河南歐諾生物科技有限公司HenanOunuoBiotechnologyCo.LTD地址：河南省鄭州市惠濟區(qū)大河路街道中原物流港B6-1-06郵編：450049電話那霉素ELISA檢測試劑盒使用說明書產品編碼：Ounuo99001本品采用競爭性酶免檢測技術用于液體乳、組織/細胞上清、組織（豬肉、牛肉、雞肉、羊肉、鴨肉等）、奶粉以及組織/細胞上清等樣本中卡那霉素的定量分析，最大可滿足96次測試，在做復孔的情況下，一次最多可檢測42個樣本。產品特性：快速（＜30min）、高回收（≥75%）和高效的前處理方法高靈敏度（0.05ng/g,或ppb）和檢測低限（1.25ng/g，或ppb）快速，檢測時間＜1.5h高的重現(xiàn)性定量限：組織（定量限：組織（豬肉、牛肉、雞肉、羊肉、鴨肉等）：5ppb液體乳：10ppb組織/細胞上清：500ppb奶粉：10ppb檢測限：組織（豬肉、牛肉、雞肉、羊肉、鴨肉等）：1.25ppb液體乳：5ppb組織/細胞上清：200ppb奶粉：5ppb技術服務：電話工郵箱：lixinyu@請您提供產品貨號、批號、實驗數(shù)據等相關信息，以便能快速而高效的為您服務（貨號及批號見試劑盒外包裝）使用前須知當與儀器方法結果相比時，試劑盒的結果偏高這是很正常的現(xiàn)象。因為儀器方法僅測量的單一化合物，而試劑盒中的抗體由于不僅能識別目標分子且還能識別結構上相似的分子，包括其相關的代謝產物。因此，使用人員需要明白本產品的局限性和對數(shù)據做出合理的分析。任何試劑、檢測程序的改變都可能導致檢測失敗。不要使用超過有效期的產品；不同批次的產品不得混用。實驗用水的質量很重要，請使用蒸餾水或去離子水。微孔板開封后，需置于有干燥劑的密封袋中冷藏保存，建議于一個月內使用完。需要但未提供的設備和試劑酶標儀：配備450nm波長單道移液器：20-200、100-1000μL量程各一支多道移液器：30-300μL量程一支白色、黃色和藍色吸頭若干恒溫培養(yǎng)箱渦旋儀多管振蕩器離心機均質器或絞肉機氯化鈉1.5mL、10mL塑料離心管1.樣本前處理一般來說，組織樣本在2-8℃最多保存1-2天，液體乳（滅菌乳）開封使用約7天，如長時間不用，建議分裝成適量小份于-20℃保存，請勿使用反復凍融的樣本。試劑配制TIP吸取上層溶液時，應避免吸取到脂類物質，影響回收10%TIP吸取上層溶液時，應避免吸取到脂類物質，影響回收稱取10g氯化鈉[NaCl]，加去離子水100mL混勻樣本稀釋液取1體積2x樣本稀釋液，加入等體積超純水混勻組織（豬肉、牛肉、雞肉、羊肉、鴨肉等）稱取0.5±0.01g均質的樣本于10mL塑料離心管，加入2.5mL10%氯化鈉振蕩3min，

4000rpm離心3min；吸取0.1mL上層清液于1.5mL離心管，加0.4mL樣本稀釋液，渦旋15s；取50μL點樣稀釋倍數(shù)：25液體乳稱取0.5±0.01g均質的樣本于10mL塑料離心管，加入4.5mL10%氯化鈉振蕩3min，

4000rpm離心3min；吸取0.1mL上層清液于1.5mL離心管，加0.9mL樣本稀釋液，渦旋15s；取50μL點樣稀釋倍數(shù)：100奶粉稱取0.5±0.01g均質的樣本于10mL塑料離心管，加入4mL10%氯化鈉振蕩3min，

4000rpm離心3min；吸取0.08mL上層清液于1.5mL離心管，加0.92mL樣本稀釋液，渦旋15s；取50μL點樣稀釋倍數(shù)：100組織/細胞上清量取0.1mL樣本于1.5mL塑料離心管，加入0.9mL去離子水渦旋混勻；吸取0.1mL上層清液于新的1.5mL離心管，加入0.9mL去離子水渦旋混勻；再次吸取0.25mL上層清液于新的1.5mL離心管，加0.75mL10%氯化鈉渦旋混勻；取100μL于新的1.5mL離心管中，加900μL樣本稀釋液，渦旋15s；取50μL點樣稀釋倍數(shù)：40002.檢測步驟檢測前準備所有試劑需回復至室溫（在20-25℃下，從試劑盒中取出并放置1-2h）；檢測開始前需準備好所需試劑；取出所需體積的試劑，其余放回盒內；未使用完的試劑請勿倒回原試劑瓶內，移取每一種試劑需更換吸頭，以免交叉污染；請不要在通風口、陽光直射下檢測，以避免造成微孔微環(huán)境差異導致檢測失敗洗液（1×）配制取1體積的20×濃縮洗液，加入19體積的去離子水或蒸餾水混勻TIP加標準品時，建議從低濃度到高濃度 TIP加標準品時，建議從低濃度到高濃度檢測步驟移取50μL卡那霉素標準品至相應微孔中；移取50μL樣本至相應微孔中；移取50μL酶結合物至每一所需微孔中；加入50μL卡那霉素抗體至每一所需微孔中，用手指肚輕輕敲擊微孔板架兩側混勻1min；室溫（20-25℃）孵育30min；甩干微孔板，加入300μL洗液（1×），浸泡5s后倒出洗液，再重復4次，甩干并于無塵布上拍干；TIP加終止液后，請于30min內讀數(shù)；讀數(shù)前用無塵布輕輕擦掉微孔底部的水珠或異物加入100μL底物，室溫（20-25TIP加終止液后，請于30min內讀數(shù)；讀數(shù)前用無塵布輕輕擦掉微孔底部的水珠或異物加入100μL終止液，于450nm下讀數(shù)結果計算以logit(B/B0）為y軸，以log（分析物濃度）為x，進行線性擬合。其中公式如下logit(B/B0)=klnB為標準品或樣本對應的吸光度；B0為零標準品對應的吸光度；logit(BK為斜率；C為截距計算出樣本的平均吸光度和樣本的B/B0值

代入公式①中求出濃度并乘以對應的稀釋

倍數(shù)，即為樣本中待測物最終濃度標準曲線圖如右：3.原理基于競爭性免疫檢測原理：卡那霉素與預包被在板上的卡那霉素蛋白偶聯(lián)物競爭結合有限的抗卡那霉素的抗體，然后加入酶結合物反應，形成酶結合物—抗卡那霉素抗體—卡那霉素蛋白偶聯(lián)物復合物，洗滌除去未結合的反應物，經TMB底物顯色產生藍色產物，加終止液后，產物由藍色轉變?yōu)辄S色，其在450nm下有最大吸收峰。樣本中卡那霉素含量與樣本的吸光度呈負相關。4.產品性能檢測限和定量限樣本類別檢測限ng/g或ppb定量限ng/g或ppb組織（豬肉、牛肉、雞肉、羊肉、鴨肉等）1.255液體乳510組織/細胞上清200500奶粉510特異性（交叉反應）化合物交叉反應率%卡那霉素（Kanamycin）100其他抗生素＜0.1精密度：批內/間≤10%準確度（添加回收）樣本類型添加回收率%組織（豬肉、牛肉、雞肉、羊肉、鴨肉等）100±25液體乳100±15組織/細胞上清100±20奶粉100±20線性區(qū)間：0.05~4.05ng/mL檢測時間：45min保存及有效期本產品需保存在2-8℃，有效期為12個月；開封使用后建議一個月內使用完。5.產品組成組分數(shù)量組分數(shù)量預包被微孔板96孔（8孔*12條）卡那