大球蓋菇菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程本文件適用于大球蓋菇菌種生產(chǎn)。下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文GB4806.7食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品接觸用塑料材料及制品GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程本文件沒有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。宜使用18mm×180mm或20mm×200mm玻璃試管。馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA):馬鈴薯200g(浸出汁),葡萄糖20g,瓊脂20g,水1000mL,pH培養(yǎng)基分裝量不超過試管容量1/4,121℃滅菌30min。滅菌結(jié)束后溫度降至65℃±5℃時(shí)，在潔凈的環(huán)境中擺斜面，斜面長(zhǎng)度不超過試管長(zhǎng)度的2/3。斜面凝固后，按NY/T528的規(guī)定進(jìn)行試管滅菌效果檢驗(yàn)。2按NY/T528的規(guī)定執(zhí)行，做好標(biāo)記。接種后試管置于23℃~25℃下避光培養(yǎng)，待菌絲長(zhǎng)滿斜面2/3以上。符合NY/T528的規(guī)定，塑料制品符合GB4806.7的規(guī)定。宜使用但不限于以下配方：a)谷粒98%,碳酸鈣2%,含水量60%～62%;b)木屑78%,麩皮20%,碳酸鈣2%,含水量60%～62%。按NY/T528的規(guī)定配制后分裝入原種瓶(袋),121℃~123℃滅菌2h。料溫冷卻至26℃以下，按NY/T528的規(guī)定接種，做好標(biāo)記。接種后置于培養(yǎng)室，23℃~25℃遮光培養(yǎng)，空氣相對(duì)濕度保持在55%～65%,二氧化碳濃度低于0.5%,當(dāng)菌絲長(zhǎng)滿瓶(袋)時(shí)結(jié)束培養(yǎng)。培養(yǎng)期間按NY/T528要求定期檢查。馬鈴薯200g(浸出液)、稻殼100g(浸出液)、葡萄糖20g、磷酸二氫鉀2g、硫酸鎂0.5g、加水至裝液量不超過搖瓶容量的2/5。裝好的搖瓶放入高壓滅菌鍋內(nèi)滅菌，121℃下滅菌30min。培養(yǎng)基溫度降至26℃以下，嚴(yán)格按照無(wú)菌操作程序，將母種塊切割成3mm~5mm顆粒，接入待接種搖瓶培養(yǎng)基內(nèi)，每100mL液體培養(yǎng)基接種10粒。接種后在25℃環(huán)境下靜置培養(yǎng)2d,待接入的菌種塊萌發(fā)出白色菌絲體后，置于振蕩培養(yǎng)箱，25℃下150r/min振蕩培養(yǎng)5d～7d。3培養(yǎng)完成后對(duì)菌種進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，檢驗(yàn)要求應(yīng)符合附錄B的規(guī)定。參考配方：按照每1000mL水加入玉米粉7.5g、黃豆粉5g、葡萄糖20g、蛋白胨2g、磷酸二氫鉀1g、硫酸鎂0.5g比例配制。原料攪拌均勻，不應(yīng)有結(jié)塊，轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)，裝液量不超過罐體容量的70%,加入0.03%消泡劑。121℃滅菌90min。生產(chǎn)用水應(yīng)符合GB5749的規(guī)定。培養(yǎng)基溫度降至26℃以下，維持罐體壓力在0.03MPa,快速接入搖瓶菌種。接種量為罐內(nèi)培養(yǎng)基總體積的0.1%～0.2%。維持罐體壓力在0.03MPa,溫度25℃,攪拌狀態(tài)下培養(yǎng)7d～10d。培養(yǎng)完成后對(duì)菌種進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，檢驗(yàn)要求應(yīng)符合附錄B的規(guī)定。應(yīng)符合NY/T528的規(guī)定。宜使用17cm×35cm×0.005cm規(guī)格的聚丙烯塑料袋，塑料制品符合GB4806.7的規(guī)定。宜使用但不限于以下配方：a)雜木屑43%,稻殼30%,玉米芯20%,麩皮或米糠5%,石膏1%,石灰1%,含水量63%～65%;b)雜木屑76%,稻殼20%,黃豆粉2%,石灰1%,石膏1%,含水量63%～65%。按NY/T528的規(guī)定配制后分裝入菌種袋，121℃~123℃滅菌2h。滅菌結(jié)束后在冷卻室冷卻至25℃以下。固體原種接種按NY/T528的規(guī)定執(zhí)行。發(fā)酵罐液體原種用液體菌種接種器接種，每袋接種量20mL～30mL,封口并貼好標(biāo)簽。接種后置于培養(yǎng)室，23℃~25℃遮光培養(yǎng)，空氣相對(duì)濕度保持在55%～65%,二氧化碳濃度低于0.5%,待菌絲長(zhǎng)滿菌袋。培養(yǎng)期間按NY/T528的規(guī)定定期檢查。培養(yǎng)完成后對(duì)菌種進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，檢驗(yàn)要求應(yīng)符合附錄A的規(guī)定。4完成培養(yǎng)后，菌種應(yīng)在4℃冷庫(kù)內(nèi)儲(chǔ)藏，時(shí)間不應(yīng)超過30d。各級(jí)菌種按NY/T528的規(guī)定建立生產(chǎn)記錄并留樣，檔案保留2年以上。5(規(guī)范性)固體菌種質(zhì)量要求固體菌種質(zhì)量要求見表A.1。表A.1固體菌種質(zhì)