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DB13河北省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I本文件按照GB/T1.1－2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構與起本文件主要起草人：劉建釵、柳煥章、劉會恰1禽煙曲霉菌病綜合診斷技術規(guī)程本文件規(guī)定了禽煙曲霉病綜合診斷技術的臨床診斷、實驗室診斷和綜合本文件適用于雞、鴨、鵝、鴿子、鵪鶉等禽類煙曲霉下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改各日齡禽均可感染，雛禽易感。病禽眼神呆滯、瞇眼、呼吸困4.2剖檢病變肺臟發(fā)生不同程度壞死、氣囊增厚、出現(xiàn)黃色菌斑并包括常規(guī)檢測和定量PCR檢測技術。參照GB19489-22取病禽肺、肝臟、腎等病料，放入無菌的平皿中；其他器官用無菌剪刀各取小塊組菌水充分沖洗后，一份接種于YEPD平板上（1%酵母膏，2%蛋白胨，2%葡萄糖，2%瓊脂粉），一份5.1.2病原菌的分離純化與形態(tài)觀察取疑似菌落菌體進一步接種于PDA試管斜面，28℃培養(yǎng)3d后保存?zhèn)溆谩＿x擇有典型癥狀的病禽，無菌采血或病變組織（肺），放入1.5mL滅菌EP管中，將EP管編號，記），解在50μLTE（10mMTris，1上游引物F：5?-TAATAGCTACAA3下游引物R：5?-ACGAGGAACATAT5.2.5標準曲線和熔解曲線性克隆為模板在同樣條件下進行SYBRGr5.2.6結果判斷樣品中含有煙曲霉菌，而且可通過Ct值大小判斷感染的程度（參見附錄A）。未出現(xiàn)“S”型擴增4A.1鏡檢28℃恒溫培養(yǎng)36h～48h；將疑似單菌落取菌體經革蘭氏染色和棉藍染色鏡檢，將霉菌樣細胞的相應菌落取菌體分別接種于沙保弱培養(yǎng)基平板，于28℃恒溫、保濕培養(yǎng)3d～4d，觀察平板菌落特征并直A.2判斷沙保弱培養(yǎng)基平板上可見中央為藍綠色，周圍為白色的菌落，但藍綠色占比多于周圍白菌落背面，周邊為黃綠色，中央為藍綠色。第四天菌落正面分為三種顏色，由內向外分別為墨A.3不同染色方法檢查HE染色：血管充血，呼吸毛細管消失，肺房間隔增寬甚至消失，被結締組織所取代，并有炎性細織結構不清楚，菌絲染成紫色，孢子染成紅色，而背景為藍紫色，真菌與周圍組織反差明顯反差明顯易辨認。菌絲分布與PAS染色相同；CFW染色，

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