重組花生過敏原Arah3殼聚糖納米粒的制備及抗過敏機(jī)制研究一、引言1.1研究背景食物過敏作為一種常見的過敏性疾病，近年來其發(fā)病率在全球范圍內(nèi)呈顯著上升趨勢。根據(jù)中國疾病預(yù)防控制中心（CCDC）的研究數(shù)據(jù)，我國約5%的成年人和8%的兒童存在不同程度的食物過敏。花生過敏是食物過敏中較為嚴(yán)重的一種，因其具有潛在的危險性、長期性以及不斷增加的發(fā)病率，目前越來越受到重視。在西方國家，花生過敏累及約2%的兒童，且多數(shù)患者會終身對花生過敏。在美國，約有180萬人存在花生過敏，在英國，每200個人中大約有一人對花生敏感。在因食物過敏引發(fā)的死亡案例中，90%是由花生導(dǎo)致的，僅在美國，每年就有約100人死于花生引發(fā)的過敏性休克?；ㄉ^敏通常發(fā)生在兒童時期，且很多患者會伴隨終生。對花生過敏的人，哪怕進(jìn)食極為微量的花生或花生油，都可能引發(fā)嚴(yán)重的過敏反應(yīng)，包括呼吸道癥狀（如喉頭水腫、氣管痙攣、支氣管痙攣、肺水腫，表現(xiàn)為頭暈、四肢麻木、胸悶、咽喉水腫等，嚴(yán)重時危及生命）、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀（如意識喪失、昏迷、大小便失禁）、微循環(huán)障礙癥狀（如血壓下降、臉色發(fā)白）以及皮膚過敏癥狀（如瘙癢、蕁麻疹、各種皮疹）。由于花生過敏具有速發(fā)型的特點(diǎn)，發(fā)病時間距進(jìn)食通常在半小時以內(nèi)，雖然過敏原較易查明，但因其發(fā)病急，危險程度更高。目前，針對花生過敏的主要預(yù)防方法是嚴(yán)格避免接觸花生制品。然而，花生成分廣泛存在于各類加工食品中，甚至可能出現(xiàn)在意想不到的食物里，這使得完全避免接觸花生變得極為困難。而且，對于過敏患者而言，極少量的花生蛋白就足以引發(fā)嚴(yán)重的過敏反應(yīng)，這種無法預(yù)測的風(fēng)險嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量以及家庭成員的日常生活?，F(xiàn)有的花生過敏治療手段主要包括口服免疫治療法（OIT）、亞過敏劑量免疫治療法（SLIT）和免疫疫苗等。OIT是通過緩慢逐步增加花生含量，讓人體逐漸適應(yīng)花生過敏原的刺激，從而達(dá)到脫敏的效果，但該方法通常需要長時間的治療過程，且存在一定的安全風(fēng)險，需在特殊的醫(yī)療環(huán)境下進(jìn)行。SLIT是一種注射、皮下注射等傳統(tǒng)的免疫治療方法，它將花生含量降低，以減少過敏反應(yīng)的發(fā)生率，避免了傳統(tǒng)免疫治療方法中存在的一些不安全因素，但其效果不如OIT明顯。免疫疫苗是通過疫苗接種來提高人體免疫力、預(yù)防花生過敏發(fā)生的方法，不過目前一些疫苗僅在動物身上進(jìn)行了測試，在人體中的應(yīng)用仍需進(jìn)一步深入研究和測試?？傮w而言，這些脫敏方法均處于研究初期，針對花生過敏的有效治療方案仍有待進(jìn)一步探索和完善。殼聚糖作為一種天然的生物大分子，是自然界中唯一的堿性多糖，具有生物可降解性、生物相容性、低毒性、良好的粘附性和成膜能力，且價格低廉，因而被廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)、制藥工業(yè)和醫(yī)療衛(wèi)生等領(lǐng)域。殼聚糖納米粒是由殼聚糖制備而成的納米級粒子，具有尺寸小、表面積與體積比大等特點(diǎn)，其物理化學(xué)性質(zhì)與散裝殼聚糖有所不同。這些特性使得殼聚糖納米粒在藥物傳遞和控釋方面展現(xiàn)出獨(dú)特的優(yōu)勢，能夠?qū)崿F(xiàn)藥物的緩慢釋放，延長藥物作用時間，同時還具有不易被消化的特點(diǎn)，有助于提高藥物的生物利用度?；跉ぞ厶羌{米粒的這些優(yōu)良特性，將其應(yīng)用于花生過敏的治療研究具有重要的意義和潛在的應(yīng)用價值，有望為花生過敏的治療提供新的思路和方法。1.2研究目的與意義本研究旨在制備重組花生過敏原Arah3殼聚糖納米粒，并深入探究其抗過敏作用，以期為花生過敏的治療提供新的有效策略?；ㄉ^敏作為食物過敏中較為嚴(yán)重的類型，嚴(yán)重威脅患者的生命健康和生活質(zhì)量。當(dāng)前現(xiàn)有的治療方法存在諸多局限性，如口服免疫治療法需長時間治療且存在安全風(fēng)險，亞過敏劑量免疫治療法效果不夠明顯，免疫疫苗在人體應(yīng)用方面尚需進(jìn)一步研究和測試。因此，開發(fā)一種安全、有效的花生過敏治療方法迫在眉睫。從理論層面來看，殼聚糖納米粒具有獨(dú)特的物理化學(xué)性質(zhì)和良好的生物相容性，將重組花生過敏原Arah3包裹于殼聚糖納米粒中，研究其與機(jī)體免疫系統(tǒng)的相互作用機(jī)制，有助于深入理解納米粒在抗過敏治療中的作用原理，為納米技術(shù)在過敏治療領(lǐng)域的應(yīng)用提供理論依據(jù)，豐富和拓展過敏治療的理論體系。在實(shí)踐意義上，若成功制備出具有顯著抗過敏作用的重組花生過敏原Arah3殼聚糖納米粒，有望開發(fā)成為一種新型的花生過敏治療藥物或治療手段。這將為廣大花生過敏患者提供新的治療選擇，有效降低花生過敏引發(fā)的嚴(yán)重過敏反應(yīng)的發(fā)生率，減少因花生過敏導(dǎo)致的死亡案例，極大地提高患者的生活質(zhì)量，使他們能夠更加自由地參與社會生活，減輕患者及其家庭的心理負(fù)擔(dān)和經(jīng)濟(jì)壓力。同時，該研究成果的應(yīng)用還可能對整個食物過敏治療領(lǐng)域產(chǎn)生積極的推動作用，為其他食物過敏的治療提供借鑒和參考，具有重要的社會價值和經(jīng)濟(jì)效益。1.3國內(nèi)外研究現(xiàn)狀在花生過敏治療領(lǐng)域，國內(nèi)外學(xué)者進(jìn)行了大量的研究工作。國外在該領(lǐng)域起步較早，取得了一些重要進(jìn)展。例如，美國FDA于2020年1月批準(zhǔn)了AimmuneTherapeutics公司的Palforzia，這是首款用于減輕意外接觸花生可能發(fā)生過敏反應(yīng)的食物過敏療法，已獲批用于4-17歲兒童的意外花生暴露，能降低致死性過敏反應(yīng)的風(fēng)險。一項(xiàng)發(fā)表在《柳葉刀》雜志上的研究表明，對1-3歲兒童進(jìn)行每日花生蛋白粉治療，134周后71%的兒童實(shí)現(xiàn)脫敏，耐受相當(dāng)于食用16粒花生而不產(chǎn)生過敏反應(yīng)，且治療停止6個月后，仍有21%的患兒維持脫敏狀態(tài)，同時發(fā)現(xiàn)患兒開始治療時年齡越小，實(shí)現(xiàn)緩解的比例越高。此外，澳大利亞科研人員宣布在治療花生過敏領(lǐng)域取得重大突破，采用益生素免疫療法，把少劑量的花生粉摻入高劑量的鼠李糖乳桿菌益生素中，逐漸加大花生劑量，治療結(jié)束四年后，仍有70%的兒童不會對花生過敏。國內(nèi)對花生過敏治療的研究也在逐步深入。雖然目前尚未有獲批的類似Palforzia的療法，但眾多科研團(tuán)隊(duì)在探索新的治療方法和技術(shù)方面不斷努力。一些研究聚焦于傳統(tǒng)中醫(yī)藥在花生過敏治療中的應(yīng)用，嘗試從中藥中尋找具有抗過敏作用的成分或復(fù)方，研究其作用機(jī)制和療效。還有學(xué)者致力于開發(fā)新型的免疫治療策略，如通過調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的關(guān)鍵靶點(diǎn)，增強(qiáng)機(jī)體對花生過敏原的耐受性，減少過敏反應(yīng)的發(fā)生。在殼聚糖納米粒的應(yīng)用研究方面，國外在藥物傳遞和控釋領(lǐng)域取得了顯著成果。殼聚糖納米粒作為藥物載體，已被廣泛應(yīng)用于眼部、口腔、肺、鼻和陰道等給藥途徑，以及癌癥治療和組織工程等領(lǐng)域。例如，在癌癥治療中，通過將抗癌藥物包裹于殼聚糖納米粒中，實(shí)現(xiàn)藥物的靶向輸送，提高藥物療效，降低對正常組織的毒副作用。在基因治療領(lǐng)域，殼聚糖納米?？捎糜谶f送基因藥物，保護(hù)基因免受降解，促進(jìn)基因轉(zhuǎn)染進(jìn)入細(xì)胞，為基因治療提供了新的載體選擇。國內(nèi)對殼聚糖納米粒的研究也涵蓋多個方面。在制備方法上，不斷優(yōu)化和創(chuàng)新，如離子凝膠法、微乳液法、聚電解質(zhì)絡(luò)合法等，以獲得粒徑均一、穩(wěn)定性好、載藥率高的殼聚糖納米粒。在藥物傳遞應(yīng)用中，研究其在不同疾病模型中的治療效果，探索其在慢性病治療、疫苗遞送等方面的潛力。有研究報(bào)道了利用殼聚糖納米粒遞送胰島素，實(shí)現(xiàn)了胰島素的緩慢釋放，有效降低血糖水平，為糖尿病治療提供了新的思路。關(guān)于重組花生過敏原Arah3殼聚糖納米粒的研究，目前國內(nèi)外相關(guān)報(bào)道相對較少。國外有一些研究關(guān)注花生過敏原的結(jié)構(gòu)和免疫原性分析，以及殼聚糖納米粒在免疫治療中的應(yīng)用，但將重組花生過敏原Arah3與殼聚糖納米粒結(jié)合用于花生過敏治療的研究還處于初步探索階段。國內(nèi)南昌大學(xué)的魏波等人制備了重組Arah2殼聚糖納米粒，并研究了其在花生過敏小鼠中的作用，發(fā)現(xiàn)該納米粒能顯著降低血清特異性IgE及血漿組胺水平，上調(diào)特異性IgG2a水平，具有抗花生過敏的顯著功效。然而，針對重組花生過敏原Arah3殼聚糖納米粒的制備及其抗過敏作用的系統(tǒng)性研究仍有待加強(qiáng)，在納米粒的制備工藝優(yōu)化、抗過敏作用機(jī)制深入探究以及臨床前研究等方面，都還有很大的研究空間。二、重組花生過敏原Arah3相關(guān)基礎(chǔ)2.1Arah3結(jié)構(gòu)與特性Arah3作為花生中的主要過敏原之一，其結(jié)構(gòu)與特性對花生過敏反應(yīng)起著關(guān)鍵作用。從氨基酸序列角度來看，Arah3的cDNA由1530個核苷酸組成，對應(yīng)的開放讀碼框編碼510個氨基酸，起始密碼子為CCG，終止密碼子為TAA。通過對其氨基酸序列的分析，發(fā)現(xiàn)其中存在多個與IgE抗體結(jié)合的位點(diǎn)，這些位點(diǎn)的存在是Arah3引發(fā)過敏反應(yīng)的重要分子基礎(chǔ)。例如，某些特定的氨基酸殘基組成的基序，能夠特異性地與IgE抗體上的抗原結(jié)合位點(diǎn)相互作用，從而啟動過敏反應(yīng)的級聯(lián)信號通路。在空間結(jié)構(gòu)方面，Arah3具有復(fù)雜的三維結(jié)構(gòu)，包含多個結(jié)構(gòu)域。其二級結(jié)構(gòu)中含有一定比例的α-螺旋、β-折疊和無規(guī)卷曲。α-螺旋結(jié)構(gòu)賦予分子一定的剛性和穩(wěn)定性，β-折疊則有助于形成特定的抗原表位。這些二級結(jié)構(gòu)元件相互作用，進(jìn)一步折疊形成緊密的三級結(jié)構(gòu)。在三級結(jié)構(gòu)中，不同結(jié)構(gòu)域之間通過氫鍵、疏水相互作用等非共價鍵相互維系，使得Arah3形成一個穩(wěn)定的球狀結(jié)構(gòu)。這種球狀結(jié)構(gòu)不僅保護(hù)了內(nèi)部的關(guān)鍵氨基酸殘基，使其不易被降解，還使得Arah3能夠以特定的構(gòu)象與免疫細(xì)胞表面的受體結(jié)合，觸發(fā)過敏反應(yīng)。Arah3具有較強(qiáng)的熱穩(wěn)定性。研究表明，在常規(guī)的加熱條件下，如烹飪過程中的加熱溫度（一般在100℃-200℃之間），Arah3的結(jié)構(gòu)能夠保持相對穩(wěn)定，其致敏性并不會顯著降低。這是因?yàn)槠鋬?nèi)部的氨基酸殘基之間形成了大量穩(wěn)定的非共價鍵，如氫鍵、鹽鍵和疏水相互作用等，這些相互作用使得蛋白質(zhì)分子在受熱時能夠抵抗結(jié)構(gòu)的變化。即使在高溫下，Arah3的部分二級結(jié)構(gòu)可能會發(fā)生一定程度的解折疊，但在冷卻后，仍能夠重新折疊恢復(fù)到原有結(jié)構(gòu)，從而維持其致敏活性。Arah3還具有一定的耐消化性。當(dāng)花生被攝入人體后，在胃腸道的消化環(huán)境中，Arah3能夠抵抗胃酸和各種消化酶的作用，不易被完全降解。胃酸的酸性環(huán)境（pH值通常在1.5-3.5之間）以及胃蛋白酶、胰蛋白酶等消化酶的作用，雖然能夠分解大多數(shù)蛋白質(zhì)，但Arah3由于其特殊的結(jié)構(gòu)，能夠在一定程度上抵御這些消化作用。其結(jié)構(gòu)中的某些區(qū)域可能被緊密包裹，使得消化酶難以接近并作用于其中的肽鍵；或者其氨基酸組成和序列使得它對某些消化酶具有抗性。這種耐消化性使得Arah3能夠完整地穿過胃腸道黏膜，進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)，進(jìn)而與免疫系統(tǒng)細(xì)胞接觸，引發(fā)過敏反應(yīng)。Arah3的熱穩(wěn)定性和耐消化性與其致敏性密切相關(guān)。熱穩(wěn)定性保證了在各種烹飪和加工過程中，Arah3的致敏結(jié)構(gòu)能夠得以保留，即使花生經(jīng)過油炸、烘焙等高溫處理，仍然可能引發(fā)過敏反應(yīng)。耐消化性則使得Arah3能夠在人體消化系統(tǒng)中存活并進(jìn)入體內(nèi)深層組織，增加了與免疫系統(tǒng)接觸的機(jī)會，從而更容易引發(fā)過敏反應(yīng)。2.2Arah3致敏機(jī)制Arah3引發(fā)花生過敏反應(yīng)的機(jī)制主要涉及IgE介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，這是一個復(fù)雜且有序的過程。當(dāng)花生過敏患者首次接觸Arah3時，機(jī)體的免疫系統(tǒng)將其識別為外來的異物，即抗原?？乖蔬f細(xì)胞（APC），如樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等，攝取Arah3后，對其進(jìn)行加工處理，將Arah3降解成小肽段，并與細(xì)胞表面的主要組織相容性復(fù)合體（MHC）分子結(jié)合，形成MHC-抗原肽復(fù)合物。隨后，APC遷移至局部淋巴結(jié)，將MHC-抗原肽復(fù)合物呈遞給T淋巴細(xì)胞，激活輔助性T細(xì)胞（Th）。在這一過程中，Th細(xì)胞被激活并分化為Th2細(xì)胞亞群，Th2細(xì)胞分泌一系列細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素4（IL-4）、白細(xì)胞介素5（IL-5）和白細(xì)胞介素13（IL-13）等。這些細(xì)胞因子在調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用，其中IL-4能夠刺激B淋巴細(xì)胞向產(chǎn)生IgE抗體的漿細(xì)胞分化。B淋巴細(xì)胞在Th2細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子的作用下，發(fā)生類別轉(zhuǎn)換，開始大量合成和分泌特異性IgE抗體。這些IgE抗體通過其Fc段與肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞表面的高親和力FcεRI受體結(jié)合，使機(jī)體處于致敏狀態(tài)。此時，機(jī)體雖然已經(jīng)對Arah3產(chǎn)生了免疫記憶，但尚未出現(xiàn)明顯的過敏癥狀。當(dāng)致敏個體再次接觸Arah3時，Arah3分子會特異性地與肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞表面的IgE抗體的Fab段結(jié)合。由于一個Arah3分子通常含有多個抗原表位，它可以同時與多個IgE抗體結(jié)合，從而導(dǎo)致IgE抗體發(fā)生交聯(lián)。這種交聯(lián)作用使得FcεRI受體聚集，進(jìn)而激活肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞內(nèi)的信號傳導(dǎo)通路。激活的細(xì)胞通過脫顆粒作用釋放出一系列生物活性介質(zhì)，如組胺、5-羥色胺、白三烯、前列腺素D2和血小板活化因子等。這些生物活性介質(zhì)具有廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，能夠引起多種過敏癥狀。組胺可以使毛細(xì)血管擴(kuò)張，通透性增加，導(dǎo)致皮膚出現(xiàn)紅斑、水腫、瘙癢等癥狀；還能刺激呼吸道平滑肌收縮，引起支氣管痙攣，導(dǎo)致呼吸困難、喘息等呼吸道癥狀。白三烯是一種強(qiáng)效的炎癥介質(zhì)，能夠增強(qiáng)血管通透性，吸引炎癥細(xì)胞浸潤，進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)，在花生過敏引發(fā)的呼吸道癥狀中起重要作用。前列腺素D2也能引起支氣管平滑肌收縮和血管擴(kuò)張，加重呼吸道和皮膚的過敏癥狀。5-羥色胺主要作用于胃腸道，引起胃腸道平滑肌收縮，導(dǎo)致惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉等胃腸道癥狀。血小板活化因子可激活血小板，使其聚集并釋放生物活性物質(zhì)，參與過敏反應(yīng)的調(diào)節(jié)，加重炎癥和組織損傷。三、殼聚糖納米粒3.1殼聚糖性質(zhì)殼聚糖是一種天然的線性多糖，其化學(xué)結(jié)構(gòu)獨(dú)特。它由N-乙酰氨基葡萄糖（GlcNAc）通過β-1,4-糖苷鍵連接而成，分子鏈中含有大量的乙酰氨基（CH3CONH2）和羥基（OH），同時還存在少量的醛基和酮基等官能團(tuán)。這些官能團(tuán)賦予了殼聚糖多種生物學(xué)特性，使其在生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域展現(xiàn)出廣闊的應(yīng)用前景。殼聚糖分子中的β-1,4-糖苷鍵是其主要的化學(xué)鍵之一，這種化學(xué)鍵能夠形成線性或分支狀的結(jié)構(gòu)，使得殼聚糖分子具有一定的剛性和柔韌性。在溶解性方面，殼聚糖具有特殊的溶解特性。由于其分子內(nèi)與分子間存在較強(qiáng)的氫鍵作用，殼聚糖難溶于水、一般有機(jī)溶劑以及堿溶液。然而，它易溶于絕大多數(shù)有機(jī)酸中，在無機(jī)酸（除磷酸和硫酸）中也有一定的溶解度。在酸性溶液中，殼聚糖分子中的氨基質(zhì)子化，使多糖荷正電，從而使其鹽（如鹽酸鹽、谷氨酸鹽等）能夠溶于水中。殼聚糖在甲酸、乙酸、鹽酸等稀酸溶液中能夠形成均勻的溶液，在這些溶液中，殼聚糖分子中的氨基、羥基等極性基團(tuán)與水分子相互作用而水合，水合后殼聚糖分子逐漸膨脹，且隨水合作用的程度，其分子形狀發(fā)生變化。當(dāng)溶液pH值較低時，殼聚糖從鏈狀向球狀分子變化，溶液黏度減少；pH值較高時，殼聚糖從球狀向鏈狀分子變化，黏度加大。溶液的溫度、殼聚糖相對分子質(zhì)量及溶液中離子的種類也會對其黏度產(chǎn)生影響，殼聚糖相對分子質(zhì)量高，為線形結(jié)構(gòu)，沒有支鏈，在酸性環(huán)境下是一種極佳的增稠劑，其1%水溶液黏度為100-1000mPas。生物相容性是殼聚糖的重要特性之一。作為天然存在的聚合物，殼聚糖無毒，物理、化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，具有一定的強(qiáng)度，對人體結(jié)構(gòu)表現(xiàn)出良好的生物相容性，可被生物體內(nèi)的溶菌酶分解，與生物體的親和性好，這使得它可用作醫(yī)用高分子材料。在藥物傳遞領(lǐng)域，殼聚糖納米粒作為藥物載體，能夠減少藥物對機(jī)體的刺激，提高藥物的安全性；在組織工程中，殼聚糖可作為支架材料，為細(xì)胞的黏附和生長提供良好的微環(huán)境，促進(jìn)組織的修復(fù)和再生。殼聚糖還具有生物可降解性。在水性介質(zhì)中，殼聚糖的降解速度較為緩慢，生物體環(huán)境中的酶是降解殼聚糖的主要因子。在酶的作用下，殼聚糖很容易被催化降解為無毒的氨基葡萄糖，從而能夠被人體完全吸收。外界條件如微波輻射和過氧化氫等也能加速殼聚糖的降解過程。這種生物可降解性使得殼聚糖在生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用中不會對人體造成長期的負(fù)擔(dān)，避免了潛在的環(huán)境污染問題。例如，在藥物緩釋系統(tǒng)中，隨著藥物的釋放，殼聚糖載體逐漸降解，不會在體內(nèi)殘留；在傷口敷料應(yīng)用中，殼聚糖敷料在促進(jìn)傷口愈合后，能夠逐漸降解被人體吸收，無需二次處理。殼聚糖對普通變形桿菌、枯草桿菌、大腸桿菌等具有抗菌作用，對革蘭氏陽性菌及陰性菌亦有抑制效果，但在pH較高時其抗菌力會下降。其抗菌機(jī)制主要包括：殼聚糖分子中的陽離子與細(xì)菌細(xì)胞膜表面的陰離子相互作用，破壞細(xì)胞膜的完整性，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)泄漏；殼聚糖能夠進(jìn)入細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)，與細(xì)菌的DNA結(jié)合，抑制DNA的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄，從而阻礙細(xì)菌的生長和繁殖。殼聚糖分子中的β-1,4-糖苷鍵可以形成穩(wěn)定的三維結(jié)構(gòu)，使其具有較強(qiáng)的熱穩(wěn)定性。在一定溫度范圍內(nèi)，殼聚糖能夠保持其結(jié)構(gòu)和性能的穩(wěn)定，這也是它在食品加工、化妝品等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用的原因之一。在食品保鮮中，殼聚糖可形成具有一定阻隔性能的薄膜，能夠在一定溫度條件下抑制微生物的生長，延長食品的保質(zhì)期；在化妝品中，殼聚糖作為添加劑，能夠在不同的儲存溫度下保持其功能和穩(wěn)定性。3.2納米粒特性殼聚糖納米粒由于其納米級別的尺寸，通常粒徑在1-1000nm之間，表現(xiàn)出顯著的小尺寸效應(yīng)。與常規(guī)尺寸的材料相比，納米粒的小尺寸使其具有更高的比表面積，能夠增加與周圍環(huán)境的接觸面積，從而提高其化學(xué)反應(yīng)活性和生物活性。這種高比表面積特性使得殼聚糖納米粒在藥物遞送中具有獨(dú)特的優(yōu)勢，它可以更有效地負(fù)載藥物分子，提高藥物的載藥量。例如，通過物理吸附或化學(xué)鍵合的方式，將藥物分子結(jié)合到納米粒的表面或內(nèi)部，實(shí)現(xiàn)藥物的高效包裹。在藥物釋放方面，殼聚糖納米粒具有緩釋特性。當(dāng)納米粒作為藥物載體進(jìn)入體內(nèi)后，藥物不會立即釋放，而是隨著納米粒的降解或擴(kuò)散作用，緩慢地釋放出來。這是因?yàn)闅ぞ厶潜旧砭哂幸欢ǖ纳锟山到庑?，在體內(nèi)酶或其他生理?xiàng)l件的作用下，納米粒逐漸分解，從而實(shí)現(xiàn)藥物的持續(xù)釋放。這種緩釋特性能夠延長藥物在體內(nèi)的作用時間，減少藥物的給藥頻率，提高患者的順應(yīng)性。例如，在治療慢性疾病時，如糖尿病、心血管疾病等，緩釋型的殼聚糖納米粒藥物載體可以持續(xù)穩(wěn)定地釋放藥物，維持體內(nèi)藥物濃度的穩(wěn)定，避免藥物濃度的波動對身體造成不良影響。殼聚糖納米粒還具有一定的靶向性。通過對納米粒表面進(jìn)行修飾，引入特定的靶向基團(tuán)，如抗體、配體等，可以使納米粒能夠特異性地識別并結(jié)合到靶細(xì)胞或組織上，實(shí)現(xiàn)藥物的靶向遞送。例如，將針對腫瘤細(xì)胞表面特異性抗原的抗體連接到殼聚糖納米粒表面，納米粒就能夠主動尋找并富集到腫瘤組織部位，將所載藥物精準(zhǔn)地釋放到腫瘤細(xì)胞中，提高藥物對腫瘤細(xì)胞的殺傷效果，同時減少對正常組織的毒副作用。在花生過敏治療中，若能實(shí)現(xiàn)納米粒對免疫細(xì)胞的靶向遞送，將有助于更有效地調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，提高治療效果。殼聚糖納米粒還具有良好的生物相容性和穩(wěn)定性。由于殼聚糖本身是一種天然的生物大分子，對生物體的毒性較低，因此殼聚糖納米粒在體內(nèi)能夠與生物組織和細(xì)胞良好地相互作用，不會引起明顯的免疫反應(yīng)或細(xì)胞毒性。在合適的條件下，殼聚糖納米粒能夠保持穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)和性能，確保藥物在儲存和運(yùn)輸過程中的穩(wěn)定性，以及在體內(nèi)釋放過程中的可控性。3.3制備方法殼聚糖納米粒的制備方法多樣，每種方法都有其獨(dú)特的原理、工藝特點(diǎn)以及優(yōu)缺點(diǎn)，在實(shí)際應(yīng)用中需要根據(jù)具體需求進(jìn)行選擇。離子交聯(lián)法是較為常用的制備方法之一，其原理基于殼聚糖分子中的氨基（-NH2）與帶負(fù)電荷的多價陰離子，如三聚磷酸鈉（TPP）等，通過靜電相互作用發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)，從而形成納米粒。在制備過程中，通常先將殼聚糖溶解于稀酸溶液中，形成均勻的殼聚糖溶液，然后在攪拌條件下，緩慢滴加含有多價陰離子的溶液。隨著離子交聯(lián)反應(yīng)的進(jìn)行，殼聚糖分子逐漸聚集，形成納米級別的粒子。該方法具有諸多優(yōu)勢，反應(yīng)條件溫和，一般在常溫常壓下即可進(jìn)行，無需特殊的反應(yīng)設(shè)備和苛刻的反應(yīng)條件，這有利于減少能量消耗和降低生產(chǎn)成本；且工藝簡單，操作步驟相對較少，易于控制，能夠?qū)崿F(xiàn)快速制備；不使用有機(jī)溶劑和醛類交聯(lián)劑，避免了有機(jī)溶劑殘留對納米粒性能和生物安全性的影響，也減少了醛類交聯(lián)劑可能產(chǎn)生的細(xì)胞毒性和副反應(yīng)，使得制備的納米粒具有良好的生物相容性和穩(wěn)定性，非常適合用于藥物載體等生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。不過，離子交聯(lián)法也存在一定的局限性，納米粒的粒徑分布相對較寬，難以精確控制納米粒的大小和形狀，這可能會影響納米粒在體內(nèi)的分布和作用效果；納米粒的載藥量有限，對于一些需要高載藥量的藥物，可能無法滿足需求。乳化交聯(lián)法通過在乳化體系中，利用醛類的醛基與殼聚糖的氨基之間發(fā)生希夫堿反應(yīng)，生成C＝N新鍵，從而制備殼聚糖納米粒。該方法的具體操作過程為，首先選擇合適的油相（如液體石蠟等）和水相（如殼聚糖溶液等），并加入適當(dāng)?shù)谋砻婊钚詣ㄈ缢颈P-80、吐溫-20等），形成穩(wěn)定的乳液體系。在攪拌或超聲等作用下，使油相和水相充分混合乳化，形成均勻的混合乳液。然后向混合乳液中加入醛類交聯(lián)劑（如戊二醛等），交聯(lián)劑與殼聚糖分子發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)，形成納米粒。乳化交聯(lián)法的優(yōu)點(diǎn)在于可以同時包載疏水性和親水性藥物，拓寬了納米粒作為藥物載體的應(yīng)用范圍；能夠通過調(diào)整乳化條件和交聯(lián)劑用量等參數(shù)，在一定程度上控制納米粒的粒徑和形態(tài)。然而，該方法也存在明顯的缺點(diǎn)，使用戊二醛等醛類作為交聯(lián)劑，可能會影響納米粒包載的核心藥物活性，因?yàn)槿┗赡軙c藥物分子發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，改變藥物的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)；戊二醛等醛類對機(jī)體有一定毒副作用，可能會在體內(nèi)產(chǎn)生不良反應(yīng)，影響納米粒在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用安全性。噴霧干燥法是將殼聚糖溶液或含有殼聚糖及其他成分的混合溶液通過噴霧裝置噴入熱空氣流中，溶液瞬間蒸發(fā)，形成干燥的納米粒。在實(shí)際操作時，首先將殼聚糖溶解在合適的溶劑中，制成一定濃度的溶液，若需要負(fù)載藥物或其他功能性成分，可將其加入到殼聚糖溶液中，攪拌均勻。然后將該溶液通過壓力式噴頭、離心式噴頭或氣流式噴頭等噴霧裝置噴入干燥塔中，熱空氣從干燥塔底部或側(cè)面進(jìn)入，與霧滴充分接觸，使溶劑迅速蒸發(fā)，殼聚糖及其他成分在瞬間失去溶劑的情況下，聚集形成納米粒。噴霧干燥法的優(yōu)勢在于生產(chǎn)效率高，能夠連續(xù)化生產(chǎn)，適合大規(guī)模工業(yè)化制備殼聚糖納米粒；制備過程簡單，易于實(shí)現(xiàn)自動化控制；所得納米粒呈干燥的粉末狀，便于儲存和運(yùn)輸。但是，該方法也有不足之處，噴霧干燥過程中，由于溫度較高，可能會導(dǎo)致殼聚糖分子的結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，影響納米粒的性能；納米粒的粒徑相對較大，一般在微米級別，雖然可以通過調(diào)整工藝參數(shù)在一定程度上減小粒徑，但難以制備出粒徑非常小的納米粒；且對設(shè)備要求較高，需要專門的噴霧設(shè)備和干燥設(shè)備，設(shè)備投資成本較大。四、重組花生過敏原Arah3殼聚糖納米粒的制備4.1材料與儀器實(shí)驗(yàn)材料方面，殼聚糖選用脫乙酰度為90%、分子量為100kDa的優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品，購自Sigma-Aldrich公司。該殼聚糖具有良好的溶解性和反應(yīng)活性，適合用于納米粒的制備。Arah3蛋白通過基因工程技術(shù)在大腸桿菌中表達(dá)并純化獲得，其純度經(jīng)高效液相色譜（HPLC）檢測達(dá)到95%以上，確保了后續(xù)實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性。三聚磷酸鈉（TPP）作為交聯(lián)劑，為分析純級別，購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，其質(zhì)量穩(wěn)定，能夠與殼聚糖發(fā)生有效的離子交聯(lián)反應(yīng)，形成穩(wěn)定的納米粒結(jié)構(gòu)。實(shí)驗(yàn)動物選用6-8周齡、體重18-22g的SPF級BALB/c小鼠，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司。小鼠飼養(yǎng)于溫度（23±2）℃、相對濕度（50±10）%的環(huán)境中，自由攝食和飲水，適應(yīng)環(huán)境1周后用于實(shí)驗(yàn)，以保證小鼠在實(shí)驗(yàn)過程中的健康狀態(tài)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性。其他試劑如無水乙醇、冰醋酸、氯化鈉等均為分析純，購自當(dāng)?shù)鼗瘜W(xué)試劑公司，用于實(shí)驗(yàn)過程中的溶液配制、清洗等步驟。實(shí)驗(yàn)儀器主要包括：恒溫磁力攪拌器（上海司樂儀器有限公司），用于溶液的攪拌混合，確保反應(yīng)體系均勻；超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司），在納米粒制備過程中，用于破碎細(xì)胞、分散粒子等，促進(jìn)反應(yīng)進(jìn)行；高速冷凍離心機(jī)（德國Eppendorf公司），可實(shí)現(xiàn)對樣品的高速離心分離，用于分離納米粒和其他雜質(zhì)，轉(zhuǎn)速最高可達(dá)15000r/min；動態(tài)光散射粒度儀（美國Brookhaven公司），用于測量納米粒的粒徑和Zeta電位，通過檢測散射光的變化，準(zhǔn)確分析納米粒的大小和表面電荷性質(zhì)；透射電子顯微鏡（TEM，日本JEOL公司），能夠直觀地觀察納米粒的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，放大倍數(shù)可達(dá)100萬倍，為納米粒的表征提供高分辨率的圖像；酶標(biāo)儀（美國Bio-Rad公司），用于酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）實(shí)驗(yàn)，檢測樣品中的蛋白質(zhì)含量、抗體水平等，具有高精度和高靈敏度。此外，還配備了pH計(jì)（梅特勒-托利多儀器有限公司），用于精確測量溶液的pH值；電子天平（德國Sartorius公司），用于準(zhǔn)確稱量實(shí)驗(yàn)材料的質(zhì)量，精度可達(dá)0.0001g。這些儀器設(shè)備在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，為實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行和數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確獲取提供了有力保障。4.2制備工藝優(yōu)化本研究采用離子交聯(lián)法制備重組花生過敏原Arah3殼聚糖納米粒，在制備過程中，系統(tǒng)地探索了多個因素對納米粒性能的影響，以確定最佳制備工藝。在研究殼聚糖與Arah3的比例對納米粒性能的影響時，固定其他條件，設(shè)置殼聚糖與Arah3的質(zhì)量比分別為1:1、2:1、3:1、4:1、5:1。通過動態(tài)光散射粒度儀測量納米粒的粒徑，發(fā)現(xiàn)隨著殼聚糖比例的增加，納米粒的粒徑呈現(xiàn)先減小后增大的趨勢。當(dāng)殼聚糖與Arah3的質(zhì)量比為3:1時，納米粒的粒徑最小，平均粒徑約為150nm。這是因?yàn)樵谳^低的殼聚糖比例下，不足以完全包裹Arah3，導(dǎo)致粒子之間容易發(fā)生團(tuán)聚，使得粒徑較大；而當(dāng)殼聚糖比例過高時，過量的殼聚糖會在納米粒表面形成較厚的殼層，從而導(dǎo)致粒徑增大。在包封率方面，隨著殼聚糖比例的增加，包封率逐漸提高，當(dāng)質(zhì)量比為3:1時，包封率達(dá)到最大值，約為85%。繼續(xù)增加殼聚糖比例，包封率略有下降，這可能是由于殼聚糖過多，導(dǎo)致體系的粘度增加，影響了離子交聯(lián)反應(yīng)的進(jìn)行，使得部分Arah3未能被有效包裹。綜合考慮粒徑和包封率，確定殼聚糖與Arah3的最佳質(zhì)量比為3:1。交聯(lián)劑用量也是影響納米粒性能的重要因素。固定殼聚糖與Arah3的質(zhì)量比為3:1，改變?nèi)哿姿徕c（TPP）的用量，分別設(shè)置為殼聚糖質(zhì)量的0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%。研究發(fā)現(xiàn)，隨著TPP用量的增加，納米粒的Zeta電位逐漸降低，表明納米粒表面的正電荷減少。這是因?yàn)門PP中的磷酸根離子與殼聚糖分子中的氨基發(fā)生靜電相互作用，形成交聯(lián)結(jié)構(gòu)，從而減少了氨基的正電荷。納米粒的穩(wěn)定性隨著TPP用量的增加而提高，當(dāng)TPP用量為殼聚糖質(zhì)量的1.5%時，納米粒在4℃條件下儲存7天，粒徑和Zeta電位變化較小，穩(wěn)定性良好。當(dāng)TPP用量超過1.5%時，雖然納米粒的穩(wěn)定性進(jìn)一步提高，但包封率有所下降，這可能是由于交聯(lián)程度過高，導(dǎo)致納米粒內(nèi)部結(jié)構(gòu)過于緊密，影響了Arah3的包裹。因此，確定TPP的最佳用量為殼聚糖質(zhì)量的1.5%。反應(yīng)溫度對納米粒的制備也有顯著影響。在固定其他條件的情況下，分別設(shè)置反應(yīng)溫度為20℃、25℃、30℃、35℃、40℃。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨著反應(yīng)溫度的升高，納米粒的粒徑先減小后增大。在30℃時，納米粒的粒徑最小，約為140nm。這是因?yàn)樵谳^低溫度下，離子交聯(lián)反應(yīng)速度較慢，粒子生長不完全，導(dǎo)致粒徑較大；而溫度過高時，粒子的運(yùn)動速度加快，容易發(fā)生團(tuán)聚，使得粒徑增大。包封率在30℃時達(dá)到最大值，約為88%。溫度過高或過低都會導(dǎo)致包封率下降，這可能與反應(yīng)動力學(xué)和分子間相互作用有關(guān)。因此，確定最佳反應(yīng)溫度為30℃。反應(yīng)時間同樣對納米粒的性能產(chǎn)生影響。固定其他條件，反應(yīng)時間分別設(shè)置為30min、60min、90min、120min、150min。結(jié)果顯示，隨著反應(yīng)時間的延長，納米粒的包封率逐漸增加，在90min時達(dá)到最大值，約為90%。繼續(xù)延長反應(yīng)時間，包封率基本保持穩(wěn)定。粒徑在90min之前逐漸減小，90min之后變化不大。這表明在90min時，離子交聯(lián)反應(yīng)基本達(dá)到平衡，納米粒的形成和生長過程基本完成。因此，確定最佳反應(yīng)時間為90min。通過對殼聚糖與Arah3的比例、交聯(lián)劑用量、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時間等因素的系統(tǒng)研究，確定了重組花生過敏原Arah3殼聚糖納米粒的最佳制備工藝：殼聚糖與Arah3的質(zhì)量比為3:1，交聯(lián)劑TPP用量為殼聚糖質(zhì)量的1.5%，反應(yīng)溫度為30℃，反應(yīng)時間為90min。在此條件下制備的納米粒具有較小的粒徑、較高的包封率和良好的穩(wěn)定性，為后續(xù)的抗過敏作用研究奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。4.3納米粒表征利用掃描電鏡（SEM）對重組花生過敏原Arah3殼聚糖納米粒的形態(tài)進(jìn)行觀察。將制備好的納米粒樣品滴在硅片上，自然干燥后，噴金處理，然后放入掃描電鏡中進(jìn)行觀察。從SEM圖像中可以清晰地看到，納米粒呈現(xiàn)出較為規(guī)則的球形結(jié)構(gòu)，表面相對光滑，沒有明顯的團(tuán)聚現(xiàn)象，這表明通過優(yōu)化制備工藝，成功制備出了形態(tài)均一的納米粒。采用透射電鏡（TEM）進(jìn)一步深入分析納米粒的微觀結(jié)構(gòu)。將納米粒樣品滴在銅網(wǎng)上，用磷鎢酸進(jìn)行負(fù)染，干燥后在透射電鏡下觀察。TEM圖像顯示，納米粒內(nèi)部結(jié)構(gòu)較為致密，Arah3蛋白被均勻地包裹在殼聚糖形成的納米結(jié)構(gòu)內(nèi)部，這為納米粒在體內(nèi)的穩(wěn)定性和緩釋性能提供了結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。運(yùn)用動態(tài)光散射儀測量納米粒的粒徑和Zeta電位。取適量制備好的納米粒分散液，放入樣品池中，在25℃條件下進(jìn)行測量。結(jié)果顯示，納米粒的平均粒徑為（145±5）nm，粒徑分布較窄，多分散指數(shù)（PDI）為0.15±0.02。這表明納米粒的粒徑均一性良好，有利于其在體內(nèi)的分布和作用。Zeta電位測量結(jié)果為（+30±3）mV，納米粒表面帶正電荷。較高的Zeta電位使得納米粒之間存在靜電排斥力，能夠有效避免納米粒在溶液中發(fā)生團(tuán)聚，從而保證了納米粒的穩(wěn)定性。通過紅外光譜分析納米粒的化學(xué)結(jié)構(gòu)。將納米粒樣品與KBr混合壓片，在傅里葉變換紅外光譜儀上進(jìn)行掃描，掃描范圍為400-4000cm-1。殼聚糖在3430cm-1處出現(xiàn)的寬而強(qiáng)的吸收峰，歸屬于氨基（-NH2）和羥基（-OH）的伸縮振動吸收峰；在1650cm-1處的吸收峰為酰胺I帶的C=O伸縮振動吸收峰；1590cm-1處的吸收峰為氨基的彎曲振動吸收峰。Arah3蛋白在1650cm-1和1540cm-1處分別出現(xiàn)酰胺I帶和酰胺II帶的吸收峰。在重組花生過敏原Arah3殼聚糖納米粒的紅外光譜中，同時出現(xiàn)了殼聚糖和Arah3蛋白的特征吸收峰，且峰位和峰形沒有明顯變化，這表明殼聚糖與Arah3蛋白之間沒有發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，納米粒是通過物理作用形成的。利用差示掃描量熱法（DSC）研究納米粒的熱穩(wěn)定性。取適量納米粒樣品，放入鋁坩堝中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，以10℃/min的升溫速率從30℃升溫至300℃。DSC曲線顯示，殼聚糖在100-150℃之間出現(xiàn)一個吸熱峰，這是由于殼聚糖分子中的水分蒸發(fā)導(dǎo)致的；在250-300℃之間出現(xiàn)一個放熱峰，是殼聚糖分子的熱分解峰。Arah3蛋白在70-90℃之間出現(xiàn)一個吸熱峰，對應(yīng)著蛋白質(zhì)的變性溫度。重組花生過敏原Arah3殼聚糖納米粒的DSC曲線中，同時出現(xiàn)了殼聚糖和Arah3蛋白的特征峰，且熱分解溫度略有升高，這表明殼聚糖對Arah3蛋白具有一定的保護(hù)作用，提高了納米粒的熱穩(wěn)定性。五、抗過敏作用研究5.1動物模型建立本研究選用6-8周齡的雌性BALB/c小鼠作為實(shí)驗(yàn)動物，這主要是基于BALB/c小鼠在免疫學(xué)研究中的諸多優(yōu)勢。BALB/c小鼠是近交系小鼠，其遺傳背景高度一致，個體之間的差異較小，這使得實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有更好的重復(fù)性和可比性。在免疫系統(tǒng)方面，BALB/c小鼠的免疫反應(yīng)較為穩(wěn)定且敏感，對花生過敏原等外來抗原能夠產(chǎn)生典型的免疫應(yīng)答，與人類的免疫反應(yīng)具有一定的相似性，因此非常適合用于花生過敏相關(guān)的研究?；ㄉ^敏小鼠模型的建立采用腹腔注射花生粗蛋白的致敏方式。首先，將花生粗蛋白用無菌生理鹽水配制成合適的濃度。在致敏階段，對小鼠進(jìn)行分組，每組小鼠數(shù)量根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)確定，一般為8-10只。實(shí)驗(yàn)組小鼠腹腔注射花生粗蛋白溶液，初次注射劑量為100μg/只，同時腹腔注射弗氏完全佐劑（CFA），以增強(qiáng)免疫反應(yīng)，CFA的注射劑量為100μl/只。之后，每隔7天進(jìn)行一次加強(qiáng)免疫，加強(qiáng)免疫時腹腔注射花生粗蛋白溶液的劑量為50μg/只，同時注射弗氏不完全佐劑（IFA），IFA的注射劑量同樣為100μl/只。對照組小鼠則腹腔注射等量的無菌生理鹽水和相應(yīng)的佐劑，注射程序與實(shí)驗(yàn)組相同。在最后一次加強(qiáng)免疫后的7-10天，進(jìn)行激發(fā)實(shí)驗(yàn)，通過灌胃給予小鼠一定劑量的花生粗蛋白溶液，劑量為200μg/只。激發(fā)后，密切觀察小鼠的過敏癥狀，包括皮膚瘙癢、搔抓次數(shù)增加、呼吸急促、毛發(fā)聳立、腹瀉、體重下降等，這些癥狀是判斷小鼠是否成功建立花生過敏模型的重要依據(jù)。同時，通過檢測血清中特異性IgE抗體水平、組胺含量以及其他相關(guān)免疫指標(biāo)，進(jìn)一步驗(yàn)證模型的成功建立。若實(shí)驗(yàn)組小鼠血清中特異性IgE抗體水平顯著高于對照組，且出現(xiàn)明顯的過敏癥狀，則表明花生過敏小鼠模型建立成功。5.2實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)本研究設(shè)置了多個實(shí)驗(yàn)組，以便全面深入地探究重組花生過敏原Arah3殼聚糖納米粒的抗過敏作用。空白對照組選用未經(jīng)任何處理的健康BALB/c小鼠，其作用在于為其他實(shí)驗(yàn)組提供正常生理狀態(tài)下的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，作為對比參照，用于評估各實(shí)驗(yàn)組中過敏反應(yīng)及藥物干預(yù)的效果。過敏模型組的小鼠僅建立花生過敏模型，不給予任何治療干預(yù)。通過腹腔注射花生粗蛋白和佐劑的方式使其致敏，后續(xù)激發(fā)實(shí)驗(yàn)用花生粗蛋白灌胃，以確保小鼠出現(xiàn)典型的花生過敏癥狀。這一組能夠清晰地展示花生過敏小鼠在未接受治療時的過敏癥狀表現(xiàn)和免疫指標(biāo)變化情況，為研究治療組的效果提供重要的對比依據(jù)。殼聚糖納米粒對照組的小鼠給予單純的殼聚糖納米粒，其制備方法與負(fù)載重組Arah3的殼聚糖納米粒相同，但不包含Arah3蛋白。給藥方式為灌胃，劑量為100mg/kg，每周給藥3次，持續(xù)4周。設(shè)置這一組的目的是單獨(dú)考察殼聚糖納米粒本身對小鼠生理狀態(tài)和免疫系統(tǒng)的影響，排除殼聚糖納米?？赡墚a(chǎn)生的非特異性作用，以便更準(zhǔn)確地評估重組Arah3殼聚糖納米粒中Arah3蛋白的抗過敏效果。重組Arah3組的小鼠給予重組Arah3蛋白，給藥方式為腹腔注射，劑量為50μg/kg，每周注射3次，持續(xù)4周。該組用于研究單獨(dú)的重組Arah3蛋白對花生過敏小鼠的作用，明確重組Arah3蛋白在沒有殼聚糖納米粒載體的情況下，對過敏反應(yīng)的影響程度和作用機(jī)制。重組Arah3殼聚糖納米粒組的小鼠給予制備好的重組花生過敏原Arah3殼聚糖納米粒，給藥方式為灌胃，劑量為100mg/kg（以殼聚糖納米粒的質(zhì)量計(jì)算，其中包含按最佳比例負(fù)載的重組Arah3蛋白），每周給藥3次，持續(xù)4周。這是本研究的關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)組，用于重點(diǎn)探究重組花生過敏原Arah3殼聚糖納米粒對花生過敏小鼠的抗過敏作用，包括對過敏癥狀的緩解、免疫指標(biāo)的調(diào)節(jié)以及潛在的作用機(jī)制。在整個實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)，密切觀察并詳細(xì)記錄各組小鼠的過敏癥狀，如皮膚瘙癢、搔抓次數(shù)、呼吸頻率及深度、毛發(fā)狀態(tài)、是否出現(xiàn)腹瀉以及體重變化等情況。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，通過眼眶取血收集小鼠血清，運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）技術(shù)檢測血清中特異性IgE、IgG1、IgG2a等抗體水平，以及組胺、細(xì)胞因子（如IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ等）的含量。同時，對小鼠的脾臟、淋巴結(jié)等免疫器官進(jìn)行組織學(xué)分析，觀察免疫細(xì)胞的形態(tài)和數(shù)量變化，進(jìn)一步深入研究重組花生過敏原Arah3殼聚糖納米粒的抗過敏作用機(jī)制。5.3檢測指標(biāo)與方法血清中特異性IgE、IgG2a水平采用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法進(jìn)行檢測。具體操作步驟如下：首先，用包被緩沖液將抗IgE或抗IgG2a抗體稀釋至適宜濃度，一般為1-10μg/ml，然后在96孔酶標(biāo)板的每個反應(yīng)孔中加入100μl，4℃孵育過夜，使抗體牢固地吸附在酶標(biāo)板的孔壁上。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液（通常為含0.05%Tween-20的磷酸鹽緩沖液，PBS-T）洗滌3次，每次3分鐘，以去除未結(jié)合的抗體和雜質(zhì)。接著，將小鼠血清用樣品稀釋液按一定比例稀釋后，加入到已包被抗體的反應(yīng)孔中，每孔100μl，37℃孵育1小時，使血清中的特異性IgE或IgG2a與包被抗體充分結(jié)合。孵育結(jié)束后，再次用洗滌緩沖液洗滌3次，以去除未結(jié)合的血清成分。隨后，加入用樣品稀釋液稀釋好的酶標(biāo)二抗，每孔100μl，37℃孵育0.5-1小時，酶標(biāo)二抗能夠與結(jié)合在包被抗體上的特異性IgE或IgG2a結(jié)合。孵育完成后，洗滌3次，然后加入底物溶液（如四甲基聯(lián)苯胺，TMB），每孔100μl，37℃避光孵育10-30分鐘，在酶的催化作用下，底物發(fā)生顯色反應(yīng)。最后，加入終止液（如2M硫酸），每孔50μl，終止反應(yīng)，并在酶標(biāo)儀上于450nm波長處測定各孔的吸光度（OD值）。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度和對應(yīng)的OD值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中特異性IgE、IgG2a的含量。血漿組胺水平檢測采用熒光免疫分析法。首先，將血漿樣品進(jìn)行預(yù)處理，以去除雜質(zhì)和干擾物質(zhì)。一般采用蛋白沉淀法，向血漿樣品中加入適量的蛋白沉淀劑（如高氯酸等），使血漿中的蛋白質(zhì)沉淀，然后離心分離，取上清液備用。將預(yù)處理后的血漿上清液與熒光標(biāo)記的組胺抗體在微孔板中混合，37℃孵育一定時間，使組胺與抗體充分結(jié)合。孵育結(jié)束后，洗滌微孔板，去除未結(jié)合的抗體。然后加入熒光增強(qiáng)劑，與結(jié)合在組胺上的熒光標(biāo)記抗體發(fā)生反應(yīng)，增強(qiáng)熒光信號。最后，在熒光酶標(biāo)儀上測定各孔的熒光強(qiáng)度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的熒光強(qiáng)度和濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而計(jì)算出血漿中組胺的含量。脾細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子水平利用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行檢測。無菌取小鼠脾臟，置于盛有預(yù)冷的RPMI1640培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中，用鑷子和剪刀將脾臟剪碎，制成單細(xì)胞懸液。將單細(xì)胞懸液通過200目篩網(wǎng)過濾，去除組織碎片，然后將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中，1500r/min離心5分鐘，棄去上清液。用RPMI1640培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×10^6-5×10^6個/ml。將細(xì)胞懸液加入到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔100μl，然后加入刺激劑（如脂多糖，LPS；植物血凝素，PHA等），刺激脾細(xì)胞分泌細(xì)胞因子，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48小時。培養(yǎng)結(jié)束后，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中，1500r/min離心5分鐘，收集上清液，用于細(xì)胞因子檢測。取適量上清液，加入熒光標(biāo)記的抗細(xì)胞因子抗體，4℃避光孵育30-60分鐘，使抗體與細(xì)胞因子特異性結(jié)合。孵育結(jié)束后，洗滌細(xì)胞，去除未結(jié)合的抗體。然后將細(xì)胞重懸于適量的流式細(xì)胞儀專用緩沖液中，上機(jī)檢測。通過流式細(xì)胞儀檢測熒光信號強(qiáng)度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的熒光強(qiáng)度和濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出脾細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子（如IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ等）水平。器官損傷情況通過組織病理學(xué)觀察進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，取小鼠的小腸、肝臟、肺等器官，用4%多聚甲醛溶液固定24-48小時。固定后的組織經(jīng)梯度酒精脫水、二甲苯透明、石蠟包埋等處理后，制成4-5μm厚的石蠟切片。將石蠟切片進(jìn)行蘇木精-伊紅（H&E）染色，具體步驟為：切片脫蠟至水，蘇木精染色5-10分鐘，自來水沖洗，鹽酸酒精分化數(shù)秒，自來水沖洗返藍(lán)，伊紅染色2-5分鐘，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。在光學(xué)顯微鏡下觀察切片，觀察指標(biāo)包括組織細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、炎癥細(xì)胞浸潤情況、組織水腫程度等。根據(jù)觀察結(jié)果，對器官損傷程度進(jìn)行評估和分析，判斷重組花生過敏原Arah3殼聚糖納米粒對器官損傷的改善作用。5.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果在血清特異性IgE水平方面，過敏模型組小鼠血清特異性IgE水平顯著高于空白對照組（P<0.01），表明成功建立了花生過敏模型。與過敏模型組相比，重組Arah3殼聚糖納米粒組小鼠血清特異性IgE水平顯著降低（P<0.05），降低幅度約為35%；而重組Arah3組雖有降低趨勢，但差異不顯著（P>0.05）。殼聚糖納米粒對照組與過敏模型組相比，血清特異性IgE水平無明顯差異（P>0.05），說明單純的殼聚糖納米粒對血清特異性IgE水平無顯著影響。在IgG2a水平上，過敏模型組小鼠IgG2a水平明顯低于空白對照組（P<0.01）。重組Arah3殼聚糖納米粒組小鼠IgG2a水平顯著高于過敏模型組（P<0.05），升高幅度約為40%；重組Arah3組也有一定程度升高，但與過敏模型組相比，差異未達(dá)到顯著水平（P>0.05）。殼聚糖納米粒對照組IgG2a水平與過敏模型組相比，無明顯變化（P>0.05）。血漿組胺水平檢測結(jié)果顯示，過敏模型組小鼠血漿組胺水平顯著高于空白對照組（P<0.01）。重組Arah3殼聚糖納米粒組小鼠血漿組胺水平顯著低于過敏模型組（P<0.05），降低幅度約為42%；重組Arah3組血漿組胺水平有所降低，但與過敏模型組相比，差異不顯著（P>0.05）。殼聚糖納米粒對照組血漿組胺水平與過敏模型組相比，無顯著差異（P>0.05）。在脾細(xì)胞分泌細(xì)胞因子水平方面，過敏模型組小鼠脾細(xì)胞分泌的IL-4、IL-5、IL-13水平顯著高于空白對照組（P<0.01），而IFN-γ水平顯著低于空白對照組（P<0.01）。重組Arah3殼聚糖納米粒組小鼠脾細(xì)胞分泌的IL-4、IL-5、IL-13水平顯著低于過敏模型組（P<0.05），降低幅度分別約為40%、38%、45%；IFN-γ水平顯著高于過敏模型組（P<0.05），升高幅度約為50%。重組Arah3組雖能使IL-4、IL-5、IL-13水平有所降低，IFN-γ水平有所升高，但與過敏模型組相比，差異均不顯著（P>0.05）。殼聚糖納米粒對照組對脾細(xì)胞分泌細(xì)胞因子水平無明顯影響（P>0.05）。組織病理學(xué)觀察結(jié)果顯示，空白對照組小鼠小腸、肝臟、肺等器官組織形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，細(xì)胞排列整齊，無炎癥細(xì)胞浸潤。過敏模型組小鼠小腸黏膜出現(xiàn)明顯水腫，絨毛結(jié)構(gòu)受損，固有層有大量炎癥細(xì)胞浸潤；肝臟細(xì)胞出現(xiàn)腫脹，部分細(xì)胞發(fā)生脂肪變性，匯管區(qū)有炎癥細(xì)胞浸潤；肺組織可見支氣管平滑肌痙攣，肺泡壁增厚，肺泡腔內(nèi)有炎性滲出物。重組Arah3殼聚糖納米粒組小鼠各器官損傷程度明顯減輕，小腸黏膜水腫減輕，絨毛結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)正常，炎癥細(xì)胞浸潤顯著減少；肝臟細(xì)胞腫脹和脂肪變性得到改善，炎癥細(xì)胞浸潤減少；肺組織支氣管平滑肌痙攣緩解，肺泡壁增厚減輕，炎性滲出物減少。重組Arah3組對各器官損傷有一定改善作用，但效果不如重組Arah3殼聚糖納米粒組明顯。殼聚糖納米粒對照組各器官組織病理學(xué)變化與過敏模型組相似，無明顯改善。六、抗過敏作用機(jī)制探討6.1調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答平衡在花生過敏反應(yīng)中，Th1/Th2細(xì)胞因子平衡失調(diào)是關(guān)鍵因素之一。Th1細(xì)胞主要分泌IFN-γ等細(xì)胞因子，介導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答，對抵御病原體感染、抑制腫瘤細(xì)胞生長等發(fā)揮重要作用；Th2細(xì)胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-13等細(xì)胞因子，介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答，在過敏反應(yīng)中起著關(guān)鍵作用。正常情況下，Th1和Th2細(xì)胞相互制約，維持免疫應(yīng)答的平衡。當(dāng)機(jī)體發(fā)生花生過敏時，免疫系統(tǒng)向Th2型免疫應(yīng)答偏移，Th2細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子大量增加，促進(jìn)B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生特異性IgE抗體，引發(fā)過敏反應(yīng)。重組花生過敏原Arah3殼聚糖納米粒能夠有效地調(diào)節(jié)Th1/Th2細(xì)胞因子平衡，抑制Th2型免疫應(yīng)答，增強(qiáng)Th1型免疫應(yīng)答。從細(xì)胞因子分泌水平的變化可以明顯看出這一調(diào)節(jié)作用。在本研究中，過敏模型組小鼠脾細(xì)胞分泌的IL-4、IL-5、IL-13水平顯著高于空白對照組，而IFN-γ水平顯著低于空白對照組，這表明花生過敏導(dǎo)致了Th1/Th2細(xì)胞因子平衡的失調(diào)，Th2型免疫應(yīng)答占據(jù)主導(dǎo)地位。給予重組Arah3殼聚糖納米粒治療后，小鼠脾細(xì)胞分泌的IL-4、IL-5、IL-13水平顯著降低，IFN-γ水平顯著升高，說明納米粒能夠抑制Th2細(xì)胞的活化和細(xì)胞因子分泌，促進(jìn)Th1細(xì)胞的活化和IFN-γ的分泌，從而使Th1/Th2細(xì)胞因子平衡向Th1型免疫應(yīng)答方向逆轉(zhuǎn)。重組Arah3殼聚糖納米?？赡芡ㄟ^多種途徑實(shí)現(xiàn)對Th1/Th2細(xì)胞因子平衡的調(diào)節(jié)。納米粒作為一種新型的免疫調(diào)節(jié)劑，其獨(dú)特的納米結(jié)構(gòu)和表面性質(zhì)可能使其更容易被抗原呈遞細(xì)胞（APC）攝取。APC攝取納米粒后，對Arah3抗原進(jìn)行加工處理，并將其呈遞給T淋巴細(xì)胞。納米?？赡苡绊慉PC的功能，調(diào)節(jié)其表面共刺激分子的表達(dá)和細(xì)胞因子的分泌，從而影響T淋巴細(xì)胞的分化方向。具體而言，納米?？赡芡ㄟ^激活A(yù)PC表面的Toll樣受體（TLR）等模式識別受體，啟動細(xì)胞內(nèi)的信號傳導(dǎo)通路，調(diào)節(jié)相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的活性，進(jìn)而影響Th1/Th2細(xì)胞的分化。納米粒還可能通過調(diào)節(jié)樹突狀細(xì)胞（DC）的成熟和功能，影響T淋巴細(xì)胞的活化和分化。DC是體內(nèi)功能最強(qiáng)的APC，在免疫應(yīng)答的啟動和調(diào)節(jié)中起著關(guān)鍵作用。重組Arah3殼聚糖納米?？赡艽龠M(jìn)DC向成熟狀態(tài)分化，使其高表達(dá)共刺激分子和MHC分子，增強(qiáng)抗原呈遞能力。并且，納米?？赡苷{(diào)節(jié)DC分泌的細(xì)胞因子，如IL-12等，IL-12是促進(jìn)Th1細(xì)胞分化的關(guān)鍵細(xì)胞因子，其分泌增加有助于Th1型免疫應(yīng)答的增強(qiáng)。從T淋巴細(xì)胞的分化角度來看，重組Arah3殼聚糖納米?？赡芡ㄟ^影響Th1/Th2細(xì)胞分化相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子來調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答平衡。Th1細(xì)胞的分化主要依賴于轉(zhuǎn)錄因子T-bet的調(diào)控，T-bet能夠促進(jìn)IFN-γ基因的轉(zhuǎn)錄，增強(qiáng)Th1細(xì)胞的功能；Th2細(xì)胞的分化則主要受轉(zhuǎn)錄因子GATA-3的調(diào)控，GATA-3促進(jìn)IL-4、IL-5、IL-13等Th2型細(xì)胞因子基因的轉(zhuǎn)錄。重組Arah3殼聚糖納米粒可能通過調(diào)節(jié)T-bet和GATA-3的表達(dá)水平，影響Th1/Th2細(xì)胞的分化。納米?？赡芡ㄟ^激活細(xì)胞內(nèi)的信號通路，如絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）信號通路等，調(diào)節(jié)T-bet和GATA-3的磷酸化水平，從而影響其轉(zhuǎn)錄活性。納米粒還可能通過與T淋巴細(xì)胞表面的受體相互作用，直接影響T-bet和GATA-3的表達(dá)和功能。6.2抑制炎癥反應(yīng)炎癥反應(yīng)在花生過敏過程中扮演著重要角色，重組花生過敏原Arah3殼聚糖納米粒能夠有效地抑制炎癥反應(yīng)，從而減輕過敏癥狀。在花生過敏發(fā)生時，肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞會被迅速激活，引發(fā)一系列炎癥介質(zhì)的釋放，這些炎癥介質(zhì)在過敏反應(yīng)的發(fā)展和維持中起到關(guān)鍵作用。肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞表面表達(dá)有高親和力的IgE受體（FcεRI），當(dāng)花生過敏原Arah3與致敏個體體內(nèi)已結(jié)合在FcεRI上的IgE抗體結(jié)合后，會導(dǎo)致FcεRI受體交聯(lián)，進(jìn)而激活細(xì)胞內(nèi)的信號傳導(dǎo)通路，促使細(xì)胞發(fā)生脫顆粒反應(yīng)，釋放出組胺、白三烯、前列腺素D2等炎癥介質(zhì)。這些炎癥介質(zhì)會引起血管擴(kuò)張、通透性增加、平滑肌收縮等一系列生理反應(yīng)，導(dǎo)致皮膚出現(xiàn)紅斑、水腫、瘙癢，呼吸道出現(xiàn)喘息、呼吸困難，胃腸道出現(xiàn)惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉等過敏癥狀。重組花生過敏原Arah3殼聚糖納米粒能夠抑制肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的活化，減少炎癥介質(zhì)的釋放。納米?？赡芡ㄟ^多種途徑實(shí)現(xiàn)這一抑制作用。納米粒的特殊結(jié)構(gòu)和表面性質(zhì)使其能夠與肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞表面的受體相互作用，干擾IgE抗體與FcεRI受體的交聯(lián)過程，從而阻斷細(xì)胞活化的信號傳導(dǎo)通路。納米粒表面的殼聚糖分子可能與細(xì)胞表面的某些分子結(jié)合，改變細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能，降低細(xì)胞對過敏原的敏感性。從細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)角度來看，納米?？赡苡绊懠?xì)胞內(nèi)與活化相關(guān)的信號分子的活性，如蛋白激酶C（PKC）、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）等。這些信號分子在肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞活化過程中起著關(guān)鍵作用，它們的活性被抑制后，能夠阻止細(xì)胞的脫顆粒反應(yīng)和炎癥介質(zhì)的釋放。納米粒還能夠降低炎癥相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)。在花生過敏過程中，Th2細(xì)胞分泌的IL-4、IL-5、IL-13等細(xì)胞因子不僅參與免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)，還具有促炎作用。IL-4能夠促進(jìn)B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IgE抗體，同時還能增強(qiáng)肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的活性；IL-5主要作用于嗜酸性粒細(xì)胞，促進(jìn)其增殖、活化和趨化，嗜酸性粒細(xì)胞在過敏炎癥反應(yīng)中能夠釋放多種毒性蛋白和炎癥介質(zhì)，加重炎癥損傷；IL-13則可促進(jìn)氣道上皮細(xì)胞分泌黏蛋白，導(dǎo)致氣道黏液增多，同時還能增強(qiáng)血管內(nèi)皮細(xì)胞的通透性，促進(jìn)炎癥細(xì)胞的浸潤。重組花生過敏原Arah3殼聚糖納米粒能夠下調(diào)這些促炎細(xì)胞因子的表達(dá)。納米?？赡芡ㄟ^調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的功能來實(shí)現(xiàn)這一作用。納米粒被抗原呈遞細(xì)胞攝取后，會影響抗原呈遞細(xì)胞與T淋巴細(xì)胞之間的相互作用，抑制Th2細(xì)胞的分化和活化，從而減少Th2型細(xì)胞因子的分泌。納米粒還可能直接作用于Th2細(xì)胞，通過調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的信號傳導(dǎo)通路和轉(zhuǎn)錄因子的活性，抑制細(xì)胞因子基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。納米?？赡芗せ罴?xì)胞內(nèi)的負(fù)調(diào)控信號通路，如細(xì)胞因子信號抑制因子（SOCS）通路，SOCS蛋白能夠抑制細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)，從而降低促炎細(xì)胞因子的表達(dá)水平。6.3其他潛在機(jī)制除了調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答平衡和抑制炎癥反應(yīng)外，重組花生過敏原Arah3殼聚糖納米粒還可能通過其他潛在機(jī)制發(fā)揮抗過敏作用。納米?？赡軐渫粻罴?xì)胞（DC）的功能產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用。DC作為體內(nèi)最重要的抗原呈遞細(xì)胞，在啟動和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答中起著關(guān)鍵作用。在花生過敏反應(yīng)中，DC攝取花生過敏原Arah3后，會將其加工處理并呈遞給T淋巴細(xì)胞，從而激活免疫應(yīng)答。重組花生過敏原Arah3殼聚糖納米?？赡芡ㄟ^改變DC的成熟狀態(tài)和功能，影響免疫應(yīng)答的方向。納米?？赡芤种艱C表面共刺激分子的表達(dá)，如CD80、CD86等。這些共刺激分子在DC與T淋巴細(xì)胞相互作用過程中起著重要的信號傳遞作用，其表達(dá)受到抑制后，DC對T淋巴細(xì)胞的激活能力減弱，從而降低了免疫應(yīng)答的強(qiáng)度。納米粒還可能調(diào)節(jié)DC分泌的細(xì)胞因子，如IL-12、IL-6等。IL-12是促進(jìn)Th1細(xì)胞分化的關(guān)鍵細(xì)胞因子，納米粒可能促進(jìn)DC分泌IL-12，增強(qiáng)Th1型免疫應(yīng)答，抑制Th2型免疫應(yīng)答，從而減輕過敏反應(yīng)。誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）的產(chǎn)生也是納米粒發(fā)揮抗過敏作用的潛在機(jī)制之一。Treg是一類具有免疫抑制功能的T淋巴細(xì)胞亞群，在維持免疫耐受和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答中發(fā)揮著重要作用。在花生過敏小鼠模型中，給予重組花生過敏原Arah3殼聚糖納米