CD47蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)、功能及臨床轉(zhuǎn)化研究一、引言1.1研究背景肺癌作為全球范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率均居高不下的惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅人類健康。據(jù)流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)，肺癌在男性中的發(fā)病率居首位，在女性中居第二位，其死亡率在所有惡性腫瘤中更是排名第一，占癌癥死亡患者的18%。2020年，中國(guó)新增肺癌病例數(shù)多達(dá)82萬例，無論是國(guó)際還是國(guó)內(nèi)，肺癌的防治形勢(shì)都極為嚴(yán)峻。在肺癌的眾多類型中，非小細(xì)胞肺癌（Non-SmallCellLungCancer，NSCLC）最為常見，約占所有肺癌病例的80%-85%。非小細(xì)胞肺癌主要包括腺癌、鱗癌和大細(xì)胞癌等亞型。近年來，隨著CT檢查技術(shù)的普及以及民眾健康意識(shí)的提升，體檢中發(fā)現(xiàn)腺癌的比例逐漸增加。然而，非小細(xì)胞肺癌的治療面臨著諸多困境。由于早期癥狀不明顯，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，約75%的患者發(fā)現(xiàn)時(shí)病情已進(jìn)展到中晚期階段。此時(shí)，單純的手術(shù)治療往往難以徹底清除腫瘤細(xì)胞，而化療、放療等傳統(tǒng)治療手段雖在一定程度上能夠抑制腫瘤生長(zhǎng)，但也會(huì)對(duì)患者身體造成較大的副作用，且治療效果有限，復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)較高，患者的5年生存率很低。隨著對(duì)腫瘤免疫學(xué)研究的深入，免疫檢查點(diǎn)分子在腫瘤發(fā)生、發(fā)展和免疫逃逸中的作用逐漸受到關(guān)注。CD47蛋白作為一種重要的免疫檢查點(diǎn)分子，在腫瘤免疫領(lǐng)域備受矚目。CD47蛋白是一種廣泛表達(dá)的跨膜蛋白，通過與其配體信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白α（SIRPα）相互作用，在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮“不要咬我”信號(hào)的功能，能夠抑制巨噬細(xì)胞對(duì)表達(dá)CD47的細(xì)胞的吞噬作用。在腫瘤細(xì)胞中，CD47蛋白的異常高表達(dá)可導(dǎo)致免疫逃逸，使腫瘤細(xì)胞逃脫免疫系統(tǒng)的監(jiān)視和攻擊，從而得以存活和擴(kuò)散。目前，針對(duì)CD47蛋白的研究在多種腫瘤中取得了一定進(jìn)展，其在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)情況、與臨床病理特征的關(guān)系以及對(duì)免疫治療的潛在影響等方面仍有待深入探究。深入研究CD47蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義，對(duì)于揭示非小細(xì)胞肺癌的發(fā)病機(jī)制、尋找新的診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)具有重要的理論和實(shí)踐意義。1.2研究目的與意義本研究旨在深入探究CD47蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)情況，明確其與臨床病理特征之間的關(guān)聯(lián)，評(píng)估其對(duì)患者預(yù)后的影響，并探討以CD47蛋白為靶點(diǎn)的治療策略的潛在價(jià)值。通過全面且系統(tǒng)地研究CD47蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義，期望能夠?yàn)榉切〖?xì)胞肺癌的發(fā)病機(jī)制研究提供新的理論依據(jù)，為疾病的早期診斷和預(yù)后評(píng)估提供更為有效的生物標(biāo)志物，同時(shí)為開發(fā)新型的治療策略提供有價(jià)值的思路和方向。肺癌作為全球范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率均居高不下的惡性腫瘤，給人類健康帶來了巨大的威脅。非小細(xì)胞肺癌作為肺癌中最常見的類型，其治療效果和患者預(yù)后一直不理想。目前，傳統(tǒng)的治療手段對(duì)于中晚期非小細(xì)胞肺癌患者的療效有限，復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)較高，患者的5年生存率較低。因此，尋找新的治療靶點(diǎn)和策略，提高非小細(xì)胞肺癌的治療效果，改善患者的預(yù)后，成為了肺癌研究領(lǐng)域的迫切需求。CD47蛋白作為一種重要的免疫檢查點(diǎn)分子，在腫瘤免疫逃逸中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。研究表明，CD47蛋白通過與巨噬細(xì)胞表面的信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白α（SIRPα）結(jié)合，向巨噬細(xì)胞傳遞“不要咬我”的信號(hào)，從而抑制巨噬細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的吞噬作用，使得腫瘤細(xì)胞能夠逃避機(jī)體免疫系統(tǒng)的監(jiān)視和攻擊。在多種腫瘤中，CD47蛋白的異常高表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和不良預(yù)后密切相關(guān)。在非小細(xì)胞肺癌中，深入研究CD47蛋白的表達(dá)及臨床意義，有助于揭示腫瘤免疫逃逸的機(jī)制，為開發(fā)新的免疫治療策略提供理論基礎(chǔ)。此外，目前針對(duì)非小細(xì)胞肺癌的診斷主要依賴于影像學(xué)檢查和病理活檢等方法，這些方法在早期診斷的準(zhǔn)確性和敏感性方面存在一定的局限性。尋找新的生物標(biāo)志物，提高非小細(xì)胞肺癌的早期診斷率，對(duì)于改善患者的治療效果和預(yù)后具有重要意義。CD47蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)水平與腫瘤的惡性程度和進(jìn)展密切相關(guān)，有望成為一種新的診斷標(biāo)志物，為非小細(xì)胞肺癌的早期診斷提供新的手段。同時(shí)，CD47蛋白的表達(dá)水平還與患者的預(yù)后密切相關(guān)，可作為預(yù)測(cè)患者預(yù)后的指標(biāo)，為臨床治療方案的選擇提供參考依據(jù)。1.3研究方法與創(chuàng)新點(diǎn)在研究方法上，本研究將采用多種實(shí)驗(yàn)技術(shù)和數(shù)據(jù)分析方法，確保研究結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。實(shí)驗(yàn)檢測(cè)方面，運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色（IHC）技術(shù)，對(duì)非小細(xì)胞肺癌組織芯片以及癌旁正常組織中的CD47蛋白表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。免疫組織化學(xué)染色能夠直觀地顯示CD47蛋白在組織細(xì)胞中的定位和表達(dá)情況，通過對(duì)染色結(jié)果的分析，可以準(zhǔn)確判斷CD47蛋白在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)強(qiáng)度。同時(shí)，采用蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）對(duì)CD47蛋白的表達(dá)進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證。蛋白質(zhì)免疫印跡法可以從蛋白質(zhì)水平上定量檢測(cè)CD47蛋白的表達(dá)量，為研究CD47蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)差異提供更精確的數(shù)據(jù)支持。數(shù)據(jù)分析上，運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。通過卡方檢驗(yàn)分析CD47蛋白表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌患者臨床病理特征之間的相關(guān)性，包括腫瘤的TNM分期、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等。使用Kaplan-Meier生存分析評(píng)估CD47蛋白表達(dá)對(duì)患者預(yù)后的影響，繪制生存曲線，直觀地展示不同CD47蛋白表達(dá)水平患者的生存情況差異。通過多因素Cox回歸分析確定影響患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，明確CD47蛋白在其中的作用。臨床樣本研究方面，收集大量非小細(xì)胞肺癌患者的臨床病理資料和組織樣本，確保樣本的多樣性和代表性。詳細(xì)記錄患者的年齡、性別、吸煙史、治療方式等臨床信息，以及腫瘤的大小、位置、病理類型等病理信息，為后續(xù)的數(shù)據(jù)分析提供全面的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。本研究的創(chuàng)新點(diǎn)主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：一是首次系統(tǒng)地研究CD47蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)情況及其與臨床病理特征、預(yù)后的關(guān)系，填補(bǔ)了該領(lǐng)域在這方面研究的空白，為非小細(xì)胞肺癌的發(fā)病機(jī)制研究提供了新的視角。二是將CD47蛋白作為潛在的診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)進(jìn)行研究，為非小細(xì)胞肺癌的早期診斷和精準(zhǔn)治療提供了新的思路和方法。通過檢測(cè)CD47蛋白的表達(dá)水平，有望實(shí)現(xiàn)對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者的早期篩查和預(yù)后評(píng)估，為臨床治療方案的選擇提供科學(xué)依據(jù)。三是探討了針對(duì)CD47蛋白的免疫治療策略在非小細(xì)胞肺癌中的應(yīng)用前景，為開發(fā)新的免疫治療藥物和治療方法提供了理論基礎(chǔ)。針對(duì)CD47蛋白的免疫治療策略，如開發(fā)CD47抗體藥物，阻斷CD47-SIRPα相互作用，激活巨噬細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的吞噬作用，為非小細(xì)胞肺癌的治療帶來了新的希望。二、CD47蛋白概述2.1CD47蛋白的結(jié)構(gòu)與功能CD47蛋白，又被稱作整合素相關(guān)蛋白（IAP），是一種廣泛存在于人體細(xì)胞表面的跨膜蛋白，屬于免疫球蛋白超家族成員。其結(jié)構(gòu)較為獨(dú)特，由胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)三部分組成。CD47蛋白的胞外區(qū)包含一個(gè)免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域，此結(jié)構(gòu)域是CD47蛋白與其他配體或受體相互作用的關(guān)鍵區(qū)域。通過這個(gè)結(jié)構(gòu)域，CD47蛋白能夠特異性地與信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白α（SIRPα）、血小板反應(yīng)蛋白-1（TSP-1）以及整合素（αvβ3和α2β1）等配體相結(jié)合，進(jìn)而在細(xì)胞的生理和病理過程中發(fā)揮重要作用?？缒^(qū)由高疏水性的氨基酸序列構(gòu)成，它如同橋梁一般，將CD47蛋白牢固地錨定在細(xì)胞膜上，確保蛋白在細(xì)胞表面的穩(wěn)定存在，并在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)過程中發(fā)揮著不可或缺的跨膜傳遞作用。胞內(nèi)區(qū)則相對(duì)較短，但卻蘊(yùn)含著與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)分子相互作用的位點(diǎn)。當(dāng)CD47蛋白與胞外配體結(jié)合后，會(huì)引發(fā)構(gòu)象變化，這種變化通過跨膜區(qū)傳遞到胞內(nèi)區(qū)，使得胞內(nèi)區(qū)能夠與細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)分子相互作用，從而啟動(dòng)或調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的一系列信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，最終影響細(xì)胞的增殖、遷移、凋亡以及免疫調(diào)節(jié)等多種生理功能。在免疫系統(tǒng)中，CD47蛋白發(fā)揮著“不要吃我”信號(hào)的關(guān)鍵功能，這一功能主要通過與巨噬細(xì)胞表面的SIRPα相互作用來實(shí)現(xiàn)。SIRPα是一種主要表達(dá)于髓系細(xì)胞（如巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和髓樣樹突狀細(xì)胞）膜上的跨膜蛋白，其胞外區(qū)域含有三個(gè)免疫球蛋白超家族樣區(qū)域，其中NH2末端的V型結(jié)構(gòu)域能夠與CD47蛋白的胞外免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域特異性結(jié)合。當(dāng)CD47蛋白與SIRPα結(jié)合后，會(huì)促使SIRPα定位到吞噬突觸，進(jìn)而激活Src同源區(qū)2結(jié)構(gòu)域磷酸酶-1（SHP-1）。SHP-1被激活后，會(huì)使下游的非肌球蛋白ⅡA去磷酸化，抑制其在細(xì)胞膜上的積累，最終導(dǎo)致巨噬細(xì)胞無法形成有效的吞噬結(jié)構(gòu)，從而抑制了巨噬細(xì)胞對(duì)表達(dá)CD47蛋白細(xì)胞的吞噬作用。在正常生理狀態(tài)下，人體細(xì)胞表面普遍表達(dá)CD47蛋白，這使得巨噬細(xì)胞能夠識(shí)別這些細(xì)胞為“自身”細(xì)胞，避免對(duì)其進(jìn)行吞噬，維持了機(jī)體的免疫穩(wěn)態(tài)。而在腫瘤發(fā)生過程中，腫瘤細(xì)胞常常會(huì)異常高表達(dá)CD47蛋白，利用這一“不要吃我”信號(hào)來逃避巨噬細(xì)胞的監(jiān)視和清除，從而得以在體內(nèi)存活、增殖和轉(zhuǎn)移。2.2CD47蛋白在免疫系統(tǒng)中的作用在免疫系統(tǒng)中，CD47蛋白扮演著至關(guān)重要的角色，尤其是在免疫細(xì)胞識(shí)別以及腫瘤免疫逃逸過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。巨噬細(xì)胞作為免疫系統(tǒng)中的重要成員，在識(shí)別和清除病原體、衰老細(xì)胞以及腫瘤細(xì)胞等方面發(fā)揮著核心作用。正常生理狀態(tài)下，人體細(xì)胞表面普遍表達(dá)CD47蛋白，其與巨噬細(xì)胞表面的SIRPα特異性結(jié)合，能夠激活巨噬細(xì)胞內(nèi)的抑制性信號(hào)通路。當(dāng)CD47與SIRPα結(jié)合后，會(huì)促使SIRPα定位到吞噬突觸，激活Src同源區(qū)2結(jié)構(gòu)域磷酸酶-1（SHP-1）。SHP-1激活后，會(huì)使下游的非肌球蛋白ⅡA去磷酸化，抑制其在細(xì)胞膜上的積累，從而阻止巨噬細(xì)胞形成有效的吞噬結(jié)構(gòu)，抑制了巨噬細(xì)胞對(duì)表達(dá)CD47細(xì)胞的吞噬作用。這一機(jī)制使得巨噬細(xì)胞能夠準(zhǔn)確識(shí)別正常細(xì)胞為“自身”成分，避免對(duì)其進(jìn)行錯(cuò)誤吞噬，維持了機(jī)體的免疫穩(wěn)態(tài)。然而，在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中，腫瘤細(xì)胞常常利用CD47蛋白的這一特性來實(shí)現(xiàn)免疫逃逸。大量研究表明，多種腫瘤細(xì)胞，包括非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞，會(huì)異常高表達(dá)CD47蛋白。腫瘤細(xì)胞表面高表達(dá)的CD47蛋白與巨噬細(xì)胞表面的SIRPα緊密結(jié)合，持續(xù)向巨噬細(xì)胞傳遞“不要吃我”的信號(hào)，使巨噬細(xì)胞無法有效識(shí)別和吞噬腫瘤細(xì)胞。這就導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞能夠逃避巨噬細(xì)胞的監(jiān)視和清除，得以在體內(nèi)存活、增殖并發(fā)生轉(zhuǎn)移。此外，腫瘤細(xì)胞還可通過調(diào)節(jié)CD47蛋白的表達(dá)水平和功能，進(jìn)一步增強(qiáng)其免疫逃逸能力。腫瘤細(xì)胞可能會(huì)上調(diào)CD47蛋白的表達(dá)，使其在細(xì)胞表面的密度增加，從而更有效地抑制巨噬細(xì)胞的吞噬作用。腫瘤細(xì)胞還可能通過改變CD47蛋白的糖基化修飾等方式，影響其與SIRPα的結(jié)合親和力和特異性，進(jìn)一步增強(qiáng)免疫逃逸效果。除了對(duì)巨噬細(xì)胞的作用外，CD47蛋白還可能通過影響其他免疫細(xì)胞的功能，間接參與腫瘤免疫逃逸過程。有研究發(fā)現(xiàn)，CD47蛋白的表達(dá)異?？赡軙?huì)影響T細(xì)胞的活化和增殖，抑制T細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。腫瘤細(xì)胞表面的CD47蛋白與T細(xì)胞表面的某些受體相互作用，可能會(huì)干擾T細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)通路，導(dǎo)致T細(xì)胞無法被有效激活，從而降低了機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)。CD47蛋白還可能影響自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）等其他免疫細(xì)胞的功能，協(xié)同促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸。2.3CD47蛋白與腫瘤的關(guān)系大量研究表明，CD47蛋白在多種腫瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，并且這種高表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移和免疫逃逸密切相關(guān)。在血液系統(tǒng)腫瘤中，如急性髓系白血病、多發(fā)性骨髓瘤等，CD47蛋白的表達(dá)水平顯著高于正常造血細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn)，急性髓系白血病細(xì)胞表面的CD47蛋白高表達(dá)，使其能夠逃避巨噬細(xì)胞的吞噬作用，從而在體內(nèi)大量增殖。在實(shí)體腫瘤方面，乳腺癌、結(jié)直腸癌、肝癌、肺癌等多種癌癥組織中均檢測(cè)到CD47蛋白的高表達(dá)。乳腺癌組織中CD47蛋白的表達(dá)水平與腫瘤的惡性程度和轉(zhuǎn)移潛能呈正相關(guān)，高表達(dá)CD47蛋白的乳腺癌細(xì)胞更容易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。CD47蛋白對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響機(jī)制較為復(fù)雜。一方面，CD47蛋白可以通過與血小板反應(yīng)蛋白-1（TSP-1）結(jié)合，激活細(xì)胞內(nèi)的相關(guān)信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。TSP-1與CD47蛋白結(jié)合后，能夠激活Src激酶，進(jìn)而激活下游的PI3K/AKT和MAPK信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和存活。另一方面，CD47蛋白還可以通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)，影響腫瘤細(xì)胞的增殖。有研究表明，CD47蛋白的高表達(dá)能夠上調(diào)細(xì)胞周期蛋白D1的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，從而加速腫瘤細(xì)胞的增殖。在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中，CD47蛋白也發(fā)揮著重要作用。腫瘤細(xì)胞表面高表達(dá)的CD47蛋白能夠增強(qiáng)其與細(xì)胞外基質(zhì)的黏附能力，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。CD47蛋白可以與整合素（αvβ3和α2β1）相互作用，調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的黏附和遷移行為。在結(jié)直腸癌中，CD47蛋白與αvβ3整合素的結(jié)合能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，從而使腫瘤細(xì)胞更容易進(jìn)入血液循環(huán)，發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。CD47蛋白還可以通過調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞分泌的基質(zhì)金屬蛋白酶等蛋白的表達(dá)，降解細(xì)胞外基質(zhì)，為腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲創(chuàng)造條件。免疫逃逸是腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，而CD47蛋白在其中扮演著至關(guān)重要的角色。如前文所述，腫瘤細(xì)胞表面高表達(dá)的CD47蛋白與巨噬細(xì)胞表面的SIRPα結(jié)合，向巨噬細(xì)胞傳遞“不要吃我”的信號(hào)，抑制巨噬細(xì)胞的吞噬作用，從而使腫瘤細(xì)胞能夠逃避巨噬細(xì)胞的監(jiān)視和清除。CD47蛋白還可以通過影響其他免疫細(xì)胞的功能，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸。腫瘤細(xì)胞表面的CD47蛋白與T細(xì)胞表面的某些受體相互作用，可能會(huì)干擾T細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)通路，導(dǎo)致T細(xì)胞無法被有效激活，從而降低了機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)。CD47蛋白還可能影響自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）等其他免疫細(xì)胞的功能，協(xié)同促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸。三、非小細(xì)胞肺癌概述3.1非小細(xì)胞肺癌的分類與流行病學(xué)非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）在肺癌中占據(jù)主導(dǎo)地位，約占所有肺癌病例的80%-85%。其病理類型主要包括腺癌、鱗癌和大細(xì)胞癌，不同病理類型在發(fā)病機(jī)制、臨床特征和治療反應(yīng)等方面存在差異。腺癌是NSCLC中最為常見的類型，近年來其發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。腺癌多起源于支氣管黏膜上皮，少數(shù)起源于大支氣管的黏液腺。在組織學(xué)上，腺癌可進(jìn)一步分為原位腺癌、微浸潤(rùn)性腺癌、浸潤(rùn)性腺癌等多種亞型。原位腺癌通常表現(xiàn)為局限性的病變，腫瘤細(xì)胞局限于上皮內(nèi)，無間質(zhì)、血管或胸膜侵犯；微浸潤(rùn)性腺癌則在原位腺癌的基礎(chǔ)上，出現(xiàn)了少量的間質(zhì)浸潤(rùn)；浸潤(rùn)性腺癌則表現(xiàn)為腫瘤細(xì)胞突破基底膜，向間質(zhì)內(nèi)廣泛浸潤(rùn)。腺癌的發(fā)病與吸煙的關(guān)系相對(duì)較弱，更多地與遺傳因素、環(huán)境因素（如空氣污染、職業(yè)暴露等）以及肺部慢性炎癥等有關(guān)。女性患者中腺癌的比例相對(duì)較高，且腺癌患者中常常存在一些特定的基因突變，如表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）基因突變、間變性淋巴瘤激酶（ALK）基因融合等，這些基因突變與腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，也為靶向治療提供了重要的靶點(diǎn)。鱗癌也是NSCLC的重要病理類型之一，多起源于段和亞段支氣管黏膜的鱗狀上皮化生，與吸煙密切相關(guān)，多見于老年男性。在組織學(xué)上，鱗癌可分為角化型鱗狀上皮細(xì)胞癌、非角化型鱗狀上皮細(xì)胞癌和基底細(xì)胞樣型鱗狀上皮細(xì)胞癌。角化型鱗狀上皮細(xì)胞癌可見明顯的角化珠形成和細(xì)胞間橋；非角化型鱗狀上皮細(xì)胞癌則缺乏明顯的角化現(xiàn)象，但細(xì)胞間橋仍然可見；基底細(xì)胞樣型鱗狀上皮細(xì)胞癌的癌細(xì)胞較小，呈基底細(xì)胞樣，核深染，胞質(zhì)少。鱗癌的生長(zhǎng)相對(duì)緩慢，早期多表現(xiàn)為中央型肺癌，可引起支氣管阻塞，導(dǎo)致肺不張、阻塞性肺炎等并發(fā)癥。隨著病情進(jìn)展，鱗癌可發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。由于鱗癌對(duì)化療和放療相對(duì)敏感，傳統(tǒng)的治療手段在鱗癌的治療中仍占據(jù)重要地位，但近年來隨著免疫治療和靶向治療的發(fā)展，也為鱗癌患者帶來了新的治療選擇。大細(xì)胞癌是一種相對(duì)少見的NSCLC類型，約占NSCLC的10%-15%。大細(xì)胞癌的癌細(xì)胞體積大，核大，核仁明顯，胞質(zhì)豐富，細(xì)胞形態(tài)多樣，缺乏腺癌或鱗癌的特異性分化特征。大細(xì)胞癌多起源于肺段以上支氣管，常為中央型肺癌，生長(zhǎng)迅速，早期易發(fā)生淋巴和血行轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差。由于大細(xì)胞癌缺乏明確的分化特征，其治療主要參照NSCLC的整體治療策略，以手術(shù)、化療、放療等綜合治療為主。隨著對(duì)大細(xì)胞癌分子生物學(xué)特征的深入研究，也逐漸發(fā)現(xiàn)了一些與大細(xì)胞癌相關(guān)的分子靶點(diǎn)，為大細(xì)胞癌的精準(zhǔn)治療提供了可能。除了上述三種主要病理類型外，NSCLC還包括腺鱗癌、淋巴上皮瘤樣癌、黏液表皮樣癌、大細(xì)胞神經(jīng)內(nèi)分泌癌、腺樣囊性癌、上皮-肌上皮癌等少見類型。這些少見類型的NSCLC在臨床特征、病理表現(xiàn)和治療反應(yīng)等方面各具特點(diǎn)，但總體發(fā)病率較低，相關(guān)研究相對(duì)較少。肺癌是全球范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率均居首位的惡性腫瘤。據(jù)世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的2020年全球癌癥數(shù)據(jù)顯示，2020年全球肺癌新發(fā)病例約220萬例，死亡病例約180萬例。在男性中，肺癌的發(fā)病率和死亡率均居首位；在女性中，肺癌的發(fā)病率居第二位，死亡率居首位。NSCLC作為肺癌的主要類型，其發(fā)病和死亡情況也不容樂觀。全球范圍內(nèi)，NSCLC的發(fā)病率和死亡率呈上升趨勢(shì)，尤其是在發(fā)展中國(guó)家，由于人口增長(zhǎng)、老齡化、吸煙率居高不下以及環(huán)境污染等因素的影響，NSCLC的發(fā)病和死亡人數(shù)不斷增加。在中國(guó)，肺癌同樣是發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤。2020年中國(guó)肺癌新發(fā)病例約82萬例，死亡病例約71萬例。NSCLC在中國(guó)的發(fā)病率和死亡率也呈現(xiàn)出上升趨勢(shì)。中國(guó)的肺癌發(fā)病具有明顯的地域差異，東部地區(qū)、大城市以及工業(yè)化程度較高的地區(qū)肺癌發(fā)病率相對(duì)較高。這可能與這些地區(qū)的環(huán)境污染、吸煙率較高以及人口老齡化等因素有關(guān)。隨著中國(guó)經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展和城市化進(jìn)程的加速，環(huán)境污染問題日益嚴(yán)重，尤其是空氣污染和室內(nèi)裝修污染等，這些因素都可能增加肺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。吸煙是肺癌的主要危險(xiǎn)因素之一，中國(guó)是世界上最大的煙草消費(fèi)國(guó)，吸煙人數(shù)眾多，吸煙率居高不下，這也導(dǎo)致了肺癌的發(fā)病率和死亡率不斷上升。人口老齡化也是肺癌發(fā)病率上升的重要因素之一，隨著中國(guó)人口老齡化程度的加劇，老年人口比例不斷增加，而老年人是肺癌的高發(fā)人群，因此肺癌的發(fā)病率也相應(yīng)增加。3.2非小細(xì)胞肺癌的發(fā)病機(jī)制非小細(xì)胞肺癌的發(fā)病機(jī)制是一個(gè)多因素、多步驟的復(fù)雜過程，涉及遺傳、吸煙、環(huán)境等多種因素的相互作用，以及多個(gè)分子信號(hào)通路的異常激活。遺傳因素在非小細(xì)胞肺癌的發(fā)病中起著重要作用。研究表明，某些基因的突變與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生密切相關(guān)。表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）基因突變?cè)诜切〖?xì)胞肺癌中較為常見，尤其是在腺癌患者中。EGFR基因編碼的蛋白是一種跨膜受體酪氨酸激酶，當(dāng)EGFR基因發(fā)生突變時(shí)，會(huì)導(dǎo)致其編碼的蛋白持續(xù)激活，進(jìn)而激活下游的RAS-RAF-MEK-ERK和PI3K-AKT-mTOR等信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、存活、遷移和侵襲。亞洲人群中EGFR基因突變的頻率相對(duì)較高，約為30%-50%，而在歐美人群中，EGFR基因突變的頻率約為10%-15%。間變性淋巴瘤激酶（ALK）基因融合也是非小細(xì)胞肺癌的重要驅(qū)動(dòng)基因之一。ALK基因與其他基因發(fā)生融合后，會(huì)形成融合蛋白，該融合蛋白具有異常的激酶活性，能夠激活下游的信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖。ALK基因融合在非小細(xì)胞肺癌中的發(fā)生率約為5%，多見于年輕、不吸煙或輕度吸煙的腺癌患者。除了EGFR和ALK基因外，其他基因如KRAS、BRAF、ROS1、MET等的突變或異常表達(dá)也與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。KRAS基因突變?cè)诜切〖?xì)胞肺癌中的發(fā)生率約為20%-30%，尤其是在吸煙患者中更為常見。KRAS基因的突變會(huì)導(dǎo)致其編碼的蛋白持續(xù)激活，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和存活。吸煙是導(dǎo)致非小細(xì)胞肺癌的主要環(huán)境因素之一，約85%以上的肺癌病例與吸煙有關(guān)。煙草中含有多種致癌物質(zhì)，如多環(huán)芳烴、亞硝胺、芳香胺等，這些物質(zhì)進(jìn)入人體后，會(huì)與DNA結(jié)合，導(dǎo)致DNA損傷和突變。長(zhǎng)期吸煙會(huì)使肺部細(xì)胞不斷受到致癌物質(zhì)的刺激，增加基因突變的概率，從而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。吸煙的時(shí)間越長(zhǎng)、吸煙量越大，患非小細(xì)胞肺癌的風(fēng)險(xiǎn)就越高。被動(dòng)吸煙（二手煙）也會(huì)增加患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)，研究表明，長(zhǎng)期暴露于二手煙環(huán)境中的人，患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)比不接觸二手煙的人高出20%-30%。除了吸煙外，環(huán)境因素中的空氣污染、職業(yè)暴露等也與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)病密切相關(guān)?？諝馕廴局械念w粒物、有害氣體（如二氧化硫、氮氧化物、一氧化碳等）以及多環(huán)芳烴等致癌物質(zhì)，會(huì)對(duì)肺部造成損害，增加肺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。工業(yè)廢氣、汽車尾氣、建筑揚(yáng)塵等都是空氣污染的重要來源。在一些工業(yè)化程度較高的地區(qū)，肺癌的發(fā)病率明顯高于其他地區(qū)。職業(yè)暴露也是導(dǎo)致非小細(xì)胞肺癌的重要因素之一，長(zhǎng)期接觸石棉、氡氣、砷、鉻、鎳等致癌物質(zhì)的職業(yè)人群，患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加。石棉是一種常見的職業(yè)致癌物質(zhì)，長(zhǎng)期接觸石棉的工人，患肺癌和間皮瘤的風(fēng)險(xiǎn)很高。氡氣是一種放射性氣體，存在于土壤、巖石和建筑材料中，長(zhǎng)期暴露于高濃度的氡氣環(huán)境中，會(huì)增加患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)。在分子機(jī)制層面，多個(gè)細(xì)胞因子和受體，包括EGFR、PI3K、AKT、Ras和MEK等，以及許多細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑在非小細(xì)胞肺癌發(fā)病中扮演著重要角色。當(dāng)EGFR基因發(fā)生突變或EGFR蛋白過度表達(dá)時(shí)，EGFR會(huì)持續(xù)激活，進(jìn)而激活下游的PI3K/AKT和RAS/RAF/MEK/ERK信號(hào)通路。PI3K/AKT信號(hào)通路在細(xì)胞的增殖、存活、代謝和血管生成等過程中發(fā)揮著重要作用。AKT被激活后，會(huì)磷酸化下游的多種底物，如mTOR、GSK-3β等，促進(jìn)細(xì)胞的增殖和存活。RAS/RAF/MEK/ERK信號(hào)通路則主要參與細(xì)胞的增殖、分化和遷移等過程。RAS蛋白被激活后，會(huì)激活RAF激酶，進(jìn)而激活MEK和ERK，促進(jìn)細(xì)胞的增殖和遷移。這些信號(hào)通路的異常激活會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞增殖失控、凋亡受阻、遷移和侵襲能力增強(qiáng)，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。慢性炎癥和免疫抑制等因素也可能與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)病相關(guān)。慢性肺部疾病，如慢性阻塞性肺疾?。–OPD）、肺結(jié)節(jié)病等，會(huì)導(dǎo)致肺部組織長(zhǎng)期處于炎癥狀態(tài)，炎癥細(xì)胞釋放的細(xì)胞因子和炎性介質(zhì)會(huì)損傷肺部細(xì)胞的DNA，增加基因突變的風(fēng)險(xiǎn)，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。免疫系統(tǒng)在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要的監(jiān)視和清除作用。當(dāng)機(jī)體免疫功能低下或受到抑制時(shí)，免疫系統(tǒng)無法有效識(shí)別和清除腫瘤細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞就能夠逃脫免疫監(jiān)視，得以在體內(nèi)存活和增殖。長(zhǎng)期使用免疫抑制劑、患有免疫缺陷病等都可能導(dǎo)致免疫抑制，增加患非小細(xì)胞肺癌的風(fēng)險(xiǎn)。3.3非小細(xì)胞肺癌的診斷與治療現(xiàn)狀非小細(xì)胞肺癌的診斷目前主要依靠影像學(xué)檢查、組織病理學(xué)檢查以及分子生物學(xué)檢測(cè)等多種方法。影像學(xué)檢查在非小細(xì)胞肺癌的早期篩查和診斷中發(fā)揮著重要作用。胸部X線檢查是最基本的影像學(xué)檢查方法，能夠初步發(fā)現(xiàn)肺部的占位性病變，但對(duì)于較小的病變或隱蔽部位的病變?nèi)菀茁┰\。胸部CT檢查則具有更高的分辨率，能夠清晰地顯示肺部病變的形態(tài)、大小、位置以及與周圍組織的關(guān)系，對(duì)于早期肺癌的診斷具有重要價(jià)值。特別是低劑量螺旋CT（LDCT），因其輻射劑量較低，已成為肺癌高危人群早期篩查的重要手段。研究表明，與胸部X線檢查相比，LDCT篩查可使肺癌死亡率降低20%左右。正電子發(fā)射斷層顯像（PET-CT）則能夠從代謝水平對(duì)病變進(jìn)行評(píng)估，通過檢測(cè)病變部位的葡萄糖代謝情況，判斷病變的良惡性。PET-CT對(duì)于肺癌的分期、轉(zhuǎn)移灶的檢測(cè)以及治療效果的評(píng)估具有重要意義，但由于其價(jià)格較高，且存在一定的假陽(yáng)性和假陰性，通常不作為常規(guī)篩查手段。組織病理學(xué)檢查是確診非小細(xì)胞肺癌的金標(biāo)準(zhǔn)，通過獲取病變組織進(jìn)行病理分析，能夠明確腫瘤的類型、分化程度等信息。獲取組織標(biāo)本的方法主要包括支氣管鏡檢查、經(jīng)皮肺穿刺活檢、縱隔鏡檢查以及胸腔鏡檢查等。支氣管鏡檢查適用于中央型肺癌，可直接觀察支氣管內(nèi)的病變情況，并通過活檢獲取組織標(biāo)本。經(jīng)皮肺穿刺活檢則適用于周圍型肺癌，在CT或超聲引導(dǎo)下，將穿刺針經(jīng)皮穿刺進(jìn)入肺部病變部位，獲取組織標(biāo)本?？v隔鏡檢查主要用于評(píng)估縱隔淋巴結(jié)的情況，對(duì)于肺癌的分期具有重要意義。胸腔鏡檢查則可用于獲取胸膜、肺組織等標(biāo)本，同時(shí)還可進(jìn)行部分手術(shù)治療。分子生物學(xué)檢測(cè)在非小細(xì)胞肺癌的診斷和治療中也越來越重要，通過檢測(cè)腫瘤組織中的基因突變、基因融合等分子標(biāo)志物，能夠?yàn)榘邢蛑委熀兔庖咧委熖峁┮罁?jù)。對(duì)于非小細(xì)胞肺癌患者，通常需要檢測(cè)EGFR、ALK、ROS1、BRAF、KRAS等基因突變以及PD-L1的表達(dá)水平。EGFR基因突變檢測(cè)可采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）、二代測(cè)序（NGS）等方法，ALK基因融合檢測(cè)可采用熒光原位雜交（FISH）、免疫組織化學(xué)（IHC）等方法。非小細(xì)胞肺癌的治療手段主要包括手術(shù)治療、化療、放療、靶向治療和免疫治療等，針對(duì)不同分期和病理類型的患者，臨床通常采用綜合治療策略。手術(shù)治療是早期非小細(xì)胞肺癌的主要治療方法，包括肺葉切除術(shù)、楔形切除術(shù)、肺段切除術(shù)以及全肺切除術(shù)等。肺葉切除術(shù)是最常用的手術(shù)方式，適用于大多數(shù)早期肺癌患者，能夠徹底切除腫瘤組織，并進(jìn)行淋巴結(jié)清掃，提高患者的生存率。楔形切除術(shù)和肺段切除術(shù)則適用于一些特殊情況，如患者肺功能較差無法耐受肺葉切除術(shù)，或腫瘤較小且位于周邊部位。全肺切除術(shù)適用于腫瘤位于中心部位，侵犯范圍較廣，無法進(jìn)行肺葉切除的患者，但由于手術(shù)創(chuàng)傷較大，術(shù)后并發(fā)癥較多，一般較少采用。然而，即使進(jìn)行了根治性手術(shù)，仍有部分患者會(huì)出現(xiàn)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，對(duì)于這些患者，術(shù)后通常需要輔助化療或放療，以降低復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，提高生存率。化療是利用化學(xué)藥物殺死腫瘤細(xì)胞或抑制其生長(zhǎng)的治療方法，在非小細(xì)胞肺癌的治療中應(yīng)用廣泛。對(duì)于晚期非小細(xì)胞肺癌患者，化療是主要的治療手段之一，能夠緩解癥狀，延長(zhǎng)生存期。常用的化療藥物包括鉑類（順鉑、卡鉑）、紫杉類（紫杉醇、多西他賽）、長(zhǎng)春瑞濱、吉西他濱等。這些藥物通常采用聯(lián)合化療的方案，如鉑類聯(lián)合紫杉類、鉑類聯(lián)合長(zhǎng)春瑞濱等，以提高治療效果。化療雖然能夠?qū)δ[瘤細(xì)胞起到一定的殺傷作用，但同時(shí)也會(huì)對(duì)正常細(xì)胞造成損害，導(dǎo)致一系列不良反應(yīng)，如惡心、嘔吐、脫發(fā)、骨髓抑制等，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量?；熯€存在耐藥性問題，部分患者在化療過程中會(huì)出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥，導(dǎo)致治療效果不佳。放療是利用高能射線（如X射線、γ射線等）殺死腫瘤細(xì)胞的治療方法，可分為根治性放療、姑息性放療和輔助放療。根治性放療適用于早期不能手術(shù)或拒絕手術(shù)的患者，以及局部晚期無法切除的患者，通過高劑量的放療，有望達(dá)到根治腫瘤的目的。姑息性放療則主要用于緩解晚期患者的癥狀，如骨轉(zhuǎn)移引起的疼痛、腦轉(zhuǎn)移引起的顱內(nèi)壓增高等。輔助放療通常在手術(shù)或化療后進(jìn)行，用于降低局部復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)。放療在非小細(xì)胞肺癌的治療中也存在一定的局限性，放療可能會(huì)對(duì)周圍正常組織造成損傷，引起放射性肺炎、放射性食管炎等并發(fā)癥。放療的效果也受到腫瘤的位置、大小、病理類型以及患者的身體狀況等多種因素的影響。靶向治療是針對(duì)腫瘤細(xì)胞中的特定分子靶點(diǎn)進(jìn)行治療的方法，具有特異性強(qiáng)、療效好、副作用小等優(yōu)點(diǎn)。對(duì)于存在特定基因突變的非小細(xì)胞肺癌患者，靶向治療已成為重要的治療手段。如對(duì)于EGFR基因突變的患者，可使用EGFR酪氨酸激酶抑制劑（EGFR-TKI）進(jìn)行治療，包括一代EGFR-TKI（吉非替尼、厄洛替尼、?？颂婺幔?、二代EGFR-TKI（阿法替尼、達(dá)可替尼）和三代EGFR-TKI（奧希替尼、阿美替尼、伏美替尼）。一代EGFR-TKI通過競(jìng)爭(zhēng)性地與EGFR的ATP結(jié)合位點(diǎn)可逆性結(jié)合，抑制EGFR的自磷酸化，從而阻斷下游信號(hào)傳導(dǎo)，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。二代EGFR-TKI則通過與EGFR的ATP結(jié)合位點(diǎn)不可逆性結(jié)合，抑制EGFR及HER2等相關(guān)受體的活性。三代EGFR-TKI不僅能夠抑制EGFR敏感突變，還能夠克服一代和二代EGFR-TKI治療后出現(xiàn)的T790M耐藥突變。ALK基因融合的患者可使用ALK抑制劑進(jìn)行治療，如克唑替尼、塞瑞替尼、阿來替尼、恩沙替尼、布格替尼、洛拉替尼等。這些ALK抑制劑能夠特異性地抑制ALK融合蛋白的激酶活性，阻斷下游信號(hào)傳導(dǎo)，從而抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖。靶向治療雖然取得了顯著的療效，但也存在耐藥性問題，患者在使用靶向藥物一段時(shí)間后，往往會(huì)出現(xiàn)耐藥，導(dǎo)致治療失敗。耐藥機(jī)制主要包括靶點(diǎn)突變、旁路激活、表型轉(zhuǎn)換等。針對(duì)耐藥問題，目前正在研究開發(fā)新一代的靶向藥物，以及聯(lián)合治療方案，如靶向藥物與化療、免疫治療的聯(lián)合等。免疫治療是近年來非小細(xì)胞肺癌治療領(lǐng)域的重大突破，通過激活機(jī)體自身的免疫系統(tǒng)來識(shí)別和殺傷腫瘤細(xì)胞。免疫檢查點(diǎn)抑制劑是目前臨床上應(yīng)用最廣泛的免疫治療藥物，主要包括程序性死亡受體1（PD-1）抑制劑和程序性死亡配體1（PD-L1）抑制劑。PD-1抑制劑如納武利尤單抗、帕博利珠單抗、特瑞普利單抗、信迪利單抗、卡瑞利珠單抗、替雷利珠單抗等，PD-L1抑制劑如度伐利尤單抗、阿替利珠單抗等。這些藥物通過阻斷PD-1/PD-L1信號(hào)通路，解除腫瘤細(xì)胞對(duì)免疫系統(tǒng)的抑制，使T細(xì)胞能夠重新識(shí)別和殺傷腫瘤細(xì)胞。免疫治療對(duì)于部分非小細(xì)胞肺癌患者具有顯著的療效，能夠延長(zhǎng)患者的生存期，提高生活質(zhì)量。免疫治療并非適用于所有患者，僅部分患者能夠從中獲益。目前，臨床上主要通過檢測(cè)PD-L1的表達(dá)水平、腫瘤突變負(fù)荷（TMB）等指標(biāo)來預(yù)測(cè)患者對(duì)免疫治療的反應(yīng)。免疫治療也可能會(huì)引起一系列免疫相關(guān)的不良反應(yīng)，如免疫性肺炎、免疫性腸炎、免疫性肝炎等，需要密切監(jiān)測(cè)和及時(shí)處理。四、CD47蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)研究4.1檢測(cè)方法為深入探究CD47蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)情況，多種先進(jìn)且可靠的檢測(cè)方法被廣泛應(yīng)用，這些方法各有優(yōu)勢(shì)，從不同角度為研究提供了關(guān)鍵數(shù)據(jù)支持。免疫組化（Immunohistochemistry，IHC）是檢測(cè)組織中蛋白表達(dá)和定位的常用技術(shù)。在非小細(xì)胞肺癌CD47蛋白檢測(cè)中，其具體操作流程嚴(yán)謹(jǐn)且細(xì)致。首先，對(duì)非小細(xì)胞肺癌組織標(biāo)本進(jìn)行精心處理，通過石蠟包埋技術(shù)將組織固定，隨后利用切片機(jī)切成厚度適宜的薄片，一般厚度在3-5μm，以確保后續(xù)檢測(cè)的準(zhǔn)確性。接著，將切片進(jìn)行脫蠟處理，使組織抗原充分暴露，再經(jīng)過抗原修復(fù)步驟，恢復(fù)被掩蓋的抗原表位，增強(qiáng)抗原與抗體的結(jié)合能力。隨后，加入特異性的CD47抗體，該抗體能夠與組織中的CD47蛋白特異性結(jié)合，形成抗原-抗體復(fù)合物。經(jīng)過充分的洗滌步驟，去除未結(jié)合的抗體，再加入標(biāo)記有顯色劑（如辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗，與底物反應(yīng)后可產(chǎn)生棕色沉淀；或堿性磷酸酶標(biāo)記的二抗，與底物反應(yīng)后可產(chǎn)生藍(lán)色沉淀）的二抗，二抗與一抗結(jié)合，通過顯色劑的顯色反應(yīng)，在顯微鏡下即可清晰觀察到CD47蛋白在組織細(xì)胞中的表達(dá)位置和強(qiáng)度。免疫組化的優(yōu)勢(shì)在于能夠直觀地呈現(xiàn)CD47蛋白在腫瘤組織中的分布情況，可明確其在癌細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞等不同細(xì)胞類型中的表達(dá)差異，對(duì)于研究CD47蛋白與腫瘤微環(huán)境的關(guān)系具有重要意義。但該方法存在一定局限性，其結(jié)果的判斷主觀性較強(qiáng)，不同觀察者可能因經(jīng)驗(yàn)和標(biāo)準(zhǔn)不同而產(chǎn)生差異，且只能進(jìn)行半定量分析，無法精確測(cè)定CD47蛋白的含量。蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）是一種從蛋白質(zhì)水平定量檢測(cè)CD47蛋白表達(dá)量的重要方法。在對(duì)非小細(xì)胞肺癌組織樣本的檢測(cè)中，首先要進(jìn)行組織勻漿處理，將組織充分破碎，使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)釋放出來。然后，利用合適的裂解液裂解細(xì)胞，提取總蛋白，并通過BCA法等蛋白定量方法準(zhǔn)確測(cè)定蛋白濃度，確保后續(xù)實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。接著，將提取的蛋白進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE），在電場(chǎng)的作用下，不同分子量的蛋白質(zhì)在凝膠中以不同的速度遷移，從而實(shí)現(xiàn)分離。隨后，通過轉(zhuǎn)膜技術(shù)將凝膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜或PVDF膜上，使蛋白質(zhì)固定在膜上。再用含有脫脂奶粉或BSA的封閉液對(duì)膜進(jìn)行封閉，以防止非特異性結(jié)合。之后，加入特異性的CD47抗體，抗體與膜上的CD47蛋白特異性結(jié)合，經(jīng)過洗滌后，加入標(biāo)記有辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AP）的二抗，二抗與一抗結(jié)合。最后，通過化學(xué)發(fā)光法或顯色法進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)條帶的強(qiáng)弱和灰度值，利用圖像分析軟件（如ImageJ等）進(jìn)行定量分析，可精確測(cè)定CD47蛋白的表達(dá)量。Westernblot的優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)、靈敏度高，能夠準(zhǔn)確檢測(cè)CD47蛋白的表達(dá)量，且可同時(shí)對(duì)多個(gè)樣本進(jìn)行檢測(cè)和比較。然而，該方法操作較為復(fù)雜，需要一定的技術(shù)經(jīng)驗(yàn)和專業(yè)設(shè)備，且對(duì)樣本量要求較高，樣本處理過程中可能會(huì)出現(xiàn)蛋白降解等問題，影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）也是檢測(cè)CD47蛋白的常用方法之一。在針對(duì)非小細(xì)胞肺癌的檢測(cè)中，ELISA一般采用雙抗體夾心法。首先，將CD47特異性抗體包被在酶標(biāo)板的孔中，經(jīng)過孵育和洗滌后，加入待檢測(cè)的樣本（如血清、組織勻漿上清等），樣本中的CD47蛋白會(huì)與包被抗體特異性結(jié)合。再次洗滌后，加入酶標(biāo)記的另一種CD47特異性抗體，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。然后，加入酶的底物，在酶的催化作用下，底物發(fā)生顯色反應(yīng)，通過酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出樣本中CD47蛋白的含量。ELISA具有操作簡(jiǎn)便、快速、靈敏度較高、可同時(shí)檢測(cè)大量樣本等優(yōu)點(diǎn)，適用于大規(guī)模臨床樣本的檢測(cè)。但該方法對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求較為嚴(yán)格，易受到樣本中雜質(zhì)、交叉反應(yīng)等因素的影響，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)偏差。管式磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)技術(shù)是一種新興的檢測(cè)方法，具有較高的靈敏度和準(zhǔn)確性。在非小細(xì)胞肺癌CD47蛋白檢測(cè)中，該方法利用磁性分離技術(shù)、化學(xué)發(fā)光檢測(cè)技術(shù)與免疫學(xué)方法相結(jié)合。首先，將磁微粒與免疫球蛋白結(jié)合分子（如葡萄球菌蛋白A、鏈球菌蛋白G等）結(jié)合，再連接CD47抗體，形成磁微粒-免疫球蛋白結(jié)合分子-CD47抗體復(fù)合物。同時(shí)，制備CD47抗體-中性親和素-生物素-辣根過氧化物酶復(fù)合物作為酶結(jié)合物。檢測(cè)時(shí)，將樣本、磁微粒復(fù)合物和酶結(jié)合物依次加入反應(yīng)管中，樣本中的CD47蛋白與磁微粒復(fù)合物和酶結(jié)合物特異性結(jié)合。在磁場(chǎng)的作用下，磁微粒被分離出來，經(jīng)過洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)。然后，加入發(fā)光液A（含有魯米諾、對(duì)碘酚等）和發(fā)光液B（過氧化脲溶液），在辣根過氧化物酶的催化作用下，發(fā)光液發(fā)生化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生光信號(hào)，通過發(fā)光檢測(cè)儀檢測(cè)光信號(hào)的強(qiáng)度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線即可定量測(cè)定樣本中CD47蛋白的含量。該方法具有檢測(cè)速度快、靈敏度高、線性范圍寬、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，能夠?qū)崿F(xiàn)自動(dòng)化檢測(cè)，減少人為誤差，在臨床診斷中具有廣闊的應(yīng)用前景。但該技術(shù)設(shè)備昂貴，檢測(cè)成本較高，限制了其在一些基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)的應(yīng)用。4.2表達(dá)情況眾多研究表明，CD47蛋白在非小細(xì)胞肺癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)。通過免疫組織化學(xué)染色、蛋白質(zhì)免疫印跡法、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定以及管式磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)技術(shù)等多種方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，非小細(xì)胞肺癌組織中CD47蛋白的表達(dá)水平顯著高于癌旁正常組織。在一項(xiàng)研究中，選取了80例非小細(xì)胞肺癌患者的手術(shù)切除標(biāo)本，利用蛋白質(zhì)免疫印跡法對(duì)其中20例患者的新鮮組織標(biāo)本提取組織蛋白，檢測(cè)癌組織和癌旁組織CD47表達(dá)情況，結(jié)果顯示癌組織的CD47表達(dá)水平明顯高于癌旁組織。進(jìn)一步對(duì)80例患者手術(shù)切除后石蠟包埋標(biāo)本進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)，同樣證實(shí)癌組織CD47表達(dá)高于癌旁組織。另一項(xiàng)研究采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢測(cè)了50例非小細(xì)胞肺癌患者血清中的CD47蛋白水平，并與30例健康對(duì)照組進(jìn)行比較，結(jié)果顯示非小細(xì)胞肺癌患者血清CD47蛋白水平顯著高于健康對(duì)照組。還有研究運(yùn)用管式磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測(cè)技術(shù)對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者的組織勻漿上清進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)CD47蛋白在非小細(xì)胞肺癌組織勻漿上清中的含量明顯高于癌旁組織勻漿上清。CD47蛋白在不同病理類型的非小細(xì)胞肺癌中均有高表達(dá)。在肺腺癌和肺鱗癌組織中，CD47蛋白的表達(dá)水平均顯著高于正常肺組織。有研究通過免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)了30例肺腺癌和30例肺鱗癌組織中CD47蛋白的表達(dá)，結(jié)果顯示肺腺癌和肺鱗癌組織中CD47蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別為80%和76.7%，而正常肺組織中CD47蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率僅為20%。通過蛋白質(zhì)免疫印跡法對(duì)不同病理類型的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株進(jìn)行檢測(cè)，也發(fā)現(xiàn)CD47蛋白在肺腺癌細(xì)胞株（如A549細(xì)胞株）和肺鱗癌細(xì)胞株（如NCI-H520細(xì)胞株）中均高表達(dá)。4.3表達(dá)差異分析大量研究表明，CD47蛋白在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)與多種臨床病理特征存在顯著相關(guān)性，這些相關(guān)性對(duì)于深入理解非小細(xì)胞肺癌的發(fā)病機(jī)制、評(píng)估病情以及制定治療策略具有重要意義。在腫瘤大小方面，有研究對(duì)80例非小細(xì)胞肺癌患者進(jìn)行分析，結(jié)果顯示CD47蛋白高表達(dá)組的腫瘤大小明顯大于低表達(dá)組。腫瘤直徑大于3cm的患者中，CD47蛋白高表達(dá)的比例較高；而在腫瘤直徑小于3cm的患者中，CD47蛋白低表達(dá)的比例相對(duì)較高。這表明CD47蛋白的高表達(dá)可能與腫瘤的生長(zhǎng)和體積增大密切相關(guān)，其可能通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、抑制細(xì)胞凋亡等機(jī)制，使得腫瘤細(xì)胞能夠快速生長(zhǎng)，從而導(dǎo)致腫瘤體積增大。臨床分期是評(píng)估非小細(xì)胞肺癌患者病情嚴(yán)重程度和預(yù)后的重要指標(biāo)，而CD47蛋白的表達(dá)與臨床分期密切相關(guān)。一項(xiàng)納入50例非小細(xì)胞肺癌患者的研究發(fā)現(xiàn)，隨著臨床分期的升高，CD47蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率逐漸增加。在Ⅰ期患者中，CD47蛋白陽(yáng)性表達(dá)率相對(duì)較低；而在Ⅲ期和Ⅳ期患者中，CD47蛋白陽(yáng)性表達(dá)率顯著升高。這說明CD47蛋白的高表達(dá)可能參與了腫瘤的進(jìn)展過程，在腫瘤從早期向晚期發(fā)展的過程中，CD47蛋白的表達(dá)水平逐漸升高，提示CD47蛋白可能通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移以及免疫逃逸等作用，推動(dòng)腫瘤的進(jìn)展，使患者的臨床分期升高。TNM分期是目前國(guó)際上廣泛采用的腫瘤分期系統(tǒng)，它綜合考慮了腫瘤的原發(fā)灶（T）、區(qū)域淋巴結(jié)（N）和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移（M）情況。研究顯示，CD47蛋白表達(dá)與TNM分期顯著相關(guān)。在對(duì)80例非小細(xì)胞肺癌患者的研究中發(fā)現(xiàn)，CD47蛋白高表達(dá)組的pTNM分期明顯晚于低表達(dá)組。T3-T4期、N1-N3期以及M1期的患者中，CD47蛋白高表達(dá)的比例較高。這表明CD47蛋白的高表達(dá)與腫瘤的局部浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，其可能通過調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞與周圍組織的相互作用、促進(jìn)腫瘤血管生成以及抑制免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的清除等機(jī)制，促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致TNM分期升高。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的重要因素之一，而CD47蛋白的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。對(duì)80例非小細(xì)胞肺癌患者的研究表明，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，CD47蛋白高表達(dá)的比例顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，隨著淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目的增加，CD47蛋白的表達(dá)水平也逐漸升高。這說明CD47蛋白的高表達(dá)可能促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的淋巴道轉(zhuǎn)移，其可能通過增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞與淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附能力、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞分泌淋巴管生成因子等機(jī)制，使腫瘤細(xì)胞更容易進(jìn)入淋巴管，從而發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后不良的主要原因之一，研究發(fā)現(xiàn)CD47蛋白表達(dá)與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移也存在密切關(guān)聯(lián)。在發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的非小細(xì)胞肺癌患者中，CD47蛋白高表達(dá)的比例明顯高于未發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者。對(duì)80例患者的研究顯示，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者中CD47蛋白高表達(dá)的比例達(dá)到70%以上，而未發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者中CD47蛋白高表達(dá)的比例僅為30%左右。這表明CD47蛋白的高表達(dá)可能促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，其可能通過調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力、改變腫瘤微環(huán)境以及抑制免疫系統(tǒng)對(duì)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞的監(jiān)視和清除等機(jī)制，使腫瘤細(xì)胞能夠突破局部組織的限制，進(jìn)入血液循環(huán)或淋巴循環(huán)，從而發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。五、CD47蛋白表達(dá)對(duì)非小細(xì)胞肺癌生物學(xué)行為的影響5.1對(duì)肺癌細(xì)胞增殖的影響大量研究表明，CD47蛋白的高表達(dá)對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的增殖具有顯著的促進(jìn)作用，這一作用在多種實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭械玫搅顺浞烛?yàn)證。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方面，諸多研究運(yùn)用細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)，成功構(gòu)建了CD47蛋白過表達(dá)或低表達(dá)的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞模型，以此深入探究CD47蛋白對(duì)細(xì)胞增殖的影響。在對(duì)A549和H1299等非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系的研究中，通過轉(zhuǎn)染CD47過表達(dá)質(zhì)粒，使細(xì)胞中CD47蛋白的表達(dá)水平顯著上調(diào)。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，過表達(dá)CD47蛋白的細(xì)胞增殖速度明顯加快。在細(xì)胞培養(yǎng)的第1天，過表達(dá)組和對(duì)照組的細(xì)胞數(shù)量差異不明顯；但在第3天，過表達(dá)組的細(xì)胞數(shù)量比對(duì)照組增加了約50%；到第5天，過表達(dá)組的細(xì)胞數(shù)量幾乎是對(duì)照組的2倍。通過MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性，發(fā)現(xiàn)過表達(dá)CD47蛋白的細(xì)胞在490nm處的吸光度值顯著高于對(duì)照組，這表明過表達(dá)CD47蛋白能夠增強(qiáng)細(xì)胞的增殖能力。相反，利用RNA干擾技術(shù)下調(diào)CD47蛋白的表達(dá)后，細(xì)胞的增殖受到明顯抑制。在相同的培養(yǎng)條件下，CD47低表達(dá)組的細(xì)胞增殖速度明顯減緩，細(xì)胞數(shù)量增長(zhǎng)緩慢，在第5天，CD47低表達(dá)組的細(xì)胞數(shù)量?jī)H為對(duì)照組的50%左右。細(xì)胞周期分析結(jié)果進(jìn)一步揭示了CD47蛋白促進(jìn)肺癌細(xì)胞增殖的機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn)，CD47蛋白高表達(dá)可使肺癌細(xì)胞周期進(jìn)程發(fā)生改變，促進(jìn)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期。在正常情況下，肺癌細(xì)胞在G1期進(jìn)行物質(zhì)準(zhǔn)備，為DNA合成做準(zhǔn)備；進(jìn)入S期后，細(xì)胞開始進(jìn)行DNA復(fù)制。當(dāng)CD47蛋白高表達(dá)時(shí)，細(xì)胞周期蛋白D1和細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4（CDK4）的表達(dá)上調(diào)。細(xì)胞周期蛋白D1與CDK4結(jié)合形成復(fù)合物，促進(jìn)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白（Rb）的磷酸化。磷酸化的Rb蛋白釋放轉(zhuǎn)錄因子E2F，E2F進(jìn)入細(xì)胞核，啟動(dòng)與DNA合成相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，從而促進(jìn)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，加速細(xì)胞增殖。而在CD47蛋白低表達(dá)的細(xì)胞中，細(xì)胞周期蛋白D1和CDK4的表達(dá)下調(diào)，Rb蛋白磷酸化水平降低，E2F釋放受阻，細(xì)胞周期進(jìn)程受阻，增殖受到抑制。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，將過表達(dá)CD47蛋白的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞接種到裸鼠皮下，結(jié)果顯示腫瘤生長(zhǎng)速度明顯加快。在接種后的第1周，過表達(dá)組和對(duì)照組的腫瘤體積差異較?。坏诘?周，過表達(dá)組的腫瘤體積達(dá)到了對(duì)照組的2倍以上。通過測(cè)量腫瘤的重量，發(fā)現(xiàn)過表達(dá)CD47蛋白的腫瘤重量明顯高于對(duì)照組。相反，將CD47蛋白低表達(dá)的細(xì)胞接種到裸鼠皮下，腫瘤的生長(zhǎng)受到明顯抑制，腫瘤體積和重量均顯著低于對(duì)照組。這些結(jié)果表明，CD47蛋白的高表達(dá)能夠促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞在體內(nèi)的增殖，加速腫瘤的生長(zhǎng)。5.2對(duì)肺癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的影響CD47蛋白高表達(dá)對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力有著顯著的增強(qiáng)作用，這一現(xiàn)象在眾多研究中得到了充分證實(shí)。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)層面，通過細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)等經(jīng)典方法，深入探究了CD47蛋白對(duì)肺癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力的影響。以A549和H1299等非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系為研究對(duì)象，運(yùn)用細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)構(gòu)建CD47過表達(dá)細(xì)胞模型。在細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)中，過表達(dá)CD47蛋白的細(xì)胞在劃痕后24小時(shí)內(nèi)的遷移距離明顯長(zhǎng)于對(duì)照組，劃痕愈合率顯著提高。在Transwell實(shí)驗(yàn)中，過表達(dá)CD47蛋白的細(xì)胞穿過聚碳酸酯膜的數(shù)量顯著增加，是對(duì)照組的2-3倍。相反，利用RNA干擾技術(shù)下調(diào)CD47蛋白的表達(dá)后，細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力明顯受到抑制。在細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)中，CD47低表達(dá)組的細(xì)胞遷移距離明顯縮短，劃痕愈合率降低；在Transwell實(shí)驗(yàn)中，穿過聚碳酸酯膜的細(xì)胞數(shù)量顯著減少，僅為對(duì)照組的30%-50%。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，CD47蛋白可能通過多種分子機(jī)制促進(jìn)肺癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。CD47蛋白可以與整合素（αvβ3和α2β1）相互作用，調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的黏附能力。在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中，CD47蛋白與αvβ3整合素的結(jié)合能夠增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞與纖維連接蛋白、層粘連蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)成分的黏附，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。CD47蛋白還可以通過調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的表達(dá)來促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。MMPs是一類能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)的酶，在腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要作用。研究表明，CD47蛋白高表達(dá)可上調(diào)MMP-2和MMP-9等基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)，增加細(xì)胞外基質(zhì)的降解，為腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲創(chuàng)造條件。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，構(gòu)建裸鼠肺癌轉(zhuǎn)移模型，進(jìn)一步驗(yàn)證了CD47蛋白對(duì)肺癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的促進(jìn)作用。將過表達(dá)CD47蛋白的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞通過尾靜脈注射或原位接種的方式接種到裸鼠體內(nèi)，結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，過表達(dá)組裸鼠的肺部轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)量明顯增多，轉(zhuǎn)移灶的大小也顯著增大。在尾靜脈注射模型中，過表達(dá)組裸鼠肺部轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)量平均為30-40個(gè)，而對(duì)照組僅為10-15個(gè)。通過對(duì)肺部組織進(jìn)行病理切片觀察，發(fā)現(xiàn)過表達(dá)CD47蛋白的腫瘤細(xì)胞更容易突破肺組織的基底膜，侵入周圍組織和血管，形成遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。相反，將CD47蛋白低表達(dá)的細(xì)胞接種到裸鼠體內(nèi)，肺部轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)量明顯減少，轉(zhuǎn)移灶也較小。這些結(jié)果表明，CD47蛋白的高表達(dá)能夠促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞在體內(nèi)的侵襲和轉(zhuǎn)移，增加腫瘤的惡性程度。5.3對(duì)肺癌細(xì)胞免疫逃逸的影響CD47蛋白在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞免疫逃逸過程中扮演著關(guān)鍵角色，其主要通過與巨噬細(xì)胞的相互作用以及與其他免疫檢查點(diǎn)分子的協(xié)同作用來實(shí)現(xiàn)這一過程。巨噬細(xì)胞作為免疫系統(tǒng)的重要組成部分，在識(shí)別和清除腫瘤細(xì)胞中發(fā)揮著核心作用。然而，非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞通過高表達(dá)CD47蛋白，與巨噬細(xì)胞表面的信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白α（SIRPα）特異性結(jié)合，形成CD47-SIRPα信號(hào)復(fù)合物。SIRPα的細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)中含有免疫受體酪氨酸抑制基序（ITIM），當(dāng)CD47與SIRPα結(jié)合后，會(huì)導(dǎo)致ITIM發(fā)生磷酸化，進(jìn)而傳導(dǎo)抑制性信號(hào)，即“別吃我”信號(hào)。這一信號(hào)的產(chǎn)生使得巨噬細(xì)胞的吞噬活性顯著降低，無法有效識(shí)別和清除腫瘤細(xì)胞，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞得以逃避巨噬細(xì)胞的監(jiān)視和攻擊，實(shí)現(xiàn)免疫逃逸。研究表明，在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞與巨噬細(xì)胞的共培養(yǎng)體系中，高表達(dá)CD47蛋白的肺癌細(xì)胞能夠明顯抑制巨噬細(xì)胞的吞噬作用。通過基因編輯技術(shù)下調(diào)肺癌細(xì)胞中CD47蛋白的表達(dá)后，巨噬細(xì)胞對(duì)肺癌細(xì)胞的吞噬能力顯著增強(qiáng)。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，將高表達(dá)CD47蛋白的肺癌細(xì)胞接種到小鼠體內(nèi)，腫瘤細(xì)胞能夠快速生長(zhǎng)并逃避巨噬細(xì)胞的清除；而當(dāng)使用CD47抗體阻斷CD47-SIRPα相互作用時(shí)，巨噬細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的吞噬作用增強(qiáng)，腫瘤生長(zhǎng)受到明顯抑制。除了與巨噬細(xì)胞的相互作用外，CD47蛋白還與其他免疫檢查點(diǎn)分子，如程序性死亡受體1（PD-1）及其配體程序性死亡配體1（PD-L1）等，存在協(xié)同作用，進(jìn)一步增強(qiáng)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的免疫逃逸能力。PD-1主要表達(dá)于活化的T細(xì)胞、B細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞等免疫細(xì)胞表面，PD-L1則廣泛表達(dá)于腫瘤細(xì)胞和腫瘤浸潤(rùn)免疫細(xì)胞表面。當(dāng)腫瘤細(xì)胞表面的PD-L1與T細(xì)胞表面的PD-1結(jié)合后，會(huì)抑制T細(xì)胞的活化和增殖，降低T細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。研究發(fā)現(xiàn)，在非小細(xì)胞肺癌中，CD47蛋白的高表達(dá)往往伴隨著PD-L1的高表達(dá)。CD47和PD-L1通過不同的機(jī)制共同抑制免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的攻擊。CD47主要抑制巨噬細(xì)胞的吞噬作用，而PD-L1則主要抑制T細(xì)胞的免疫活性。兩者的協(xié)同作用使得腫瘤細(xì)胞能夠更加有效地逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者腫瘤組織的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，CD47和PD-L1雙陽(yáng)性表達(dá)的患者，其腫瘤的惡性程度更高，預(yù)后更差。在體外實(shí)驗(yàn)中，同時(shí)阻斷CD47和PD-L1信號(hào)通路，能夠顯著增強(qiáng)免疫細(xì)胞對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的殺傷作用，比單獨(dú)阻斷其中一條信號(hào)通路的效果更為明顯。六、CD47蛋白表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的關(guān)系6.1臨床研究眾多臨床研究聚焦于CD47蛋白表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的關(guān)系，結(jié)果顯示CD47蛋白高表達(dá)與患者不良預(yù)后緊密相關(guān)。一項(xiàng)針對(duì)50例非小細(xì)胞肺癌患者的研究，通過免疫組化檢測(cè)術(shù)后腫瘤組織中CD47蛋白表達(dá)，發(fā)現(xiàn)CD47陽(yáng)性表達(dá)組無進(jìn)展生存期顯著短于CD47陰性表達(dá)組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且CD47蛋白表達(dá)水平與臨床分期和無進(jìn)展生存期（PFS）密切相關(guān)（P＜0.05）。在臨床分期較晚的患者中，CD47蛋白高表達(dá)更為常見，這類患者的無進(jìn)展生存期明顯縮短，提示CD47蛋白高表達(dá)不僅與腫瘤的進(jìn)展相關(guān)，還預(yù)示著患者的預(yù)后較差。另一項(xiàng)納入80例非小細(xì)胞肺癌患者的研究表明，高表達(dá)CD47蛋白組患者更易出現(xiàn)淋巴轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移（P＜0.05）。隨著腫瘤的轉(zhuǎn)移，患者的病情進(jìn)一步惡化，生存時(shí)間明顯縮短。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者，其5年生存率顯著低于無轉(zhuǎn)移的患者，而這些轉(zhuǎn)移患者中CD47蛋白高表達(dá)的比例較高，說明CD47蛋白高表達(dá)通過促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移，進(jìn)而影響患者的預(yù)后。對(duì)CD47蛋白表達(dá)水平進(jìn)行量化分析的研究也得出類似結(jié)論。通過蛋白質(zhì)免疫印跡法或酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定等方法精確測(cè)定CD47蛋白表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)CD47蛋白表達(dá)量越高，患者的總生存期和無進(jìn)展生存期越短。在一項(xiàng)研究中，將CD47蛋白表達(dá)量分為高、中、低三組，結(jié)果顯示高表達(dá)組患者的總生存期和無進(jìn)展生存期明顯短于中、低表達(dá)組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這進(jìn)一步證實(shí)了CD47蛋白表達(dá)水平與非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后之間的負(fù)相關(guān)關(guān)系，即CD47蛋白表達(dá)水平越高，患者的預(yù)后越差。6.2預(yù)后因素分析對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的準(zhǔn)確評(píng)估，是制定合理治療方案、提高患者生存率和生活質(zhì)量的關(guān)鍵。在眾多影響預(yù)后的因素中，CD47蛋白表達(dá)水平以及臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等臨床病理特征都發(fā)揮著重要作用。CD47蛋白表達(dá)水平是影響非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的關(guān)鍵因素之一。大量臨床研究表明，CD47蛋白高表達(dá)的患者，其無進(jìn)展生存期和總生存期明顯縮短。如前所述，在一項(xiàng)針對(duì)50例非小細(xì)胞肺癌患者的研究中，CD47陽(yáng)性表達(dá)組無進(jìn)展生存期顯著短于CD47陰性表達(dá)組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這表明CD47蛋白的高表達(dá)可能預(yù)示著腫瘤細(xì)胞具有更強(qiáng)的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力，從而導(dǎo)致患者病情進(jìn)展更快，預(yù)后更差。CD47蛋白高表達(dá)還可能通過抑制機(jī)體的免疫功能，使腫瘤細(xì)胞更容易逃避免疫系統(tǒng)的監(jiān)視和攻擊，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤的發(fā)展。臨床分期也是評(píng)估非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)。隨著臨床分期的升高，患者的預(yù)后逐漸變差。在一項(xiàng)納入80例非小細(xì)胞肺癌患者的研究中，I期患者的5年生存率明顯高于II期和III期患者。這是因?yàn)榕R床分期較晚的患者，腫瘤往往已經(jīng)發(fā)生了局部浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，手術(shù)切除的難度增加，且術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)也更高。在臨床分期較晚的患者中，腫瘤細(xì)胞可能已經(jīng)擴(kuò)散到周圍組織和器官，手術(shù)難以完全切除，導(dǎo)致腫瘤殘留，進(jìn)而影響患者的預(yù)后。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移同樣對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者的預(yù)后產(chǎn)生顯著影響。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，其5年生存率顯著低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者。這是因?yàn)榱馨徒Y(jié)轉(zhuǎn)移意味著腫瘤細(xì)胞已經(jīng)通過淋巴管擴(kuò)散到周圍淋巴結(jié)，增加了腫瘤復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)。在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，腫瘤細(xì)胞可能已經(jīng)在淋巴結(jié)內(nèi)增殖，并通過淋巴循環(huán)進(jìn)一步擴(kuò)散到其他部位，導(dǎo)致病情惡化。遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后不良的主要原因之一。一旦腫瘤發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，如肝轉(zhuǎn)移、骨轉(zhuǎn)移、腦轉(zhuǎn)移等，治療難度將大大增加，患者的生存率也會(huì)顯著降低。遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞在新的部位生長(zhǎng)，會(huì)對(duì)周圍組織和器官造成破壞，引起相應(yīng)的癥狀和并發(fā)癥，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和生存時(shí)間。將CD47蛋白表達(dá)聯(lián)合其他因素進(jìn)行分析，能夠更全面、準(zhǔn)確地評(píng)估非小細(xì)胞肺癌患者的預(yù)后。在一項(xiàng)研究中，通過多因素Cox回歸分析發(fā)現(xiàn)，CD47蛋白表達(dá)、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。CD47蛋白高表達(dá)、臨床分期晚和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，其死亡風(fēng)險(xiǎn)明顯增加。這表明，在評(píng)估患者預(yù)后時(shí)，綜合考慮這些因素，能夠更準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)患者的生存情況，為臨床治療決策提供更有力的依據(jù)。臨床醫(yī)生可以根據(jù)患者的CD47蛋白表達(dá)水平、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，制定個(gè)性化的治療方案，如對(duì)于CD47蛋白高表達(dá)且臨床分期晚的患者，可能需要更積極的治療措施，包括手術(shù)、化療、放療、免疫治療等多種手段的聯(lián)合應(yīng)用，以提高患者的生存率和生活質(zhì)量。6.3生存分析生存分析結(jié)果顯示，CD47蛋白表達(dá)水平與非小細(xì)胞肺癌患者的生存率密切相關(guān)，高表達(dá)CD47蛋白的患者生存率顯著低于低表達(dá)患者。在一項(xiàng)納入100例非小細(xì)胞肺癌患者的研究中，通過Kaplan-Meier生存分析發(fā)現(xiàn)，CD47蛋白高表達(dá)組患者的5年生存率僅為20%，而低表達(dá)組患者的5年生存率達(dá)到45%。在生存曲線中，高表達(dá)組患者的生存曲線在低表達(dá)組下方，且隨著時(shí)間的推移，兩組之間的生存差異逐漸增大。在隨訪的第1年，高表達(dá)組和低表達(dá)組的生存率差異不明顯；但在第3年，高表達(dá)組的生存率明顯低于低表達(dá)組；到第5年，兩組的生存率差異更為顯著。這表明CD47蛋白的高表達(dá)可能預(yù)示著患者的預(yù)后較差，生存時(shí)間較短。Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)一步分析表明，CD47蛋白表達(dá)是影響非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。在對(duì)100例患者的多因素分析中，調(diào)整了年齡、性別、吸煙史、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等因素后，CD47蛋白高表達(dá)患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)是低表達(dá)患者的2.5倍。這意味著，在其他因素相同的情況下，CD47蛋白高表達(dá)的患者更容易出現(xiàn)疾病進(jìn)展和死亡，其預(yù)后更差。CD47蛋白表達(dá)對(duì)患者生存率的影響在不同亞組中也表現(xiàn)出一定的差異。在年齡大于60歲的患者中，CD47蛋白高表達(dá)組的5年生存率為15%，低表達(dá)組為35%；而在年齡小于60歲的患者中，高表達(dá)組的5年生存率為25%，低表達(dá)組為50%。在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，CD47蛋白高表達(dá)組的5年生存率為10%，低表達(dá)組為20%；在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，高表達(dá)組的5年生存率為30%，低表達(dá)組為55%。這說明CD47蛋白表達(dá)對(duì)患者生存率的影響在不同年齡和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)的患者中均存在，且高表達(dá)CD47蛋白的患者在各亞組中的生存率均較低。CD47蛋白表達(dá)水平對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者生存率的影響具有重要的臨床意義，這為臨床治療決策提供了重要的參考依據(jù)。對(duì)于CD47蛋白高表達(dá)的患者，臨床醫(yī)生應(yīng)更加密切地關(guān)注患者的病情變化，制定更為積極的治療方案，如加強(qiáng)術(shù)后輔助治療、選擇更有效的化療藥物或嘗試新的治療方法（如免疫治療聯(lián)合靶向治療等），以提高患者的生存率和生活質(zhì)量。七、基于CD47蛋白的非小細(xì)胞肺癌治療策略7.1CD47抗體藥物的研發(fā)CD47抗體藥物的研發(fā)近年來取得了顯著進(jìn)展，成為非小細(xì)胞肺癌治療領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。眾多科研團(tuán)隊(duì)和制藥公司投入大量資源，致力于開發(fā)高效、安全的CD47抗體藥物，以滿足臨床治療的迫切需求。目前，全球范圍內(nèi)有多款CD47抗體藥物處于臨床試驗(yàn)階段。Magrolimab（Hu5F9-G4）是吉利德科學(xué)公司研發(fā)的一款抗CD47單克隆抗體，它以IgG4亞型為基礎(chǔ)進(jìn)行設(shè)計(jì)，旨在降低Fc段介導(dǎo)的效應(yīng)，減少對(duì)正常細(xì)胞的影響。在非小細(xì)胞肺癌的臨床試驗(yàn)中，Magrolimab展現(xiàn)出了一定的治療潛力。研究表明，它能夠阻斷CD47與SIRPα的相互作用，解除對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬功能的抑制，從而激活巨噬細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的吞噬作用。在一項(xiàng)早期臨床試驗(yàn)中，部分接受Magrolimab治療的非小細(xì)胞肺癌患者的腫瘤得到了一定程度的控制，病情出現(xiàn)緩解跡象。然而，由于CD47在正常細(xì)胞如紅細(xì)胞上也有表達(dá)，使用Magrolimab治療時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)一些不良反應(yīng)，如貧血等。這主要是因?yàn)榭贵w與紅細(xì)胞表面的CD47結(jié)合，導(dǎo)致紅細(xì)胞被巨噬細(xì)胞吞噬，從而引起貧血。盡管如此，通過調(diào)整給藥劑量和方案，以及聯(lián)合其他藥物治療，有望在提高療效的降低不良反應(yīng)的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。ALX148是ALXOncology公司開發(fā)的一種靶向CD47的在研抗體療法，其獨(dú)特之處在于對(duì)抗體的Fc端進(jìn)行了特別處理，使其無法激活Fc受體。ALXOncology認(rèn)為，能夠激活Fc受體的抗CD47抗體可能激發(fā)巨噬細(xì)胞吞噬表達(dá)CD47的健康細(xì)胞，從而造成抗體療法的毒副作用，限制其使用劑量。通過讓Fc端失活，ALX148有望降低抗CD47抗體的毒副作用，而且ALX148與其它抗CD47抗體相比分子量更小，更容易滲透到實(shí)體瘤中，從而提高它的療效。在與抗HER2抗體曲妥珠單抗和化療聯(lián)用治療HER2陽(yáng)性胃癌或胃食管結(jié)合部癌的臨床試驗(yàn)中，ALX148取得了積極結(jié)果，客觀緩解率達(dá)到72%。這一結(jié)果為ALX148在非小細(xì)胞肺癌治療中的應(yīng)用提供了借鑒，目前也有針對(duì)非小細(xì)胞肺癌的相關(guān)臨床試驗(yàn)正在開展，以進(jìn)一步驗(yàn)證其療效和安全性。在國(guó)內(nèi)，也有多家企業(yè)積極投身于CD47抗體藥物的研發(fā)。天境生物的Lemzoparlimab（TJC4，來佐利單抗）利用紅細(xì)胞反向篩選方式篩選到主要結(jié)合腫瘤CD47的抗體，并選擇IgG4亞型。臨床研究顯示，在未采用“預(yù)激劑量”給藥的情況下，Lemzoparlimab均顯示出良好的安全性和耐受性。目前，該藥物已在中國(guó)啟動(dòng)了治療骨髓增生異常綜合征（MDS）的Ⅲ期臨床研究，同時(shí)也在探索其在非小細(xì)胞肺癌等其他腫瘤中的治療潛力。CD47抗體藥物的作用機(jī)制主要是通過特異性地結(jié)合腫瘤細(xì)胞表面的CD47蛋白，阻斷CD47-SIRPα信號(hào)通路，從而解除腫瘤細(xì)胞對(duì)巨噬細(xì)胞的免疫抑制，恢復(fù)巨噬細(xì)胞的吞噬功能。巨噬細(xì)胞在免疫系統(tǒng)中扮演著重要的角色，它能夠識(shí)別并吞噬病原體、衰老細(xì)胞以及腫瘤細(xì)胞。然而，腫瘤細(xì)胞表面高表達(dá)的CD47蛋白與巨噬細(xì)胞表面的SIRPα結(jié)合后，會(huì)向巨噬細(xì)胞傳遞“不要吃我”的信號(hào)，抑制巨噬細(xì)胞的吞噬活性。當(dāng)CD47抗體與腫瘤細(xì)胞表面的CD47蛋白結(jié)合后，阻斷了CD47-SIRPα的相互作用，使巨噬細(xì)胞能夠重新識(shí)別并吞噬腫瘤細(xì)胞。巨噬細(xì)胞吞噬腫瘤細(xì)胞后，還可以將腫瘤抗原呈遞給T細(xì)胞，激活T細(xì)胞介導(dǎo)的適應(yīng)性免疫反應(yīng)，進(jìn)一步增強(qiáng)機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。CD47抗體還可能通過抗體依賴的細(xì)胞毒性作用（ADCC）和補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性作用（CDC）等機(jī)制，直接殺傷腫瘤細(xì)胞。7.2聯(lián)合治療策略將CD47抗體與化療、放療、免疫治療等其他治療方法聯(lián)合使用，是當(dāng)前非小細(xì)胞肺癌治療研究的重要方向，這種聯(lián)合治療策略有望通過多種機(jī)制協(xié)同作用，提高治療效果，克服單一治療的局限性。化療是傳統(tǒng)的腫瘤治療手段之一，在非小細(xì)胞肺癌的治療中應(yīng)用廣泛。然而，化療藥物在殺傷腫瘤細(xì)胞的也會(huì)對(duì)正常細(xì)胞造成損傷，且容易引發(fā)耐藥問題，導(dǎo)致治療效果不佳。將CD47抗體與化療藥物聯(lián)合使用，可通過不同機(jī)制增強(qiáng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。CD47抗體能夠阻斷腫瘤細(xì)胞表面的CD47蛋白與巨噬細(xì)胞表面的SIRPα的相互作用，解除對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬功能的抑制，使巨噬細(xì)胞能夠更有效地吞噬腫瘤細(xì)胞。化療藥物則直接作用于腫瘤細(xì)胞，通過干擾DNA合成、抑制細(xì)胞分裂等方式殺傷腫瘤細(xì)胞。兩者聯(lián)合，可從免疫調(diào)節(jié)和直接殺傷腫瘤細(xì)胞兩個(gè)方面發(fā)揮作用，提高治療效果。在一項(xiàng)針對(duì)非小細(xì)胞肺癌的臨床前研究中，將CD47抗體與紫杉醇、順鉑等化療藥物聯(lián)合使用，結(jié)果顯示聯(lián)合治療組的腫瘤生長(zhǎng)抑制率明顯高于單獨(dú)使用化療藥物組。聯(lián)合治療還能夠降低化療藥物的使用劑量，減少化療藥物對(duì)正常細(xì)胞的損傷，降低不良反應(yīng)的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。CD47抗體還可能通過調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，克服化療耐藥問題。放療也是非小細(xì)胞肺癌的重要治療手段之一，但放療通常只能對(duì)局部腫瘤產(chǎn)生抑制作用，難以抑制已轉(zhuǎn)移的腫瘤。CD47抗體與放療聯(lián)合，可有效增強(qiáng)放療的局部抗腫瘤作用，并誘導(dǎo)系統(tǒng)性的免疫反應(yīng)，抑制遠(yuǎn)端未放療側(cè)腫瘤的生長(zhǎng)。研究表明，放療能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫原性死亡，釋放腫瘤相關(guān)抗原，激活固有免疫和適應(yīng)性免疫反應(yīng)。而CD47抗體能夠阻斷CD47-SIRPα信號(hào)通路