第1頁/共1頁2024北京重點校高二（下）期末生物匯編微生物培養(yǎng)技術及應用一、單選題1．（2024北京石景山高二下期末）物質W是一種含氮有機物，會污染土壤。W在培養(yǎng)基中達到一定量時，培養(yǎng)基表現(xiàn)為不透明。某研究小組欲從土壤中篩選出能降解W的細菌。在從土壤中分離目標菌的過程中，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上甲、乙兩種細菌都能生長并形成菌落（如圖所示）。下列敘述不正確的是（）A．為分離該目標菌而配制的選擇培養(yǎng)基中無需添加其它氮源B．平板上出現(xiàn)菌落甲說明接種或培養(yǎng)過程中有雜菌污染C．透明圈與菌落的直徑大小能反映該細菌對物質W的分解能力D．要得到目標菌，應該對菌落乙繼續(xù)進行純化培養(yǎng)2．（2024北京東城高二下期末）某學校利用平板劃線法接種進行酵母菌的純培養(yǎng)，實驗中發(fā)現(xiàn)了一些異?，F(xiàn)象，下列分析不合理的是（）選項異?，F(xiàn)象原因分析A平板上產生了雜菌菌落，但未接種的平板上無菌落產生培養(yǎng)基滅菌不徹底B接種后的平板上未形成酵母菌菌落接種環(huán)灼燒后未冷卻處理C平板上有大量水滴未進行倒置培養(yǎng)D平板上未分離出單個菌落每次劃線前都重新蘸取菌液A．A B．B C．C D．D3．（2024北京朝陽高二下期末）某實驗小組測定土壤中能分解尿素的活菌數(shù)，在實驗組的每個平板上接種0.1mL稀釋105倍的土樣稀釋液，培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)實驗組4個平板上的菌落數(shù)分別為17、68、69、75，下列相關敘述正確的是（

）A．用清水將土樣制成1×103～107倍稀釋的稀釋液后滅菌處理B．接種所用的培養(yǎng)基是濕熱滅菌處理后的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基C．如果未接種的對照組平板上有菌落出現(xiàn)，應重新進行實驗D．該實驗所用每克土樣中能分解尿素的活菌數(shù)為5.7×107個4．（2024北京海淀高二下期末）兩位同學食用冰激凌后出現(xiàn)腹瀉癥狀，為此他們檢驗冰激凌中大腸桿菌數(shù)量是否超標。他們的實驗流程和結果如下圖。下列敘述不合理的是（

）A．①應采用涂布平板法B．實驗方案應增設僅接種無菌水的組別C．①應接種至少3個平板D．僅以深紫色菌落數(shù)估測會導致結果偏高5．（2024北京大興高二下期末）聚乙烯醇(PVA)是存在于化工污水中的一種難以降解的大分子有機物，PVA與碘作用時能產生藍綠色復合物，被分解后藍綠色復合物消失，在培養(yǎng)基上形成白色透明斑。下表是篩選高效分解PVA的細菌培養(yǎng)基配方，相關敘述正確的是（

）成分MgSO?蛋白質PVA水用量5g10g7g1000mLA．制備該培養(yǎng)基時，一般需要將培養(yǎng)基調節(jié)至中性或弱堿性B．該培養(yǎng)基以PVA為唯一碳源，其上生長的菌落均具有分解PVA的能力C．接種時，用滅菌后的涂布器蘸取少量菌液并均勻地涂布在培養(yǎng)基表面D．在確定菌株降解PVA效果時，培養(yǎng)基由藍綠色變?yōu)榘咨乃俾蕿闄z測變量6．（2024北京大興高二下期末）獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是防止雜菌污染，下列相關敘述錯誤的是（

）A．常用的滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、濕熱滅菌等B．涂布器、接種環(huán)等可通過灼燒的方法迅速滅菌C．配制培養(yǎng)基和接種時，均需在酒精燈火焰附近進行操作D．煮沸消毒法可殺死微生物的營養(yǎng)細胞和一部分芽孢7．（2024北京西城高二下期末）下列“土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)”的相關操作，不能達到實驗目的的是（）A．配制以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基B．從富含動物糞便和尿液的土壤中取樣C．將土壤浸出液滅菌后接種到培養(yǎng)基上D．培養(yǎng)基倒置于恒溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)8．（2024北京西城高二下期末）甲乙兩個生物小組的“酵母菌純培養(yǎng)”結果如圖所示。下列說法正確的是（）A．兩組平板都分成4個區(qū)進行劃線B．甲組操作過程需4次灼燒接種環(huán)C．乙組適合對酵母菌活菌進行計數(shù)D．單菌落大小反映菌種種類差異二、非選擇題9．（2024北京石景山高二下期末）研究者發(fā)現(xiàn)腸癌患者的腸道中乳酸乳球菌豐度下降，猜測這種菌可能具有抑癌作用。為證實此猜測，研究者進行了系列實驗。(1)將健康人的糞便濾液用法接種于固體培養(yǎng)基表面，培養(yǎng)基中應含有等營養(yǎng)物質。培養(yǎng)一段時間后，經(jīng)分離鑒定，得到一種新的乳酸乳球菌株HL10.(2)誘導獲得腫瘤鼠和腫瘤無菌鼠，每天灌胃等量培養(yǎng)液、大腸桿菌菌液、HL10菌液，一段時間后檢測腸癌細胞數(shù)量、腫瘤大小等指標（用腸腫瘤負荷綜合體現(xiàn)），結果如圖1。據(jù)此可知。(3)將人源腫瘤細胞（HCT116和HT29）培養(yǎng)在不同的細菌培養(yǎng)液中，檢測兩種腫瘤細胞的增殖標志物PCNA蛋白，結果如圖2。表明。(4)系列實驗研究表明，HL10的抗腫瘤作用歸因于其分泌的α-甘露糖苷酶（αMAN）。請?zhí)暨x合適的選項完成驗證實驗方案，并預測結果：。a．腫瘤鼠b．正常鼠c．轉入αMAN基因d．轉入可與αMAN-mRNA結合的miRNAe．腫瘤負荷低于對照組f．腫瘤負荷高于對照組g．腫瘤負荷與對照組無差異組別實驗組1實驗組2對照組主要操作用_____i_____的HL10菌液灌胃腫瘤鼠用_ii_的HL10菌液灌胃腫瘤鼠用HL10菌液灌胃_iii_____實驗結果_iv__________V_腫瘤負荷低10．（2024北京海淀高二下期末）細菌纖維素（BC）是一種環(huán)境友好型生物材料，應用前景廣泛。菌株K生產的BC為白色，研究人員改造菌株K使其能生產出黑色BC。(1)菌株K合成BC的單體是。菌株K屬于醋酸桿菌，為增加BC的產量，需在其培養(yǎng)基中添加較多的源，還需通入氧氣。(2)已知黑色素沉積能使BC轉變?yōu)楹谏獴C。為此研究人員向菌株K中導入酪氨酸酶基因，獲得的菌株T能合成黑色素。為探究菌株T合成黑色素的最適pH，測得下圖結果。

①研究人員提出，生產上宜將pH=8作為菌株T合成黑色素時的培養(yǎng)條件。理由是：盡管此時黑色素的初始產生速率不是最高，但是，有利于保證黑色素的產量。②已知菌株T生長和生產BC的最適pH為酸性，但在酸性和堿性條件下均可存活。利用菌株T生產黑色BC的流程應為：→收獲黑色BC（請選擇字母排序）。a．調節(jié)培養(yǎng)基pH為酸性，培養(yǎng)一段時間b．調節(jié)培養(yǎng)基pH為堿性，培養(yǎng)一段時間c．接種少量菌株T至培養(yǎng)基中d．向培養(yǎng)基中加入合成黑色素所需前體物質(3)為簡化生產黑色BC的工藝流程，請?zhí)岢鲆粭l對菌株T進行基因改造的設想。11．（2024北京延慶高二下期末）隨著我國畜禽產業(yè)迅猛發(fā)展，廢棄羽毛亟需進行有效開發(fā)利用。(1)羽毛中含有豐富的角蛋白，不易被化學試劑分解，但自然界中少有羽毛長時間積聚，這一現(xiàn)象提示在的環(huán)境中易找到羽毛分解菌。(2)為篩選土壤中的羽毛分解菌，研究者進行如下操作：①取土樣→配置濃度梯度土壤溶液→涂布于基礎培養(yǎng)基表面，培養(yǎng)一段時間后，挑取單菌落接種于的液體培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)。②以為對照，觀察羽毛降解情況并檢測角蛋白酶的酶活，結果如圖1。據(jù)圖1判斷，適合后續(xù)研究的菌株及依據(jù)。菌株ABCD對照羽毛降解情況酶活相對值310820圖1

(3)為優(yōu)化角蛋白酶的生產條件，研究者利用響應面法進行多變量分析。根據(jù)實驗結果繪制了溫度、培養(yǎng)基中羽毛含量兩種變量組合對角蛋白酶活性影響的三維圖，如圖2。圖中投影的等高線反映了不同條件下角蛋白酶活性的變化。據(jù)圖2可知：等高線中最小圖形的中心點代表時的溫度和羽毛含量；等高線酶活性隨溫度和羽毛含量增加的變化趨勢（“相同”或“不同”）。研究者根據(jù)測定結果建立模型，測得角蛋白酶活性比優(yōu)化前提高了數(shù)倍。(4)該研究潛在的應用前景是發(fā)酵液中富含氨基酸可用于。12．（2024北京昌平高二下期末）T-2毒素是真菌產生的有毒代謝物，污染谷物和動物飼料，危害人畜健康。T-2毒素的微生物脫毒法是利用微生物產酶（或代謝物）降解毒素和物理吸附毒素。科研人員對微生物降解T-2毒素的機制進行了相關研究。(1)通過觀察在固體培養(yǎng)基上形成的，對篩選出的T-2毒素脫毒菌株AFJ-2和AFJ-3進行初步的鑒定。兩類菌株需要的營養(yǎng)除碳源、氮源外還應有。(2)將兩類菌株的活細胞和滅活細胞與T-2毒素共培養(yǎng)，檢測培養(yǎng)液中T-2毒素的含量。依據(jù)圖1結果，推測兩類菌株對T-2毒素的脫毒方式最可能是，且AFJ-2菌株脫毒效率優(yōu)于AFJ-3。(3)科研人員為進一步研究兩類菌株對T-2毒素的脫毒方式，進行如下實驗。①將胞外上清液和細胞內容物分別與T-2毒素反應2h后檢測T-2毒素含量，結果顯示，兩類菌株均出現(xiàn)與細胞內容物混合的T-2毒素含量顯著降低，與胞外上清液混合的T-2毒素含量無顯著變化，說明。②利用下列材料設計實驗，其中對照組是（選填字母）。（注：滅活、蛋白酶K、SDS和PMSF均能破壞蛋白質的結構）a.細胞內容物

b.T-2毒素

c.滅活細胞內容物

d.細胞內容物+蛋白酶K

e.細胞內容物+SDS

f.細胞內容物+PMSF(4)為探究這兩類菌株在降解T-2毒素過程中的產物變化及其相對含量，利用相關技術方法獲得峰面積，用來代表物質的相對含量，結果如圖2所示。

下列相關分析正確的是_____（多選）。A．AFJ-3能以HT-2為底物B．AFJ-2能以NEO為底物C．推測產物X是由HT-2和NEO轉化的產物D．先加AFJ-3比先加AFJ-2的脫毒效果更好13．（2024北京朝陽高二下期末）豆瓣醬是我國傳統(tǒng)發(fā)酵食品，發(fā)酵過程中利用了多種天然菌種。研究人員嘗試分離這些菌種，進而研究它們在發(fā)酵中的作用。(1)研究人員用稀釋豆瓣醬醬醅，得到菌液，然后用法將菌液接種在固體培養(yǎng)基表面，培養(yǎng)一段時間后，根據(jù)菌落特征初步選擇出幾種微生物：葡萄球菌S、解淀粉芽孢桿菌Ba、嗜鹽四聯(lián)球菌T和融合魏斯氏菌W。(2)為了檢測抗生素對上述菌種的抑菌率，分別將這些菌種接種在含有不同種類、不同濃度抗生素的液體培養(yǎng)基內，并設置對照菌液和不接種菌的空白培養(yǎng)體系，在適宜條件下培養(yǎng)，定期檢測菌液的吸光度（OD值）。已知菌液吸光度與菌體密度成正比。該實驗中對照菌液組的處理方式與實驗組的區(qū)別是，某實驗組菌液抗生素抑菌率的計算公式為。(3)3種抗生素對上述微生物的抑菌率如下圖所示。據(jù)圖可知，向培養(yǎng)基中加入抗生素，控制其濃度為μg/mL，能夠實現(xiàn)對嗜鹽四聯(lián)球菌T的選擇培養(yǎng)。14．（2024北京東城高二下期末）禾谷鐮刀菌（Fg）引起的赤霉病是小麥的主要病害之一，從小麥種子內篩選抑制Fg的內生菌，為生物防治制劑的開發(fā)提供理論支撐。(1)取小麥種子用酒精沖洗表面進行，研磨后加入適量進行梯度稀釋，接種至平板培養(yǎng)獲得內生菌，可根據(jù)進行菌種的初步鑒定，挑取不同的單菌落進行純化，得到若干內生菌菌株。(2)采用平板對峙培養(yǎng)法篩選具有抑制Fg功能的內生菌，用直徑1cm的打孔器取Fg菌餅，接種于培養(yǎng)基中央，分別在不同平板上將等量待測內生菌接種在距Fg2cm處，以的平板為對照。一段時間后結果如圖1，測量各組Fg菌落半徑，計算抑菌率如圖2。圖中抑制率的計算公式為，實驗結果說明。

(3)繼續(xù)研究JB7的抑菌機制，用JB7培養(yǎng)液上清液處理Fg孢子，使用AO/PI雙熒光染色評估Fg孢子細胞膜損傷情況，AO染料可以通過完整的細胞膜，呈現(xiàn)綠色熒光；PI染料則通過破損的細胞膜，呈現(xiàn)橙紅色熒光，實驗結果如圖3。

實驗結果說明JB7使Fg細胞膜受到損傷，圖中a和b處的熒光顏色分別是。(4)欲繼續(xù)研究JB7是否通過分泌水解酶，以及分泌哪些水解酶發(fā)揮抑菌作用，請從下列選項中選擇藥品配制培養(yǎng)基，通過觀察透明圈進行判斷（選擇完成一種培養(yǎng)基配方即可）。判斷是否分泌纖維素酶的培養(yǎng)基配方：。判斷是否分泌葡聚糖酶的培養(yǎng)基配方：。A．葡聚糖

B．瓊脂

C．纖維素鈉

D．蛋白胨

E.MgSO4等無機鹽

F.蒸餾水15．（2024北京大興高二下期末）青枯病由青枯菌引發(fā)，嚴重危害番茄生長。菜粕有機肥是以油菜籽榨油后的副產物為原料經(jīng)微生物降解而制成的有機肥。研究人員希望篩選出能充分利用菜粕有機肥且抑制青枯菌的菌株。(1)菜粕有機肥含有大量的營養(yǎng)物質，可為抑菌微生物的生長和繁殖提供充足的碳源和源。(2)為篩選適于在菜粕上生長且能抑制青枯菌的菌株，研究人員進行了下列實驗。①稱取10克番茄根際土壤置于裝有的錐形瓶，制成稀釋10倍的土壤稀釋液，接種于若干個含菜粕的固體培養(yǎng)基，30℃培養(yǎng)2~4天，該培養(yǎng)基按功能劃分，屬于培養(yǎng)基。②將上述培養(yǎng)基上生長的所有單菌落接種到同一個固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)24h后，在培養(yǎng)基表面均勻噴灑懸液，30℃培養(yǎng)48h后對出現(xiàn)抑菌圈的菌落進行測量，計算每個菌落直徑和抑菌圈直徑比值以代表，最終篩選出菌株RC14。(3)為檢測在施用不同肥料條件下菌株RC14對番茄青枯病的防治效果，研究人員將盆栽番茄接種青枯菌7天后進行如下處理，45天后測定發(fā)病率，結果如下表所示。組別處理發(fā)病率(%)1施用常規(guī)化肥72.52A________62.53施用含菌株RC14的常規(guī)化肥56.54施用含菌株RC14的菜粕有機肥17.5表中A處的處理為，根據(jù)表中信息推測第4組發(fā)病率最低的原因。(4)請?zhí)岢鲆粋€RC14菌抑制青枯菌方式的假設。16．（2024北京西城高二下期末）紅曲色素是廣泛應用于食品等行業(yè)的天然色素，主要通過紅曲霉菌發(fā)酵生產?，F(xiàn)有商業(yè)菌株生產紅曲色素能力低，且會產生對動物腎臟、肝臟有毒害的桔青霉素。科研人員擬獲得優(yōu)質紅曲霉菌。(1)將待選菌樣品接種到含大米研磨液的液體培養(yǎng)基中，擴大培養(yǎng)2天后進行，依次分別涂布于固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，通過觀察特征對菌種進行初步鑒定。(2)以菌株為對照進行發(fā)酵指標的比較，初步篩選出3種菌株。選取4種大米為基質進行發(fā)酵，結束后檢測相應物質的含量，結果如圖1。

應選擇作為目標菌株進行后續(xù)生產研究。(3)氮源種類及發(fā)酵溫度對所選紅曲霉菌代謝產物合成的影響如圖2所示。

根據(jù)所有研究結果，依次寫出紅曲色素發(fā)酵罐中優(yōu)選的碳源、氮源及控制的溫度條件。

參考答案1．B【分析】人們按照微生物對營養(yǎng)物質的不同需求，配制出的供其生長繁殖的營養(yǎng)基質。按照功能的不同，可將培養(yǎng)基分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基，其中在微生物學中，將允許特定種類的微生物生長、同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱為選擇培養(yǎng)基?！驹斀狻緼、從土壤中篩選出能降解W的細菌，所用培養(yǎng)基應該以物質W為唯一氮源，無需添加其它氮源，A正確；B、平板上出現(xiàn)菌落甲且甲周圍沒有透明圈，說明細菌甲不能分解物質W，而是以空氣中的氮氣作為氮源，B錯誤；C、透明圈與菌落的直徑大小能反映該細菌對物質W的分解能力，透明圈與菌落的直徑的比值越大，細菌對物質W的分解能力越強，C正確；D、平板上出現(xiàn)菌落乙且周圍出現(xiàn)透明圈，說明細菌乙能夠降解W，應該對菌落乙繼續(xù)進行純化培養(yǎng)得到目標菌，D正確。故選B。2．A【分析】平板劃線法純化菌種時不同階段灼燒接種環(huán)的目的不同：（1）第一次操作：殺死接種環(huán)上原有的微生物。（2）每次劃線之前：殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端。（3）劃線結束后：殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。【詳解】A、若培養(yǎng)基滅菌不徹底，則未接種的平板上也會有菌落產生，A錯誤；B、接種環(huán)灼燒后未冷卻處理，則會殺死接種的菌液，因而接種后的平板上未形成酵母菌菌落，B正確；C、未進行倒置培養(yǎng)，則皿蓋上冷凝的水滴會滴落到平板上，C正確；D、每次劃線前都重新蘸取菌液相當于未將菌液稀釋，因而平板上可能未分離出單個菌落，D正確。故選A。3．C【分析】稀釋涂布平板法除可以用于分離微生物外，也常用來統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目。當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個單菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結果準確，一般選擇菌落數(shù)為30~300的平板進行計數(shù)。除稀釋涂布平板法外，還可以利用顯微鏡進行直接計數(shù)，該方法要利用特定的細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板。【詳解】A、用無菌水（不是清水）將土樣制成1×103～107倍稀釋的稀釋液，然后將稀釋液涂布到制備好的培養(yǎng)基上，A錯誤；B、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基為完全培養(yǎng)基，而實驗目的是測定土壤中能分解尿素的活菌數(shù)，應使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，B錯誤；C、如果未接種的對照組平板上有菌落出現(xiàn)，可能是培養(yǎng)菌滅菌不徹底等原因導致的，應重新進行實驗，C正確；D、為了保證結果準確，一般選擇菌落數(shù)為30~300的平板進行計數(shù)，該實驗所用每克土樣中能分解尿素的活菌數(shù)≈（68+69+75）/3÷0.1×105≈7.1×107，D錯誤。故選C。4．D【分析】1、微生物常見的接種的方法：平板劃線法和稀釋涂布平板法，稀釋涂布平板法可用于微生物的計數(shù)。2、稀釋涂布平板法統(tǒng)計菌落數(shù)目的原理：①當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌；②通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)來推測樣品中大約含有的活菌數(shù)?！驹斀狻緼、圖中①是稀釋涂布平板法，A正確；B、為排除無菌水的干擾，應增設僅接種無菌水的組別作為空白對照，B正確；C、每個稀釋梯度應設置3個平行實驗，減小誤差，C正確；D、稀釋涂布平板法，可能兩個單菌落長到一起，所以僅以深紫色菌落數(shù)估測會導致結果偏低，D錯誤。故選D。5．A【分析】菌落：是指由單個微生物細胞或一堆同種細胞在適宜固體培養(yǎng)基表面或內部生長繁殖到一定程度，形成以母細胞為中心的一團肉眼可見的、有一定形態(tài)、構造等特征的子細胞集團。各種微生物在一定條件下形成的菌落特征，如大小、形狀、邊緣、表面、質地、顏色等，具有一定的穩(wěn)定性，是衡量菌種純度、辨認和鑒定菌種的重要依據(jù)?！驹斀狻緼、培養(yǎng)基是用于培養(yǎng)細菌的，制備該培養(yǎng)基時，一般在滅菌前將培養(yǎng)基調至中性或弱堿性，A正確；B、該培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，而菌落是在固體培養(yǎng)基上長出的子細胞群體，因此，用該培養(yǎng)基不能得到分解PVA的細菌菌落，B錯誤；C、涂布時，用經(jīng)過滅菌處理的涂布器將用移液槍移到平板上的菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面，C錯誤；D、在確定菌株降解PVA能力時，培養(yǎng)基中PVA濃度為無關變量，不同的菌種是自變量，白色透明斑的直徑為檢測變量，D錯誤。故選A。6．C【分析】1、消毒是使用較為溫和的物理或化學方法殺死物體表面或內部的部分微生物（不包芽孢和孢子）。2、滅菌是使用強烈的理化因素殺死物體內外所有的微生物(包括芽孢和孢子)。常用方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、濕熱滅菌法?！驹斀狻緼、滅菌是使用強烈的理化因素殺死物體內外所有的微生物，常用的滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、濕熱滅菌等，A正確；B、涂布器、接種環(huán)等接種工具可通過灼燒的方法迅速滅菌，B正確；C、為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，接種時需在酒精燈火焰附近進行操作，但配制培養(yǎng)基不需要，C錯誤；D、煮沸消毒法可以殺死微生物的營養(yǎng)細胞和部分芽孢，不能殺死全部芽孢和孢子，D正確。故選C。7．C【分析】培養(yǎng)基是人們按照微生物對營養(yǎng)物質的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質；根據(jù)物理性質分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中一般含有水、碳源、氮源和無機鹽，其中碳源和氮源常采用蛋白胨和牛肉膏，因為它們來源于動物原料，含有糖、維生素和有機氮等營養(yǎng)物質。另外，培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質和氧氣的要求。例如，培養(yǎng)乳酸桿菌時需要在培養(yǎng)基中添加維生素，培養(yǎng)霉菌時需將培養(yǎng)基的pH調至酸性，培養(yǎng)細菌時需將pH調至中性或微堿性，培養(yǎng)厭氧微生物時則需要提供無氧的條件?！驹斀狻緼、在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中分解尿素的微生物能生存，不能分解尿素的微生物不能生存，故需配制以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，A正確；B、動物糞便和尿液中富含尿素，故可在從富含動物糞便和尿液的土壤中取樣分離尿素分解菌，B正確；C、土壤浸出液中含有分解尿素的細菌，滅菌會殺死細菌，故不能對浸出液滅菌，C錯誤；D、培養(yǎng)基倒置于恒溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，可減少培養(yǎng)基表面水分的揮發(fā)，以及防止皿蓋上冷凝的水珠滴落到培養(yǎng)基上造成污染，D正確。故選C。8．B【分析】微生物常見的接種的方法：（1）平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。（2）稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落?！驹斀狻緼、由圖可知，兩組平板都分成3個區(qū)進行劃線，A錯誤；B、接種前需對接種環(huán)灼燒滅菌一次，每次劃線后都灼燒一次，甲組共灼燒4次接種環(huán)，B正確；C、活菌計數(shù)用稀釋涂布平板法，圖中為平板劃線法，不可計數(shù)，C錯誤；D、單菌落的性狀、顏色等特征反映菌種種類差異，D錯誤。故選B。9．(1)稀釋涂布平板（或平板劃線）碳源、氮源、無機鹽、水(2)HL10和大腸桿菌均對小鼠的腸癌具有抑制作用，且HL10的抑制作用更強；腸道中含有的菌群也有一定的抑菌作用(3)HL10可抑制人源腫瘤細胞增殖，而大腸桿菌不能(4)cdaef或dcafe【分析】微生物常見的接種的方法：①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)基表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。【詳解】（1）微生物的接種方法包括稀釋涂布平板法和平板劃線法，故將健康人的糞便濾液用稀釋涂布平板（或平板劃線）法接種于固體培養(yǎng)基表面。培養(yǎng)基中一般含有水、碳源、氮源和無機鹽。（2）根據(jù)圖1可知，HL10和大腸桿菌組的腸腫瘤負荷小于培養(yǎng)液組的腸腫瘤負荷，且HL10組的腸腫瘤負荷最小，說明HL10和大腸桿菌均對小鼠的腸癌具有抑制作用，且HL10的抑制作用更強；根據(jù)圖1可知，腫瘤鼠的腸腫瘤負荷小比腫瘤無菌鼠的腸腫瘤負荷小，說明腸道中含有的菌群也有一定的抑菌作用。（3）根據(jù)圖2可知，大腸桿菌組中的腫瘤細胞的增殖標志物含量和培養(yǎng)組相近，但HL10組中的腫瘤細胞的增殖標志物含量比培養(yǎng)組少得多，說明HL10可抑制人源腫瘤細胞增殖，而大腸桿菌不能。（4）實驗的目的是要驗證HL10的抗腫瘤作用歸因于其分泌的α-甘露糖苷酶（αMAN），再結合實驗所給材料可知，實驗的自變量為α-甘露糖苷酶（αMAN）的有無，與αMAN-mRNA結合的miRNA可抑制α-甘露糖苷酶（αMAN）的表達，實驗的因變量為腫瘤負荷大小，故實驗組1用轉入αMAN基因d的HL10菌液灌胃腫瘤鼠，實驗組2用轉入可與αMAN-mRNA結合的miRNA的HL10菌液灌胃腫瘤鼠，對照組用HL10菌液灌胃腫瘤鼠，實驗結果為實驗組1腫瘤負荷低于對照組，實驗組2腫瘤負荷高于對照組；或者實驗組1用轉入可與αMAN-mRNA結合的miRNA的HL10菌液灌胃腫瘤鼠，實驗組2用轉入αMAN基因的HL10菌液灌胃腫瘤鼠，對照組用HL10菌液灌胃腫瘤鼠，實驗結果為實驗組1腫瘤負荷高于對照組，實驗組2腫瘤負荷低于對照組。10．(1)葡萄糖碳（或“碳源和氮”）(2)隨時間推移，該pH條件下黑色素的積累量高于其他pH條件c→a→d→b(3)導入可在酸性條件下合成黑色素的相關基因，以簡化調整pH的環(huán)節(jié)；導入可在堿性條件下生長和生產BC的相關基因，以簡化調整pH的環(huán)節(jié)；導入使菌株在生長過程中自身逐漸產生堿性物質的新基因，以簡化調整pH的環(huán)節(jié)。【分析】基因工程技術的基本步驟：（1）目的基因的獲??；（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等；（3）將目的基因導入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法；（4）目的基因的檢測與鑒定?！驹斀狻浚?）纖維素是多糖，構成纖維素的單體是葡萄糖，菌株K屬于醋酸桿菌，為增加BC的產量，需在其培養(yǎng)基中添加較多的碳源，還需通入氧氣；（2）①由圖可知，在pH=8時黑色素的初始產生速率不是最高，但隨時間推移，該pH條件下黑色素的積累量高于其他pH條件，有利于保證黑色素的產量，因此生產上宜將pH=8作為菌株合成黑色素時的培養(yǎng)條件；②利用菌株T生產黑色BC的流程應為：接種少量菌株T至培養(yǎng)基中（c）→調節(jié)培養(yǎng)基pH為酸性，培養(yǎng)一段時間（a）→向培養(yǎng)基中加入合成黑色素所需前體物質（d）→調節(jié)培養(yǎng)基pH為堿性，培養(yǎng)一段時間（b）→收獲黑色BC；（3）為簡化生產黑色BC的工藝流程，對菌株T進行基因改造的設想為導入可在酸性條件下合成黑色素的相關基因，以簡化調整pH的環(huán)節(jié)；導入可在堿性條件下生長和生產BC的相關基因，以簡化調整pH的環(huán)節(jié)；導入使菌株在生長過程中自身逐漸產生堿性物質的新基因，以簡化調整pH的環(huán)節(jié)。11．(1)富含羽毛(2)羽毛為唯一碳氮源空白培養(yǎng)基菌株B，角蛋白酶活性及羽毛降解能力最強(3)角蛋白酶活性最高相同(4)葉面施肥【分析】1、接種微生物的方式常見有：平板劃線法、稀釋涂布平板法等。2、將微生物接種到固體培養(yǎng)基常用稀釋涂布平板法，接種前先要將菌液進行一系列的梯度稀釋，再將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，在一定的稀釋度的菌液里，聚集在一起的微生物能分散成單個細胞，在適宜的條件下培養(yǎng)讓菌體進行繁殖，能夠在培養(yǎng)基表面形成單個菌落?！驹斀狻浚?）羽毛不易被分解。但是自然界中羽毛一般不會長時間聚集，說明自然界中有分解羽毛的微生物。所以在富含羽毛的環(huán)境中容易找到羽毛分解菌。（2）①培養(yǎng)基一般采用濕熱滅菌法，如高壓蒸汽滅菌法。題中，基礎培養(yǎng)基上的單菌落挑取后接種在以羽毛為唯一碳源的液體培養(yǎng)基上以利于選擇出能分解羽毛的純培養(yǎng)微生物。②一般以空白培養(yǎng)基為對照，觀察羽毛降解情況和檢測酶活性大小。據(jù)圖分析可知，菌株B中羽毛降解最多，說明其角蛋白酶活及羽毛降解能力最強。（3）等高線中最小圖形的中心點對應的縱軸數(shù)值最大，代表角蛋白酶活最高；等高線酶活隨溫度和羽毛含量增加都呈現(xiàn)下降趨勢，所以趨勢相同。（4）羽毛被降解后，主要生成氨基酸。故發(fā)酵液中富含氨基酸可用于葉面施肥、農作物施肥等。12．(1)菌落水和無機鹽（特殊營養(yǎng)物質）(2)利用微生物產酶（或代謝物）降解，（而不是物理吸附。）(3)兩類菌株降解T-2毒素的活性物質均位于胞內ab(4)ABC【分析】培養(yǎng)基里面的基本營養(yǎng)成分碳源、氮源，水和無機鹽（特殊營養(yǎng)物質）【詳解】（1）通過觀察在固體培養(yǎng)基上形成的菌落，對篩選出的T-2毒素脫毒菌株AFJ-2和AFJ-3進行初步的鑒定。培養(yǎng)基里面的基本營養(yǎng)成分碳源、氮源，水和無機鹽（特殊營養(yǎng)物質），所以兩類菌株需要的營養(yǎng)除碳源、氮源外還應有水和無機鹽（特殊營養(yǎng)物質）。（2）由圖可以看出，有活細胞的共同培養(yǎng)的T-2毒素的含量，要低于其他組，所以推測兩類菌株對T-2毒素的脫毒方式最可能是利用微生物產酶（或代謝物）降解，（而不是物理吸附。）（3）上清液中含有細胞的代謝物，將胞外上清液和細胞內容物分別與T-2毒素反應2h后檢測T-2毒素含量，結果顯示，兩類菌株均出現(xiàn)與細胞內容物混合的T-2毒素含量顯著降低，與胞外上清液混合的T-2毒素含量無顯著變化，說明兩類菌株降解T-2毒素的活性物質均位于胞內；如果設計實驗，實驗的自變量應為細胞內容物的有無，因為①已經(jīng)做過一組實驗，所以再做實驗，其中對照組應為細胞內容物+T-2毒素，所以選ab。（4）A、看圖可知，AFJ-2將T-2毒素完全降解后加入AFJ-3，HT-2組下降，而不加AFJ-3的HT-2組基本不發(fā)生改變，所以AFJ-3能以HT-2為底物，A正確；B、同上，AFJ-3將T-2毒素完全降解后加入AFJ-2，NEO組下降，而不加AFJ-2的NEO組基本不發(fā)生改變，所以AFJ-2能以NEO為底物，B正確；C、看圖可知，AFJ-2將T-2毒素完全降解后加入AFJ-3，HT-2組下降的同時，AFJ-3+產物X組上升，且上升的量與下降的量基本相同，所以推測產物X是由HT-2和NEO轉化的產物，C正確；D、由圖看不出，兩組的下降的多少，比較不出脫毒效果，D錯誤。故選ABC。13．(1)無菌水（稀釋）涂布（平板）(2)不添加抗生素[(對照菌液OD值-實驗組菌液OD值)/(對照菌液OD值-空白培養(yǎng)體系OD值)]×100%(3)萘夫西林鈉1.454【分析】微生物常見的接種的方法：①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)基表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落?！驹斀狻浚?）為避免雜菌感染，用無菌水稀釋豆瓣醬醬醅得到菌液，然后用（稀釋）涂布（平板）法將菌液接種在固體培養(yǎng)基表面。（2）實驗的自變量為不同種類、不同濃度的抗生素，故該實驗中對照菌液組的處理方式與實驗組的區(qū)別是不添加抗生素。某實驗組菌液抗生素抑菌率為[(對照菌液菌體密度-實驗組菌液菌體密度)/(對照菌液菌體密度-空白培養(yǎng)體系菌體密度)]×100%，已知菌液吸光度與菌體密度成正比，故某實驗組菌液抗生素抑菌率的計算公式為[(對照菌液OD值-實驗組菌液OD值)/(對照菌液OD值-空白培養(yǎng)體系OD值)]×100%。（3）據(jù)圖可知，當萘夫西林鈉濃度為1.454μg/mL時，該抗生素對其他三種微生物（葡萄球菌S、解淀粉芽孢桿菌Ba和融合魏斯氏菌W）的抑菌率幾乎為100%，能夠實現(xiàn)對嗜鹽四聯(lián)球菌T的選擇培養(yǎng)。14．(1)消毒無菌水菌落特征(2)只接種Fg，不接種內生菌抑制率=（對照組菌落直徑-實驗組菌落直徑）/對照組菌落直徑×100%幾種內生菌對Fg均有抑制作用(3)綠色、橙紅色(4)BCDEFABDEF【分析】培養(yǎng)基：（1）根據(jù)是否加瓊脂等凝固劑分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基。（2）一般都含水、碳源、氮源和無機鹽；（3）培養(yǎng)真菌PH調至酸性、培養(yǎng)細菌PH調至中性或弱堿性、培養(yǎng)乳酸桿菌添加維生素；【詳解】（1）消毒指使用較為溫和的物理、化學或生物等方法殺死物體表面或內部的一部分微生物。取小麥種子用酒精沖洗表面進行消毒，研磨后加入適量無菌水進行梯度稀釋，接種至平板培養(yǎng)獲得內生菌，可根據(jù)顏色、性狀、隆起程度等菌落特征對菌種進行初步鑒定，挑取不同的單菌落進行純化，進而得到若干內生菌菌株。（2）篩選具有抑制Fg功能的內生菌可采用平板對峙培養(yǎng)法，即用直徑1cm的打孔器取Fg菌餅，接種于培養(yǎng)基中央，分別在不同平板上將等量待測內生菌接種在距Fg2cm處，以只接種Fg，不接種內生菌的平板做對照，以排除無關變量的干擾，增強實驗結果的說服力。一段時間后結果如圖1，測量各組Fg菌落半徑，根據(jù)抑制率=（對照組菌落直徑-實驗組菌落直徑）/對照組菌落直徑×100%，計算抑制率并繪制圖2。分析實驗結果可知，幾種內生菌的抑制率均高于對照組，說明幾種內生菌對Fg均有抑制作用。（3）AO染料可以通過完整的細胞膜，呈現(xiàn)綠色熒光，故圖中a處的熒光顏色是綠色；JB7使Fg細胞膜受到損傷，PI染料則通過破損的細胞膜，呈現(xiàn)橙紅色熒光，圖中b處的熒光顏色是橙紅