1工作簡(jiǎn)況

1.1任務(wù)來(lái)源

本項(xiàng)目是由國(guó)家煙草專賣局2012年下達(dá)的煙草行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)制定計(jì)

劃（國(guó)煙科[2012]118號(hào)），合同號(hào)為2012B062。

1.2項(xiàng)目承擔(dān)單位、協(xié)作單位及主要分工

該標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目的牽頭承擔(dān)單位為中國(guó)煙草總公司鄭州煙草研究院

（楊軍），協(xié)作承擔(dān)單位為云南省煙草農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院（崔國(guó)民）。中

國(guó)煙草總公司鄭州煙草研究院主要負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目的總體統(tǒng)籌和協(xié)調(diào)，

指導(dǎo)實(shí)施方案制定以及標(biāo)準(zhǔn)制定的各項(xiàng)具體工作；云南省煙草農(nóng)業(yè)科

學(xué)研究院負(fù)責(zé)煙草調(diào)制過(guò)程鮮煙葉樣品的制備技術(shù)研究。

1.3主要工作過(guò)程

本標(biāo)準(zhǔn)制定工作于2012年4月簽訂項(xiàng)目合同。

2012年6月制定完成了鮮煙葉樣品采集制備方案；

2012年9月完成大田關(guān)鍵生育期鮮煙葉樣品采集工作，共采集

樣品903個(gè)；同期完成烘烤過(guò)程鮮煙葉樣品的采集工作，共采集樣品

96個(gè)；

2012年12月完成大田鮮煙葉樣品代謝組學(xué)和分子生物學(xué)試驗(yàn)

研究；完成烘烤試驗(yàn)鮮煙葉樣品淀粉和蛋白質(zhì)含量的檢測(cè)；

2013年1月撰寫“鮮煙葉樣品制備液氮法”標(biāo)準(zhǔn)文本的草稿

及年度試驗(yàn)總結(jié)報(bào)告；

1

2013年3月完成代謝組學(xué)和分子生物學(xué)補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)；

2013年4月根據(jù)補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)研究結(jié)論對(duì)鮮煙葉樣品采集制備方

案進(jìn)行修正和完善，形成初稿；

2013年5月邀請(qǐng)有關(guān)專家對(duì)“鮮煙葉樣品制備液氮法”標(biāo)準(zhǔn)

文本及研究報(bào)告進(jìn)行完善；形成征求意見(jiàn)稿。

1.4標(biāo)準(zhǔn)主要起草人及其所做的工作

根據(jù)“全國(guó)煙草標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)制、修訂工作細(xì)則”的要求，由

承擔(dān)單位組織了林福呈、楊軍、崔國(guó)民、金立鋒、魏春陽(yáng)、李鋒、王

燃、羅朝鵬、武明珠等起草人為主的起草小組，負(fù)責(zé)該標(biāo)準(zhǔn)的起草工

作。其中，項(xiàng)目負(fù)責(zé)人楊軍負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)制定的各項(xiàng)具體工作；林福呈負(fù)

責(zé)項(xiàng)目的總體協(xié)調(diào)和技術(shù)指導(dǎo)；崔國(guó)民與魏春陽(yáng)負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目協(xié)調(diào)、

標(biāo)準(zhǔn)條款起草；崔國(guó)民負(fù)責(zé)煙草調(diào)制過(guò)程鮮煙葉樣品的制備技術(shù)研

究；金立鋒、魏春陽(yáng)、李鋒、王燃、羅朝鵬、武明珠、趙高坤、黃維

等負(fù)責(zé)樣品采集、制備、分析檢測(cè)研究與驗(yàn)證。

2相關(guān)領(lǐng)域的國(guó)、內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)研究和制修訂情況

目前，與煙草鮮煙葉采集制備尚沒(méi)有完善或發(fā)布的相關(guān)國(guó)家標(biāo)

準(zhǔn)，煙草基因組重大專項(xiàng)的實(shí)施需要大量新鮮煙葉樣本的采集制備、

分析等工作，重大專項(xiàng)需要行業(yè)內(nèi)外多家實(shí)驗(yàn)共同參與，為保證樣本

的后期樣本數(shù)據(jù)的通用性，需要對(duì)煙葉樣本進(jìn)行統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)化的采集、

制備、運(yùn)輸、保存。因此，目前亟須建立行業(yè)內(nèi)外通用的鮮煙葉樣品

的制備標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)經(jīng)過(guò)兩年多代謝組學(xué)及表達(dá)譜樣品制備實(shí)踐，項(xiàng)目

2

組已經(jīng)具備制定規(guī)范的煙葉樣本的條件。

該標(biāo)準(zhǔn)將對(duì)煙草基因組計(jì)劃重大專項(xiàng)及行業(yè)其他需要采集鮮煙

葉的樣本進(jìn)行嚴(yán)格規(guī)范，鮮煙葉樣本采集制備將更加統(tǒng)一，對(duì)于不同

實(shí)驗(yàn)室后期數(shù)據(jù)交流與共享具有重要意義。目前，國(guó)外無(wú)相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)

研究。

3標(biāo)準(zhǔn)制定的原則及主要內(nèi)容確定的依據(jù)

3.1標(biāo)準(zhǔn)適用范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了煙草生育期和烘烤過(guò)程中鮮煙葉樣品采集、制作、

保存和運(yùn)輸?shù)募夹g(shù)要求。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于烤煙、白肋煙和香料煙，其他類型煙草可參照使用。

3.2標(biāo)準(zhǔn)編制原則

標(biāo)準(zhǔn)的制定，能夠?yàn)樽畲笙薅葴p小煙草鮮煙葉取樣過(guò)程和樣品運(yùn)

輸保存過(guò)程的代謝物及RNA等含量變化為技術(shù)參考，確保實(shí)驗(yàn)室所

用樣本最大限度體現(xiàn)煙葉樣本的原有理化特性，從而真實(shí)反應(yīng)煙葉生

理變化規(guī)律。

3.3標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容確定的依據(jù)

煙草是重要的模式作物及經(jīng)濟(jì)作物，代謝物是煙草品質(zhì)及香氣的

主要物質(zhì)基礎(chǔ)，蛋白質(zhì)、DNA、RNA及是煙葉品質(zhì)形成的可調(diào)控體

內(nèi)因子，煙草基因組學(xué)暨主要從這四個(gè)層面研究煙草品質(zhì)形成機(jī)理、

探討建立有效調(diào)控手段。這些物質(zhì)研究材料主要是新鮮煙葉樣本，同

時(shí)為了研究的實(shí)用性，大部分研究取材直接從大田進(jìn)行取樣，取樣點(diǎn)

3

遍布全國(guó)，取樣點(diǎn)距離實(shí)驗(yàn)室較遠(yuǎn)，需要長(zhǎng)距離運(yùn)輸回到實(shí)驗(yàn)室。

鮮煙葉樣品制備規(guī)程是獲得好的生物學(xué)（尤其是“組學(xué)”）數(shù)據(jù)

的前提。煙草中各類物質(zhì)包括DNA、RNA、蛋白質(zhì)及代謝物都容易

受環(huán)境的影響，在實(shí)際分析過(guò)程中，包括取樣、運(yùn)輸、保存和樣品制

備對(duì)各種生物組分分析影響非常關(guān)鍵，很多文獻(xiàn)和不同實(shí)驗(yàn)室的經(jīng)驗(yàn)

都證明了這一點(diǎn)。因此，一個(gè)好的實(shí)驗(yàn)操作流程是獲得真實(shí)數(shù)據(jù)的前

提，不同的實(shí)驗(yàn)室采取不同的樣品制備技術(shù)會(huì)獲得大相徑庭的結(jié)果，

所以非常有必要確定煙草鮮煙葉樣品制備規(guī)程。

煙草鮮煙葉樣品制備規(guī)程是獲得歸范、可比、標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)的前提，

有利于不同研究單位的數(shù)據(jù)對(duì)接。隨著煙草基因組的測(cè)序和重大專項(xiàng)

的展開(kāi)，越來(lái)越多的研究單位開(kāi)展以鮮煙葉為樣本有關(guān)的生物學(xué)研

究，不同單位可能采用不同的樣品制備方法，有的單位對(duì)怎樣進(jìn)行樣

品制備還存在疑惑，不同單位獲得的數(shù)據(jù)之間的可比性較差，浪費(fèi)了

實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)和時(shí)間，所以有統(tǒng)一的鮮煙葉樣品制備規(guī)范不僅給各研究單

位提供的準(zhǔn)確實(shí)用的取樣方法，而且可以有效利用不同研究層面的研

究數(shù)據(jù)，實(shí)現(xiàn)不同項(xiàng)目組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可比、交流、共享。

我們這兩年來(lái)通過(guò)開(kāi)展煙草代謝組學(xué)項(xiàng)目與煙草表達(dá)譜項(xiàng)目，已

經(jīng)制定了一套嚴(yán)格完整的鮮煙葉取樣規(guī)程，實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析表明取樣時(shí)

間盡量縮短（控制在10min之內(nèi)），樣品取下標(biāo)記后迅速浸入液氮，

完全速凍后，采用干冰完全包埋盡快（長(zhǎng)途使用航空）運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室，

-80℃保存，可以保證樣本中總代謝物及總RNA基本不變。

標(biāo)準(zhǔn)的制定根據(jù)“全國(guó)煙草標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)制、修訂工作細(xì)則”

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的要求，嚴(yán)格按照國(guó)家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)制定程序及格式開(kāi)展標(biāo)準(zhǔn)制定工作。

標(biāo)準(zhǔn)制定的具體依據(jù)詳見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)驗(yàn)證報(bào)告。

3.4本標(biāo)準(zhǔn)在標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)內(nèi)容、水平方面的情況

本標(biāo)準(zhǔn)為新制定的煙草行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。

本標(biāo)準(zhǔn)是在兩年來(lái)煙草代謝組學(xué)及表達(dá)譜項(xiàng)目鮮煙葉樣品采樣

實(shí)踐和數(shù)據(jù)分析基礎(chǔ)上制定的。本標(biāo)準(zhǔn)的術(shù)語(yǔ)、定義、適用范圍等方

面，符合現(xiàn)有的煙草代謝組學(xué)和生物學(xué)科學(xué)研究實(shí)際，有利于促進(jìn)煙

草基因組計(jì)劃工作高效、規(guī)范、有序進(jìn)行。

本標(biāo)準(zhǔn)的制定和發(fā)布實(shí)施，對(duì)基因組重大專項(xiàng)有關(guān)鮮煙葉樣本制

備規(guī)程、確保基因組重大專項(xiàng)項(xiàng)目數(shù)據(jù)真實(shí)可靠、交叉使用及共享具

有重要意義。

4標(biāo)準(zhǔn)預(yù)期產(chǎn)生的社會(huì)、經(jīng)濟(jì)效益

本標(biāo)準(zhǔn)為國(guó)家煙草專賣局標(biāo)準(zhǔn)制訂項(xiàng)目，本標(biāo)準(zhǔn)適用于煙草代謝

組學(xué)和生物學(xué)研究的科研單位。本標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布實(shí)施后，將使基因組重大

專項(xiàng)及涉及鮮煙葉樣本其他項(xiàng)目樣本采集規(guī)范化，保證煙草生物學(xué)研

究數(shù)據(jù)真實(shí)、可靠，促進(jìn)不同實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展數(shù)據(jù)交流及共享。

5采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)外先進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)的情況

本標(biāo)準(zhǔn)為新制定的煙草行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，未采用相關(guān)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)。目前煙

草生物相關(guān)研究尚沒(méi)有相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。

本標(biāo)準(zhǔn)是基于保證鮮煙葉真實(shí)生物學(xué)狀態(tài)，促進(jìn)煙草基因組計(jì)劃

5

相關(guān)項(xiàng)目可以進(jìn)行有效數(shù)據(jù)交流、共享角度制定的。本標(biāo)準(zhǔn)對(duì)確保煙

草基因組計(jì)劃順利實(shí)施具有一定意義。

6與有關(guān)的現(xiàn)行法律、法規(guī)和強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系

本標(biāo)準(zhǔn)與其他現(xiàn)行法律、法規(guī)并無(wú)沖突之處。

7重大分歧意見(jiàn)的處理經(jīng)過(guò)和依據(jù)

無(wú)。

8作為強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)或推薦性標(biāo)準(zhǔn)的建議及主要依據(jù)

本標(biāo)準(zhǔn)建議為推薦性標(biāo)準(zhǔn)。

理由：不屬于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)法中規(guī)定的強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的范圍。

9標(biāo)準(zhǔn)宣貫的要求和措施建議

本標(biāo)準(zhǔn)適用于從事以鮮煙葉為材料進(jìn)行煙草代謝組學(xué)和生物學(xué)

研