eIF3a在胃癌中的表達(dá)及其臨床意義的深度剖析一、引言1.1研究背景與意義胃癌是全球范圍內(nèi)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康。據(jù)統(tǒng)計(jì)，每年全球新增胃癌病例眾多，中國(guó)作為人口大國(guó)，胃癌的發(fā)病率和死亡率均處于較高水平，給患者家庭和社會(huì)帶來(lái)了沉重的負(fù)擔(dān)。早期胃癌患者通過(guò)手術(shù)等治療手段，5年生存率相對(duì)較高；然而，由于胃癌早期癥狀隱匿，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，此時(shí)病情進(jìn)展迅速，治療效果往往不盡人意，患者的生存質(zhì)量和生存期受到極大影響。真核翻譯起始因子3a（eIF3a）作為翻譯起始因子中最大且最復(fù)雜的eIF3的最大亞基，在基因表達(dá)過(guò)程里起著關(guān)鍵的調(diào)控作用?，F(xiàn)有研究表明，eIF3a在多種腫瘤組織中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，包括肺癌、乳腺癌、宮頸癌、胃癌和食管癌等，并且與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、臨床分期以及預(yù)后密切相關(guān)。在胃癌中，eIF3a可能參與了細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖和細(xì)胞周期的進(jìn)展等過(guò)程。通過(guò)對(duì)eIF3a在胃癌組織、癌旁組織及正常胃組織中表達(dá)水平的檢測(cè)與分析，研究其與胃癌臨床病理學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系，有助于深入了解胃癌的發(fā)病機(jī)制，為胃癌的早期診斷提供新的生物標(biāo)志物。早期準(zhǔn)確診斷胃癌，能夠使患者更早地接受有效的治療，提高治療成功率，改善預(yù)后。同時(shí)，明確eIF3a在胃癌中的作用機(jī)制，還能為胃癌的治療提供新的靶點(diǎn)和思路，推動(dòng)開(kāi)發(fā)更具針對(duì)性和有效性的治療方法，這對(duì)于提高胃癌患者的生存率和生存質(zhì)量具有重要的臨床意義和應(yīng)用價(jià)值，有望為胃癌的診治帶來(lái)新的突破，減輕患者痛苦，降低社會(huì)醫(yī)療負(fù)擔(dān)。1.2研究目的與問(wèn)題提出本研究旨在深入探究eIF3a在胃癌中的表達(dá)情況，具體而言，通過(guò)精準(zhǔn)檢測(cè)eIF3a在胃癌組織、癌旁組織以及正常胃組織中的表達(dá)水平，運(yùn)用科學(xué)的實(shí)驗(yàn)方法和數(shù)據(jù)分析手段，明確其表達(dá)差異。在此基礎(chǔ)上，詳細(xì)分析eIF3a表達(dá)水平與胃癌患者臨床病理學(xué)參數(shù)之間的內(nèi)在聯(lián)系，這些參數(shù)包括但不限于腫瘤的浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移狀況以及TNM分期等，以揭示eIF3a在胃癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中所扮演的角色和發(fā)揮的作用。通過(guò)對(duì)這些問(wèn)題的研究，期望能夠?yàn)槲赴┑脑缙谠\斷提供新的生物標(biāo)志物，為臨床醫(yī)生在胃癌的早期篩查、診斷工作中提供更有力的工具和依據(jù)，從而實(shí)現(xiàn)胃癌的早發(fā)現(xiàn)、早治療。同時(shí)，本研究也致力于為胃癌的治療提供新的靶點(diǎn)和策略，期望通過(guò)對(duì)eIF3a作用機(jī)制的深入了解，開(kāi)發(fā)出針對(duì)eIF3a的治療方法，如靶向藥物等，為胃癌患者帶來(lái)更有效的治療選擇，改善患者的預(yù)后和生存質(zhì)量。1.3國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀在國(guó)外，對(duì)eIF3a的研究開(kāi)展得相對(duì)較早，在多個(gè)層面深入探索了其在胃癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的作用機(jī)制。有研究通過(guò)基因敲除和過(guò)表達(dá)技術(shù)，深入探究eIF3a對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，發(fā)現(xiàn)敲低eIF3a基因后，胃癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力明顯減弱，細(xì)胞周期也出現(xiàn)阻滯。在信號(hào)通路研究方面，發(fā)現(xiàn)eIF3a可以通過(guò)激活PI3K/Akt信號(hào)通路，促進(jìn)胃癌細(xì)胞的存活和增殖，抑制細(xì)胞凋亡。此外，國(guó)外學(xué)者還關(guān)注eIF3a與其他分子的相互作用，有研究表明eIF3a能夠與某些轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，調(diào)控下游基因的表達(dá)，進(jìn)而影響胃癌的發(fā)生發(fā)展。在臨床研究上，國(guó)外也有不少對(duì)eIF3a作為胃癌診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)的探索，通過(guò)對(duì)大量胃癌患者樣本的檢測(cè)分析，評(píng)估eIF3a在胃癌早期診斷和預(yù)后判斷中的價(jià)值。國(guó)內(nèi)在eIF3a與胃癌的研究領(lǐng)域也取得了一系列成果。有研究運(yùn)用免疫組化、Westernblot等實(shí)驗(yàn)技術(shù)，檢測(cè)eIF3a在不同分期胃癌組織中的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)eIF3a表達(dá)與胃癌的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)，為臨床評(píng)估病情提供了參考。從細(xì)胞實(shí)驗(yàn)角度，國(guó)內(nèi)學(xué)者發(fā)現(xiàn)eIF3a可以調(diào)節(jié)胃癌細(xì)胞中某些關(guān)鍵蛋白的表達(dá)，從而影響細(xì)胞的生物學(xué)特性，如通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞周期蛋白的表達(dá)，促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方面，構(gòu)建胃癌小鼠模型，研究eIF3a對(duì)腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的影響，進(jìn)一步驗(yàn)證了eIF3a在胃癌發(fā)展中的重要作用。同時(shí)，國(guó)內(nèi)也在積極探索針對(duì)eIF3a的治療策略，如研發(fā)靶向eIF3a的小分子抑制劑，為胃癌的治療提供新的思路。盡管?chē)?guó)內(nèi)外在eIF3a與胃癌的研究上已取得諸多成果，但仍存在一些不足。在作用機(jī)制研究方面，雖然已揭示了eIF3a參與的部分信號(hào)通路和分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，但對(duì)于其在復(fù)雜的腫瘤微環(huán)境中如何與其他因素相互作用，仍有待深入研究。在臨床應(yīng)用上，目前eIF3a作為胃癌診斷和預(yù)后標(biāo)志物的準(zhǔn)確性和特異性還需要進(jìn)一步提高，且針對(duì)eIF3a的靶向治療藥物，大多還處于實(shí)驗(yàn)室研究或臨床試驗(yàn)階段，距離廣泛應(yīng)用于臨床還有一定的距離。此外，不同研究之間的結(jié)果存在一定差異，可能與研究方法、樣本來(lái)源等因素有關(guān)，這也需要進(jìn)一步的大樣本、多中心研究來(lái)驗(yàn)證和統(tǒng)一結(jié)論。二、理論基礎(chǔ)與相關(guān)技術(shù)2.1eIF3a的結(jié)構(gòu)與功能2.1.1eIF3a的分子結(jié)構(gòu)eIF3a作為真核翻譯起始因子3（eIF3）的最大亞基，在蛋白質(zhì)翻譯起始過(guò)程中扮演著不可或缺的角色。從基因?qū)用鎭?lái)看，編碼eIF3a的基因在人類(lèi)中定位于10q26.11，其核苷酸序列蘊(yùn)含著合成特定蛋白質(zhì)的遺傳信息。通過(guò)轉(zhuǎn)錄過(guò)程，基因信息被轉(zhuǎn)化為信使核糖核酸（mRNA），隨后mRNA進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，在核糖體等多種分子機(jī)器的參與下進(jìn)行翻譯，最終合成eIF3a蛋白。eIF3a蛋白具有獨(dú)特的氨基酸序列和結(jié)構(gòu)特征。它由多個(gè)結(jié)構(gòu)域組成，其中犰狳樣螺旋域較為突出，這種結(jié)構(gòu)域賦予了eIF3a特定的空間構(gòu)象和功能特性，使其能夠與其他分子發(fā)生特異性相互作用。eIF3a含有多個(gè)功能位點(diǎn)，這些位點(diǎn)對(duì)于其與其他翻譯起始因子以及mRNA、核糖體等的結(jié)合至關(guān)重要，通過(guò)這些相互作用，eIF3a在翻譯起始過(guò)程中發(fā)揮著核心作用。在真核翻譯起始因子3（eIF3）復(fù)合體中，eIF3a與其他12個(gè)亞基（EIF3B、EIF3C、EIF3D、EIF3E、EIF3F、EIF3G、EIF3H、EIF3I、EIF3J、EIF3K、EIF3L和EIF3M）共同協(xié)作。整個(gè)eIF3復(fù)合體可分為三個(gè)穩(wěn)定模塊，其中模塊A由EIF3A、EIF3B、EIF3G和EIF3I組成，eIF3a作為模塊A的重要組成部分，通過(guò)與其他亞基的緊密結(jié)合，維持著模塊A的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，進(jìn)而保障eIF3復(fù)合體整體結(jié)構(gòu)和功能的正常發(fā)揮。這種復(fù)雜的分子結(jié)構(gòu)和組成方式，為eIF3a在細(xì)胞內(nèi)執(zhí)行多種生物學(xué)功能奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。2.1.2在翻譯起始中的作用機(jī)制在真核生物細(xì)胞內(nèi)，mRNA翻譯過(guò)程起始階段是一個(gè)高度有序且復(fù)雜的分子事件，需要眾多翻譯起始因子的協(xié)同參與，其中eIF3a起著關(guān)鍵作用。在起始階段，eIF3a首先與40S核糖體亞基緊密結(jié)合，這一結(jié)合過(guò)程對(duì)于穩(wěn)定40S核糖體亞基的結(jié)構(gòu)至關(guān)重要，使其能夠處于一個(gè)適宜參與翻譯起始的狀態(tài)。同時(shí)，eIF3a還參與了mRNA的招募，它通過(guò)與mRNA的5’非翻譯區(qū)（5’UTR）相互作用，幫助mRNA準(zhǔn)確地定位到40S核糖體亞基上，從而促進(jìn)了43S前起始復(fù)合物（包含40S核糖體亞基、eIF3、eIF1、eIF1A、eIF2-GTP-Met-tRNAi等）的形成。在這個(gè)過(guò)程中，eIF3a憑借其自身的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和功能位點(diǎn)，與其他翻譯起始因子之間形成了復(fù)雜的相互作用網(wǎng)絡(luò)，共同推動(dòng)翻譯起始復(fù)合物的組裝。eIF3a在掃描起始密碼子的過(guò)程中也發(fā)揮著重要作用。當(dāng)43S前起始復(fù)合物在mRNA上掃描時(shí)，eIF3a能夠協(xié)助識(shí)別起始密碼子AUG，確保翻譯起始的準(zhǔn)確性。研究表明，eIF3a與起始密碼子周?chē)暮塑账嵝蛄写嬖谔禺愋韵嗷プ饔茫@種相互作用有助于穩(wěn)定起始復(fù)合物的結(jié)構(gòu)，促進(jìn)核糖體亞基與mRNA之間的正確結(jié)合，使得翻譯起始能夠順利進(jìn)行。一旦起始密碼子被識(shí)別，eIF3a還參與了60S核糖體亞基的結(jié)合，促使48S起始復(fù)合物進(jìn)一步組裝形成80S起始復(fù)合物，至此，翻譯起始階段完成，蛋白質(zhì)合成進(jìn)入延伸階段。2.1.3對(duì)細(xì)胞周期的影響細(xì)胞周期是細(xì)胞生命活動(dòng)的重要過(guò)程，包括G1期、S期、G2期和M期，每個(gè)時(shí)期都受到嚴(yán)格的調(diào)控，以確保細(xì)胞的正常生長(zhǎng)、增殖和分化。eIF3a在細(xì)胞周期調(diào)控中扮演著重要角色，通過(guò)多種途徑影響細(xì)胞周期的進(jìn)程。在G1期，eIF3a可以調(diào)節(jié)細(xì)胞周期蛋白的表達(dá)。細(xì)胞周期蛋白是一類(lèi)在細(xì)胞周期中周期性表達(dá)的蛋白質(zhì)，它們與細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)性激酶（CDK）結(jié)合形成復(fù)合物，進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的不同階段。eIF3a通過(guò)調(diào)控細(xì)胞周期蛋白D（CyclinD）等的翻譯過(guò)程，影響CyclinD-CDK4/6復(fù)合物的形成，從而對(duì)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期的進(jìn)程產(chǎn)生影響。當(dāng)eIF3a表達(dá)水平升高時(shí)，會(huì)促進(jìn)CyclinD的翻譯，增加CyclinD-CDK4/6復(fù)合物的活性，使細(xì)胞更容易通過(guò)G1期限制點(diǎn)，進(jìn)入S期，促進(jìn)細(xì)胞增殖；反之，當(dāng)eIF3a表達(dá)受到抑制時(shí)，CyclinD的翻譯減少，細(xì)胞進(jìn)入S期的進(jìn)程受阻，細(xì)胞增殖受到抑制。在S期，eIF3a參與DNA合成相關(guān)蛋白的翻譯調(diào)控。DNA合成是S期的關(guān)鍵事件，需要多種蛋白質(zhì)的參與，如DNA聚合酶、核苷酸還原酶等。eIF3a能夠通過(guò)與這些蛋白的mRNA相互作用，促進(jìn)其翻譯過(guò)程，為DNA合成提供充足的蛋白質(zhì)原料，保障DNA復(fù)制的順利進(jìn)行。如果eIF3a功能異常，會(huì)導(dǎo)致DNA合成相關(guān)蛋白的合成不足，影響DNA復(fù)制的效率和準(zhǔn)確性，進(jìn)而使細(xì)胞周期停滯在S期。在G2/M期，eIF3a對(duì)細(xì)胞進(jìn)入有絲分裂也起著重要作用。它可以調(diào)節(jié)一些與有絲分裂相關(guān)蛋白的表達(dá)，如周期蛋白B（CyclinB）等。CyclinB與CDK1結(jié)合形成復(fù)合物，是細(xì)胞進(jìn)入M期的關(guān)鍵調(diào)控因子。eIF3a通過(guò)調(diào)控CyclinB的翻譯，影響CyclinB-CDK1復(fù)合物的活性，從而控制細(xì)胞從G2期進(jìn)入M期，對(duì)細(xì)胞的有絲分裂進(jìn)程產(chǎn)生影響。2.2胃癌的病理與臨床特征2.2.1胃癌的病理類(lèi)型與分期胃癌的病理類(lèi)型多樣，不同類(lèi)型在生物學(xué)行為、治療反應(yīng)和預(yù)后等方面存在顯著差異。根據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）的分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)，常見(jiàn)的胃癌病理類(lèi)型包括腺癌、腺鱗癌、鱗狀細(xì)胞癌、未分化癌和類(lèi)癌等。其中，腺癌最為常見(jiàn)，約占胃癌的90%以上，它又可進(jìn)一步細(xì)分為乳頭狀腺癌、管狀腺癌、低分化腺癌、黏液腺癌和印戒細(xì)胞癌等亞型。乳頭狀腺癌癌細(xì)胞呈乳頭狀結(jié)構(gòu)，乳頭由纖維血管軸心和覆蓋其表面的癌細(xì)胞組成，惡性程度相對(duì)較低；管狀腺癌癌細(xì)胞排列成腺管狀，根據(jù)腺管的分化程度又分為高分化、中分化和低分化管狀腺癌，高分化管狀腺癌腺管結(jié)構(gòu)規(guī)則，癌細(xì)胞異型性小，而低分化管狀腺癌腺管結(jié)構(gòu)不完整，癌細(xì)胞異型性較大，惡性程度較高；黏液腺癌癌細(xì)胞分泌大量黏液，在組織中形成黏液湖，癌細(xì)胞漂浮其中；印戒細(xì)胞癌癌細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)充滿(mǎn)黏液，將細(xì)胞核擠向一側(cè)，形似印戒，該型胃癌惡性程度高，侵襲性強(qiáng)，預(yù)后較差。胃癌的分期對(duì)于指導(dǎo)治療和判斷預(yù)后具有重要意義。目前臨床上廣泛采用的是國(guó)際抗癌聯(lián)盟（UICC）和美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)（AJCC）聯(lián)合制定的TNM分期系統(tǒng)。T代表原發(fā)腫瘤的浸潤(rùn)深度，T1表示腫瘤侵犯黏膜層或黏膜下層，T2表示腫瘤侵犯固有肌層，T3表示腫瘤侵犯至漿膜層，T4表示腫瘤侵犯鄰近組織或器官。N代表區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，N0表示無(wú)區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，N1表示有1-2個(gè)區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，N2表示有3-6個(gè)區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，N3表示有7個(gè)及以上區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。M代表遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，M0表示無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，M1表示有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。根據(jù)T、N、M的不同組合，將胃癌分為Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期，其中Ⅰ期為早期胃癌，Ⅱ期和Ⅲ期為進(jìn)展期胃癌，Ⅳ期為晚期胃癌。早期胃癌患者通過(guò)手術(shù)切除，5年生存率較高；而晚期胃癌患者由于腫瘤的廣泛轉(zhuǎn)移，治療難度大，預(yù)后較差。2.2.2臨床癥狀與診斷方法胃癌的臨床癥狀在疾病的不同階段表現(xiàn)各異，且早期癥狀往往不典型，容易被忽視。在早期，部分患者可能無(wú)明顯癥狀，或僅出現(xiàn)一些非特異性癥狀，如消化不良、上腹部隱痛、飽脹不適、食欲不振等，這些癥狀與胃炎、胃潰瘍等良性疾病相似，難以引起患者的重視。隨著病情的進(jìn)展，患者會(huì)逐漸出現(xiàn)較為明顯的癥狀。上腹痛是胃癌最常見(jiàn)的癥狀之一，疼痛性質(zhì)多樣，可為隱痛、脹痛、刺痛或燒灼樣痛，疼痛程度逐漸加重，且一般的抑酸劑或胃黏膜保護(hù)劑治療效果不佳?；颊哌€可能出現(xiàn)惡心、嘔吐，當(dāng)腫瘤發(fā)生在幽門(mén)附近時(shí)，可導(dǎo)致幽門(mén)梗阻，引起嘔吐，嘔吐物多為宿食，有酸臭味；當(dāng)腫瘤侵犯食管下端時(shí)，可出現(xiàn)吞咽困難。此外，患者還可能伴有消瘦、乏力、貧血等全身癥狀，這是由于腫瘤消耗機(jī)體營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，以及腫瘤導(dǎo)致的慢性失血等原因引起的。如果腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移，還會(huì)出現(xiàn)相應(yīng)轉(zhuǎn)移部位的癥狀，如轉(zhuǎn)移至肝臟可引起肝區(qū)疼痛、黃疸；轉(zhuǎn)移至肺部可出現(xiàn)咳嗽、咯血、呼吸困難等。胃癌的診斷需要綜合運(yùn)用多種方法，以提高診斷的準(zhǔn)確性。胃鏡檢查是診斷胃癌的重要手段，通過(guò)胃鏡可以直接觀察胃內(nèi)病變的部位、形態(tài)、大小等，并可取組織進(jìn)行病理活檢，病理活檢是確診胃癌的金標(biāo)準(zhǔn)。在胃鏡檢查時(shí)，醫(yī)生會(huì)對(duì)可疑病變部位進(jìn)行多點(diǎn)活檢，以確保獲取足夠的組織進(jìn)行病理診斷。影像學(xué)檢查在胃癌的診斷中也起著重要作用。上消化道鋇餐造影可以觀察食管、胃和十二指腸的形態(tài)、輪廓、蠕動(dòng)情況等，對(duì)于發(fā)現(xiàn)較大的病變具有一定價(jià)值，但對(duì)于早期胃癌的診斷敏感性相對(duì)較低。CT檢查可以清晰地顯示胃壁的厚度、腫瘤的大小、侵犯范圍以及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等，有助于胃癌的分期和制定治療方案。MRI檢查對(duì)軟組織的分辨力較高，在評(píng)估胃癌對(duì)周?chē)M織和器官的侵犯方面具有一定優(yōu)勢(shì)，尤其適用于對(duì)CT造影劑過(guò)敏或需要進(jìn)一步了解病變細(xì)節(jié)的患者。正電子發(fā)射斷層顯像（PET-CT）能夠從代謝角度檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的活性，對(duì)于發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移灶具有較高的敏感性，但由于其價(jià)格昂貴，一般不作為常規(guī)檢查手段，主要用于臨床高度懷疑轉(zhuǎn)移但其他檢查方法難以明確的患者。腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)也是胃癌診斷的輔助手段之一，常用的腫瘤標(biāo)志物包括癌胚抗原（CEA）、糖類(lèi)抗原19-9（CA19-9）、糖類(lèi)抗原72-4（CA72-4）等。CEA是一種廣譜腫瘤標(biāo)志物，在胃癌患者中可出現(xiàn)升高，但特異性不高，其他惡性腫瘤以及一些良性疾病如結(jié)腸炎、胰腺炎等也可能導(dǎo)致CEA升高；CA19-9在胃癌、胰腺癌等消化系統(tǒng)腫瘤中常升高，其水平與腫瘤的分期和預(yù)后相關(guān)；CA72-4對(duì)胃癌的診斷具有較高的特異性，尤其在胃癌早期即可升高，但其敏感性相對(duì)較低。腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)一般不能單獨(dú)用于胃癌的診斷，而是與其他檢查方法相結(jié)合，有助于提高診斷的準(zhǔn)確性和對(duì)病情的評(píng)估。2.3檢測(cè)eIF3a表達(dá)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)2.3.1免疫組織化學(xué)(SP)法原理與步驟免疫組織化學(xué)(SP)法是基于抗原抗體特異性結(jié)合的原理，用于檢測(cè)組織或細(xì)胞內(nèi)特定抗原的一種常用技術(shù)，在eIF3a表達(dá)檢測(cè)中發(fā)揮著重要作用。其基本原理是，先將組織或細(xì)胞中的某些化學(xué)物質(zhì)提取出來(lái)，以此作為抗原或半抗原免疫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，制備特異性抗體，即第一抗體。該第一抗體能夠特異性識(shí)別并結(jié)合組織或細(xì)胞中的目標(biāo)抗原，也就是eIF3a。然后，用生物素等處理過(guò)的第二抗體與第一抗體結(jié)合，形成抗原-一抗-二抗復(fù)合物。其中，第二抗體與第一抗體的結(jié)合具有高度特異性，進(jìn)一步保證了檢測(cè)的準(zhǔn)確性。由于抗體與抗原結(jié)合后形成的免疫復(fù)合物本身是無(wú)色的，難以直接觀察，所以需要借助鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶（SP）和顯色劑來(lái)使抗原抗體反應(yīng)部位可視化。SP中的過(guò)氧化物酶可以催化底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，生成有色的不溶性產(chǎn)物，常用的顯色劑為3,3'-二氨基聯(lián)苯胺（DAB），它在過(guò)氧化物酶的作用下會(huì)被氧化形成棕黃色的沉淀，從而在顯微鏡下能夠清晰地觀察到eIF3a在組織或細(xì)胞中的分布位置和表達(dá)情況，實(shí)現(xiàn)對(duì)eIF3a的定位、定性及半定量研究。在實(shí)際操作中，首先要進(jìn)行石蠟切片制作。取胃癌組織、癌旁組織及正常胃組織樣本，用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗后，放入4%多聚甲醛磷酸鹽緩沖液內(nèi)固定12小時(shí)，以保持組織的形態(tài)和抗原性。接著進(jìn)行脫水處理，倒去固定液，用蒸餾水沖洗3次，再用50%酒精沖洗2次，然后依次用70%酒精浸泡1天、80%酒精過(guò)夜、95%酒精浸泡3小時(shí)，最后用無(wú)水酒精（Ⅰ）、（Ⅱ）各浸泡2小時(shí)，去除組織中的水分。脫水后的組織進(jìn)行透明處理，將組織放入1:1無(wú)水酒精二甲苯溶液中浸泡45分鐘，再分別用二甲苯（Ⅰ）、（Ⅱ）各浸泡30分鐘，使組織變得透明，便于后續(xù)的包埋。包埋過(guò)程在恒溫箱內(nèi)進(jìn)行，先將組織浸入1:1二甲苯石蠟（58℃）溶液中45分鐘，然后依次在石蠟（Ⅰ）、（Ⅱ）、（Ⅲ）中浸泡共2.5小時(shí)，最后用石蠟（Ⅲ）包埋組織。包埋后的組織塊經(jīng)修整后，用切片機(jī)切成5-7μm的石蠟帶，將石蠟帶在50℃溫水中展片，用處理干凈并涂有防脫劑多聚賴(lài)氨酸的載玻片撈片，使組織帶黏在載玻片上，再將載玻片放入68℃恒溫箱內(nèi)烤片2小時(shí)。制成石蠟切片后，進(jìn)行SP三步法檢測(cè)。脫蠟是第一步，脫蠟前將組織芯片在室溫中放置60分鐘或60℃恒溫箱中烘烤20分鐘，然后用二甲苯（Ⅰ）、（Ⅱ）浸泡共25分鐘，去除石蠟。脫蠟后進(jìn)行水化，依次用無(wú)水酒精（Ⅰ）、（Ⅱ）各浸泡2分鐘，再下行至95%、80%、70%酒精（Ⅰ）（Ⅱ）各浸泡2分鐘，使組織恢復(fù)到含水狀態(tài)。接著用PBS沖洗2-3次，每次5分鐘，以去除殘留的酒精。為了滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性，需用3%H?O?去離子水（或80%甲醇）孵育10分鐘，之后再用PBS沖洗2-3次，每次5分鐘。由于組織在固定和包埋過(guò)程中，抗原決定簇可能會(huì)被遮蔽，所以需要進(jìn)行抗原修復(fù)，將切片置于0.01M枸櫞酸緩沖液（PH6.0）中，用煮沸（95℃，15-20分鐘）的方法使抗原暴露，自然冷卻20分鐘以上，再用冷水沖洗加快冷卻至室溫，隨后用PBS沖洗2-3次，每次5分鐘。滴加正常山羊血清封閉液，室溫孵育20分鐘，甩去多余液體，以減少非特異性染色。滴加針對(duì)eIF3a的第一抗體50μl，室溫靜置1小時(shí)，或者37℃1小時(shí)，或者4℃過(guò)夜（需在37℃復(fù)溫45分鐘），使第一抗體與eIF3a特異性結(jié)合。用PBS沖洗2-3次，每次5分鐘，洗去未結(jié)合的第一抗體。滴加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的第二抗體40-50μl，室溫靜置1小時(shí)，或37℃1小時(shí)，使第二抗體與第一抗體結(jié)合。再次用PBS沖洗2-3次，每次5分鐘，然后滴加SP（鏈霉親和素-過(guò)氧化物酶），室溫或37℃孵育30分鐘-1小時(shí)。用PBS沖洗2-3次，每次5分鐘后，進(jìn)行顯色，用DAB顯色5-10分鐘，在顯微鏡下觀察染色程度，以胞漿呈棕色者判定為陽(yáng)性細(xì)胞，即eIF3a表達(dá)陽(yáng)性的細(xì)胞。顯色完成后，用自來(lái)水沖洗10分鐘終止反應(yīng)，再用蘇木精復(fù)染2分鐘，鹽酸酒精分化，自來(lái)水沖洗10-15分鐘，最后進(jìn)行常規(guī)脫水、透明、封片，用中性樹(shù)膠滴在組織旁邊，再用蓋玻片蓋上，在顯微鏡下觀察結(jié)果。每張切片選擇5個(gè)高倍鏡視野（400X），應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行定量灰度掃描后進(jìn)行分析，從而判斷eIF3a在不同組織中的表達(dá)水平差異。2.3.2WesternBlot法原理與應(yīng)用WesternBlot法，又稱(chēng)蛋白質(zhì)免疫印跡法，是一種廣泛應(yīng)用于檢測(cè)蛋白質(zhì)表達(dá)水平的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，在研究eIF3a蛋白表達(dá)量方面具有重要價(jià)值。其原理基于蛋白質(zhì)的電泳分離和抗原抗體特異性結(jié)合。首先，將提取的組織或細(xì)胞中的總蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）。在電場(chǎng)的作用下，蛋白質(zhì)根據(jù)其分子量大小在凝膠中發(fā)生遷移，分子量較小的蛋白質(zhì)遷移速度較快，分子量較大的蛋白質(zhì)遷移速度較慢，從而使不同分子量的蛋白質(zhì)在凝膠上得以分離。常用的PAGE有SDS-PAGE（十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳），SDS是一種陰離子去污劑，它能與蛋白質(zhì)分子結(jié)合，使蛋白質(zhì)分子帶上大量的負(fù)電荷，并且消除蛋白質(zhì)分子之間的電荷差異和結(jié)構(gòu)差異，使蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中的遷移率主要取決于其分子量大小。通過(guò)這種方式，可以將eIF3a蛋白與其他蛋白質(zhì)分離開(kāi)來(lái)。電泳結(jié)束后，需要將凝膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到固相膜上，常用的固相膜有硝酸纖維素膜（NC膜）或聚偏二氟乙烯膜（PVDF膜）。轉(zhuǎn)移過(guò)程通常采用電轉(zhuǎn)印的方法，在電場(chǎng)的作用下，蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到固相膜上，并且保持其在凝膠上的相對(duì)位置不變。這樣，固相膜上就固定了與凝膠上相對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)條帶，其中包含了目標(biāo)蛋白eIF3a。接著，利用封閉液對(duì)固相膜進(jìn)行封閉，封閉液中含有一些蛋白質(zhì)，如脫脂奶粉或牛血清白蛋白（BSA）等，它們能夠占據(jù)固相膜上未結(jié)合蛋白質(zhì)的位點(diǎn)，防止后續(xù)實(shí)驗(yàn)中抗體的非特異性結(jié)合，提高檢測(cè)的特異性。封閉完成后，將固相膜與特異性識(shí)別eIF3a的第一抗體孵育，第一抗體能夠與固相膜上的eIF3a蛋白特異性結(jié)合。經(jīng)過(guò)洗滌步驟，去除未結(jié)合的第一抗體后，再將固相膜與標(biāo)記有辣根過(guò)氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AP）等酶的第二抗體孵育，第二抗體能夠與第一抗體特異性結(jié)合，從而形成抗原-一抗-二抗復(fù)合物。最后，加入相應(yīng)的酶底物進(jìn)行顯色反應(yīng)。如果第二抗體標(biāo)記的是HRP，常用的底物是化學(xué)發(fā)光試劑，如魯米諾等，HRP能夠催化魯米諾發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生熒光信號(hào)，通過(guò)曝光膠片或使用化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)可以檢測(cè)到熒光信號(hào)，從而顯示出eIF3a蛋白的條帶位置和強(qiáng)度；如果第二抗體標(biāo)記的是AP，常用的底物是5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸（BCIP）和氮藍(lán)四唑（NBT），AP催化BCIP和NBT發(fā)生反應(yīng)，生成紫色沉淀，使eIF3a蛋白條帶顯色。通過(guò)分析條帶的強(qiáng)度，可以半定量地評(píng)估eIF3a蛋白的表達(dá)量，條帶強(qiáng)度越強(qiáng)，說(shuō)明eIF3a蛋白的表達(dá)量越高；反之，條帶強(qiáng)度越弱，eIF3a蛋白的表達(dá)量越低。在檢測(cè)eIF3a蛋白表達(dá)量時(shí)，WesternBlot法具有較高的靈敏度和特異性，能夠準(zhǔn)確地檢測(cè)出不同組織或細(xì)胞中eIF3a蛋白表達(dá)量的差異，為研究eIF3a在胃癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的作用機(jī)制提供重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。通過(guò)比較胃癌組織、癌旁組織及正常胃組織中eIF3a蛋白條帶的強(qiáng)度，可以直觀地了解eIF3a蛋白在不同組織中的表達(dá)水平變化，進(jìn)而分析其與胃癌臨床病理學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系，如與腫瘤的浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等的相關(guān)性。2.3.3實(shí)時(shí)RT-PCR技術(shù)原理與分析實(shí)時(shí)RT-PCR（逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）技術(shù)是一種在分子生物學(xué)領(lǐng)域廣泛應(yīng)用的技術(shù)，主要用于定量檢測(cè)特定RNA的表達(dá)水平，在檢測(cè)eIF3amRNA水平方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。其基本原理是先以RNA為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成互補(bǔ)DNA（cDNA），然后以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，同時(shí)利用熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR擴(kuò)增過(guò)程，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板RNA含量的定量分析。在檢測(cè)eIF3amRNA水平時(shí)，首先從胃癌組織、癌旁組織及正常胃組織樣本中提取總RNA。提取過(guò)程通常使用TRIzol試劑等，TRIzol試劑能夠裂解細(xì)胞，使細(xì)胞中的RNA釋放出來(lái)，并通過(guò)氯仿抽提、異丙醇沉淀等步驟將RNA分離純化出來(lái)。提取的總RNA需進(jìn)行質(zhì)量和濃度檢測(cè)，常用的方法是通過(guò)分光光度計(jì)測(cè)定其在260nm和280nm處的吸光度，根據(jù)A???/A???的比值來(lái)判斷RNA的純度，一般比值在1.8-2.0之間表示RNA純度較高。同時(shí)，根據(jù)A???的吸光度值計(jì)算RNA的濃度。獲得高質(zhì)量的總RNA后，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。在逆轉(zhuǎn)錄酶、引物（如隨機(jī)引物、寡聚dT引物或特異性引物）、dNTPs（脫氧核糖核苷三磷酸）等的作用下，以總RNA為模板合成cDNA。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系中的各種成分相互協(xié)作，逆轉(zhuǎn)錄酶能夠以RNA為模板，按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則合成cDNA鏈，引物則為逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)提供起始位點(diǎn)。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)完成后，得到的cDNA即可作為后續(xù)PCR擴(kuò)增的模板。PCR擴(kuò)增是實(shí)時(shí)RT-PCR技術(shù)的關(guān)鍵步驟。在PCR反應(yīng)體系中，加入cDNA模板、特異性引物（針對(duì)eIF3a基因設(shè)計(jì)的上下游引物）、dNTPs、DNA聚合酶、緩沖液等成分。DNA聚合酶以cDNA為模板，在引物的引導(dǎo)下，按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，從引物的3'端開(kāi)始延伸，合成新的DNA鏈。通過(guò)反復(fù)進(jìn)行變性、退火和延伸三個(gè)步驟的循環(huán)，使目的基因（eIF3a基因）的拷貝數(shù)呈指數(shù)級(jí)增長(zhǎng)。在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，加入熒光染料或熒光標(biāo)記的探針來(lái)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物的積累。常用的熒光染料有SYBRGreenⅠ，它能夠與雙鏈DNA結(jié)合，在激發(fā)光的照射下發(fā)出熒光，熒光強(qiáng)度與雙鏈DNA的含量成正比。隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，擴(kuò)增產(chǎn)物不斷增加，SYBRGreenⅠ與雙鏈DNA結(jié)合的量也不斷增加，熒光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)。通過(guò)熒光定量PCR儀實(shí)時(shí)檢測(cè)熒光信號(hào)的變化，并以循環(huán)數(shù)（Ct值）來(lái)表示熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定閾值時(shí)所經(jīng)歷的PCR循環(huán)次數(shù)。Ct值與起始模板的含量呈負(fù)相關(guān)，即起始模板中eIF3amRNA的含量越高，Ct值越小；反之，起始模板中eIF3amRNA的含量越低，Ct值越大。為了準(zhǔn)確分析eIF3amRNA的表達(dá)水平，通常會(huì)選擇一個(gè)內(nèi)參基因，如β-actin、GAPDH等。內(nèi)參基因在不同組織和細(xì)胞中的表達(dá)相對(duì)穩(wěn)定，其表達(dá)水平不受實(shí)驗(yàn)條件和處理因素的影響。在同一反應(yīng)體系中，同時(shí)對(duì)eIF3a基因和內(nèi)參基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，通過(guò)比較eIF3a基因與內(nèi)參基因的Ct值，采用相對(duì)定量方法（如2?ΔΔCt法）來(lái)計(jì)算eIF3amRNA在不同組織中的相對(duì)表達(dá)量。首先計(jì)算ΔCt值，即目的基因（eIF3a）的Ct值減去內(nèi)參基因的Ct值；然后計(jì)算ΔΔCt值，即實(shí)驗(yàn)組的ΔCt值減去對(duì)照組的ΔCt值；最后根據(jù)2?ΔΔCt公式計(jì)算出實(shí)驗(yàn)組中eIF3amRNA相對(duì)于對(duì)照組的表達(dá)倍數(shù)。通過(guò)這種方法，可以消除實(shí)驗(yàn)過(guò)程中由于RNA提取效率、逆轉(zhuǎn)錄效率等因素造成的誤差，準(zhǔn)確地反映出eIF3amRNA在胃癌組織、癌旁組織及正常胃組織中的表達(dá)差異，為研究eIF3a在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的作用機(jī)制提供重要的分子生物學(xué)數(shù)據(jù)。三、研究設(shè)計(jì)與方法3.1研究對(duì)象選取3.1.1樣本來(lái)源本研究的樣本來(lái)源于[具體醫(yī)院名稱(chēng)]。在[具體時(shí)間段]內(nèi)，收集了經(jīng)手術(shù)切除且病理確診為胃癌的患者的手術(shù)標(biāo)本。其中，胃癌組織樣本直接取自手術(shù)切除的腫瘤部位，癌旁組織樣本則取自距離腫瘤邊緣[X]cm以上的胃組織，以確保癌旁組織未受腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)。正常胃組織樣本來(lái)源于因其他良性疾?。ㄈ缥赶⑷?、胃潰瘍等，排除胃癌及其他惡性腫瘤相關(guān)疾病）接受胃部分切除術(shù)的患者，取材部位為遠(yuǎn)離病變部位的正常胃黏膜組織。所有樣本在獲取后，立即進(jìn)行處理，一部分樣本用4%多聚甲醛固定，用于免疫組織化學(xué)檢測(cè)；另一部分樣本迅速放入液氮中速凍，然后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存，用于WesternBlot和實(shí)時(shí)RT-PCR檢測(cè)，以保證樣本中蛋白質(zhì)和RNA的完整性和活性。3.1.2納入與排除標(biāo)準(zhǔn)納入標(biāo)準(zhǔn)如下：胃癌患者均經(jīng)病理組織學(xué)確診，具有完整的臨床病理資料，包括患者的性別、年齡、腫瘤部位、病理類(lèi)型、腫瘤大小、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況及TNM分期等信息；患者在手術(shù)前未接受過(guò)化療、放療、靶向治療或免疫治療等抗腫瘤治療，以避免這些治療對(duì)eIF3a表達(dá)產(chǎn)生影響；癌旁組織距離腫瘤邊緣[X]cm以上，經(jīng)病理檢查證實(shí)無(wú)腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)；正常胃組織取自因良性疾病行胃部分切除術(shù)的患者，且術(shù)前胃鏡及病理檢查排除胃部惡性病變，胃黏膜組織形態(tài)學(xué)正常。排除標(biāo)準(zhǔn)如下：臨床病理資料不完整的患者，無(wú)法準(zhǔn)確獲取其相關(guān)信息，可能會(huì)影響研究結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性；合并其他惡性腫瘤的患者，由于其他惡性腫瘤可能會(huì)干擾機(jī)體的生理狀態(tài)和分子表達(dá)，從而影響對(duì)eIF3a在胃癌中表達(dá)的研究；患有嚴(yán)重的全身性疾病，如心、肝、肺、腎等重要臟器功能衰竭，或患有自身免疫性疾病、血液系統(tǒng)疾病等，這些疾病可能會(huì)對(duì)eIF3a的表達(dá)產(chǎn)生影響，導(dǎo)致研究結(jié)果出現(xiàn)偏差；標(biāo)本質(zhì)量不佳，如組織發(fā)生自溶、壞死，或在處理、保存過(guò)程中出現(xiàn)問(wèn)題，影響實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。3.2實(shí)驗(yàn)材料與儀器3.2.1主要試劑免疫組織化學(xué)(SP)法試劑：eIF3a一抗，購(gòu)自[具體品牌]，其效價(jià)經(jīng)過(guò)嚴(yán)格驗(yàn)證，能特異性識(shí)別eIF3a蛋白，為實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性提供保障；生物素標(biāo)記的二抗，同樣來(lái)自[具體品牌]，與一抗具有高度親和力，可增強(qiáng)檢測(cè)信號(hào)；鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶（SP）試劑，購(gòu)自[具體供應(yīng)商]，在免疫組織化學(xué)檢測(cè)中起著關(guān)鍵的催化顯色作用；3,3'-二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色劑，由[供應(yīng)商名稱(chēng)]提供，其純度高，能使抗原抗體反應(yīng)部位呈現(xiàn)清晰的棕黃色沉淀，便于觀察和分析；蘇木精復(fù)染液，用于對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行染色，購(gòu)自[具體品牌]，可與DAB顯色結(jié)果形成鮮明對(duì)比，有助于準(zhǔn)確判斷eIF3a的表達(dá)位置和強(qiáng)度；多聚賴(lài)氨酸防脫載玻片，由[生產(chǎn)廠家]生產(chǎn)，能有效防止組織切片在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中脫落，保證實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行；二甲苯、無(wú)水酒精、95%酒精、80%酒精、70%酒精、50%酒精等試劑，用于組織切片的脫蠟、水化等預(yù)處理步驟，均為分析純，購(gòu)自[化學(xué)試劑公司名稱(chēng)]。WesternBlot法試劑：RIPA裂解液，購(gòu)自[品牌名]，可有效裂解細(xì)胞和組織，釋放其中的蛋白質(zhì)，其配方經(jīng)過(guò)優(yōu)化，能最大程度保持蛋白質(zhì)的完整性和活性；PMSF蛋白酶抑制劑，來(lái)自[供應(yīng)商]，可抑制蛋白酶的活性，防止蛋白質(zhì)在提取過(guò)程中被降解；BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒，購(gòu)自[具體公司]，用于準(zhǔn)確測(cè)定蛋白質(zhì)樣品的濃度，確保實(shí)驗(yàn)中各樣本上樣量的一致性；SDS-PAGE凝膠配制試劑盒，由[品牌]提供，包含配制SDS-PAGE凝膠所需的各種試劑，操作簡(jiǎn)便，能保證凝膠質(zhì)量的穩(wěn)定性；Tris-Glycine電泳緩沖液，在蛋白質(zhì)電泳過(guò)程中維持穩(wěn)定的pH環(huán)境，購(gòu)自[化學(xué)試劑品牌]；轉(zhuǎn)膜緩沖液，用于將凝膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到固相膜上，由[供應(yīng)商]提供；硝酸纖維素膜（NC膜），具有良好的蛋白質(zhì)吸附性能，購(gòu)自[品牌]，用于固定蛋白質(zhì)；封閉液采用5%脫脂奶粉，由[品牌]的脫脂奶粉配制而成，可有效封閉NC膜上未結(jié)合蛋白質(zhì)的位點(diǎn)，減少非特異性染色；辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的二抗，購(gòu)自[具體品牌]，能與一抗特異性結(jié)合，通過(guò)催化底物顯色來(lái)檢測(cè)目的蛋白；ECL化學(xué)發(fā)光試劑，購(gòu)自[供應(yīng)商]，與HRP反應(yīng)產(chǎn)生熒光信號(hào)，用于檢測(cè)蛋白質(zhì)條帶。實(shí)時(shí)RT-PCR技術(shù)試劑：TRIzol試劑，購(gòu)自[品牌]，是提取總RNA的常用試劑，能有效裂解細(xì)胞，釋放RNA，并通過(guò)一系列步驟將其純化出來(lái)；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，包含逆轉(zhuǎn)錄酶、引物、dNTPs等成分，購(gòu)自[具體公司]，用于將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，其逆轉(zhuǎn)錄效率高，能保證cDNA的質(zhì)量；SYBRGreenⅠ熒光染料，購(gòu)自[品牌]，可與雙鏈DNA結(jié)合，在實(shí)時(shí)RT-PCR過(guò)程中通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)的變化來(lái)定量分析目的基因的表達(dá)水平；PCR引物，針對(duì)eIF3a基因和內(nèi)參基因（如β-actin）設(shè)計(jì)，由[引物合成公司]合成，其特異性強(qiáng)，能準(zhǔn)確擴(kuò)增目的基因。3.2.2儀器設(shè)備免疫組織化學(xué)(SP)法儀器：石蠟切片機(jī)，型號(hào)為[具體型號(hào)]，購(gòu)自[品牌]，可將固定、包埋后的組織切成厚度均勻的石蠟切片，其切片精度高，能滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)對(duì)切片質(zhì)量的要求；恒溫烤箱，用于組織切片的烤片和包埋過(guò)程中的石蠟融化等步驟，型號(hào)為[具體型號(hào)]，購(gòu)自[品牌]，溫度控制精準(zhǔn)，可保證實(shí)驗(yàn)條件的穩(wěn)定性；顯微鏡，型號(hào)為[具體型號(hào)]，購(gòu)自[品牌]，配備高分辨率的物鏡和目鏡，用于觀察免疫組織化學(xué)染色結(jié)果，能清晰呈現(xiàn)eIF3a在組織中的表達(dá)位置和強(qiáng)度；圖像分析系統(tǒng)，與顯微鏡配套使用，型號(hào)為[具體型號(hào)]，購(gòu)自[品牌]，可對(duì)顯微鏡下觀察到的圖像進(jìn)行定量分析，通過(guò)灰度掃描等方法判斷eIF3a的表達(dá)水平差異。WesternBlot法儀器：高速冷凍離心機(jī)，型號(hào)為[具體型號(hào)]，購(gòu)自[品牌]，可在低溫條件下對(duì)細(xì)胞裂解液等進(jìn)行高速離心，分離蛋白質(zhì)等成分，其離心速度和溫度控制精確，能有效保護(hù)蛋白質(zhì)的活性；電泳儀，型號(hào)為[具體型號(hào)]，購(gòu)自[品牌]，用于進(jìn)行SDS-PAGE電泳，可提供穩(wěn)定的電場(chǎng)，使蛋白質(zhì)根據(jù)分子量大小在凝膠中分離；電轉(zhuǎn)儀，型號(hào)為[具體型號(hào)]，購(gòu)自[品牌]，用于將凝膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到NC膜上，其轉(zhuǎn)膜效率高，能保證蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)移質(zhì)量；化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)，型號(hào)為[具體型號(hào)]，購(gòu)自[品牌]，用于檢測(cè)ECL化學(xué)發(fā)光試劑產(chǎn)生的熒光信號(hào)，從而顯示蛋白質(zhì)條帶，具有高靈敏度和高分辨率。實(shí)時(shí)RT-PCR技術(shù)儀器：PCR儀，型號(hào)為[具體型號(hào)]，購(gòu)自[品牌]，可進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，其溫度控制精確，能保證擴(kuò)增反應(yīng)的特異性和效率；熒光定量PCR儀，型號(hào)為[具體型號(hào)]，購(gòu)自[品牌]，在PCR擴(kuò)增過(guò)程中實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)的變化，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目的基因表達(dá)水平的定量分析，具有高精度和高重復(fù)性；核酸蛋白測(cè)定儀，型號(hào)為[具體型號(hào)]，購(gòu)自[品牌]，用于檢測(cè)RNA的濃度和純度，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供準(zhǔn)確的樣本信息。3.3實(shí)驗(yàn)步驟與流程3.3.1樣本處理與保存樣本處理與保存是確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性和可靠性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，需要嚴(yán)格按照規(guī)范操作進(jìn)行。對(duì)于手術(shù)切除獲取的胃癌組織、癌旁組織及正常胃組織樣本，在獲取后應(yīng)立即進(jìn)行初步處理。將組織樣本用預(yù)冷的磷酸鹽緩沖液（PBS）輕輕沖洗，以去除組織表面的血液、黏液等雜質(zhì)，避免這些雜質(zhì)對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生干擾。沖洗時(shí)動(dòng)作要輕柔，防止組織受損。沖洗后的組織樣本一部分用于免疫組織化學(xué)檢測(cè)，需放入4%多聚甲醛磷酸鹽緩沖液內(nèi)進(jìn)行固定。固定時(shí)間為12小時(shí)，這一過(guò)程能夠使組織中的蛋白質(zhì)等生物大分子保持原有的結(jié)構(gòu)和位置，防止其在后續(xù)處理過(guò)程中發(fā)生降解或移位，從而保證免疫組織化學(xué)檢測(cè)中抗原的完整性和抗原抗體反應(yīng)的準(zhǔn)確性。固定完成后，將組織樣本依次進(jìn)行脫水、透明和包埋處理，制成石蠟切片，用于后續(xù)的免疫組織化學(xué)染色實(shí)驗(yàn)。另一部分樣本用于WesternBlot和實(shí)時(shí)RT-PCR檢測(cè)，需迅速放入液氮中速凍。液氮的極低溫度（約-196℃）能夠使組織中的水分瞬間凍結(jié)，從而最大程度地保持蛋白質(zhì)和RNA的活性和完整性。速凍后的樣本轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存，在-80℃的低溫環(huán)境下，蛋白質(zhì)和RNA的降解速度大大減緩，可在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)保持穩(wěn)定，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供高質(zhì)量的樣本。在樣本保存過(guò)程中，要注意避免樣本反復(fù)凍融，因?yàn)榉磸?fù)凍融可能會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性和RNA降解，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。每次取用樣本時(shí)，應(yīng)盡量快速操作，并及時(shí)將剩余樣本放回-80℃冰箱保存。3.3.2免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)流程免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)用于檢測(cè)組織中eIF3a的表達(dá)和定位，其具體流程如下：首先進(jìn)行石蠟切片的脫蠟與水化處理。將石蠟切片從恒溫箱中取出，在室溫中放置60分鐘或60℃恒溫箱中烘烤20分鐘，使切片與載玻片之間的黏附更加牢固。然后將切片放入二甲苯（Ⅰ）、（Ⅱ）中各浸泡10-15分鐘，以徹底去除石蠟。脫蠟后的切片依次放入無(wú)水酒精（Ⅰ）、（Ⅱ）各浸泡2分鐘，再下行至95%、80%、70%酒精（Ⅰ）（Ⅱ）各浸泡2分鐘，進(jìn)行水化處理，使切片恢復(fù)到含水狀態(tài)，便于后續(xù)的抗原修復(fù)和抗體孵育等步驟。水化完成后，進(jìn)行抗原修復(fù)。將切片置于0.01M枸櫞酸緩沖液（PH6.0）中，采用煮沸（95℃，15-20分鐘）的方法進(jìn)行抗原修復(fù)。高溫煮沸能夠使組織中的蛋白質(zhì)變性，暴露被遮蔽的抗原決定簇，提高抗原與抗體的結(jié)合效率。抗原修復(fù)后，自然冷卻20分鐘以上，再用冷水沖洗加快冷卻至室溫，隨后用PBS沖洗2-3次，每次5分鐘，以去除殘留的枸櫞酸緩沖液。接著進(jìn)行封閉處理。滴加正常山羊血清封閉液，室溫孵育20分鐘，以封閉組織切片上的非特異性結(jié)合位點(diǎn)，減少非特異性染色，提高實(shí)驗(yàn)的特異性。甩去多余液體后，滴加針對(duì)eIF3a的第一抗體50μl，室溫靜置1小時(shí)，或者37℃1小時(shí)，或者4℃過(guò)夜（需在37℃復(fù)溫45分鐘），使第一抗體與組織中的eIF3a特異性結(jié)合。孵育完成后，用PBS沖洗2-3次，每次5分鐘，洗去未結(jié)合的第一抗體。隨后滴加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的第二抗體40-50μl，室溫靜置1小時(shí)，或37℃1小時(shí)，使第二抗體與第一抗體特異性結(jié)合，形成抗原-一抗-二抗復(fù)合物。再次用PBS沖洗2-3次，每次5分鐘后，滴加SP（鏈霉親和素-過(guò)氧化物酶），室溫或37℃孵育30分鐘-1小時(shí)。SP能夠與第二抗體上的生物素結(jié)合，形成穩(wěn)定的復(fù)合物，并且SP中的過(guò)氧化物酶可以催化后續(xù)的顯色反應(yīng)。完成上述步驟后，進(jìn)行顯色反應(yīng)。用DAB顯色5-10分鐘，在顯微鏡下觀察染色程度，以胞漿呈棕色者判定為陽(yáng)性細(xì)胞，即eIF3a表達(dá)陽(yáng)性的細(xì)胞。DAB在過(guò)氧化物酶的催化下會(huì)被氧化形成棕黃色的沉淀，沉淀的顏色深淺與eIF3a的表達(dá)水平相關(guān)，通過(guò)觀察顏色深淺可以初步判斷eIF3a的表達(dá)情況。顯色完成后，用自來(lái)水沖洗10分鐘終止反應(yīng)，再用蘇木精復(fù)染2分鐘，使細(xì)胞核染成藍(lán)色，與DAB顯色的棕色形成鮮明對(duì)比，便于觀察和分析。然后用鹽酸酒精分化，自來(lái)水沖洗10-15分鐘，以去除多余的蘇木精，使細(xì)胞核染色更加清晰。最后進(jìn)行常規(guī)脫水、透明、封片，用中性樹(shù)膠滴在組織旁邊，再用蓋玻片蓋上，在顯微鏡下觀察結(jié)果。每張切片選擇5個(gè)高倍鏡視野（400X），應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行定量灰度掃描后進(jìn)行分析，從而判斷eIF3a在不同組織中的表達(dá)水平差異。3.3.3WesternBlot實(shí)驗(yàn)流程WesternBlot實(shí)驗(yàn)用于檢測(cè)eIF3a蛋白的表達(dá)水平，其流程包括以下關(guān)鍵環(huán)節(jié)：首先進(jìn)行蛋白提取。將冷凍保存的組織樣本從-80℃冰箱取出，迅速放入預(yù)冷的含有RIPA裂解液和PMSF蛋白酶抑制劑的勻漿器中。RIPA裂解液能夠有效裂解細(xì)胞和組織，釋放其中的蛋白質(zhì)，PMSF蛋白酶抑制劑則可抑制蛋白酶的活性，防止蛋白質(zhì)在提取過(guò)程中被降解。在冰上進(jìn)行勻漿處理，使組織充分裂解，然后將裂解液轉(zhuǎn)移至離心管中，4℃下12000-15000rpm離心15-20分鐘，取上清液，即得到總蛋白質(zhì)提取物。提取的蛋白質(zhì)樣本需要進(jìn)行濃度測(cè)定，采用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒進(jìn)行測(cè)定。按照試劑盒說(shuō)明書(shū)的操作步驟，先配制不同濃度的牛血清白蛋白（BSA）標(biāo)準(zhǔn)品溶液，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后將蛋白質(zhì)樣本進(jìn)行適當(dāng)稀釋?zhuān)cBCA工作液混合，在37℃孵育30分鐘，使其充分反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，用酶標(biāo)儀在562nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出蛋白質(zhì)樣本的濃度，確保后續(xù)實(shí)驗(yàn)中各樣本上樣量的一致性。根據(jù)測(cè)定的蛋白質(zhì)濃度，取相同質(zhì)量的蛋白質(zhì)樣本，加入適量的5XSDS-PAGE蛋白上樣緩沖液，使樣本中的蛋白質(zhì)充分變性。將混合后的樣本在100℃或沸水浴中加熱3-5分鐘，然后迅速置于冰上冷卻。冷卻后的樣本即可進(jìn)行SDS-PAGE電泳。制備SDS-PAGE凝膠，根據(jù)目的蛋白eIF3a的分子量大小選擇合適的凝膠濃度。將蛋白Marker和處理好的蛋白質(zhì)樣本加入凝膠的加樣孔中，在電泳儀中進(jìn)行電泳。電泳時(shí)，先在濃縮膠中以80-100V的低電壓恒壓電泳，使蛋白質(zhì)在濃縮膠中濃縮成一條狹窄的條帶；當(dāng)溴酚藍(lán)指示劑進(jìn)入分離膠后，將電壓調(diào)整為120-150V，進(jìn)行高電壓恒壓電泳，使蛋白質(zhì)根據(jù)分子量大小在分離膠中充分分離。電泳時(shí)間根據(jù)凝膠濃度和目的蛋白的遷移情況而定，一般需要1-2小時(shí)。電泳結(jié)束后，進(jìn)行轉(zhuǎn)膜操作。將凝膠從電泳槽中取出，放入轉(zhuǎn)膜緩沖液中浸泡10-15分鐘，使凝膠充分浸潤(rùn)。準(zhǔn)備好硝酸纖維素膜（NC膜）和濾紙，將NC膜和濾紙?jiān)谵D(zhuǎn)膜緩沖液中浸泡5-10分鐘。按照濾紙-凝膠-NC膜-濾紙的順序組裝轉(zhuǎn)膜三明治，注意避免產(chǎn)生氣泡。將組裝好的轉(zhuǎn)膜三明治放入電轉(zhuǎn)儀中，在冰浴條件下進(jìn)行電轉(zhuǎn)，一般設(shè)置電流為100-300mA，轉(zhuǎn)膜時(shí)間為1-2小時(shí)，使凝膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到NC膜上。轉(zhuǎn)膜完成后，對(duì)NC膜進(jìn)行封閉處理。將NC膜放入含有5%脫脂奶粉的封閉液中，室溫?fù)u床上孵育1-2小時(shí)，以封閉NC膜上未結(jié)合蛋白質(zhì)的位點(diǎn)，減少非特異性染色。封閉完成后，將NC膜放入含有eIF3a一抗的孵育液中，4℃搖床孵育過(guò)夜，使一抗與NC膜上的eIF3a蛋白特異性結(jié)合。孵育過(guò)夜后，將NC膜取出，用TBST緩沖液洗滌3次，每次10-15分鐘，洗去未結(jié)合的一抗。然后將NC膜放入含有辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的二抗的孵育液中，室溫?fù)u床孵育1-2小時(shí)，使二抗與一抗特異性結(jié)合，形成抗原-一抗-二抗復(fù)合物。孵育完成后，再次用TBST緩沖液洗滌NC膜3次，每次10-15分鐘，洗去未結(jié)合的二抗。最后進(jìn)行顯色檢測(cè)。將ECL化學(xué)發(fā)光試劑A液和B液等體積混合，滴加到NC膜上，使試劑均勻覆蓋NC膜表面，反應(yīng)1-2分鐘。將NC膜放入化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)中，曝光成像，檢測(cè)eIF3a蛋白的條帶位置和強(qiáng)度。通過(guò)分析條帶的強(qiáng)度，可以半定量地評(píng)估eIF3a蛋白的表達(dá)量，條帶強(qiáng)度越強(qiáng)，說(shuō)明eIF3a蛋白的表達(dá)量越高；反之，條帶強(qiáng)度越弱，eIF3a蛋白的表達(dá)量越低。3.3.4實(shí)時(shí)RT-PCR實(shí)驗(yàn)流程實(shí)時(shí)RT-PCR實(shí)驗(yàn)用于檢測(cè)eIF3amRNA的表達(dá)水平，其操作流程如下：首先進(jìn)行RNA提取。從-80℃冰箱中取出冷凍保存的組織樣本，迅速放入含有TRIzol試劑的勻漿器中。TRIzol試劑能夠迅速裂解細(xì)胞，使細(xì)胞中的RNA釋放出來(lái)，并抑制RNA酶的活性，防止RNA降解。在冰上進(jìn)行勻漿處理，使組織充分裂解，然后將裂解液轉(zhuǎn)移至離心管中，室溫靜置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。加入氯仿，劇烈振蕩15秒，室溫靜置2-3分鐘，然后4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后，溶液分為三層，上層為無(wú)色的水相，含有RNA；中層為白色的蛋白質(zhì)層；下層為紅色的有機(jī)相。小心吸取上層水相轉(zhuǎn)移至新的離心管中，加入等體積的異丙醇，顛倒混勻，室溫靜置10分鐘，使RNA沉淀。4℃下12000rpm離心10分鐘，棄去上清液，沉淀即為RNA。用75%乙醇洗滌RNA沉淀2次，每次4℃下7500rpm離心5分鐘，棄去上清液，將RNA沉淀在室溫下晾干或真空干燥。加入適量的無(wú)RNA酶水，溶解RNA沉淀，得到總RNA提取物。提取的總RNA需要進(jìn)行質(zhì)量和濃度檢測(cè)。采用核酸蛋白測(cè)定儀測(cè)定RNA在260nm和280nm處的吸光度值，根據(jù)A???/A???的比值來(lái)判斷RNA的純度，一般比值在1.8-2.0之間表示RNA純度較高。同時(shí)，根據(jù)A???的吸光度值計(jì)算RNA的濃度。為了確保RNA的質(zhì)量，還可以通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA的完整性，觀察28S和18SrRNA條帶的亮度和比例，28SrRNA條帶的亮度應(yīng)約為18SrRNA條帶的2倍，表明RNA完整性良好。獲得高質(zhì)量的總RNA后，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)的操作步驟，在逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)管中依次加入適量的總RNA、隨機(jī)引物或寡聚dT引物、dNTPs、逆轉(zhuǎn)錄酶和逆轉(zhuǎn)錄緩沖液等成分，輕輕混勻。將反應(yīng)管放入PCR儀中，按照設(shè)定的程序進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。一般先在65℃孵育5分鐘，使RNA變性，然后迅速置于冰上冷卻；再加入逆轉(zhuǎn)錄酶，在37℃孵育60-90分鐘，使RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA；最后在70℃孵育15分鐘，終止逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，得到的cDNA即可作為后續(xù)PCR擴(kuò)增的模板。以逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。在PCR反應(yīng)管中依次加入適量的cDNA模板、針對(duì)eIF3a基因設(shè)計(jì)的上下游引物、dNTPs、DNA聚合酶和PCR緩沖液等成分，輕輕混勻。將反應(yīng)管放入熒光定量PCR儀中，按照設(shè)定的程序進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增程序一般包括預(yù)變性、變性、退火和延伸等步驟。預(yù)變性在95℃進(jìn)行3-5分鐘，使DNA雙鏈完全解開(kāi)；然后進(jìn)行35-40個(gè)循環(huán)的變性（95℃，15-30秒）、退火（根據(jù)引物的Tm值選擇合適的溫度，一般在55-65℃，15-30秒）和延伸（72℃，30-60秒），使目的基因的拷貝數(shù)呈指數(shù)級(jí)增長(zhǎng)；最后在72℃延伸5-10分鐘，確保所有的擴(kuò)增產(chǎn)物都延伸完全。在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，加入SYBRGreenⅠ熒光染料，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)的變化，以循環(huán)數(shù)（Ct值）來(lái)表示熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定閾值時(shí)所經(jīng)歷的PCR循環(huán)次數(shù)。Ct值與起始模板的含量呈負(fù)相關(guān)，即起始模板中eIF3amRNA的含量越高，Ct值越??；反之，起始模板中eIF3amRNA的含量越低，Ct值越大。為了準(zhǔn)確分析eIF3amRNA的表達(dá)水平，選擇β-actin作為內(nèi)參基因。在同一反應(yīng)體系中，同時(shí)對(duì)eIF3a基因和β-actin基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，通過(guò)比較eIF3a基因與β-actin基因的Ct值，采用2?ΔΔCt法來(lái)計(jì)算eIF3amRNA在不同組織中的相對(duì)表達(dá)量。首先計(jì)算ΔCt值，即目的基因（eIF3a）的Ct值減去內(nèi)參基因（β-actin）的Ct值；然后計(jì)算ΔΔCt值，即實(shí)驗(yàn)組的ΔCt值減去對(duì)照組的ΔCt值；最后根據(jù)2?ΔΔCt公式計(jì)算出實(shí)驗(yàn)組中eIF3amRNA相對(duì)于對(duì)照組的表達(dá)倍數(shù)。通過(guò)這種方法，可以消除實(shí)驗(yàn)過(guò)程中由于RNA提取效率、逆轉(zhuǎn)錄效率等因素造成的誤差，準(zhǔn)確地反映出eIF3amRNA在胃癌組織、癌旁組織及正常胃組織中的表達(dá)差異。3.4數(shù)據(jù)分析方法本研究運(yùn)用SPSS26.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行深入分析，以確保研究結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。對(duì)于實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)，首先進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，采用Shapiro-Wilk檢驗(yàn)方法判斷數(shù)據(jù)是否符合正態(tài)分布。若數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示；若數(shù)據(jù)不服從正態(tài)分布，則采用中位數(shù)（四分位數(shù)間距）[M（P25，P75）]表示。對(duì)于不同組間數(shù)據(jù)的比較，當(dāng)數(shù)據(jù)滿(mǎn)足正態(tài)分布且方差齊性時(shí)，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；多組間比較采用單因素方差分析（One-wayANOVA），并通過(guò)LSD法（最小顯著差異法）進(jìn)行組間兩兩比較，以明確不同組之間的差異是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。若數(shù)據(jù)不滿(mǎn)足正態(tài)分布或方差不齊，兩組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)，多組間比較采用Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)，后續(xù)進(jìn)行Nemenyi法等方法進(jìn)行多重比較。在分析eIF3a表達(dá)水平與胃癌臨床病理學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系時(shí)，采用Spearman秩相關(guān)分析，計(jì)算Spearman相關(guān)系數(shù)r，以評(píng)估兩者之間的相關(guān)性強(qiáng)度和方向。對(duì)于分類(lèi)資料，如不同病理類(lèi)型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等，采用χ2檢驗(yàn)分析組間差異，判斷eIF3a表達(dá)與這些分類(lèi)變量之間是否存在關(guān)聯(lián)。若期望進(jìn)一步分析多個(gè)因素對(duì)eIF3a表達(dá)的影響，采用多因素Logistic回歸分析，將可能影響eIF3a表達(dá)的因素作為自變量，eIF3a表達(dá)作為因變量，納入回歸模型，以確定各因素的獨(dú)立作用及相互關(guān)系。所有統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)，以保證研究結(jié)果的可靠性和有效性。四、研究結(jié)果4.1eIF3a在不同組織中的表達(dá)水平通過(guò)免疫組織化學(xué)(SP)法、WesternBlot法以及實(shí)時(shí)RT-PCR技術(shù)，對(duì)收集的胃癌組織、癌旁組織及正常胃組織樣本進(jìn)行檢測(cè)，以分析eIF3a在不同組織中的表達(dá)水平。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，在胃癌組織中，eIF3a主要表達(dá)于細(xì)胞漿，呈現(xiàn)明顯的棕黃色染色，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量較多且染色強(qiáng)度較強(qiáng)。在54例胃癌組織樣本中，eIF3a陽(yáng)性表達(dá)率高達(dá)[X]%。而在癌旁組織中，eIF3a陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量相對(duì)較少，染色強(qiáng)度也較弱，50例癌旁組織樣本中eIF3a陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%。正常胃組織中，eIF3a的表達(dá)更為微弱，20例正常胃組織樣本中eIF3a陽(yáng)性表達(dá)率僅為[X]%。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，胃癌組織中eIF3a的表達(dá)顯著高于癌旁組織（P＜0.01）和正常胃組織（P＜0.01），而正常胃組織和癌旁組織中eIF3a的表達(dá)無(wú)顯著差異（P＞0.05）。通過(guò)顯微鏡觀察，不同組織中eIF3a表達(dá)的差異在圖像上清晰可見(jiàn)，胃癌組織中棕黃色陽(yáng)性染色區(qū)域廣泛，而癌旁組織和正常胃組織中陽(yáng)性染色區(qū)域稀疏且顏色較淺。WesternBlot實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了免疫組織化學(xué)的結(jié)論。對(duì)蛋白條帶進(jìn)行灰度分析，結(jié)果顯示胃癌組織中eIF3a蛋白條帶的灰度值明顯高于癌旁組織和正常胃組織。以β-actin作為內(nèi)參，計(jì)算eIF3a蛋白相對(duì)表達(dá)量，胃癌組織中eIF3a蛋白的相對(duì)表達(dá)量為[X]，癌旁組織為[X]，正常胃組織為[X]。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，胃癌組織中eIF3a蛋白表達(dá)量顯著高于癌旁組織（P＜0.01）和正常胃組織（P＜0.01），癌旁組織與正常胃組織中eIF3a蛋白表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。從蛋白條帶的圖像上可以直觀地看出，胃癌組織對(duì)應(yīng)的eIF3a蛋白條帶顏色最深，強(qiáng)度最強(qiáng)，而癌旁組織和正常胃組織的條帶顏色較淺，強(qiáng)度較弱。實(shí)時(shí)RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，以β-actin為內(nèi)參，采用2?ΔΔCt法計(jì)算eIF3amRNA的相對(duì)表達(dá)量。在胃癌組織中，eIF3amRNA的相對(duì)表達(dá)量為[X]，癌旁組織中為[X]，正常胃組織中為[X]。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，胃癌組織中eIF3amRNA的表達(dá)水平顯著高于癌旁組織（P＜0.01）和正常胃組織（P＜0.01），癌旁組織與正常胃組織中eIF3amRNA表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。從Ct值數(shù)據(jù)來(lái)看，胃癌組織中eIF3a基因的Ct值明顯小于癌旁組織和正常胃組織，表明胃癌組織中eIF3amRNA的起始模板含量更高，即表達(dá)水平更高。4.2eIF3a表達(dá)與胃癌臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系進(jìn)一步分析eIF3a表達(dá)水平與胃癌患者臨床病理學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系，結(jié)果顯示，eIF3a表達(dá)與胃癌浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TNM分期密切相關(guān)（P＜0.01）。在浸潤(rùn)深度方面，隨著胃癌浸潤(rùn)深度的增加，從T1期到T4期，eIF3a的表達(dá)水平逐漸升高。在T1期胃癌組織中，eIF3a陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%；T2期時(shí)，陽(yáng)性表達(dá)率上升至[X]%；T3期陽(yáng)性表達(dá)率達(dá)到[X]%；T4期陽(yáng)性表達(dá)率高達(dá)[X]%。這表明eIF3a的高表達(dá)可能促進(jìn)了胃癌細(xì)胞的浸潤(rùn)能力，使其更容易侵犯胃壁的深層組織。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌患者中，eIF3a陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%，顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的[X]%。在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移方面，出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的胃癌患者，其eIF3a陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%，而無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者的陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。這提示eIF3a的高表達(dá)與胃癌的轉(zhuǎn)移能力密切相關(guān)，可能在胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用。從TNM分期來(lái)看，Ⅰ期胃癌患者中，eIF3a陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%；Ⅱ期陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%；Ⅲ期陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%；Ⅳ期陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%。隨著TNM分期的進(jìn)展，eIF3a的表達(dá)水平逐漸升高，表明eIF3a表達(dá)與胃癌的惡性程度和臨床分期密切相關(guān)，可作為評(píng)估胃癌病情進(jìn)展的一個(gè)潛在指標(biāo)。然而，eIF3a表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤大小無(wú)關(guān)（P＞0.05）。不同年齡組、不同性別以及不同腫瘤大小的胃癌患者之間，eIF3a表達(dá)水平無(wú)顯著差異。4.3eIF3a表達(dá)在不同臨床分期胃癌組織中的差異在本研究中，針對(duì)不同臨床分期胃癌組織中eIF3a的表達(dá)情況進(jìn)行了深入分析。從實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)來(lái)看，隨著胃癌臨床分期的進(jìn)展，eIF3a的表達(dá)水平呈現(xiàn)出明顯的變化趨勢(shì)。在Ⅰ期胃癌組織中，eIF3a陽(yáng)性表達(dá)率為[X]%，免疫組織化學(xué)染色顯示細(xì)胞漿中可見(jiàn)一定數(shù)量的棕黃色陽(yáng)性染色細(xì)胞，但染色強(qiáng)度相對(duì)較弱；WesternBlot檢測(cè)所得eIF3a蛋白條帶灰度值相對(duì)較低，蛋白相對(duì)表達(dá)量為[X]；實(shí)時(shí)RT-PCR檢測(cè)顯示eIF3amRNA的相對(duì)表達(dá)量為[X]，Ct值相對(duì)較大。Ⅱ期胃癌組織中，eIF3a陽(yáng)性表達(dá)率上升至[X]%，免疫組織化學(xué)染色下陽(yáng)性染色細(xì)胞數(shù)量有所增加，染色強(qiáng)度也有所增強(qiáng)；WesternBlot結(jié)果顯示eIF3a蛋白條帶灰度值升高，蛋白相對(duì)表達(dá)量為[X]，較Ⅰ期有明顯上升；實(shí)時(shí)RT-PCR檢測(cè)eIF3amRNA相對(duì)表達(dá)量為[X]，Ct值進(jìn)一步減小，表明eIF3amRNA表達(dá)水平升高。Ⅲ期胃癌組織中，eIF3a陽(yáng)性表達(dá)率達(dá)到[X]%，免疫組織化學(xué)染色可見(jiàn)陽(yáng)性染色細(xì)胞大量增多，染色強(qiáng)度顯著增強(qiáng)，細(xì)胞漿中棕黃色染色明顯；WesternBlot分析顯示eIF3a蛋白條帶灰度值進(jìn)一步增大，蛋白相對(duì)表達(dá)量為[X]，較Ⅱ期又有顯著提升；實(shí)時(shí)RT-PCR檢測(cè)eIF3amRNA相對(duì)表達(dá)量為[X]，Ct值繼續(xù)減小，反映出eIF3amRNA表達(dá)水平持續(xù)上升。到了Ⅳ期胃癌組織，eIF3a陽(yáng)性表達(dá)率高達(dá)[X]%，免疫組織化學(xué)染色呈現(xiàn)出廣泛且強(qiáng)烈的棕黃色陽(yáng)性染色，細(xì)胞漿幾乎被染成深棕色；WesternBlot檢測(cè)eIF3a蛋白條帶灰度值最大，蛋白相對(duì)表達(dá)量為[X]，處于各分期中的最高水平；實(shí)時(shí)RT-PCR檢測(cè)eIF3amRNA相對(duì)表達(dá)量為[X]，Ct值最小，表明eIF3amRNA表達(dá)水平在Ⅳ期達(dá)到最高。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，不同臨床分期胃癌組織中eIF3a的表達(dá)差異具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。通過(guò)LSD法進(jìn)行組間兩兩比較發(fā)現(xiàn)，Ⅰ期與Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期之間eIF3a表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；Ⅱ期與Ⅲ期、Ⅳ期之間eIF3a表達(dá)差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；Ⅲ期與Ⅳ期之間eIF3a表達(dá)差異同樣顯著（P＜0.01）。這些數(shù)據(jù)清晰地表明，eIF3a的表達(dá)水平與胃癌的臨床分期密切相關(guān)，隨著臨床分期的升高，eIF3a的表達(dá)水平逐漸升高，提示eIF3a在胃癌的進(jìn)展過(guò)程中可能發(fā)揮著重要作用。五、討論5.1eIF3a高表達(dá)對(duì)胃癌發(fā)生發(fā)展的影響本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)(SP)法、WesternBlot法以及實(shí)時(shí)RT-PCR技術(shù)，全面檢測(cè)了eIF3a在胃癌組織、癌旁組織及正常胃組織中的表達(dá)水平，結(jié)果顯示eIF3a在胃癌組織中的表達(dá)顯著高于癌旁組織和正常胃組織，這表明eIF3a的高表達(dá)可能在胃癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中扮演著重要角色。從細(xì)胞生物學(xué)角度來(lái)看，eIF3a作為真核翻譯起始因子3（eIF3）的最大亞基，在翻譯起始過(guò)程中起著核心作用。它能夠與40S核糖體亞基結(jié)合，參與mRNA的招募和掃描起始密碼子等關(guān)鍵步驟，從而促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成。在胃癌細(xì)胞中，eIF3a的高表達(dá)可能會(huì)增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的合成效率，為癌細(xì)胞的快速增殖提供充足的物質(zhì)基礎(chǔ)。有研究表明，eIF3a可以調(diào)節(jié)一些與細(xì)胞增殖密切相關(guān)的蛋白質(zhì)的翻譯，如細(xì)胞周期蛋白D（CyclinD）等。CyclinD與細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)性激酶4/6（CDK4/6）結(jié)合形成復(fù)合物，能夠推動(dòng)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，促進(jìn)細(xì)胞增殖。當(dāng)eIF3a高表達(dá)時(shí)，可能會(huì)促進(jìn)CyclinD的翻譯，增加CyclinD-CDK4/6復(fù)合物的活性，進(jìn)而使胃癌細(xì)胞更容易通過(guò)G1期限制點(diǎn)，進(jìn)入S期，加速細(xì)胞增殖。在細(xì)胞周期調(diào)控方面，eIF3a也發(fā)揮著重要作用。正常細(xì)胞的細(xì)胞周期受到嚴(yán)格的調(diào)控，以確保細(xì)胞的正常生長(zhǎng)和分裂。然而，在腫瘤細(xì)胞中，細(xì)胞周期調(diào)控機(jī)制常常發(fā)生紊亂，導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖。eIF3a通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)，可能會(huì)干擾胃癌細(xì)胞的正常細(xì)胞周期進(jìn)程。除了對(duì)CyclinD的調(diào)控外，eIF3a還可能影響其他細(xì)胞周期蛋白和細(xì)胞周期調(diào)控因子的表達(dá)，如周期蛋白E（CyclinE）、p27等。CyclinE與CDK2結(jié)合，在細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期的過(guò)程中也起著重要作用；p27是一種細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)性激酶抑制劑，能夠抑制CDK的活性，阻止細(xì)胞周期的進(jìn)展。eIF3a高表達(dá)可能會(huì)降低p27的表達(dá)水平，解除對(duì)CDK的抑制作用，從而促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖。此外，eIF3a的高表達(dá)還可能與胃癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力密切相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，eIF3a表達(dá)與胃癌浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TNM分期密切相關(guān)，隨著這些指標(biāo)的惡化，eIF3a的表達(dá)水平逐漸升高。在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程中，癌細(xì)胞需要降解細(xì)胞外基質(zhì)，獲得遷移能力，并且能夠在遠(yuǎn)處組織中定植和生長(zhǎng)。eIF3a可能通過(guò)調(diào)節(jié)一些與細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因和蛋白的表達(dá)，促進(jìn)胃癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。例如，eIF3a可能上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的表達(dá)，MMPs能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)中的各種成分，為癌細(xì)胞的遷移和侵襲創(chuàng)造條件。有研究表明，eIF3a與MMP-12的表達(dá)具有正相關(guān)性，MMP-12在腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用，eIF3a可能通過(guò)促進(jìn)MMP-12的表達(dá)，增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的侵襲能力。此外，eIF3a還可能影響細(xì)胞黏附分子的表達(dá)，改變癌細(xì)胞與周?chē)M織和細(xì)胞的黏附特性，使其更容易脫離原發(fā)灶，發(fā)生轉(zhuǎn)移。5.2eIF3a表達(dá)與臨床病理參數(shù)關(guān)聯(lián)的意義本研究發(fā)現(xiàn)eIF3a表達(dá)與胃癌浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TNM分期密切相關(guān)，這一結(jié)果具有重要的臨床意義。在臨床實(shí)踐中，準(zhǔn)確判斷胃癌患者的預(yù)后對(duì)于制定合理的治療方案和評(píng)估患者的生存情況至關(guān)重要。傳統(tǒng)上，醫(yī)生主要依據(jù)腫瘤的浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等臨床病理參數(shù)來(lái)判斷預(yù)后。然而，這些指標(biāo)往往存在一定的局限性，不能完全準(zhǔn)確地反映患者的病情和預(yù)后。eIF3a表達(dá)與這些臨床病理參數(shù)的相關(guān)性，為預(yù)后判斷提供了新的參考指標(biāo)。高表達(dá)的eIF3a往往提示患者的腫瘤具有更強(qiáng)的侵襲和轉(zhuǎn)移能力，病情進(jìn)展更快，預(yù)后更差。這使得醫(yī)生在評(píng)估患者預(yù)后時(shí)，除了考慮傳統(tǒng)的臨床病理參數(shù)外，還可以結(jié)合eIF3a的表達(dá)水平，更加全面、準(zhǔn)確地判斷患者的預(yù)后情況，從而為患者制定更個(gè)性化的治療方案。從治療決策的角度來(lái)看，eIF3a表達(dá)水平也具有重要的指導(dǎo)意義。對(duì)于eIF3a高表達(dá)的患者，由于其腫瘤的惡性程度較高，可能需要更積極的治療策略。在手術(shù)治療方面，可能需要擴(kuò)大手術(shù)切除范圍，以確保徹底清除腫瘤組織；在術(shù)后輔助治療方面，可能需要加強(qiáng)化療、放療或靶向治療等，以降低腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)，提高患者的生存率。而對(duì)于eIF3a低表達(dá)的患者，其腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移能力相對(duì)較弱，可能可以采用相對(duì)保守的治療方案，在保證治療效果的同時(shí)，減少過(guò)度治療對(duì)患者身體造成的損害，提高患者的生存質(zhì)量。eIF3a表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)聯(lián)還為胃癌的早期診斷和篩查提供了新的方向。由于eIF3a在胃癌組織中的高表達(dá)，且與腫瘤的進(jìn)展相關(guān)，通過(guò)檢測(cè)eIF3a的表達(dá)水平，有可能在胃癌的早期階段發(fā)現(xiàn)病變，實(shí)現(xiàn)早診斷、早治療。可以開(kāi)發(fā)基于eIF3a檢測(cè)的新型診斷技術(shù)，如血清學(xué)檢測(cè)、液體活檢等，用于胃癌的早期篩查，提高胃癌的早期診斷率，為患者爭(zhēng)取更多的治療機(jī)會(huì)。5.3eIF3a作為胃癌診斷和治療靶點(diǎn)的潛力基于本研究結(jié)果以及相關(guān)研究進(jìn)展，eIF3a在胃癌的早期診斷和靶向治療方面展現(xiàn)出巨大的潛力，有望為胃癌的臨床診治帶來(lái)新的突破。在早期診斷方面，由于eIF3a在胃癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá)，且與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，其可作為一種潛在的生物標(biāo)志物用于胃癌的早期篩查和診斷。當(dāng)前，胃癌的早期診斷面臨著諸多挑戰(zhàn)，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，嚴(yán)重影響治療效果和預(yù)后。傳統(tǒng)的診斷方法如胃鏡檢查雖然是確診胃癌的金標(biāo)準(zhǔn)，但屬于侵入性檢查，患者依從性較差，且早期胃癌的內(nèi)鏡下表現(xiàn)不典型，容易漏診。腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)雖然操作簡(jiǎn)便，但現(xiàn)有的腫瘤標(biāo)志物如CEA、CA19-9等在胃癌早期的敏感性和特異性不夠理想。eIF3a的發(fā)現(xiàn)為解決這些問(wèn)題提供了新的方向?？梢酝ㄟ^(guò)檢測(cè)血液、胃液或組織中的eIF3a水平，結(jié)合其他檢測(cè)方法，提高胃癌早期診斷的準(zhǔn)確性。例如，開(kāi)發(fā)基于eIF3a的血清學(xué)檢測(cè)方法，通過(guò)檢測(cè)血清中eIF3a蛋白的含量，實(shí)現(xiàn)對(duì)胃癌的初步篩查。這種方法具有操作簡(jiǎn)便、無(wú)創(chuàng)或微創(chuàng)的優(yōu)點(diǎn)，患者更容易接受，有助于提高胃癌的早期診斷率，為患者爭(zhēng)取更多的治療時(shí)機(jī)。從靶向治療角度來(lái)看，eIF3a在胃癌細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移等過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，使其成為一個(gè)極具潛力的治療靶點(diǎn)。針對(duì)eIF3a的靶向治療策略旨在抑制eIF3a的表達(dá)或活性，從而阻斷其對(duì)胃癌細(xì)胞的促癌作用。目前，針對(duì)eIF3a的靶向治療研究主要集中在以下幾個(gè)方面：一是研發(fā)小分子抑制劑，通過(guò)設(shè)計(jì)和合成能夠特異性結(jié)合eIF3a的小分子化合物，抑制eIF3a與其他分子的相互作用，阻斷其參與的信號(hào)通路，從而抑制胃癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖。有研究發(fā)現(xiàn)，某些小分子抑制劑能夠有效降低eIF3a的表達(dá)水平，抑制胃癌細(xì)胞的增殖和遷移能力，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。二是利用RNA干擾（RNAi）技術(shù)，通過(guò)導(dǎo)入與eIF3amRNA互補(bǔ)的小干擾RNA（siRNA），特異性地降解eIF3amRNA，從而降低eIF3a蛋白的表達(dá)水平。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，RNAi技術(shù)已被證明能夠顯著抑制胃癌細(xì)胞中eIF3a的表達(dá)，抑制腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。三是開(kāi)發(fā)針對(duì)eIF3a的抗體藥物，通過(guò)制備特異性識(shí)別eIF3a的抗體，利用抗體的靶向作用，將藥物或毒素等傳遞到高表達(dá)eIF3a的胃癌細(xì)胞中，實(shí)現(xiàn)對(duì)胃癌細(xì)胞的特異性殺傷。這些靶向治療策略為胃癌的治療提供了新的思路和方法，有望克服傳統(tǒng)治療方法的局限性，提高治療效果，減少不良反應(yīng)，改善患者的預(yù)后和生存質(zhì)量。5.4研究結(jié)果與現(xiàn)有文獻(xiàn)的對(duì)比分析本研究結(jié)果與其他相關(guān)文獻(xiàn)在eIF3a表達(dá)與胃癌關(guān)系方面既有相似之處，也存在一定差異。在eIF3a表達(dá)水平方面，多數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道與本研究一致，均表明eIF3a在胃癌組織中呈高表達(dá)狀態(tài)，顯著高于癌旁組織和正常胃組織。如[文獻(xiàn)作者1]通過(guò)免疫組化和WesternBlot檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)胃癌組織中eIF3a蛋白表達(dá)水平明顯高于正常胃黏膜組織，與本研究結(jié)果相符，進(jìn)一步證實(shí)了eIF3a在胃癌發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮重要作用。在eIF3a表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系上，本研究發(fā)現(xiàn)eIF3a表達(dá)與胃癌浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TNM分期密切相關(guān)，這與[文獻(xiàn)作者2]的研究結(jié)果一致。[文獻(xiàn)作者2]通過(guò)對(duì)大量胃癌患者樣本的分析，發(fā)現(xiàn)eIF3a高表達(dá)的患者更容易出現(xiàn)腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，臨床分期也更高，提示eIF3a可作為評(píng)估胃癌病情進(jìn)展和預(yù)后的