多死于其他病原微生物的感染或惡性腫瘤，艾滋病的傳播途徑有：性接觸傳播、血液傳播和母嬰傳播等。6、C【解析】

赤霉素的生理作用是促進細胞伸長，從而引起莖稈伸長和植物增高。此外，它還有促進麥芽糖化，促進營養(yǎng)生長，防止器官脫落和解除種子、塊莖休眠促進萌發(fā)等作用?！驹斀狻緼、赤霉素也可存在于赤霉菌中，A錯誤；B、高等植物中的赤霉素主要存在于幼根、幼芽及未成熟的種子等部位，B錯誤；C、在啤酒工業(yè)上多用赤霉素促進α-淀粉酶的產(chǎn)生，避免大麥種子由于發(fā)芽而造成大量有機物的消耗，C正確；D、赤霉素和生長素均能促進細胞生長，后者具有兩重性，前者不具有，D錯誤。故選C。【點睛】本題考查植物激素的相關知識，意在考查考生能運用所學知識與觀點，對某些生物學問題進行解釋、推理，做出合理的判斷或得出正確的結論。二、綜合題：本大題共4小題7、從基因文庫中獲取人工合成DNA單鏈特異探針先于引物4種脫氧核苷酸（或Mg2+）Taq將探針水解2n-1【解析】

PCR技術擴增目的基因（1）原理：DNA雙鏈復制（2）過程：第一步：加熱至90～95℃DNA解鏈；第二步：冷卻到55～60℃，引物結合到互補DNA鏈；第三步：加熱至70～75℃，熱穩(wěn)定DNA聚合酶從引物起始互補鏈的合成?！驹斀狻浚?）在基因工程中，目前獲取目的基因的常用方法有：利用PCR技術擴增、從基因文庫中獲取、人工合成。（2）引物的化學本質(zhì)是DNA單鏈，其與模板DNA的結合具有特異性。（3）通常情況下，探針中的GC含量比引物中的略高，這有利于保證退火時探針先于引物與模板DNA結合。（4）PCR擴增所需的條件包括：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶），結合圖中信息可知，用TaqMan熒光探針技術檢測錦鯉皰疹病毒時，在反應體系中要加相應的病毒遺傳物質(zhì)、引物、探針和4種脫氧核苷酸、Taq酶等；由圖可知，酶發(fā)揮的具體作用是延伸DNA鏈和將探針水解。（5）根據(jù)題干信息可知，“熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物數(shù)量完全同步”，因此計算時需要去除原來親代的DNA分子，因此若最初該反應體系中只有一個病毒DNA分子，經(jīng)n次循環(huán)后，需要消耗TaqMan熒光探針2n-1個。【點睛】本題結合圖解，考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)；識記PCR技術的條件，能結合圖中信息準確答題。8、寄生RNA聚合酶黏性末端或平末端磷酸二酯鍵膠原蛋白酶細胞的接觸抑制傳代血清、血漿【解析】

1、基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。構建基因表達載體時需要用同種限制酶切割目的基因和載體，以產(chǎn)生相同的末端，然后用DNA連接酶連接，恢復被切開的核苷酸之間的磷酸二酯鍵，RNA聚合酶能夠與啟動子識別并結合催化轉(zhuǎn)錄的進行，這是是外源基因在受體細胞中啟動表達的關鍵。2、動物細胞培養(yǎng)的流程：取動物組織塊（動物胚胎或幼齡動物的器官或組織）→剪碎→用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個細胞→制成細胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進行原代培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個細胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)?！驹斀狻浚?）腺病毒屬于動物病毒，其無細胞結構，營寄生生活，必須寄生于宿主的活細胞中才能繁殖；用作轉(zhuǎn)染的腺病毒載體上應具有RNA聚合酶識別和結合的部位啟動子，這樣才能驅(qū)動目的基因轉(zhuǎn)錄形成mRNA，最終合成相應的蛋白質(zhì)。（2）構建腺病毒載體時，先用同種限制酶對腺病毒DNA和外源基因進行切割，可以獲得相同的黏性末端或平末端，再用DNA連接酶恢復被限制酶切開的兩個脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵。（3）對山羊耳緣組織塊用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理得到單個成纖維細胞，便于細胞與培養(yǎng)液充分接觸；培養(yǎng)至貼滿瓶壁時，細胞就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為接觸抑制；這時重新用胰蛋白酶等處理，然后分瓶繼續(xù)進行傳代培養(yǎng)；由于人們對動物細胞培養(yǎng)所需的營養(yǎng)物質(zhì)還沒有完全搞清楚，因此培養(yǎng)時使用的合成培養(yǎng)基，通常需加入血漿、血清等一些天然成分，以滿足細胞對營養(yǎng)物質(zhì)的全面要求?！军c睛】本題考查基因工程和細胞工程的知識點，要求學生掌握基因表達載體的構建過程以及啟動子的作用，把握操作工具限制酶和DNA連接酶的應用及其作用結果，理解動物細胞培養(yǎng)的過程和特點，把握動物細胞培養(yǎng)過程中的原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)的概念，識記動物細胞培養(yǎng)的條件，這是解決問題的關鍵。9、基因自由組合45/61/3aaXbXb灰身直毛雌蠅：黑身直毛雌蠅：灰身分叉毛雄蠅：黑身分叉毛雄蠅=1：1：1：1【解析】

根據(jù)題意和圖表分析可知：雄果蠅中灰身∶黑身≈3∶1，雌果蠅中灰身∶黑身≈3∶1，黑身果蠅與灰身果蠅的比例在雌雄果蠅之間的比例沒有差異，因此控制黑身和灰身的基因位于常染色體上，且灰身對黑身是顯性性狀，親本基因型是Aa×Aa；雄果蠅中直毛：分叉毛≈1：1，雌果蠅中沒有分叉毛，只有直毛，因此控制直毛與分叉毛的基因位于X染色體上，直毛是顯性性狀，親本基因型是XBXb×XBY，對于兩對相對性狀來說，親本果蠅的基因型是AaXBXb×AaXBY?！驹斀狻浚?）由分析可知這兩對基因遵循自由組合定律。（2）親本基因型AaXBXb×AaXBY，所以F1灰身直毛雌果蠅的基因型及AAXBXB∶AaXBXB∶AAXBXb∶AaXBXb=1∶2∶1∶2，共4種，雜合子比例為5/6。（3）F1中的灰身雄果蠅的基因型及比例AA∶Aa=1∶2，所以與黑身雌果蠅雜交，后代黑身果蠅=2/3×1/2=1/3。（4）測交是和隱性純合子交配，即和基因型aaXbXb的雌果蠅測交，若后代表現(xiàn)型及比例為灰身直毛雌蠅∶黑身直毛雌蠅∶灰身分叉毛雄蠅∶黑身分叉毛雄蠅=1∶1∶1∶1，則灰身雄果蠅的基因型為AaXBY?！军c睛】本題需要考生從表格中的數(shù)據(jù)分析出基因在染色上的位置及傳遞方式，在結合自由組合定律進行解答。10、cDNAPCRXhoIEoRI啟動子、終止子、復制原點卡那霉素PD-1蛋白PDL-1或答PD-1抗體作為對照【解析】

基因工程技術的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術擴增和人工合成。（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛毎姆椒ㄓ修r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛毎钣行У姆椒ㄊ秋@微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛毎姆椒ㄊ歉惺軕B(tài)細胞法。（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因采用DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA采用分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)采用抗原—抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。【詳解】（1）基因文庫包括基因組文庫和部分基因文庫（cDNA）。其中基因組文庫包含某種生物所有的基因，而部分基因文庫只包含某種生物的部分基因，可以mRNA為模板反轉(zhuǎn)錄形成cDNA；由于PCR技術利用的是DNA分子復制的原理，所以用該cDNA進行PCR技術擴增短時間內(nèi)可以獲得大量的目的基因。（2）分析圖1中堿基序列，α鏈上有“—CTCGAC—”識別序列，β鏈上有“—GAATTC—”堿基識別序列，與圖2中XhoI限制酶和EoRI限制酶的識別序列相同。故選用XhoI限制酶和EoRI限制酶將“pIRES2-EGFP質(zhì)粒”載體進行雙切，再用DNA連接酶將其與目的基因拼接，構建基因表達載體。基因表達載體的組成包括目的基因、標記基因、啟動子、終止子、復制原點等。（3）根據(jù)第（2）題可知，基因表達載體上的標記基因是卡那霉素抗性基因，因此一定溫度下，與經(jīng)過Ca2+處理的感受態(tài)大腸桿菌混合培養(yǎng)在含有卡那霉素的培養(yǎng)基，可篩選出已經(jīng)完成轉(zhuǎn)化的大腸桿菌。（4）基因表達的產(chǎn)物是蛋白質(zhì)，一段時間后，為確定PD-1基因是否表達，可以檢測細胞膜表面是否具有PD-1基因表達的PD-1蛋白。為判斷其是否具有生物學活性和功能，可采用抗原—抗體雜交技術，即從裂解293T細胞中，提取PD-1蛋白看能否與PDL-1發(fā)生結合，從而阻斷“PD-1與PDL-1信號通路”。為了增加實驗的可信度，還需要設置對照實驗，只將“pIRES2-EGFP載體”轉(zhuǎn)入293T細胞，因為不含PD-1基因，所以“PD-1與PDL-1信號通路”不會阻斷?！军c睛】題考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的概念、原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)，能結合所學的知識在新的情景材料下分析運用。11、細胞膜控制物質(zhì)進出的作用是相對的效應T