食品智能加工技術(shù)專業(yè)金黃色葡萄球菌革蘭氏染色技術(shù)山東藥品食品職業(yè)學(xué)院目錄目錄目錄目錄目錄原理1材料與儀器2方法與步驟3結(jié)果報告4原理原理原理原理原理G+菌的細胞壁主要由肽聚糖組成，其形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)致密，壁厚，脂類物質(zhì)含量低，用乙醇脫色處理時細胞壁脫水，使肽聚糖層的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)孔徑縮小，通透性降低，從而使結(jié)晶紫-碘復(fù)合物不易被洗脫而保留在細胞內(nèi)，經(jīng)復(fù)染后仍保留初染劑的藍紫色；G-菌的細胞壁肽聚糖含量低且結(jié)構(gòu)疏松，而脂類物質(zhì)含量高，當(dāng)用乙醇脫色處理時，脂類物質(zhì)被乙醇溶解，細胞壁通透性增大，使結(jié)晶紫-碘復(fù)合物被洗脫出來，再用復(fù)染劑復(fù)染后，細胞被染上復(fù)染劑的紅色。材料與儀器材料與儀器材料與儀器材料與儀器1.菌種金黃色葡萄球菌平板培養(yǎng)物。2.染色液和試劑草酸銨結(jié)晶紫染色液、路哥氏碘液、0.5%番紅染色液、95%乙醇、香柏油、二甲苯。3.儀器和用具普通光學(xué)顯微鏡、接種環(huán)、酒精燈、火柴、載玻片、擦鏡紙等。方法步驟方法步驟方法步驟方法步驟方法步驟1.制作涂片標本（1）取干凈的載玻片，在中央部位加一滴生理鹽水。（2）以無菌操作法用接種環(huán)取大腸桿菌或金黃色葡萄球菌少許。（3）與載玻片上生理鹽水混合均勻，涂成一薄層，直徑約為1cm。方法步驟方法步驟方法步驟方法步驟方法步驟2.干燥、固定（1）將涂片放在室溫下自然干燥，也可將涂面朝上在酒精燈火焰高處微火烤干。（2）將涂面朝上，將涂片在酒精燈火焰中以鐘擺的速度來回移動3-4次，涂片溫度以手背觸及涂片背面微燙手為宜（不超過60℃），溫度過高易破壞細胞形態(tài)。方法步驟方法步驟方法步驟方法步驟方法步驟4.初染、水洗（1）滴加結(jié)晶紫染液1-2滴到涂面上，以染液剛好覆蓋涂面為宜，染色1min。（2）傾去染液，斜置玻片，用細小的水流從載玻片上端緩慢流下，直至流下的水無色為止。水洗時，不要直接沖洗涂面，水流不宜過急，過大，以免涂面薄膜脫落。方法步驟方法步驟方法步驟方法步驟方法步驟5.媒染、水洗（1）將路哥氏碘液1-2滴加到涂面上，以染液剛好覆蓋涂面為宜，染色1min。（2）傾去染液，斜置玻片，用細小的水流從載玻片上端緩慢流下，直至流下的水無色為止。方法步驟方法步驟方法步驟方法步驟方法步驟6.脫色、水洗（1）傾斜玻片，連續(xù)滴加95%乙醇沖洗脫色，直至流出的乙醇無明顯的紫色（一般需20～30s）。（2）傾斜玻片，用細小的水流從玻片上端緩慢流下。方法步驟方法步驟方法步驟方法步驟方法步驟7.復(fù)染、水洗（1）將番紅染色液1-2滴加到涂面上，以染液剛好覆蓋涂面為宜，染色1min。（2）傾去染液，斜置玻片，用細小的水流從載玻片上端緩慢流下，直至流下的水無色為止。方法步驟方法步驟方法步驟方法步驟方法步驟7.干燥、鏡檢（1）甩去玻片上的水珠后自然晾干；或用吸水紙輕輕吸去水分（不可摩擦）；或在酒精燈火焰高處微火烤干。涂片必須充分干燥。（2）先用低倍鏡找到物象，再用高倍物鏡找到適當(dāng)視野，將高倍物鏡轉(zhuǎn)出，在涂面上加1滴香柏油，再用油鏡觀察。結(jié)果報告結(jié)果報告結(jié)果報告結(jié)果報告結(jié)果報告報告（1）繪出所觀察到的菌