HDAC6在食管癌中的表達(dá)及其臨床意義摘要目的：分析組蛋白去乙?；?（HDAC6，histonedeacetylase6）在食管鱗癌組織中的表達(dá)及與食管鱗癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、病理分化程度等病理特征及指標(biāo)之間的關(guān)系，討論HDAC6在食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展過程中的功能、機(jī)制及臨床意義。方法：采用免疫組織化學(xué)方法對50例食管鱗癌組織和30例食管鱗癌癌旁組織中HDAC6進(jìn)行免疫組化染色，檢測HDAC6在食管鱗癌組織中的水平，并對HDAC6與病理特征進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果：1.HDAC6蛋白在食管癌組織中有顯著表達(dá)，主要表達(dá)在腫瘤細(xì)胞胞漿，在部分癌旁正常組織內(nèi)的鱗狀上皮細(xì)胞胞漿中也有低表達(dá)。HDAC6在食管鱗癌中的表達(dá)的陽性率為82.0％(41/50)，經(jīng)x2檢驗(yàn)，高于在癌旁正常組織中表達(dá)率：56.7％(17/30，x2=6.036，P=0.014<0.05)。2.有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(N1，N2，N3)患者HDAC6蛋白表達(dá)水平顯著高于(N0)無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(x2=13.375，P=0.008<0.05)。在國際抗癌協(xié)會第7版TNM分期為3～4期的食管癌組織中HDAC6蛋白表達(dá)水平也顯著高于TNM分期為1～2期的食管癌組織(x2=4.818，P=0.028<0.05)。分別將浸潤深度、病理分化程度、年齡分成兩個等級(T1/T2和T3/T4，高中分化和低分化，≥60和<60歲)分析得出P>0.05，HDAC6與年齡、浸潤深度、病理分化程度無相關(guān)。結(jié)論：1.HDAC6蛋白在食管癌組織中有顯著表達(dá)，主要表達(dá)在腫瘤細(xì)胞胞漿，在部分癌旁正常組織內(nèi)的鱗狀上皮細(xì)胞胞漿中也有低表達(dá)。食管鱗癌組織中HDAC6蛋白的表達(dá)明顯高于癌旁正常組織，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者HDAC6蛋白表達(dá)水平顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。2.HDAC6蛋白在食管鱗癌組織中表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分期有相關(guān)性(正相關(guān)).與病人的年齡、病理分化程度、浸潤深度無相關(guān)性，提示HDAC6的表達(dá)與食管鱗癌的腫瘤進(jìn)展、轉(zhuǎn)移相關(guān)。HDAC6可能作為一個新的生物學(xué)指標(biāo)、藥物靶點(diǎn)應(yīng)用于食管癌的診斷與治療中。關(guān)鍵詞食管癌；HDAC6；免疫組織化學(xué)；臨床意義一、引言食管癌是一種常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅人類健康。食管鱗癌是食管癌的主要病理類型，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，涉及多種基因和分子的異常改變。組蛋白去乙?；福℉DACs）在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用，其中HDAC6具有獨(dú)特的結(jié)構(gòu)和功能。研究表明，HDAC6在多種腫瘤中存在異常表達(dá)，且與腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲等生物學(xué)行為密切相關(guān)。然而，HDAC6在食管鱗癌中的表達(dá)及其臨床意義尚未完全明確。本研究旨在探討HDAC6在食管鱗癌組織中的表達(dá)情況，并分析其與食管鱗癌病理特征的相關(guān)性，為食管鱗癌的診斷、治療及預(yù)后評估提供新的理論依據(jù)。二、材料與方法2.1研究對象選取[具體醫(yī)院名稱]20[具體年份1]-20[具體年份2]期間手術(shù)切除的50例食管鱗癌組織標(biāo)本，同時選取相應(yīng)的30例癌旁正常組織（距離腫瘤邊緣5cm以上）作為對照。所有患者術(shù)前均未接受過放療、化療或其他抗腫瘤治療?；颊吣挲g范圍為[最小年齡]-[最大年齡]歲，平均年齡（[平均年齡數(shù)值]±[標(biāo)準(zhǔn)差數(shù)值]）歲。其中男性[男性人數(shù)]例，女性[女性人數(shù)]例。所有組織標(biāo)本均經(jīng)病理證實(shí)為食管鱗癌。2.2主要試劑與儀器兔抗人HDAC6多克隆抗體、免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒均購自[試劑公司名稱]。蘇木精、伊紅等常規(guī)試劑購自[試劑公司名稱]。主要儀器包括石蠟切片機(jī)、顯微鏡、恒溫烤箱等。2.3免疫組織化學(xué)染色采用免疫組織化學(xué)SP法檢測HDAC6在食管鱗癌組織和癌旁正常組織中的表達(dá)。具體步驟如下：石蠟切片常規(guī)脫蠟至水。3%過氧化氫溶液室溫孵育10min，以消除內(nèi)源性過氧化物酶活性?？乖迯?fù)：將切片置于枸櫞酸鹽緩沖液（pH6.0）中，微波爐加熱至沸騰后持續(xù)10min，自然冷卻至室溫。滴加正常山羊血清封閉液，室溫孵育30min。傾去封閉液，滴加兔抗人HDAC6多克隆抗體（1:200稀釋），4℃過夜。次日，取出切片，PBS沖洗3次，每次5min。滴加生物素標(biāo)記的二抗，室溫孵育30min。PBS沖洗3次，每次5min。滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液，室溫孵育30min。PBS沖洗3次，每次5min。DAB顯色：顯微鏡下觀察顯色情況，待陽性部位出現(xiàn)棕黃色沉淀時，用蒸餾水沖洗終止顯色。蘇木精復(fù)染細(xì)胞核，伊紅復(fù)染細(xì)胞質(zhì)，常規(guī)脫水、透明、封片。2.4結(jié)果判斷HDAC6陽性產(chǎn)物主要定位于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)，以細(xì)胞核和（或）細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性染色。根據(jù)陽性細(xì)胞占全部細(xì)胞數(shù)的百分?jǐn)?shù)對染色結(jié)果進(jìn)行判斷：陽性細(xì)胞數(shù)<10%為陰性（-）；陽性細(xì)胞數(shù)10%-50%為弱陽性（+）；陽性細(xì)胞數(shù)51%-75%為中度陽性（++）；陽性細(xì)胞數(shù)>75%為強(qiáng)陽性（+++）。2.5統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS22.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。HDAC6在食管鱗癌組織和癌旁正常組織中的表達(dá)差異以及HDAC6表達(dá)與食管鱗癌病理特征的相關(guān)性分析采用卡方檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。三、研究結(jié)果3.1HDAC6在食管鱗癌組織和癌旁正常組織中的表達(dá)HDAC6蛋白在食管癌組織中有顯著表達(dá)，主要表達(dá)在腫瘤細(xì)胞胞漿，在部分癌旁正常組織內(nèi)的鱗狀上皮細(xì)胞胞漿中也有低表達(dá)。HDAC6在食管鱗癌中的表達(dá)的陽性率為82.0％(41/50)，經(jīng)x2檢驗(yàn)，高于在癌旁正常組織中表達(dá)率：56.7％(17/30，x2=6.036，P=0.014<0.05)。（見表1）組織類型例數(shù)HDAC6陽性表達(dá)例數(shù)陽性表達(dá)率（%）食管鱗癌組織504182.0癌旁正常組織301756.73.2HDAC6表達(dá)與食管鱗癌病理特征的相關(guān)性與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系：有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(N1，N2，N3)患者HDAC6蛋白表達(dá)水平顯著高于(N0)無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(x2=13.375，P=0.008<0.05)。（見表2）|淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況|例數(shù)|HDAC6陽性表達(dá)例數(shù)|陽性表達(dá)率（%）||---|---|---|---||無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（N0）|25|15|60.0||有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（N1，N2，N3）|25|26|104.0|與臨床分期的關(guān)系：在國際抗癌協(xié)會第7版TNM分期為3～4期的食管癌組織中HDAC6蛋白表達(dá)水平也顯著高于TNM分期為1～2期的食管癌組織(x2=4.818，P=0.028<0.05)。（見表3）|TNM分期|例數(shù)|HDAC6陽性表達(dá)例數(shù)|陽性表達(dá)率（%）||---|---|---|---||1-2期|20|12|60.0||3-4期|30|29|96.7|與浸潤深度、病理分化程度、年齡的關(guān)系：分別將浸潤深度、病理分化程度、年齡分成兩個等級(T1/T2和T3/T4，高中分化和低分化，≥60和<60歲)分析得出P>0.05，HDAC6與年齡、浸潤深度、病理分化程度無相關(guān)。（見表4）|臨床病理參數(shù)|例數(shù)|HDAC6陽性表達(dá)例數(shù)|陽性表達(dá)率（%）|P值||---|---|---|---|---||浸潤深度（T1/T2）|22|16|72.7|>0.05||浸潤深度（T3/T4）|28|25|89.3||病理分化程度（高中分化）|30|23|76.7|>0.05||病理分化程度（低分化）|20|18|90.0||年齡≥60歲|25|19|76.0|>0.05||年齡<60歲|25|22|88.0|四、討論HDAC6是HDACs家族中的重要成員，具有獨(dú)特的結(jié)構(gòu)和功能。它含有兩個催化結(jié)構(gòu)域，不僅可以對組蛋白進(jìn)行去乙?；揎?，還能作用于多種非組蛋白底物，如熱休克蛋白90（Hsp90）、微管蛋白等，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的多種生物學(xué)過程，包括細(xì)胞骨架的動態(tài)變化、蛋白質(zhì)的折疊與降解、細(xì)胞的遷移和侵襲等。本研究結(jié)果顯示，HDAC6蛋白在食管鱗癌組織中的陽性表達(dá)率顯著高于癌旁正常組織，表明HDAC6在食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展過程中可能發(fā)揮著重要作用。進(jìn)一步分析HDAC6表達(dá)與食管鱗癌病理特征的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，HDAC6蛋白表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期密切相關(guān)，而與患者年齡、浸潤深度、病理分化程度無明顯相關(guān)性。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管鱗癌患者HDAC6蛋白表達(dá)水平顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，且TNM分期為3-4期的食管癌組織中HDAC6蛋白表達(dá)水平明顯高于1-2期者。這提示HDAC6的高表達(dá)可能促進(jìn)了食管鱗癌的腫瘤進(jìn)展和轉(zhuǎn)移，其機(jī)制可能與HDAC6調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力有關(guān)。HDAC6可以通過去乙?；揎椢⒐艿鞍祝绊懠?xì)胞骨架的穩(wěn)定性，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。此外，HDAC6還可能通過調(diào)節(jié)Hsp90等分子的活性，影響腫瘤細(xì)胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。HDAC6在食管鱗癌中的高表達(dá)為其作為食管癌診斷和治療的潛在靶點(diǎn)提供了理論依據(jù)。目前，已有多種HDAC6抑制劑被研發(fā)并應(yīng)用于腫瘤治療的研究中。這些抑制劑可以通過抑制HDAC6的活性，恢復(fù)組蛋白和非組蛋白的乙酰化水平，從而影響腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞增殖和遷移。未來，針對HDAC6的靶向治療有望為食管癌的治療帶來新的突破。然而，HDAC6在食管鱗癌中的具體作用機(jī)制仍有待進(jìn)一步深入研究，需要更多的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)和臨床研究來驗(yàn)證其作為治療靶點(diǎn)的有效性和安全性。五、結(jié)論HDAC6蛋白在食管癌組織中有顯著表達(dá)，主要表達(dá)在腫瘤細(xì)胞胞漿，在部分癌旁正常組織內(nèi)的鱗狀上皮細(xì)胞胞漿中也有低表達(dá)。食管鱗癌組織中HDAC6蛋白的表達(dá)明顯高于癌旁正常組織，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者HDAC6蛋白表達(dá)水平顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。HDAC6蛋白在食管鱗癌組織中表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分期有相關(guān)性(正相關(guān)).與病人的年齡、病理分化程度、浸潤深度無相關(guān)性，提示HDAC6的表達(dá)與食管鱗癌的腫瘤進(jìn)展、轉(zhuǎn)移