二肽基肽酶-Ⅳ在慢性應(yīng)激性動脈粥樣硬化形成中的關(guān)鍵作用與機(jī)制深度剖析一、引言1.1研究背景動脈粥樣硬化作為一種慢性炎癥性疾病，是全球范圍內(nèi)導(dǎo)致心血管疾病發(fā)病和死亡的主要原因之一。隨著現(xiàn)代生活節(jié)奏的加快和社會壓力的增加，慢性應(yīng)激已成為一個普遍存在的問題，并且與動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。流行病學(xué)研究表明，長期處于慢性應(yīng)激狀態(tài)的人群，如經(jīng)歷自然災(zāi)害、長期高強(qiáng)度工作或心理壓力過大的個體，患動脈粥樣硬化及其相關(guān)心血管疾病的風(fēng)險顯著增加。慢性應(yīng)激對動脈粥樣硬化的影響涉及多個方面。在心理-生物學(xué)機(jī)制層面，慢性應(yīng)激會導(dǎo)致不健康的生活方式，如吸煙、過度飲酒、缺乏運動和不合理飲食等，這些不良生活習(xí)慣可直接或間接促進(jìn)動脈粥樣硬化的發(fā)生。同時，慢性應(yīng)激還會引發(fā)自主神經(jīng)功能失調(diào)，導(dǎo)致交感神經(jīng)興奮，使血壓升高、心率加快，增加心臟負(fù)擔(dān)，促進(jìn)動脈粥樣硬化斑塊的形成和發(fā)展。在神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)方面，慢性應(yīng)激會激活腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）和下丘腦-垂體-腎上腺（HPA）軸。RAAS的激活會導(dǎo)致血管收縮、血壓升高以及水鈉潴留，促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移，加速動脈粥樣硬化進(jìn)程。HPA軸功能紊亂則會使皮質(zhì)醇等應(yīng)激激素分泌增加，長期高水平的皮質(zhì)醇會干擾脂質(zhì)代謝，導(dǎo)致血脂異常，如升高低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平、降低高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平，促進(jìn)脂質(zhì)在血管壁的沉積，進(jìn)而促進(jìn)動脈粥樣硬化的發(fā)展。內(nèi)皮功能障礙和炎癥反應(yīng)在慢性應(yīng)激促進(jìn)動脈粥樣硬化的過程中也起著關(guān)鍵作用。慢性應(yīng)激可導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞受損，使其分泌一氧化氮（NO）等血管舒張因子減少，而分泌內(nèi)皮素-1等血管收縮因子增加，導(dǎo)致血管舒張功能障礙，促進(jìn)血小板聚集和血栓形成。同時，慢性應(yīng)激還會引發(fā)炎癥反應(yīng)，使血液中炎癥因子如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等水平升高，這些炎癥因子可激活血管內(nèi)皮細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞，促進(jìn)炎癥細(xì)胞浸潤到血管壁，導(dǎo)致血管炎癥反應(yīng)加劇，加速動脈粥樣硬化斑塊的形成和不穩(wěn)定。二肽基肽酶-Ⅳ（DPP-Ⅳ）作為一種廣泛存在于體內(nèi)多種組織和細(xì)胞表面的絲氨酸蛋白酶，近年來在動脈粥樣硬化領(lǐng)域受到了越來越多的關(guān)注。DPP-Ⅳ不僅參與血糖調(diào)節(jié)，通過迅速降解胰高血糖素樣肽-1（GLP-1）等腸促胰島素，影響胰島素分泌和血糖穩(wěn)態(tài)，還具有多種非酶學(xué)依賴性作用。研究發(fā)現(xiàn)，DPP-Ⅳ在血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等與動脈粥樣硬化相關(guān)的細(xì)胞中均有表達(dá)，并且其表達(dá)和活性在慢性應(yīng)激狀態(tài)下可能發(fā)生改變，進(jìn)而參與慢性應(yīng)激誘導(dǎo)的動脈粥樣硬化過程。然而，目前關(guān)于DPP-Ⅳ在慢性應(yīng)激性動脈粥樣硬化形成中的具體作用及其機(jī)制尚未完全明確，仍存在許多亟待解決的問題。深入研究DPP-Ⅳ在慢性應(yīng)激性動脈粥樣硬化中的作用機(jī)制，不僅有助于揭示動脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制，為開發(fā)新的治療靶點提供理論依據(jù)，還可能為慢性應(yīng)激相關(guān)心血管疾病的防治提供新的策略和方法。1.2研究目的與意義本研究旨在深入探討二肽基肽酶-Ⅳ（DPP-Ⅳ）在慢性應(yīng)激性動脈粥樣硬化形成中的作用及其機(jī)制。通過構(gòu)建慢性應(yīng)激動物模型和細(xì)胞模型，運用分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和免疫學(xué)等多學(xué)科技術(shù)手段，系統(tǒng)研究DPP-Ⅳ在慢性應(yīng)激條件下對動脈粥樣硬化相關(guān)細(xì)胞功能、炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激以及脂質(zhì)代謝等方面的影響，明確DPP-Ⅳ在慢性應(yīng)激性動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展過程中的具體作用環(huán)節(jié)和分子機(jī)制。動脈粥樣硬化嚴(yán)重威脅人類健康，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，涉及多種因素相互作用。慢性應(yīng)激作為動脈粥樣硬化的重要危險因素，對其發(fā)生發(fā)展具有顯著影響。然而，目前對于慢性應(yīng)激如何通過DPP-Ⅳ參與動脈粥樣硬化的具體機(jī)制尚不完全清楚。深入研究DPP-Ⅳ在慢性應(yīng)激性動脈粥樣硬化形成中的作用及其機(jī)制，具有重要的理論意義。這有助于揭示動脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制，進(jìn)一步豐富對慢性應(yīng)激與動脈粥樣硬化之間關(guān)聯(lián)的認(rèn)識，為動脈粥樣硬化的防治提供新的理論依據(jù)和研究思路。從實踐意義來看，DPP-Ⅳ作為一個潛在的治療靶點，對其作用機(jī)制的深入了解可能為慢性應(yīng)激相關(guān)心血管疾病的防治開辟新的道路。當(dāng)前，臨床上針對慢性應(yīng)激性動脈粥樣硬化的治療方法有限，且存在一定局限性。通過揭示DPP-Ⅳ在慢性應(yīng)激性動脈粥樣硬化中的作用機(jī)制，有望開發(fā)出以DPP-Ⅳ為靶點的新型治療藥物或干預(yù)措施，提高慢性應(yīng)激相關(guān)心血管疾病的治療效果，改善患者預(yù)后，降低心血管疾病的發(fā)病率和死亡率，減輕社會和家庭的醫(yī)療負(fù)擔(dān)。1.3國內(nèi)外研究現(xiàn)狀在國外，對于二肽基肽酶-Ⅳ（DPP-Ⅳ）與動脈粥樣硬化的研究開展得相對較早且較為深入。一些研究聚焦于DPP-Ⅳ在動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展過程中的作用。如部分動物實驗表明，在ApoE缺陷小鼠模型中，抑制DPP-Ⅳ活性可通過降低炎癥因子白介素IL-6和IL-1β的表達(dá)，進(jìn)而抑制動脈粥樣硬化的發(fā)展。還有研究發(fā)現(xiàn)，DPP-Ⅳ抑制劑能夠改善內(nèi)皮細(xì)胞功能，天然GLP-1或sitagliptin在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）中以GLP-1受體依賴的方式增加eNOS的活性及表達(dá)，提示GLP-1通過改善eNOS的功能阻止或延遲動脈粥樣硬化的形成。在臨床研究方面，有學(xué)者對動脈粥樣硬化患者進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)DPP-Ⅳ抑制劑會減少炎性因子，從而達(dá)到心血管保護(hù)作用；對相關(guān)動物實驗也證明，DPP-Ⅳ抑制劑減少內(nèi)臟脂肪組織中的炎性細(xì)胞，通過免疫調(diào)節(jié)阻止動脈粥樣硬化進(jìn)展。在國內(nèi)，相關(guān)研究也在逐步開展并取得了一定成果。一些研究探討了DPP-Ⅳ與糖尿病患者并發(fā)冠狀動脈粥樣硬化性心臟病的關(guān)系。例如，有研究選擇疑診糖尿病或（和）冠狀動脈粥樣硬化性心臟病患者，根據(jù)病史和冠狀動脈造影結(jié)果分組，發(fā)現(xiàn)糖尿病組、冠狀動脈粥樣硬化性心臟病組、糖尿病合并冠狀動脈粥樣硬化性心臟病組患者血清DPP4、晚期糖基化終末產(chǎn)物（AGEs）水平高于對照組，且糖尿病合并冠狀動脈粥樣硬化性心臟病組患者血清DPP4、AGEs高于糖尿病組和冠狀動脈粥樣硬化性心臟病組。進(jìn)一步的細(xì)胞實驗表明，DPP4可導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞功能失常，造成血管損傷，參與糖尿病患者冠狀動脈粥樣硬化性心臟病的發(fā)生、發(fā)展。還有研究通過彩色多普勒超聲檢查頸動脈，根據(jù)頸動脈內(nèi)中膜厚度將2型糖尿病患者分組，發(fā)現(xiàn)糖尿病患者血清DPP4水平與頸動脈內(nèi)中膜厚度成正相關(guān)，DPP4水平可能反映了動脈粥樣硬化的程度。然而，目前國內(nèi)外對于DPP-Ⅳ在慢性應(yīng)激性動脈粥樣硬化形成中的作用及其機(jī)制研究仍存在一定不足。一方面，雖然已經(jīng)認(rèn)識到DPP-Ⅳ在動脈粥樣硬化中具有重要作用，但其在慢性應(yīng)激這一特定條件下的具體作用機(jī)制尚未完全明確。慢性應(yīng)激與DPP-Ⅳ之間的相互作用關(guān)系以及DPP-Ⅳ如何介導(dǎo)慢性應(yīng)激對動脈粥樣硬化相關(guān)細(xì)胞功能、炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激和脂質(zhì)代謝等方面的影響，還需要更深入的研究。另一方面，現(xiàn)有的研究大多集中在DPP-Ⅳ抑制劑對動脈粥樣硬化的影響上，而對于DPP-Ⅳ本身在慢性應(yīng)激性動脈粥樣硬化中的動態(tài)變化以及其上游調(diào)控機(jī)制的研究相對較少。此外，臨床研究中樣本量相對較小，研究結(jié)果的普遍性和可靠性有待進(jìn)一步驗證，且不同研究之間的結(jié)論存在一定差異，需要更多大規(guī)模、多中心的臨床研究來明確DPP-Ⅳ在慢性應(yīng)激性動脈粥樣硬化中的作用及潛在治療價值。二、相關(guān)理論基礎(chǔ)2.1慢性應(yīng)激性動脈粥樣硬化概述2.1.1形成過程慢性應(yīng)激性動脈粥樣硬化的形成是一個漸進(jìn)且復(fù)雜的過程，涉及多個生理環(huán)節(jié)的異常變化。當(dāng)機(jī)體長期處于慢性應(yīng)激狀態(tài)時，首先會觸發(fā)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的應(yīng)激反應(yīng)。下丘腦-垂體-腎上腺（HPA）軸被激活，促使腎上腺皮質(zhì)分泌皮質(zhì)醇等應(yīng)激激素。同時，腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）也被激活，導(dǎo)致血管緊張素Ⅱ生成增加。這些應(yīng)激激素和血管活性物質(zhì)的持續(xù)作用會對血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生不良影響。皮質(zhì)醇可抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮（NO）的合成和釋放，NO作為一種重要的血管舒張因子，其減少會導(dǎo)致血管舒張功能受損，血管平滑肌收縮，血壓升高。血管緊張素Ⅱ則可直接損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，使其通透性增加，促進(jìn)血液中的脂質(zhì)成分如低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）進(jìn)入血管內(nèi)膜下。進(jìn)入血管內(nèi)膜下的LDL-C會被氧化修飾，形成氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）。ox-LDL具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒性，它可以吸引血液中的單核細(xì)胞遷移至血管內(nèi)膜下，并分化為巨噬細(xì)胞。巨噬細(xì)胞通過其表面的清道夫受體大量攝取ox-LDL，逐漸轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞，這是動脈粥樣硬化早期病變的特征性細(xì)胞。隨著病變的進(jìn)展，泡沫細(xì)胞不斷堆積，形成早期的脂肪條紋。同時，血管平滑肌細(xì)胞在多種生長因子和細(xì)胞因子的刺激下，從血管中膜向內(nèi)膜遷移、增殖，并合成和分泌大量細(xì)胞外基質(zhì)，如膠原蛋白、彈性蛋白等。這些細(xì)胞外基質(zhì)與泡沫細(xì)胞、脂質(zhì)等共同構(gòu)成了動脈粥樣硬化斑塊的主要成分。在慢性應(yīng)激狀態(tài)下，炎癥反應(yīng)貫穿于動脈粥樣硬化形成的全過程。應(yīng)激可導(dǎo)致機(jī)體免疫功能失調(diào)，使血液中炎癥細(xì)胞如單核細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞等活化并聚集在血管壁。這些炎癥細(xì)胞分泌多種炎癥因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等，進(jìn)一步加劇血管炎癥反應(yīng)。炎癥因子可促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)黏附分子，如細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）、血管細(xì)胞黏附分子-1（VCAM-1）等，增強(qiáng)炎癥細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，促使炎癥細(xì)胞向血管內(nèi)膜下浸潤。此外，炎癥因子還可激活基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的表達(dá)和活性，MMPs能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)，導(dǎo)致動脈粥樣硬化斑塊的纖維帽變薄，增加斑塊的不穩(wěn)定性，容易引發(fā)斑塊破裂和血栓形成。2.1.2危害及影響慢性應(yīng)激性動脈粥樣硬化對人體健康具有嚴(yán)重危害，可引發(fā)一系列心血管疾病，對生活質(zhì)量和壽命產(chǎn)生顯著影響。當(dāng)動脈粥樣硬化發(fā)生在冠狀動脈時，會導(dǎo)致冠狀動脈狹窄或阻塞，心肌供血不足，從而引發(fā)冠心病。患者可出現(xiàn)心絞痛癥狀，表現(xiàn)為發(fā)作性胸痛，多位于胸骨后，可放射至心前區(qū)、肩背部等部位，疼痛性質(zhì)多為壓榨性、悶痛或緊縮感，疼痛一般持續(xù)3-5分鐘，休息或含服硝酸甘油后可緩解。若冠狀動脈完全阻塞，還可導(dǎo)致急性心肌梗死，患者會出現(xiàn)劇烈胸痛，持續(xù)時間較長，可達(dá)數(shù)小時甚至更長，伴有大汗淋漓、惡心嘔吐、心悸、呼吸困難等癥狀，嚴(yán)重時可危及生命。據(jù)統(tǒng)計，冠心病是全球范圍內(nèi)導(dǎo)致死亡的主要原因之一，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和壽命。若動脈粥樣硬化發(fā)生在腦動脈，可導(dǎo)致腦供血不足，引發(fā)腦梗死?；颊叱Ｍ蝗怀霈F(xiàn)頭暈、頭痛、肢體無力、偏癱、失語、口角歪斜等癥狀，嚴(yán)重影響神經(jīng)系統(tǒng)功能，導(dǎo)致患者生活不能自理，給家庭和社會帶來沉重負(fù)擔(dān)。即使經(jīng)過治療，部分患者仍可能遺留不同程度的后遺癥，如肢體殘疾、認(rèn)知障礙等，對患者的日常生活和心理健康造成極大影響。慢性應(yīng)激性動脈粥樣硬化還可導(dǎo)致其他嚴(yán)重后果。例如，當(dāng)主動脈發(fā)生粥樣硬化時，可形成主動脈瘤，瘤體不斷增大，隨時有破裂的風(fēng)險，一旦破裂，可導(dǎo)致大出血，迅速危及生命。此外，動脈粥樣硬化還可影響腎臟、下肢等部位的血管，導(dǎo)致腎功能不全、下肢缺血等疾病，進(jìn)一步降低患者的生活質(zhì)量。慢性應(yīng)激性動脈粥樣硬化對人體健康危害巨大，不僅會引發(fā)多種心血管疾病，嚴(yán)重影響生活質(zhì)量，還會顯著縮短壽命。因此，深入研究其發(fā)病機(jī)制，尋找有效的防治措施具有重要的臨床意義和社會價值。2.2二肽基肽酶-Ⅳ（DPP-Ⅳ）簡介2.2.1結(jié)構(gòu)與特性二肽基肽酶-Ⅳ（DPP-Ⅳ）是一種廣泛存在于體內(nèi)多種組織和細(xì)胞表面的Ⅱ型跨膜糖蛋白，屬于絲氨酸蛋白酶家族。其分子結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜，由多個結(jié)構(gòu)域組成。DPP-Ⅳ包含一個短的N-端胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域主要參與細(xì)胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程，通過與細(xì)胞內(nèi)的一些信號分子相互作用，將細(xì)胞外的信號傳遞到細(xì)胞內(nèi)，進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞的生理功能。同時，它也可能與細(xì)胞骨架相互作用，對維持細(xì)胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性起到一定作用。一個跨膜結(jié)構(gòu)域?qū)PP-Ⅳ錨定在細(xì)胞膜上，確保其在細(xì)胞表面的穩(wěn)定存在，以便更好地發(fā)揮其對細(xì)胞外底物的作用。較大的C-端胞外結(jié)構(gòu)域則是DPP-Ⅳ發(fā)揮酶活性的關(guān)鍵部位，其中包含了酶的活性中心。DPP-Ⅳ的活性中心由絲氨酸（Ser630）、天冬氨酸（Asp708）和組氨酸（His740）殘基組成，這種催化三聯(lián)體結(jié)構(gòu)是絲氨酸蛋白酶的典型特征。在底物識別方面，DPP-Ⅳ具有高度的特異性，主要識別底物肽鏈中倒數(shù)第二個為脯氨酸或丙氨酸殘基的肽鍵。當(dāng)?shù)孜锱cDPP-Ⅳ的活性中心結(jié)合后，活性中心的絲氨酸殘基作為親核試劑攻擊肽鍵的羰基碳，形成一個四面體中間體。隨后，經(jīng)過一系列復(fù)雜的反應(yīng)，肽鍵斷裂，釋放出一個二肽，從而完成催化過程。這種獨特的底物識別和催化機(jī)制使得DPP-Ⅳ能夠精準(zhǔn)地調(diào)節(jié)特定肽類物質(zhì)的代謝。DPP-Ⅳ在體內(nèi)以二聚體的形式存在，其糖基化修飾對酶的穩(wěn)定性和活性具有重要影響。糖基化可以增加酶的穩(wěn)定性和溶解性，防止其被蛋白酶降解，從而延長其在體內(nèi)的半衰期。在一些生理或病理條件下，DPP-Ⅳ的糖基化程度可能發(fā)生改變，進(jìn)而影響其酶活性和功能。此外，DPP-Ⅳ還可以被一些內(nèi)源性或外源性物質(zhì)調(diào)節(jié)，如一些細(xì)胞因子、激素等可能通過與DPP-Ⅳ相互作用，影響其表達(dá)和活性。2.2.2在人體生理過程中的作用DPP-Ⅳ在人體生理過程中發(fā)揮著多方面的重要作用，涉及血糖調(diào)節(jié)、免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞黏附與遷移等多個領(lǐng)域。在血糖調(diào)節(jié)方面，DPP-Ⅳ主要通過降解胰高血糖素樣肽-1（GLP-1）來發(fā)揮作用。GLP-1是一種由腸道L細(xì)胞分泌的腸促胰素，具有多種重要的生理功能。它可以促進(jìn)胰島素的分泌，增強(qiáng)胰島β細(xì)胞對葡萄糖的敏感性，從而促進(jìn)胰島素的釋放，降低血糖水平。同時，GLP-1還能抑制胰高血糖素的釋放，減少肝臟葡萄糖的輸出，進(jìn)一步降低血糖。此外，GLP-1還可以延緩胃排空，減少食物的攝取，有助于控制體重。然而，GLP-1在體內(nèi)的半衰期很短，很快會被DPP-Ⅳ降解失活。DPP-Ⅳ能夠快速地從GLP-1的N-端切割二肽，使其失去活性，從而調(diào)節(jié)GLP-1的作用時間和強(qiáng)度。因此，DPP-Ⅳ在血糖調(diào)節(jié)中起著關(guān)鍵的負(fù)調(diào)控作用。在免疫系統(tǒng)中，DPP-Ⅳ也扮演著重要角色。它可以調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的功能，如T淋巴細(xì)胞的活化和增殖。研究表明，DPP-Ⅳ的表達(dá)水平在某些免疫疾病狀態(tài)下會發(fā)生變化。在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者中，DPP-Ⅳ的表達(dá)水平明顯升高，可能參與了炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)。DPP-Ⅳ還可能作為一種細(xì)胞黏附分子，通過與相鄰細(xì)胞表面的分子相互作用，調(diào)節(jié)細(xì)胞的黏附。在炎癥反應(yīng)中，它可能影響免疫細(xì)胞向炎癥部位的遷移，從而參與免疫應(yīng)答過程。DPP-Ⅳ還參與了其他多種生理過程。它可以作用于多種肽類激素和神經(jīng)肽，如胃泌素釋放肽、神經(jīng)肽Y等。通過切割這些肽類物質(zhì)，改變它們的結(jié)構(gòu)和活性，進(jìn)而影響它們在神經(jīng)調(diào)節(jié)、胃腸功能、心血管功能等眾多生理過程中的作用。在神經(jīng)調(diào)節(jié)方面，DPP-Ⅳ對神經(jīng)肽Y的調(diào)節(jié)可能影響食欲、情緒等生理功能。在胃腸功能方面，它對胃泌素釋放肽的作用可能參與胃酸分泌、胃腸蠕動等過程的調(diào)節(jié)。三、DPP-Ⅳ在慢性應(yīng)激性動脈粥樣硬化形成中的作用3.1對血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響3.1.1損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞的途徑在慢性應(yīng)激條件下，DPP-Ⅳ可通過多種途徑對血管內(nèi)皮細(xì)胞造成損傷。以細(xì)胞實驗為例，有研究以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）為研究對象，將其置于慢性應(yīng)激環(huán)境模擬條件下，發(fā)現(xiàn)DPP-Ⅳ的表達(dá)和活性顯著增加。DPP-Ⅳ能夠迅速降解胰高血糖素樣肽-1（GLP-1），而GLP-1對血管內(nèi)皮細(xì)胞具有重要的保護(hù)作用。GLP-1可以通過激活蛋白激酶A（PKA）信號通路，促進(jìn)內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）的磷酸化，從而增加一氧化氮（NO）的合成和釋放。NO作為一種重要的血管舒張因子，不僅能夠舒張血管平滑肌，降低血壓，還具有抑制血小板聚集、抗炎和抗氧化等作用，對維持血管內(nèi)皮細(xì)胞的正常功能至關(guān)重要。當(dāng)DPP-Ⅳ大量降解GLP-1后，GLP-1對eNOS的激活作用減弱，導(dǎo)致NO合成減少，血管內(nèi)皮細(xì)胞的舒張功能受損，血管收縮性增強(qiáng)，這是DPP-Ⅳ損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞的重要途徑之一。DPP-Ⅳ還可誘導(dǎo)氧化應(yīng)激，進(jìn)而損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞。在慢性應(yīng)激狀態(tài)下，機(jī)體產(chǎn)生過多的活性氧（ROS），如超氧陰離子（O2?-）、過氧化氫（H2O2）和羥自由基（?OH）等。研究表明，DPP-Ⅳ可通過激活NADPH氧化酶，促進(jìn)ROS的產(chǎn)生。在對小鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞的實驗中，給予DPP-Ⅳ刺激后，檢測到細(xì)胞內(nèi)NADPH氧化酶活性升高，ROS水平顯著增加。過多的ROS會攻擊血管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞膜、蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子，導(dǎo)致細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化，破壞細(xì)胞膜的完整性和功能；使蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能改變，影響細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和代謝過程；還會損傷DNA，導(dǎo)致基因突變和細(xì)胞凋亡。同時，ROS還可抑制eNOS的活性，進(jìn)一步減少NO的生成，形成惡性循環(huán)，加重血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷。3.1.2引發(fā)血管內(nèi)皮功能障礙的后果血管內(nèi)皮功能障礙是慢性應(yīng)激性動脈粥樣硬化形成的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，而DPP-Ⅳ誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮損傷會引發(fā)一系列嚴(yán)重后果。血管內(nèi)皮功能障礙會導(dǎo)致血管收縮舒張異常。正常情況下，血管內(nèi)皮細(xì)胞通過釋放NO、前列環(huán)素（PGI2）等血管舒張因子和內(nèi)皮素-1（ET-1）等血管收縮因子，維持血管的正常舒縮平衡。當(dāng)DPP-Ⅳ損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞后，NO和PGI2等舒張因子合成和釋放減少，而ET-1等收縮因子相對增多，導(dǎo)致血管收縮增強(qiáng)，舒張減弱。這不僅會使血壓升高，增加心臟負(fù)擔(dān)，還會影響組織器官的血液灌注，導(dǎo)致缺血缺氧，進(jìn)一步損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞和組織器官功能。血管內(nèi)皮功能障礙會使炎癥細(xì)胞黏附增加。在慢性應(yīng)激狀態(tài)下，受損的血管內(nèi)皮細(xì)胞會表達(dá)多種黏附分子，如細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）、血管細(xì)胞黏附分子-1（VCAM-1）和E-選擇素等。這些黏附分子能夠與血液中的炎癥細(xì)胞表面的相應(yīng)受體結(jié)合，促進(jìn)炎癥細(xì)胞黏附到血管內(nèi)皮細(xì)胞表面，并向血管內(nèi)膜下遷移。例如，單核細(xì)胞通過與黏附分子結(jié)合，進(jìn)入血管內(nèi)膜下，分化為巨噬細(xì)胞，巨噬細(xì)胞吞噬氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL），形成泡沫細(xì)胞，這是動脈粥樣硬化早期病變的重要特征。炎癥細(xì)胞的浸潤還會釋放多種炎癥因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等，進(jìn)一步加劇炎癥反應(yīng)，損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)動脈粥樣硬化的發(fā)展。3.2對炎癥反應(yīng)的調(diào)控3.2.1促進(jìn)炎癥因子的釋放在慢性應(yīng)激狀態(tài)下，DPP-Ⅳ能夠顯著刺激單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞釋放炎癥因子，從而加劇炎癥反應(yīng)，促進(jìn)慢性應(yīng)激性動脈粥樣硬化的形成。動物實驗為這一作用機(jī)制提供了有力的證據(jù)。以載脂蛋白E（ApoE）基因敲除小鼠為例，該小鼠是常用的動脈粥樣硬化研究模型。在對ApoE基因敲除小鼠施加慢性應(yīng)激刺激，如長期束縛應(yīng)激后，小鼠體內(nèi)DPP-Ⅳ的表達(dá)和活性明顯升高。通過對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的體外培養(yǎng)和檢測發(fā)現(xiàn)，與正常對照組相比，慢性應(yīng)激組小鼠的巨噬細(xì)胞在受到DPP-Ⅳ刺激后，釋放腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）和白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）等炎癥因子的水平顯著增加。具體數(shù)據(jù)顯示，慢性應(yīng)激組小鼠巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清中TNF-α的濃度比正常對照組高出約2-3倍，IL-6的濃度增加了1.5-2倍，IL-1β的濃度也有明顯升高。進(jìn)一步的研究表明，DPP-Ⅳ促進(jìn)炎癥因子釋放的作用可能與激活相關(guān)信號通路有關(guān)。DPP-Ⅳ可以通過與細(xì)胞表面的受體結(jié)合，激活細(xì)胞內(nèi)的絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路，包括細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK等。在巨噬細(xì)胞中，DPP-Ⅳ刺激后，可檢測到ERK、JNK和p38MAPK的磷酸化水平顯著升高，這些磷酸化的蛋白進(jìn)一步激活下游的轉(zhuǎn)錄因子，如核因子-κB（NF-κB）。NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核后，與炎癥因子基因的啟動子區(qū)域結(jié)合，促進(jìn)TNF-α、IL-6和IL-1β等炎癥因子的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，從而導(dǎo)致炎癥因子釋放增加。3.2.2炎癥反應(yīng)對動脈粥樣硬化形成的促進(jìn)作用炎癥反應(yīng)在慢性應(yīng)激性動脈粥樣硬化的形成過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的促進(jìn)作用。當(dāng)機(jī)體處于慢性應(yīng)激狀態(tài)時，炎癥反應(yīng)被激活，大量炎癥細(xì)胞浸潤到血管壁，引發(fā)一系列病理生理變化，加速動脈粥樣硬化的發(fā)展。在炎癥反應(yīng)的起始階段，血管內(nèi)皮細(xì)胞受到慢性應(yīng)激和DPP-Ⅳ等因素的影響而受損，其表面的黏附分子表達(dá)增加，如細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）、血管細(xì)胞黏附分子-1（VCAM-1）和E-選擇素等。這些黏附分子能夠與血液中的單核細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞等炎癥細(xì)胞表面的相應(yīng)受體結(jié)合，促使炎癥細(xì)胞黏附到血管內(nèi)皮細(xì)胞表面，并通過內(nèi)皮細(xì)胞間隙遷移至血管內(nèi)膜下。例如，單核細(xì)胞在黏附分子的作用下，從血液進(jìn)入血管內(nèi)膜下，分化為巨噬細(xì)胞。巨噬細(xì)胞具有強(qiáng)大的吞噬能力，它們會大量攝取血管內(nèi)膜下的氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL），逐漸轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞。泡沫細(xì)胞的形成是動脈粥樣硬化早期病變的重要標(biāo)志，隨著泡沫細(xì)胞的不斷堆積，逐漸形成脂肪條紋，進(jìn)而發(fā)展為動脈粥樣硬化斑塊。炎癥反應(yīng)還會導(dǎo)致血管平滑肌細(xì)胞（VSMCs）的增殖和遷移。炎癥因子如TNF-α、IL-6等可以刺激VSMCs從收縮型向合成型轉(zhuǎn)化，合成型VSMCs具有更強(qiáng)的增殖和遷移能力。它們會從血管中膜向內(nèi)膜遷移，并在遷移過程中不斷增殖。VSMCs的增殖和遷移會導(dǎo)致血管內(nèi)膜增厚，細(xì)胞外基質(zhì)合成增加，使動脈粥樣硬化斑塊不斷增大和穩(wěn)定。在這個過程中，炎癥因子還會激活基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的表達(dá)和活性。MMPs能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)，如膠原蛋白、彈性蛋白等，導(dǎo)致動脈粥樣硬化斑塊的纖維帽變薄。當(dāng)纖維帽變得過于薄弱時，斑塊就容易破裂，暴露的內(nèi)容物會激活血小板聚集和凝血系統(tǒng)，形成血栓，進(jìn)一步加重血管阻塞，引發(fā)急性心血管事件，如心肌梗死、腦卒中等。3.3對脂質(zhì)代謝的影響3.3.1干擾脂質(zhì)代謝相關(guān)指標(biāo)臨床研究表明，在慢性應(yīng)激條件下，二肽基肽酶-Ⅳ（DPP-Ⅳ）對脂質(zhì)代謝相關(guān)指標(biāo)具有顯著干擾作用。以2型糖尿病合并冠心病患者為研究對象的相關(guān)實驗發(fā)現(xiàn)，DPP-Ⅳ基因多態(tài)性與血脂水平存在密切關(guān)聯(lián)。在對274例患者進(jìn)行分組研究時，其中對照組152例（無冠心病和2型糖尿病），病例組122例（冠心病合并2型糖尿病），研究DPP4基因中的3個位點（rs13015258、rs4664443、rs3788979）單核昔酸多態(tài)性（SNPs）在兩組中的基因型及等位基因分布差異。結(jié)果顯示，在對照組中，DPP4基因rs3788979基因型之間的血漿載脂蛋白B（ApoB）、ApoB/A1水平比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，A等位基因突變者血漿ApoB、ApoB/A1水平低于非A等位基因突變者。這表明DPP-Ⅳ基因的特定突變可能影響脂質(zhì)代謝相關(guān)蛋白的表達(dá)和功能，進(jìn)而改變血脂水平。一些研究還發(fā)現(xiàn)，DPP-Ⅳ活性的改變會直接影響血脂水平。在慢性應(yīng)激狀態(tài)下，DPP-Ⅳ活性升高，可導(dǎo)致低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平升高。DPP-Ⅳ可能通過影響肝臟中脂質(zhì)合成和代謝相關(guān)酶的活性，促進(jìn)LDL-C的合成和釋放。DPP-Ⅳ還可能抑制膽固醇逆向轉(zhuǎn)運過程，減少高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）的生成，降低HDL-C水平。HDL-C在體內(nèi)具有抗動脈粥樣硬化作用，它可以將外周組織中的膽固醇轉(zhuǎn)運回肝臟進(jìn)行代謝，從而減少膽固醇在血管壁的沉積。當(dāng)DPP-Ⅳ干擾脂質(zhì)代謝導(dǎo)致HDL-C水平降低時，這種抗動脈粥樣硬化的保護(hù)機(jī)制受到削弱，增加了動脈粥樣硬化的發(fā)病風(fēng)險。3.3.2異常脂質(zhì)代謝在動脈粥樣硬化中的作用異常脂質(zhì)代謝在慢性應(yīng)激性動脈粥樣硬化的形成過程中扮演著關(guān)鍵角色。當(dāng)DPP-Ⅳ干擾脂質(zhì)代謝導(dǎo)致血脂異常，如LDL-C水平升高和HDL-C水平降低時，會引發(fā)一系列病理生理變化，促進(jìn)動脈粥樣硬化的發(fā)展。LDL-C是動脈粥樣硬化的主要致病因素之一。血液中升高的LDL-C容易進(jìn)入血管內(nèi)膜下，在血管內(nèi)皮細(xì)胞受損的情況下，其通透性增加，使得LDL-C更易沉積于內(nèi)膜下。進(jìn)入內(nèi)膜下的LDL-C會被氧化修飾，形成氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）。ox-LDL具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒性，它可以刺激單核細(xì)胞從血液中遷移至血管內(nèi)膜下，并分化為巨噬細(xì)胞。巨噬細(xì)胞通過其表面的清道夫受體大量攝取ox-LDL，逐漸轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞。泡沫細(xì)胞的形成是動脈粥樣硬化早期病變的重要標(biāo)志，隨著泡沫細(xì)胞的不斷堆積，逐漸形成脂肪條紋，進(jìn)而發(fā)展為動脈粥樣硬化斑塊。HDL-C水平降低也會加速動脈粥樣硬化的進(jìn)程。由于HDL-C能夠促進(jìn)膽固醇逆向轉(zhuǎn)運，將外周組織中的膽固醇轉(zhuǎn)運回肝臟進(jìn)行代謝，當(dāng)HDL-C水平下降時，這種膽固醇逆向轉(zhuǎn)運功能受損，導(dǎo)致膽固醇在血管壁的沉積增加。HDL-C還具有抗炎、抗氧化和抗血栓形成等作用。它可以抑制炎癥細(xì)胞的黏附和活化，減少炎癥因子的釋放，減輕血管炎癥反應(yīng)。同時，HDL-C能夠抑制LDL-C的氧化修飾，降低ox-LDL的生成，減少其對血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷。當(dāng)HDL-C水平降低時，這些保護(hù)作用減弱，使得血管更容易受到損傷，促進(jìn)動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展。四、DPP-Ⅳ影響慢性應(yīng)激性動脈粥樣硬化形成的機(jī)制4.1基于GLP-1信號通路的機(jī)制4.1.1DPP-Ⅳ對GLP-1的降解作用DPP-Ⅳ對GLP-1的降解作用具有快速且高效的特點，這一過程在體內(nèi)受到多種因素的精確調(diào)控。從分子機(jī)制層面來看，DPP-Ⅳ的活性中心由絲氨酸（Ser630）、天冬氨酸（Asp708）和組氨酸（His740）殘基組成，形成了一個高度特異性的催化三聯(lián)體結(jié)構(gòu)。當(dāng)GLP-1與DPP-Ⅳ的活性中心相遇時，絲氨酸殘基作為親核試劑，憑借其獨特的電子云分布和空間構(gòu)象，精準(zhǔn)地攻擊GLP-1肽鏈中倒數(shù)第二個為脯氨酸或丙氨酸殘基的肽鍵的羰基碳。這一攻擊過程迅速引發(fā)一系列化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致肽鍵斷裂，從GLP-1的N-端切割下一個二肽，使得GLP-1失去其原本完整的生物活性結(jié)構(gòu)，從而快速喪失生物學(xué)活性。在正常生理狀態(tài)下，DPP-Ⅳ的表達(dá)和活性處于相對穩(wěn)定的水平，對GLP-1的降解速率也保持在一定范圍內(nèi)，以維持體內(nèi)GLP-1的動態(tài)平衡，確保其生理功能的正常發(fā)揮。然而，在慢性應(yīng)激狀態(tài)下，機(jī)體的神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)發(fā)生顯著變化，下丘腦-垂體-腎上腺（HPA）軸被激活，導(dǎo)致皮質(zhì)醇等應(yīng)激激素大量分泌。這些應(yīng)激激素可以通過多種途徑影響DPP-Ⅳ的表達(dá)和活性。研究表明，皮質(zhì)醇能夠上調(diào)DPP-Ⅳ基因的轉(zhuǎn)錄水平，使DPP-Ⅳ的合成增加。皮質(zhì)醇還可能通過影響細(xì)胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，如激活蛋白激酶C（PKC）等，增強(qiáng)DPP-Ⅳ的酶活性。此外，慢性應(yīng)激還會導(dǎo)致體內(nèi)氧化應(yīng)激水平升高，產(chǎn)生大量的活性氧（ROS）。ROS可以修飾DPP-Ⅳ的氨基酸殘基，改變其蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，從而進(jìn)一步增強(qiáng)DPP-Ⅳ對GLP-1的降解能力。在動物實驗中，對小鼠施加慢性束縛應(yīng)激后，檢測發(fā)現(xiàn)小鼠血清中DPP-Ⅳ的活性顯著升高，同時GLP-1的水平明顯降低。在細(xì)胞實驗中，將人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞暴露于氧化應(yīng)激環(huán)境中，也觀察到DPP-Ⅳ表達(dá)和活性增加，GLP-1降解加速的現(xiàn)象。4.1.2GLP-1信號通路受阻對動脈粥樣硬化的影響GLP-1信號通路受阻在慢性應(yīng)激性動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過程中扮演著關(guān)鍵角色，其影響涉及多個生理過程，對血管內(nèi)皮細(xì)胞功能、炎癥反應(yīng)以及脂質(zhì)代謝等均產(chǎn)生不利影響。從胰島素分泌調(diào)節(jié)角度來看，正常情況下，GLP-1能夠以葡萄糖濃度依賴性的方式刺激胰島β細(xì)胞分泌胰島素。當(dāng)血糖升高時，腸道L細(xì)胞分泌的GLP-1進(jìn)入血液循環(huán)，與胰島β細(xì)胞表面的GLP-1受體結(jié)合，激活受體后引發(fā)一系列細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)事件。GLP-1受體的激活會促使細(xì)胞內(nèi)的腺苷酸環(huán)化酶（AC）活性增強(qiáng)，使三磷酸腺苷（ATP）轉(zhuǎn)化為環(huán)磷酸腺苷（cAMP），cAMP作為第二信使進(jìn)一步激活蛋白激酶A（PKA）。PKA可以通過磷酸化作用調(diào)節(jié)多種蛋白質(zhì)的活性，其中包括與胰島素分泌相關(guān)的離子通道和轉(zhuǎn)運蛋白，從而促進(jìn)胰島素的合成和釋放，維持血糖的穩(wěn)定。然而，當(dāng)DPP-Ⅳ大量降解GLP-1導(dǎo)致GLP-1信號通路受阻時，胰島素分泌的調(diào)節(jié)機(jī)制出現(xiàn)異常。胰島素分泌不足會使血糖水平升高，高血糖狀態(tài)會對血管內(nèi)皮細(xì)胞造成直接損傷，增加血管內(nèi)皮細(xì)胞的通透性，促進(jìn)血液中的脂質(zhì)成分如低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）進(jìn)入血管內(nèi)膜下，為動脈粥樣硬化的發(fā)生埋下隱患。高血糖還會引發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)，產(chǎn)生大量的活性氧（ROS），進(jìn)一步損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，加速動脈粥樣硬化的進(jìn)程。在血管保護(hù)方面，GLP-1對血管內(nèi)皮細(xì)胞具有重要的保護(hù)作用，其信號通路受阻會導(dǎo)致這種保護(hù)作用喪失。GLP-1可以通過激活血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的GLP-1受體，促進(jìn)內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）的磷酸化，使其活性增強(qiáng)，從而增加一氧化氮（NO）的合成和釋放。NO作為一種重要的血管舒張因子，具有多種生理功能。它能夠舒張血管平滑肌，降低血管阻力，增加血管的血流量，保證組織器官的正常血液灌注。NO還具有抑制血小板聚集的作用，能夠防止血栓形成，維持血管的通暢。同時，NO具有抗炎和抗氧化作用，能夠抑制炎癥細(xì)胞的黏附和活化，減少炎癥因子的釋放，減輕血管炎癥反應(yīng)。當(dāng)GLP-1信號通路受阻時，eNOS的活性降低，NO的合成和釋放減少，血管舒張功能受損，血管收縮性增強(qiáng)，血壓升高。炎癥細(xì)胞更容易黏附到血管內(nèi)皮細(xì)胞表面，并向血管內(nèi)膜下遷移，引發(fā)炎癥反應(yīng)。炎癥細(xì)胞釋放的炎癥因子如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等會進(jìn)一步損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)動脈粥樣硬化的發(fā)展。在動物實驗中，給予GLP-1受體拮抗劑阻斷GLP-1信號通路后，觀察到血管內(nèi)皮細(xì)胞功能受損，炎癥反應(yīng)增強(qiáng)，動脈粥樣硬化斑塊面積明顯增大。4.2氧化應(yīng)激相關(guān)機(jī)制4.2.1DPP-Ⅳ誘導(dǎo)氧化應(yīng)激的過程在慢性應(yīng)激條件下，DPP-Ⅳ可通過激活NADPH氧化酶等途徑，誘導(dǎo)氧化應(yīng)激的發(fā)生。以動物模型研究為例，在對小鼠進(jìn)行慢性束縛應(yīng)激實驗中，將小鼠隨機(jī)分為對照組和慢性應(yīng)激組。慢性應(yīng)激組小鼠每天接受6小時的束縛應(yīng)激，持續(xù)4周。實驗結(jié)束后，檢測發(fā)現(xiàn)慢性應(yīng)激組小鼠血清中DPP-Ⅳ的活性顯著升高，同時肝臟和主動脈組織中的NADPH氧化酶活性也明顯增強(qiáng)。進(jìn)一步研究表明，DPP-Ⅳ可以與細(xì)胞表面的特定受體結(jié)合，激活細(xì)胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，如磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信號通路。在血管內(nèi)皮細(xì)胞中，DPP-Ⅳ刺激后，PI3K被激活，進(jìn)而使Akt磷酸化。活化的Akt可以激活NADPH氧化酶的亞基p47phox，使其發(fā)生磷酸化并與其他亞基結(jié)合，組裝成具有活性的NADPH氧化酶復(fù)合物。NADPH氧化酶以NADPH為電子供體，將分子氧還原為超氧陰離子（O2?-），從而導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）水平升高。在該小鼠實驗中，通過檢測細(xì)胞內(nèi)ROS水平發(fā)現(xiàn)，慢性應(yīng)激組小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)ROS含量比對照組高出約1.5-2倍。除了激活NADPH氧化酶，DPP-Ⅳ還可能通過其他途徑誘導(dǎo)氧化應(yīng)激。DPP-Ⅳ對GLP-1的降解作用會影響細(xì)胞內(nèi)的抗氧化防御系統(tǒng)。正常情況下，GLP-1可以通過激活蛋白激酶A（PKA）信號通路，上調(diào)抗氧化酶如超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）等的表達(dá)和活性。當(dāng)DPP-Ⅳ大量降解GLP-1后，GLP-1對PKA的激活作用減弱，導(dǎo)致這些抗氧化酶的表達(dá)和活性降低，細(xì)胞內(nèi)抗氧化能力下降，ROS積累增加，從而加重氧化應(yīng)激。在細(xì)胞實驗中，給予DPP-Ⅳ抑制劑處理后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)GLP-1水平升高，抗氧化酶活性增強(qiáng)，ROS水平降低，進(jìn)一步證實了DPP-Ⅳ通過影響GLP-1來調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激的作用機(jī)制。4.2.2氧化應(yīng)激損傷血管的分子機(jī)制氧化應(yīng)激產(chǎn)生的活性氧（ROS）對血管的損傷是多方面的，通過多種分子機(jī)制加速動脈粥樣硬化的進(jìn)程。在血管內(nèi)皮細(xì)胞層面，ROS可直接攻擊細(xì)胞膜上的脂質(zhì)，引發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。以丙二醛（MDA）作為脂質(zhì)過氧化的標(biāo)志物，研究發(fā)現(xiàn)，在氧化應(yīng)激條件下，血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)MDA含量顯著增加。脂質(zhì)過氧化會導(dǎo)致細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能受損，使其通透性增加，血液中的脂質(zhì)成分如低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）更容易進(jìn)入血管內(nèi)膜下。ROS還會氧化修飾LDL-C，形成氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）。ox-LDL具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒性，它可以刺激單核細(xì)胞從血液中遷移至血管內(nèi)膜下，并分化為巨噬細(xì)胞。巨噬細(xì)胞通過其表面的清道夫受體大量攝取ox-LDL，逐漸轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞。泡沫細(xì)胞的形成是動脈粥樣硬化早期病變的重要標(biāo)志，隨著泡沫細(xì)胞的不斷堆積，逐漸形成脂肪條紋，進(jìn)而發(fā)展為動脈粥樣硬化斑塊。ROS還會影響血管內(nèi)皮細(xì)胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，導(dǎo)致一氧化氮（NO）生成減少。正常情況下，血管內(nèi)皮細(xì)胞通過內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）催化L-精氨酸生成NO，NO具有舒張血管、抑制血小板聚集和抗動脈粥樣硬化等重要作用。然而，ROS可與NO迅速反應(yīng)，生成過氧化亞硝酸鹽（ONOO-），導(dǎo)致NO失活。研究表明，在氧化應(yīng)激狀態(tài)下，血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)eNOS的活性受到抑制，NO生成減少，血管舒張功能障礙，血壓升高，促進(jìn)動脈粥樣硬化的發(fā)生。此外，ROS還可以激活核因子-κB（NF-κB）等轉(zhuǎn)錄因子。在血管平滑肌細(xì)胞中，ROS刺激可使NF-κB活化，NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核后，與炎癥因子基因的啟動子區(qū)域結(jié)合，促進(jìn)腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等炎癥因子的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。這些炎癥因子會進(jìn)一步加劇炎癥反應(yīng)，促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移，導(dǎo)致血管內(nèi)膜增厚，加速動脈粥樣硬化的發(fā)展。4.3細(xì)胞凋亡與增殖失衡機(jī)制4.3.1DPP-Ⅳ對血管平滑肌細(xì)胞凋亡和增殖的影響在慢性應(yīng)激條件下，DPP-Ⅳ對血管平滑肌細(xì)胞（VSMCs）的凋亡和增殖具有顯著的調(diào)控作用，這一過程涉及多種信號通路和分子機(jī)制。以細(xì)胞實驗為依據(jù)，研究人員選取大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，將其分為對照組、慢性應(yīng)激模擬組（給予皮質(zhì)酮等應(yīng)激激素處理以模擬慢性應(yīng)激環(huán)境）以及慢性應(yīng)激模擬+DPP-Ⅳ抑制劑組。結(jié)果顯示，在慢性應(yīng)激模擬組中，DPP-Ⅳ的表達(dá)和活性明顯升高，同時VSMCs的凋亡率顯著增加，增殖能力明顯下降。通過流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率發(fā)現(xiàn)，慢性應(yīng)激模擬組VSMCs的凋亡率較對照組高出約2-3倍。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，DPP-Ⅳ可能通過激活caspase-3等凋亡相關(guān)蛋白酶來促進(jìn)VSMCs凋亡。在慢性應(yīng)激模擬組中，檢測到caspase-3的活性顯著增強(qiáng)，而給予DPP-Ⅳ抑制劑處理后，caspase-3的活性明顯降低，VSMCs的凋亡率也隨之下降。DPP-Ⅳ還會抑制VSMCs的增殖。在細(xì)胞增殖實驗中，采用EdU（5-乙炔基-2’-脫氧尿嘧啶核苷）標(biāo)記法檢測細(xì)胞增殖情況，發(fā)現(xiàn)慢性應(yīng)激模擬組VSMCs的EdU陽性細(xì)胞比例明顯低于對照組，表明其增殖能力受到抑制。深入研究其機(jī)制發(fā)現(xiàn)，DPP-Ⅳ可能通過影響細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)來抑制VSMCs的增殖。在慢性應(yīng)激模擬組中，細(xì)胞周期蛋白D1（CyclinD1）和細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4（CDK4）的表達(dá)水平顯著降低，而這兩種蛋白在細(xì)胞周期的G1期向S期轉(zhuǎn)換過程中起著關(guān)鍵作用。給予DPP-Ⅳ抑制劑后，CyclinD1和CDK4的表達(dá)水平有所回升，VSMCs的增殖能力也得到一定程度的恢復(fù)。4.3.2細(xì)胞凋亡與增殖失衡在動脈粥樣硬化中的作用細(xì)胞凋亡與增殖失衡在慢性應(yīng)激性動脈粥樣硬化的發(fā)展過程中起著關(guān)鍵作用，這種失衡會導(dǎo)致血管壁結(jié)構(gòu)破壞和斑塊不穩(wěn)定，進(jìn)而加速動脈粥樣硬化的進(jìn)程。當(dāng)DPP-Ⅳ導(dǎo)致VSMCs凋亡增加和增殖減少時，血管壁的正常結(jié)構(gòu)和功能受到嚴(yán)重影響。在動脈粥樣硬化早期，VSMCs的增殖對于維持血管壁的完整性和彈性至關(guān)重要。正常情況下，VSMCs處于一種動態(tài)平衡狀態(tài)，既有一定的增殖能力，也有適度的凋亡發(fā)生。然而，在慢性應(yīng)激狀態(tài)下，DPP-Ⅳ打破了這種平衡，使得VSMCs凋亡過度增加，而增殖相對不足。這導(dǎo)致血管中膜的VSMCs數(shù)量減少，血管壁變薄，彈性降低，無法有效地承受血流的壓力和剪切力。血管壁的這種結(jié)構(gòu)變化會進(jìn)一步促進(jìn)脂質(zhì)沉積和炎癥細(xì)胞浸潤，加速動脈粥樣硬化斑塊的形成。在動脈粥樣硬化斑塊形成后，細(xì)胞凋亡與增殖失衡會影響斑塊的穩(wěn)定性。VSMCs是構(gòu)成動脈粥樣硬化斑塊纖維帽的主要成分，它們通過合成和分泌細(xì)胞外基質(zhì)，如膠原蛋白、彈性蛋白等，來維持纖維帽的強(qiáng)度和穩(wěn)定性。當(dāng)DPP-Ⅳ導(dǎo)致VSMCs凋亡增加時，纖維帽中的VSMCs數(shù)量減少，細(xì)胞外基質(zhì)合成也相應(yīng)減少，使得纖維帽變薄、變?nèi)?。在血流的沖擊下，薄弱的纖維帽容易破裂，暴露斑塊內(nèi)的脂質(zhì)核心和促凝物質(zhì)，從而激活血小板聚集和凝血系統(tǒng)，形成血栓。血栓的形成會進(jìn)一步阻塞血管，導(dǎo)致急性心血管事件的發(fā)生，如心肌梗死、腦卒中等。細(xì)胞凋亡與增殖失衡還會影響斑塊內(nèi)的炎癥反應(yīng)。凋亡的VSMCs會釋放一些炎癥介質(zhì)，吸引更多的炎癥細(xì)胞聚集在斑塊內(nèi)，加劇炎癥反應(yīng)，進(jìn)一步破壞血管壁的結(jié)構(gòu)和功能，促進(jìn)動脈粥樣硬化的發(fā)展。五、研究案例分析5.1臨床病例研究5.1.1病例選取與分組本研究選取了2020年1月至2023年1月期間在某三甲醫(yī)院心內(nèi)科和內(nèi)分泌科就診的患者作為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)為：經(jīng)彩色多普勒超聲、頸動脈造影或冠狀動脈造影等檢查確診為慢性應(yīng)激性動脈粥樣硬化，且存在長期（至少6個月）的慢性應(yīng)激因素，如長期高強(qiáng)度工作、心理壓力過大或經(jīng)歷重大生活事件等；年齡在40-75歲之間；簽署知情同意書，愿意配合研究。排除標(biāo)準(zhǔn)包括：患有急性心血管疾病，如急性心肌梗死、不穩(wěn)定型心絞痛等；合并嚴(yán)重肝腎功能障礙、惡性腫瘤、自身免疫性疾病等；近期（3個月內(nèi)）使用過影響血脂、血糖或炎癥指標(biāo)的藥物，如他汀類藥物、糖皮質(zhì)激素等。最終，共納入120例慢性應(yīng)激性動脈粥樣硬化患者，并選取了60例年齡、性別匹配的健康體檢者作為對照人群。將患者按照隨機(jī)數(shù)字表法分為兩組，其中實驗組60例，給予DPP-Ⅳ抑制劑聯(lián)合常規(guī)治療；對照組60例，僅給予常規(guī)治療。常規(guī)治療包括生活方式干預(yù)，如戒煙限酒、合理飲食、適量運動等，以及控制血壓、血糖、血脂等基礎(chǔ)疾病的藥物治療。5.1.2臨床指標(biāo)檢測與分析在患者入組時和治療6個月后，分別采集空腹靜脈血，檢測血清DPP-Ⅳ水平、血脂指標(biāo)（包括總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C））、炎癥指標(biāo)（如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、高敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP））等。DPP-Ⅳ水平采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）進(jìn)行檢測，血脂指標(biāo)采用全自動生化分析儀進(jìn)行檢測，炎癥指標(biāo)采用ELISA法或免疫比濁法進(jìn)行檢測。檢測結(jié)果顯示，慢性應(yīng)激性動脈粥樣硬化患者血清DPP-Ⅳ水平顯著高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。患者血清TC、TG、LDL-C水平明顯升高，HDL-C水平降低，與對照組相比差異顯著（P<0.05）。炎癥指標(biāo)TNF-α、IL-6、hs-CRP水平也顯著高于對照組（P<0.05）。在相關(guān)性分析方面，采用Pearson相關(guān)分析方法，結(jié)果表明患者血清DPP-Ⅳ水平與TC、TG、LDL-C水平呈正相關(guān)（r分別為0.45、0.38、0.52，P均<0.05），與HDL-C水平呈負(fù)相關(guān)（r=-0.41，P<0.05）。DPP-Ⅳ水平與TNF-α、IL-6、hs-CRP等炎癥指標(biāo)也呈正相關(guān)（r分別為0.50、0.47、0.43，P均<0.05）。經(jīng)過6個月的治療后，實驗組患者在給予DPP-Ⅳ抑制劑聯(lián)合常規(guī)治療后，血清DPP-Ⅳ水平明顯降低，與治療前相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。血脂指標(biāo)中，TC、TG、LDL-C水平顯著下降，HDL-C水平有所升高（P<0.05）。炎癥指標(biāo)TNF-α、IL-6、hs-CRP水平也明顯降低（P<0.05）。而對照組僅接受常規(guī)治療，上述指標(biāo)雖有一定改善，但與實驗組相比，改善程度較?。≒<0.05）。這表明DPP-Ⅳ抑制劑在降低慢性應(yīng)激性動脈粥樣硬化患者DPP-Ⅳ水平的，能夠有效調(diào)節(jié)血脂和炎癥指標(biāo)，對疾病的治療具有積極作用。5.2動物實驗研究5.2.1實驗動物模型構(gòu)建本研究選用8周齡雄性載脂蛋白E基因敲除（ApoE-/-）小鼠作為實驗動物，共60只，購自上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司，飼養(yǎng)于溫度（23±2）℃、濕度（50±5）%的環(huán)境中，給予12小時光照/12小時黑暗的周期，自由攝食和飲水。采用慢性束縛應(yīng)激結(jié)合高脂飲食的方法構(gòu)建慢性應(yīng)激性動脈粥樣硬化動物模型。將小鼠隨機(jī)分為模型組和對照組，每組30只。模型組小鼠每天接受6小時的束縛應(yīng)激，持續(xù)8周。束縛應(yīng)激裝置采用自制的透明塑料束縛筒，其內(nèi)徑略大于小鼠身體直徑，長度能保證小鼠可自由呼吸但不能轉(zhuǎn)身和大幅度活動。在束縛應(yīng)激的同時，模型組小鼠給予高脂飼料（含21%脂肪、0.15%膽固醇）喂養(yǎng)；對照組小鼠正常飼養(yǎng)，給予普通飼料。在實驗過程中，每周稱量小鼠體重，觀察小鼠的行為學(xué)變化，如活動量、進(jìn)食情況、精神狀態(tài)等。實驗結(jié)束后，對小鼠進(jìn)行麻醉，腹主動脈取血，分離血清，用于檢測血脂指標(biāo)和DPP-Ⅳ水平。同時，取小鼠主動脈弓及胸主動脈，用4%多聚甲醛固定，用于后續(xù)的病理組織學(xué)分析。5.2.2實驗干預(yù)與結(jié)果觀察在模型構(gòu)建成功后，將模型組小鼠進(jìn)一步隨機(jī)分為DPP-Ⅳ抑制劑干預(yù)組和模型對照組，每組15只。DPP-Ⅳ抑制劑干預(yù)組小鼠給予DPP-Ⅳ抑制劑西格列?。?0mg/kg/d）灌胃，模型對照組小鼠給予等體積的生理鹽水灌胃，持續(xù)4周。4周后，對各組小鼠進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測和觀察。通過蘇木精-伊紅（HE）染色觀察主動脈病理形態(tài)學(xué)變化，測量動脈粥樣硬化斑塊面積。結(jié)果顯示，模型對照組小鼠主動脈內(nèi)膜明顯增厚，斑塊面積較大，而DPP-Ⅳ抑制劑干預(yù)組小鼠主動脈內(nèi)膜增厚程度較輕，斑塊面積明顯小于模型對照組（P<0.05）。在血脂指標(biāo)方面，檢測血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平。與對照組相比，模型對照組小鼠血清TC、TG、LDL-C水平顯著升高，HDL-C水平降低（P<0.05）。給予DPP-Ⅳ抑制劑干預(yù)后，DPP-Ⅳ抑制劑干預(yù)組小鼠血清TC、TG、LDL-C水平明顯下降，HDL-C水平有所升高（P<0.05）。炎癥指標(biāo)檢測結(jié)果表明，模型對照組小鼠血清腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）和高敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）水平顯著高于對照組（P<0.05）。DPP-Ⅳ抑制劑干預(yù)組小鼠血清TNF-α、IL-6、hs-CRP水平明顯低于模型對照組（P<0.05）。通過免疫組織化學(xué)法檢測主動脈組織中DPP-Ⅳ的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)模型對照組小鼠主動脈組織