發(fā)酵工程一．選擇題（共16小題）1．（2024秋?順義區(qū)期末）中國是釀酒歷史最古老的國家之一，家釀葡萄酒和工業(yè)化生產(chǎn)啤酒的過程均需要（）A．利用醋酸菌無氧呼吸的原理 B．接種人工選育的單一菌種 C．為發(fā)酵過程提供適宜的溫度 D．對發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行分離和提純2．（2024?鄒城市校級模擬）藍(lán)莓果實的主要抗氧化活性成分為花色苷和多酚類物質(zhì)，具有保護眼睛、抗氧化、消炎、增強記憶、增強免疫和抗癌等多種作用，因此利用藍(lán)莓釀造的藍(lán)莓酒具有較好的保健功能。釀造藍(lán)莓酒的工藝流程為新鮮藍(lán)莓→榨汁→接種→發(fā)酵→過濾→藍(lán)莓酒→儲存。下列敘述錯誤的是（）A．藍(lán)莓酒發(fā)酵過程中起主要作用的微生物是酵母菌 B．對藍(lán)莓汁進(jìn)行糖度調(diào)整可改變藍(lán)莓酒的酒精度 C．接種后需要持續(xù)通入無菌空氣以加快發(fā)酵進(jìn)程 D．若利用酸性重鉻酸鉀檢測酒精度，需先對藍(lán)莓酒進(jìn)行脫色處理3．（2024?六合區(qū)校級二模）將大腸桿菌培養(yǎng)在含有葡萄糖培養(yǎng)液中，在時間0時，將含大腸桿菌的培養(yǎng)液均分為四組，處理見下表?；靹蛱幚?小時后，將經(jīng)不同處理的培養(yǎng)液分別涂布在四組不同的平板上，每組涂12個，在37℃下培養(yǎng)24小時，計數(shù)每組平板中菌落的平均數(shù)。結(jié)果如下表所示：下列有關(guān)說法，正確的是（）組別組1組2組3組4培養(yǎng)液處理只有葡萄糖葡萄糖+物質(zhì)A葡萄糖+物質(zhì)B葡萄糖+物質(zhì)A+物質(zhì)B平板的菌落平均數(shù)長滿菌落2±24±123±3A．研究物質(zhì)A和B對大腸桿菌的共同作用時，組1是對照組，2、3、4組為實驗組 B．物質(zhì)A和物質(zhì)B均能抑制大腸桿菌的生長，且物質(zhì)B的抑制作用強于物質(zhì)A C．物質(zhì)A與物質(zhì)B同時存在時，有些原來不能存活的大腸桿菌存活下來 D．可在培養(yǎng)液（基）中加入酚紅試劑鑒別大腸桿菌4．（2024?河南模擬）黃豆醬是人們喜愛的傳統(tǒng)美食，早在春秋時期就有制作方法的相關(guān)記載。它以黃豆為主要原料，經(jīng)米曲霉（好氧菌）、酵母菌、乳酸菌等微生物發(fā)酵而成。勞動人民在制作過程中不斷改進(jìn)發(fā)酵技術(shù)，總結(jié)出以下經(jīng)驗。下列敘述錯誤的是（）①選用具有高蛋白酶活性的米曲霉②用蒸煮后的大豆與米曲霉混合堆積③將初步發(fā)酵后含米曲霉等微生物的曲料攤薄，并適當(dāng)通風(fēng)④在裝壇時，添加適量食鹽⑤發(fā)酵過程中，需保持發(fā)酵壇密封⑥發(fā)酵過程中，需定期攪拌A．①和④對黃豆醬風(fēng)味的形成起重要作用，利于提升品質(zhì) B．②和⑥可以促使微生物和物料充分混合，提高發(fā)酵效率 C．③有利于米曲霉和酵母菌進(jìn)行有氧呼吸并快速大量增殖 D．⑤中乳酸菌主要集中于發(fā)酵壇上部而米曲霉集中于下部5．（2024?安順模擬）刺梨是貴州主要特產(chǎn)水果，富含超氧化物歧化酶和大量的維生素C、花青素等，可用于制作刺梨果酒和刺梨果醋。利用發(fā)酵工程生產(chǎn)刺梨果酒和果醋的主要流程如圖所示。下列敘述錯誤的是（）A．培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須經(jīng)過嚴(yán)格的滅菌 B．發(fā)酵Ⅰ和發(fā)酵Ⅱ利用的微生物代謝類型不同 C．利用刺梨表面的微生物即可進(jìn)行發(fā)酵Ⅰ和Ⅱ過程 D．發(fā)酵的不同時期要嚴(yán)格控制發(fā)酵溫度、pH和溶氧量等6．（2023秋?潁州區(qū)校級期末）我國是最早生產(chǎn)醬油的國家。制曲是醬油生產(chǎn)的重要工序之一，其主要目的是給黑曲霉創(chuàng)造最佳條件，使其生長繁殖并分泌和積累相應(yīng)的酶，制曲設(shè)備示意圖如圖。下列敘述錯誤的是（）A．黑曲霉不僅可以用于生產(chǎn)醬油，還可以用于生產(chǎn)檸檬酸 B．酶及微生物的種類和數(shù)量是鑒定成曲質(zhì)量的指標(biāo) C．將曲料攤鋪在簾架上有利于控制微生物生長的溫度 D．該制曲過程主要的發(fā)酵產(chǎn)物是葡萄糖、乙醇、乳酸等物質(zhì)7．（2023秋?潁州區(qū)校級期末）無菌操作在微生物培養(yǎng)、植物組織培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)中都至關(guān)重要。下列敘述正確的是（）A．生物技術(shù)實驗中，所有器皿、培養(yǎng)基及生物材料均需進(jìn)行滅菌處理 B．酒精能使細(xì)胞中的蛋白質(zhì)變性失活，95%的酒精用來消毒效果最好 C．配置動物細(xì)胞培養(yǎng)基時，加入抗生素即可達(dá)到無菌培養(yǎng)的目的 D．易分解的活性物質(zhì)過濾除菌后，在無菌條件下加入滅菌的培養(yǎng)基中8．（2023秋?亭湖區(qū)校級期末）下列相關(guān)說法中，錯誤的是（）A．利用發(fā)酵技術(shù)，在鮮奶中加入乳酸菌可制成乳酸制品 B．在腐乳制作過程中，毛霉將蛋白質(zhì)分解產(chǎn)生小分子的肽和氨基酸 C．乙醇既是果酒發(fā)酵的產(chǎn)物，也是果醋發(fā)酵的底物，又可以抑制雜菌繁殖 D．在啤酒生產(chǎn)的主發(fā)酵階段和后發(fā)酵階段，需將溫度保持在酵母菌的最適生長溫度9．（2023秋?延邊州期末）傳統(tǒng)發(fā)酵食品的制作中，所對應(yīng)產(chǎn)物的產(chǎn)生場所，正確的是（）A．制作果酒時，酵母菌產(chǎn)生H2O的場所是線粒體基質(zhì) B．制作泡菜時，乳酸菌產(chǎn)生乳酸的場所是細(xì)胞質(zhì)基質(zhì) C．制作泡菜時，乳酸菌產(chǎn)生CO2的場所是細(xì)胞質(zhì)基質(zhì) D．制作果醋時，醋酸桿菌產(chǎn)生CO2的場所是線粒體基質(zhì)10．（2023秋?濟寧期末）我國早在9000年前就可以運用發(fā)酵技術(shù)獲得產(chǎn)品，為生活增添豐富的色彩。下列說法正確的是（）A．制作果酒時，可通過控制發(fā)酵的溫度、發(fā)酵液的pH等措施降低乳酸菌使果酒變質(zhì)的概率 B．利用酵母菌酒精發(fā)酵進(jìn)行傳統(tǒng)釀酒過程中，需一直保持無氧的條件 C．泡菜壇裝八成滿可以防止發(fā)酵過程中酵母菌、乳酸菌等產(chǎn)生的CO2使發(fā)酵液溢出 D．腐乳鮮美的味道主要由曲霉分解蛋白質(zhì)產(chǎn)生的小分子肽和氨基酸引起11．（2023秋?濟寧期末）味精是一種鮮味劑，利用發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)味精的主要過程為原料→淀粉糖化→通氣發(fā)酵→發(fā)酵產(chǎn)物提取→味精制造→包裝。下列說法錯誤的是（）A．生產(chǎn)味精需要的谷氨酸棒狀桿菌是需氧型生物 B．淀粉的糖化分解有利于發(fā)酵過程的充分進(jìn)行 C．發(fā)酵時需將發(fā)酵液的pH調(diào)節(jié)為中性或弱酸性 D．從發(fā)酵液中獲得谷氨酸需要采取提取、分離和純化措施12．（2024春?郫都區(qū)校級期中）發(fā)酵工程可實現(xiàn)發(fā)酵產(chǎn)品的大規(guī)模生產(chǎn)，如圖為發(fā)酵工程的基本環(huán)節(jié)，相關(guān)敘述正確的是（）A．①、②可以是誘變育種或基因工程育種 B．③是發(fā)酵工程的中心環(huán)節(jié) C．產(chǎn)物濃度的檢測必須在發(fā)酵結(jié)束后進(jìn)行 D．發(fā)酵條件為室溫和近中性的pH等13．（2024秋?河南月考）科研人員計劃從含多種微生物的白酒大曲中分離篩選出能分泌酯化酶的菌株，并用于白酒釀造。白酒大曲中產(chǎn)酯化酶微生物初步篩選時所用培養(yǎng)基成分與操作步驟如表所示。下列敘述錯誤的是（）培養(yǎng)基成分牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、聚乙烯醇溶液、三丁酸甘油酯、水等。（其中聚乙烯醇溶液和三丁酸甘油酯會使培養(yǎng)基呈現(xiàn)乳白色，酯化酶可催化乳白色的物質(zhì)反應(yīng)，產(chǎn)生透明物質(zhì)）操作步驟將白酒大曲塊粉碎制成菌懸液→利用①______（接種方法）接種后培養(yǎng)→將周邊出現(xiàn)②______的菌落挑出→重新劃線接種至分離純化平板培養(yǎng)基上→多次重復(fù)純化至得到不同形態(tài)的單菌落→4℃冰箱保存。A．表中所示培養(yǎng)基中的牛肉膏和蛋白胨可為微生物生長提供氮源 B．篩選產(chǎn)酯化酶的霉菌時，應(yīng)將培養(yǎng)基在滅菌前調(diào)至中性或弱堿性 C．表中①可代表稀釋涂布平板法，②處應(yīng)填透明圈 D．通過劃線操作可將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面14．（2024秋?如皋市期中）酵母菌的純培養(yǎng)步驟如圖所示，下列敘述正確的是（）A．步驟①需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行 B．步驟②培養(yǎng)基凝固后將平板倒置，可減緩培養(yǎng)基中水分蒸發(fā)，避免過快干裂 C．步驟③接種時，若在平板上劃線4個區(qū)，需蘸取酵母菌液4次 D．步驟④培養(yǎng)前需在培養(yǎng)皿皿蓋上做好標(biāo)記15．（2024秋?如皋市期中）某生物小組欲利用以下培養(yǎng)基從土壤中分離某種微生物，下列對該實驗的后續(xù)操作及結(jié)果分析正確的是（）成分葡萄糖K2HPO4K2SO4NaClCaCO3MgSO4?7H2O蒸餾水瓊脂粉含量10g0.2g0.2g0.2g5g0.2g1000mL20gA．配制好的培養(yǎng)基先分裝到錐形瓶后再進(jìn)行高壓蒸汽滅菌 B．該培養(yǎng)基滅菌后需冷卻至40℃再進(jìn)行倒平板操作 C．用無菌水將土樣進(jìn)行系列稀釋，在最后一次稀釋后進(jìn)行涂布接種 D．該無氮培養(yǎng)基可用于硝化細(xì)菌等固氮菌的分離與計數(shù)16．（2024秋?如皋市期中）關(guān)于消毒和滅菌的敘述，錯誤的是（）A．利用微生物寄生于多種細(xì)菌體內(nèi)使細(xì)菌裂解，屬于生物消毒 B．利用紫外線消毒前，噴灑消毒液可加強消毒效果 C．對培養(yǎng)基滅菌時，干熱滅菌比濕熱滅菌需要更高的滅菌溫度 D．對涂布器滅菌，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡，再放在火焰上灼燒二．解答題（共4小題）17．（2024?息縣模擬）（一）某食品公司得到一種高效釀酒的酵母菌菌株，并設(shè)計方案獲得發(fā)酵產(chǎn)物。（1）對于酵母菌的培養(yǎng)，比較適合它的培養(yǎng)基為（A．馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基；B．MS培養(yǎng)基；C．LB培養(yǎng)基；D．牛肉湯培養(yǎng)基），除了要選擇合適的培養(yǎng)基成分外，還要考慮培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)的。（2）欲知道這種微生物的繁殖速度，可用涂布分離法或?qū)湍妇M(jìn)行計數(shù)。對培養(yǎng)到某一時期的培養(yǎng)液制備成10﹣5的稀釋液，每次取0.1mL進(jìn)行涂布分離，三個培養(yǎng)皿生長的菌落數(shù)依次為35個、32個、29個，則培養(yǎng)液中的酵母菌數(shù)量為個/mL。在恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)時，培養(yǎng)皿的放置方式如圖（填“a”或“b”）。（3）該酵母菌的發(fā)酵食品也會因為發(fā)酵時間的長短和不同，而形成不同的代謝產(chǎn)物，使發(fā)酵食品的風(fēng)味發(fā)生變化。釀酒時會因為發(fā)酵液放置過久等原因，導(dǎo)致出現(xiàn)酸味，可能是因為產(chǎn)生了（填物質(zhì)）。（二）目前我國新冠病毒核酸檢測的方法是RT﹣PCR，如圖為RT﹣PCR（逆轉(zhuǎn)錄熒光PCR技術(shù)）的原理：PCR過程中探針和引物一起與模板結(jié)合，探針兩側(cè)分別帶有熒光基團和淬滅基團（抑制熒光發(fā)出），當(dāng)酶催化子鏈延伸至探針處時會水解探針，導(dǎo)致熒光基團與淬滅基團分離而發(fā)出熒光（熒光強度與探針?biāo)饬砍烧嚓P(guān)）。請回答下列問題：（4）PCR技術(shù)與DNA體內(nèi)復(fù)制過程相比，兩者的復(fù)制方式都是。RT﹣PCR過程中，需先以RNA為模板合成cDNA，故裝置中需添加酶。除了加酶，解開cDNA雙螺旋的方法還有。（5）對新冠病毒進(jìn)行檢測時，探針是一段與相同的核苷酸序列。（6）通過熒光檢測到熒光信號，則可判定該檢測樣本為性（選填“陽”、“陰”），在相同PCR循環(huán)次數(shù)條件下，熒光強度與病毒數(shù)量呈。（7）為了在沒有條件進(jìn)行核酸檢測前及早發(fā)現(xiàn)新冠病毒，我國于2022年3月11日推出新冠病毒抗原檢測試劑盒作為核酸檢測的補充措施，該試劑盒的檢測原理是。試劑盒中的探針應(yīng)采用技術(shù)生產(chǎn)。18．（2023秋?宣威市校級期末）青霉素發(fā)酵是高耗氧過程，發(fā)酵過程中給微生物持續(xù)高效地供氧是保證青霉素持續(xù)高產(chǎn)的關(guān)鍵。血紅蛋白具有很強的攜帶O2的能力，將其引入青霉菌是提高青霉素產(chǎn)能的思路之一、血紅蛋白不僅存在于人和動物的紅細(xì)胞中，某些細(xì)菌（如透明顫菌）細(xì)胞中也存在。研究人員為了將透明顫菌的血紅蛋白引入青霉菌，設(shè)計了如圖所示的方案?；卮鹣铝袉栴}：注：某氨基酸缺陷型菌株是指該菌株在缺少該種氨基酸的培養(yǎng)基上會暫停生長（1）上圖步驟②采用的接種方法是，步驟③往培養(yǎng)基中添加的某種物質(zhì)是。得到的平板中菌落較（填“大”或“小”）的菌株即為甲硫氨酸營養(yǎng)缺陷型菌株。（2）溶菌酶屬于免疫系統(tǒng)組成中的，蝸牛酶是從以植物和真菌為食的蝸牛消化道中提取的酶。處理⑤、⑥所用的酶分別是上述兩種酶中的。（3）簡述圖甲步驟⑧從融合細(xì)胞中篩選目的菌株的基本思路：。（4）除了上述方案，請再提出一種將透明顫菌的血紅蛋白引入青霉菌的技術(shù)手段。19．（2023秋?杞縣校級期末）回答下列（一）、（二）小題：（一）如圖1是谷氨酸發(fā)酵裝置示意圖，谷氨酸工業(yè)上常用谷氨酸棒狀桿菌在30℃下發(fā)酵獲得；如圖2是谷氨酸生產(chǎn)的機理，谷氨酸棒狀桿菌以葡萄糖為底物進(jìn)行了如下過程。據(jù)圖分析，回答下列問題：（1）如圖1中1、2處是發(fā)酵罐夾層中冷凝水的進(jìn)出口，水在發(fā)酵罐夾層流動的作用是。如圖1中3為攪拌器，可以加快谷氨酸形成的速率，其原理是。發(fā)酵過程中，若谷氨酸積累過量，會抑制谷氨酸脫氫酶的活性，從而導(dǎo)致該合成途徑中斷，因此提高產(chǎn)物產(chǎn)量的關(guān)鍵是改變菌體細(xì)胞膜的。（2）谷氨酸棒桿菌進(jìn)行以硫酸二乙酯和紫外線相結(jié)合的復(fù)合誘變，經(jīng)選育得到高產(chǎn)突變株LG﹣01．將其接種在含葡萄糖液體培養(yǎng)基中，于30℃下培養(yǎng)48h。搖勻并取培養(yǎng)液稀釋107倍后，向四個培養(yǎng)基分別涂布0.1mL該培養(yǎng)液，四個培養(yǎng)皿生長的菌落依次為31個、2個、35個、33個，則稀釋前菌液的菌體為個/mL，計算得到的值比實際值。（3）發(fā)酵結(jié)束后可用接種環(huán)蘸取發(fā)酵液進(jìn)行，從而純化谷氨酸棒狀桿菌得到單菌落。此外，此過程需確保培養(yǎng)基的pH環(huán)境為。（二）甜菜是我國重要的糖料作物之一，為提高甜菜的光合效率和產(chǎn)量?？蒲泄ぷ髡邩?gòu)建攜帶SBPase基因（編碼卡爾文循環(huán)的關(guān)鍵酶）的表達(dá)載體，如圖3為重組質(zhì)粒示意圖，通過基因工程對甜菜進(jìn)行遺傳改造?；卮鹣铝袉栴}：（4）構(gòu)建表達(dá)載體并導(dǎo)入農(nóng)桿菌：獲取目的基因后利用PCR技術(shù)進(jìn)行擴增，經(jīng)鑒定后，切割凝膠，再將凝膠溶解，回收其中包含目的基因的DNA片段。然后使用限制性內(nèi)切核酸酶切割，將帶有黏性末端的酶切產(chǎn)物純化回收后，用DNA連接酶連接。經(jīng)過一系列步驟后，再將測序正確的重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌。（5）獲取抗性植株：將含有重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌侵染甜菜葉柄并共培養(yǎng)一段時間后，先將外植體放在含有羧芐霉素和頭孢霉素的培養(yǎng)基中初步培養(yǎng)，目的是，再轉(zhuǎn)入含有的篩選培養(yǎng)基中獲得抗性植株。此過程使用抗生素時需注意。（6）為從分子水平上檢測抗性植株是否含有目的基因，對抗性植株進(jìn)行PCR后檢測，檢測結(jié)果如圖4所示。CK+組是選用含的質(zhì)粒作為陽性對照。（7）取陽性無菌苗葉片提取總RNA，將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，再以cDNA為模板，利用目的基因引物進(jìn)行PCR以檢測。在整個過程中，反應(yīng)體系中的酶有。20．（2024?西湖區(qū)校級模擬）反硝化細(xì)菌是一類能將硝態(tài)氮（NO3??N）通過一系列中間產(chǎn)物（NO2?（1）將采集的活性污泥樣品1mL加入到裝有9mL、pH7.2的磷酸鹽緩沖液的l00mL燒杯中，取樣接種到富集培養(yǎng)基中培養(yǎng)，富集培養(yǎng)基的成分有：KNO32g，F(xiàn)eSO40.2g，KH2PO41.0g，MgSO40.5g，NaCl2g，CaCO35g，其中為反硝化細(xì)菌提供氮源的是，富集培養(yǎng)的目的是。（2）將富集后的樣品進(jìn)行梯度稀釋后，使用（填工具）將樣液均勻涂布在BTB培養(yǎng)基（BTB培養(yǎng)基初始pH＝6.8，BTB是酸堿指示劑，酸性條件下為黃色，中性條件下為綠色，堿性條件下為藍(lán)色）上，每個稀釋度下涂布3個培養(yǎng)基是為了，放在30℃環(huán)境中培養(yǎng)2～3天后，挑選周圍顯色的單菌落在固體培養(yǎng)基上劃線分離，獲得純菌株。（3）將液體培養(yǎng)基導(dǎo)入大試管中，將杜氏小試管倒立放入大試管中，試管中的氣體排盡，接入純菌株，30℃恒溫培養(yǎng)5～7d，觀察到小管內(nèi)有氣泡，檢測到N20，即可鑒定純菌株為目的菌。不能依據(jù)培養(yǎng)液中硝酸鹽的濃度變低來鑒定目的菌，原因是。（4）向幾組等量的滅菌后的反硝化培養(yǎng)基中分別以1%、3%、5%、7%和10%的接種量接入菌株N1，在30℃，120r/min搖床震蕩培養(yǎng)，24h后測量NO3①本研究的目的是。②當(dāng)投菌量達(dá)到時，反硝化效果最好，NO3??N和總脫氮率均較高。當(dāng)投菌量繼續(xù)增加，NO

發(fā)酵工程參考答案與試題解析一．選擇題（共16小題）1．（2024秋?順義區(qū)期末）中國是釀酒歷史最古老的國家之一，家釀葡萄酒和工業(yè)化生產(chǎn)啤酒的過程均需要（）A．利用醋酸菌無氧呼吸的原理 B．接種人工選育的單一菌種 C．為發(fā)酵過程提供適宜的溫度 D．對發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行分離和提純【考點】果酒、果醋的制作．【專題】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作；理解能力．【答案】C【分析】發(fā)障工程一般包括菌種的選育、擴大培養(yǎng)、培養(yǎng)基的配制、滅菌、接種、發(fā)酵、產(chǎn)物的分離、提純等方面?！窘獯稹拷猓篈、家釀葡萄酒和工業(yè)化生產(chǎn)啤酒利用的是酵母菌無氧呼吸產(chǎn)生酒精的原理，A錯誤；B、家釀葡萄酒不需要接種人工選育的單一菌種，B錯誤；C、家釀葡萄酒和工業(yè)化生產(chǎn)啤酒均需要為發(fā)酵過程提供適宜的溫度，C正確；D、家釀葡萄酒不需要對發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行分離和提純，D錯誤。故選：C?！军c評】本題考查傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)和發(fā)酵工程的相關(guān)知識，要求考生識記相關(guān)的制作原理和流程，意在考查考生的識記和分析能力。2．（2024?鄒城市校級模擬）藍(lán)莓果實的主要抗氧化活性成分為花色苷和多酚類物質(zhì)，具有保護眼睛、抗氧化、消炎、增強記憶、增強免疫和抗癌等多種作用，因此利用藍(lán)莓釀造的藍(lán)莓酒具有較好的保健功能。釀造藍(lán)莓酒的工藝流程為新鮮藍(lán)莓→榨汁→接種→發(fā)酵→過濾→藍(lán)莓酒→儲存。下列敘述錯誤的是（）A．藍(lán)莓酒發(fā)酵過程中起主要作用的微生物是酵母菌 B．對藍(lán)莓汁進(jìn)行糖度調(diào)整可改變藍(lán)莓酒的酒精度 C．接種后需要持續(xù)通入無菌空氣以加快發(fā)酵進(jìn)程 D．若利用酸性重鉻酸鉀檢測酒精度，需先對藍(lán)莓酒進(jìn)行脫色處理【考點】果酒、果醋的制作．【專題】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作；理解能力．【答案】C【分析】果酒的制作離不開酵母菌，酵母菌是兼性厭氧微生物，在有氧條件下，酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在無氧條件下，酵母菌能進(jìn)行酒精發(fā)酵。故果酒的制作原理是酵母菌無氧呼吸產(chǎn)生酒精?！窘獯稹拷猓篈、果酒的制作離不開酵母菌，在藍(lán)莓酒發(fā)酵過程中起主要作用的微生物是酵母菌，A正確；B、糖可作為酒精發(fā)酵的原料，因此對藍(lán)莓汁進(jìn)行糖度調(diào)整可改變藍(lán)莓酒的酒精度，B正確；C、酵母菌為兼性厭氧菌，釀酒初期需要氧氣促進(jìn)酵母菌的生長、繁殖，后期酵母菌需在無氧環(huán)境中進(jìn)行酒精發(fā)酵，C錯誤；D、若利用酸性重鉻酸鉀檢測酒精度，需先對藍(lán)莓酒進(jìn)行脫色處理，排除果酒原有顏色的干擾，D正確。故選：C?！军c評】本題主要考查果酒的制作等相關(guān)知識點，意在考查學(xué)生對相關(guān)知識點的理解和熟練應(yīng)用的能力。3．（2024?六合區(qū)校級二模）將大腸桿菌培養(yǎng)在含有葡萄糖培養(yǎng)液中，在時間0時，將含大腸桿菌的培養(yǎng)液均分為四組，處理見下表?；靹蛱幚?小時后，將經(jīng)不同處理的培養(yǎng)液分別涂布在四組不同的平板上，每組涂12個，在37℃下培養(yǎng)24小時，計數(shù)每組平板中菌落的平均數(shù)。結(jié)果如下表所示：下列有關(guān)說法，正確的是（）組別組1組2組3組4培養(yǎng)液處理只有葡萄糖葡萄糖+物質(zhì)A葡萄糖+物質(zhì)B葡萄糖+物質(zhì)A+物質(zhì)B平板的菌落平均數(shù)長滿菌落2±24±123±3A．研究物質(zhì)A和B對大腸桿菌的共同作用時，組1是對照組，2、3、4組為實驗組 B．物質(zhì)A和物質(zhì)B均能抑制大腸桿菌的生長，且物質(zhì)B的抑制作用強于物質(zhì)A C．物質(zhì)A與物質(zhì)B同時存在時，有些原來不能存活的大腸桿菌存活下來 D．可在培養(yǎng)液（基）中加入酚紅試劑鑒別大腸桿菌【考點】微生物的選擇培養(yǎng)（稀釋涂布平板法）．【專題】數(shù)據(jù)表格；微生物的分離、培養(yǎng)和應(yīng)用．【答案】C【分析】伊紅﹣亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基可用來鑒別大腸桿菌，生長在此培養(yǎng)基上的大腸桿菌菌落呈深紫色，并有金屬光澤?！窘獯稹拷猓篈、研究物質(zhì)A和B對大腸桿菌的共同作用時，組1、2、3均為對照組，組4為實驗組，A錯誤；B、組2、組3與組1對比可知，物質(zhì)A和物質(zhì)B均能抑制大腸桿菌的生長，且作用相當(dāng)，甚至物質(zhì)A的抑制作用稍強于物質(zhì)B，B錯誤；C、組4與組2、組3對比可知，當(dāng)物質(zhì)A與物質(zhì)B同時存在時，菌落要比物質(zhì)A、物質(zhì)B單獨存在要多，說當(dāng)物質(zhì)A與物質(zhì)B同時存在時，有些原來不能存活的大腸桿菌存活下來，C正確；D、鑒別大腸桿菌可使用的試劑是伊紅﹣亞甲藍(lán)試劑，D錯誤。故選：C?！军c評】本題考查了微生物的選擇培養(yǎng)，需要學(xué)生掌握選擇培養(yǎng)基的配制。4．（2024?河南模擬）黃豆醬是人們喜愛的傳統(tǒng)美食，早在春秋時期就有制作方法的相關(guān)記載。它以黃豆為主要原料，經(jīng)米曲霉（好氧菌）、酵母菌、乳酸菌等微生物發(fā)酵而成。勞動人民在制作過程中不斷改進(jìn)發(fā)酵技術(shù)，總結(jié)出以下經(jīng)驗。下列敘述錯誤的是（）①選用具有高蛋白酶活性的米曲霉②用蒸煮后的大豆與米曲霉混合堆積③將初步發(fā)酵后含米曲霉等微生物的曲料攤薄，并適當(dāng)通風(fēng)④在裝壇時，添加適量食鹽⑤發(fā)酵過程中，需保持發(fā)酵壇密封⑥發(fā)酵過程中，需定期攪拌A．①和④對黃豆醬風(fēng)味的形成起重要作用，利于提升品質(zhì) B．②和⑥可以促使微生物和物料充分混合，提高發(fā)酵效率 C．③有利于米曲霉和酵母菌進(jìn)行有氧呼吸并快速大量增殖 D．⑤中乳酸菌主要集中于發(fā)酵壇上部而米曲霉集中于下部【考點】制作泡菜；果酒、果醋的制作；發(fā)酵與傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)．【專題】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作．【答案】D【分析】米曲霉是真菌的一種，米曲霉發(fā)酵過程的主要目的是使米曲霉充分生長繁殖，大量分泌制作醬油過程所需的酶類，這些酶（如蛋白酶和脂肪酶）中能將發(fā)酵池中的蛋白質(zhì)和脂肪分解成易于吸收、風(fēng)味獨特的成分?！窘獯稹拷猓篈、米曲霉能夠分泌蛋白酶能夠?qū)ⅫS豆醬中的蛋白質(zhì)分解，而食鹽一方面可以抑制雜菌生長，一方面可以調(diào)味，故①和④對黃豆醬風(fēng)味的形成起重要作用，利于提升品質(zhì)，A正確；B、米曲霉是好氧菌，且能夠分泌蛋白酶將黃豆醬中的蛋白質(zhì)分解，故②和⑥可以促使微生物和物料充分混合，提高發(fā)酵效率，B正確；C、米曲霉是好氧菌，而酵母菌也可以進(jìn)行有氧呼吸，故③有利于米曲霉和酵母菌進(jìn)行有氧呼吸并快速大量增殖，C正確；D、乳酸菌屬于厭氧菌，米曲霉是好氧菌，故⑤中米曲霉主要集中于發(fā)酵壇上部而乳酸菌集中于下部，D錯誤。故選：D?！军c評】本題主要考傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用等相關(guān)知識點，意在考查學(xué)生對相關(guān)知識點的理解和掌握情況。5．（2024?安順模擬）刺梨是貴州主要特產(chǎn)水果，富含超氧化物歧化酶和大量的維生素C、花青素等，可用于制作刺梨果酒和刺梨果醋。利用發(fā)酵工程生產(chǎn)刺梨果酒和果醋的主要流程如圖所示。下列敘述錯誤的是（）A．培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須經(jīng)過嚴(yán)格的滅菌 B．發(fā)酵Ⅰ和發(fā)酵Ⅱ利用的微生物代謝類型不同 C．利用刺梨表面的微生物即可進(jìn)行發(fā)酵Ⅰ和Ⅱ過程 D．發(fā)酵的不同時期要嚴(yán)格控制發(fā)酵溫度、pH和溶氧量等【考點】果酒、果醋的制作．【專題】模式圖；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作．【答案】C【分析】發(fā)酵Ⅰ階段發(fā)酵的菌種主要是酵母菌。在發(fā)酵Ⅱ階段，發(fā)酵菌種主要是醋酸菌，醋酸菌為需氧菌，可將酒精轉(zhuǎn)化為乙醛，乙醛再轉(zhuǎn)化為醋酸?！窘獯稹拷猓篈、培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須經(jīng)過嚴(yán)格的滅菌，避免雜菌污染，A正確；B、發(fā)酵Ⅰ的微生物代謝類型為異養(yǎng)兼性厭氧菌，發(fā)酵Ⅱ利用的微生物代謝類型為異養(yǎng)需氧型，B正確；C、利用刺梨表面的微生物有雜菌且相應(yīng)的微生物數(shù)量少，則可需要接種相應(yīng)的菌種進(jìn)行發(fā)酵Ⅰ和Ⅱ過程，C錯誤；D、發(fā)酵的不同時期要嚴(yán)格控制發(fā)酵溫度、pH和溶氧量等，D正確。故選：C?！军c評】本題主要考查果酒、果醋的制作等相關(guān)知識點，意在考查學(xué)生對相關(guān)知識點的理解和掌握。6．（2023秋?潁州區(qū)校級期末）我國是最早生產(chǎn)醬油的國家。制曲是醬油生產(chǎn)的重要工序之一，其主要目的是給黑曲霉創(chuàng)造最佳條件，使其生長繁殖并分泌和積累相應(yīng)的酶，制曲設(shè)備示意圖如圖。下列敘述錯誤的是（）A．黑曲霉不僅可以用于生產(chǎn)醬油，還可以用于生產(chǎn)檸檬酸 B．酶及微生物的種類和數(shù)量是鑒定成曲質(zhì)量的指標(biāo) C．將曲料攤鋪在簾架上有利于控制微生物生長的溫度 D．該制曲過程主要的發(fā)酵產(chǎn)物是葡萄糖、乙醇、乳酸等物質(zhì)【考點】發(fā)酵工程在食品、醫(yī)藥、農(nóng)牧業(yè)等工業(yè)上的應(yīng)用．【專題】正推法；微生物的分離、培養(yǎng)和應(yīng)用；理解能力．【答案】D【分析】鼓風(fēng)機應(yīng)不斷通入經(jīng)過濾的新鮮空氣，為米曲霉的生長提供足量的氧氣，為米曲霉生長創(chuàng)做條件，以便其大量繁殖，積累相應(yīng)的酶。【解答】解：A、以大豆為主要原料，利用黑曲霉，經(jīng)一系列步驟可以生產(chǎn)醬油，檸檬酸也是由黑曲霉發(fā)酵制得的，A正確；B、發(fā)酵的主要目的是使黑曲霉充分生長繁殖并分泌和積累相應(yīng)的酶，所以酶及微生物的種類和數(shù)量是鑒定成曲質(zhì)量的指標(biāo)，B正確；C、微生物的生長需要適宜的溫度，曲料攤鋪在簾架上可以及時散熱，有利于控制微生物生長的溫度，C正確；D、葡萄糖是發(fā)酵的底物，不是產(chǎn)物，D錯誤。故選：D。【點評】本題主要考查發(fā)酵工程等相關(guān)知識點，意在考查學(xué)生對相關(guān)知識點的理解和熟練應(yīng)用的能力。7．（2023秋?潁州區(qū)校級期末）無菌操作在微生物培養(yǎng)、植物組織培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)中都至關(guān)重要。下列敘述正確的是（）A．生物技術(shù)實驗中，所有器皿、培養(yǎng)基及生物材料均需進(jìn)行滅菌處理 B．酒精能使細(xì)胞中的蛋白質(zhì)變性失活，95%的酒精用來消毒效果最好 C．配置動物細(xì)胞培養(yǎng)基時，加入抗生素即可達(dá)到無菌培養(yǎng)的目的 D．易分解的活性物質(zhì)過濾除菌后，在無菌條件下加入滅菌的培養(yǎng)基中【考點】無菌技術(shù)常用的消毒和滅菌方法．【專題】正推法；微生物的分離、培養(yǎng)和應(yīng)用；理解能力．【答案】D【分析】1、微生物培養(yǎng)過程中要進(jìn)行無菌操作，關(guān)鍵就在于防止外來雜菌的入侵。2、實驗室常用的滅菌方法：（1）灼燒滅菌：將微生物的接種工具，如接種環(huán)、接種針或其他金屬工具，直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速徹底地滅菌，此外，在接種過程中，試管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通過火焰燃燒來滅菌。（2）干熱滅菌：能耐高溫的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）和金屬用具等，可以采用這種方法滅菌?！窘獯稹拷猓篈、生物技術(shù)實驗中，要對所有培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿消毒，但是生物材料要根據(jù)實際情況來，比如說植物組織培養(yǎng)，外植體只能消毒，不能滅菌，A錯誤；B、一般消毒用的是70%的酒精，B錯誤；C、抗生素只能殺滅細(xì)菌和一部分真菌，不能達(dá)到無菌的效果，C錯誤；D、易分解的活性物質(zhì)應(yīng)該用過濾滅菌，無菌條件下加入無菌培養(yǎng)基，D正確。故選：D?！军c評】本題主要考查無菌技術(shù)等相關(guān)知識點，意在考查學(xué)生對相關(guān)知識點的理解和熟練應(yīng)用的能力。8．（2023秋?亭湖區(qū)校級期末）下列相關(guān)說法中，錯誤的是（）A．利用發(fā)酵技術(shù)，在鮮奶中加入乳酸菌可制成乳酸制品 B．在腐乳制作過程中，毛霉將蛋白質(zhì)分解產(chǎn)生小分子的肽和氨基酸 C．乙醇既是果酒發(fā)酵的產(chǎn)物，也是果醋發(fā)酵的底物，又可以抑制雜菌繁殖 D．在啤酒生產(chǎn)的主發(fā)酵階段和后發(fā)酵階段，需將溫度保持在酵母菌的最適生長溫度【考點】果酒、果醋的制作；發(fā)酵工程在食品、醫(yī)藥、農(nóng)牧業(yè)等工業(yè)上的應(yīng)用；發(fā)酵與傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)．【專題】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作；理解能力．【答案】D【分析】1、果酒的制作主要利用的是酵母菌的酒精發(fā)酵，果醋的制作利用的是醋酸菌將酒精轉(zhuǎn)變成醋酸的代謝，腐乳的制作利用的主要是毛霉分泌的蛋白酶等酶類，泡菜的制作利用的是乳酸菌的乳酸發(fā)酵。傳統(tǒng)的發(fā)酵技術(shù)都巧妙的利用了天然菌種，都為特定的菌種提供了良好的生存條件，最終的發(fā)酵產(chǎn)物不是單一的組分，而是成分復(fù)雜的混合物。2、果酒用到的葡萄應(yīng)該先沖洗，然后再除去枝梗，以避免除去枝梗時引起葡萄破損，增加被雜菌污染的機會；榨汁機、發(fā)酵裝置要清洗干凈，并進(jìn)行酒精消毒；每次排氣時只需擰松瓶蓋，不要完全揭開瓶蓋等?！窘獯稹拷猓篈、乳酸菌在無氧的條件下將有機物分解為乳酸，利用發(fā)酵技術(shù)，在鮮奶中加入乳酸菌可制成乳酸制品，A正確；B、毛霉會分泌蛋白酶，在腐乳制作過程中，可以將蛋白質(zhì)分解產(chǎn)生小分子的肽和氨基酸，B正確；C、果酒發(fā)酵過程中，酵母菌在無氧條件下產(chǎn)生乙醇，在酸性缺氧的條件下，其他雜菌不能生長，所以乙醇既是果酒發(fā)酵的產(chǎn)物，在葡萄糖缺乏，氧氣充足的條件下，醋酸菌可以將乙醇氧化為醋酸，所以也是果醋發(fā)酵的底物，又可以抑制雜菌繁殖，C正確；D、在啤酒生產(chǎn)的主發(fā)酵階段需將溫度保持在酵母菌的最適生長溫度，后發(fā)酵階段需將溫度保持在低溫，也就是發(fā)酵溫度，D錯誤。故選：D。【點評】本題考查發(fā)酵工程的相關(guān)知識，意在考查學(xué)生的識記能力和判斷能力、運用所學(xué)知識綜合分析問題的能力。9．（2023秋?延邊州期末）傳統(tǒng)發(fā)酵食品的制作中，所對應(yīng)產(chǎn)物的產(chǎn)生場所，正確的是（）A．制作果酒時，酵母菌產(chǎn)生H2O的場所是線粒體基質(zhì) B．制作泡菜時，乳酸菌產(chǎn)生乳酸的場所是細(xì)胞質(zhì)基質(zhì) C．制作泡菜時，乳酸菌產(chǎn)生CO2的場所是細(xì)胞質(zhì)基質(zhì) D．制作果醋時，醋酸桿菌產(chǎn)生CO2的場所是線粒體基質(zhì)【考點】果酒、果醋的制作；制作泡菜．【專題】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作；理解能力．【答案】B【分析】（1）利用酵母菌制作果酒的原理是：在有氧條件下，酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，大量繁殖。C6H12O6+6O2+12H2O→酶6CO2+12H2在無氧條件下，酵母菌能進(jìn)行酒精發(fā)酵。C6H12O6→酶2CO2+2C2H5（2）利用醋酸菌制作果醋的原理當(dāng)氧氣、糖源都充足時，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸；當(dāng)缺少糖源時，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿?。C6H12O6+2O2→酶CH3COOH（醋酸）+2H2O+2CO2C2H5OH+O2→酶CH3COOH（醋酸）+H2【解答】解：A、在制作果酒時，酵母菌進(jìn)行有氧呼吸產(chǎn)生H2O的場所是線粒體內(nèi)膜，而不是線粒體基質(zhì)，A錯誤；B、制作泡菜時，乳酸菌進(jìn)行無氧呼吸產(chǎn)生乳酸，無氧呼吸的場所是細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)，B正確；C、乳酸菌進(jìn)行無氧呼吸產(chǎn)生乳酸，不產(chǎn)生CO2，C錯誤；D、醋酸桿菌屬于原核生物，沒有線粒體，其進(jìn)行有氧呼吸產(chǎn)生CO2的場所是細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)，D錯誤。故選：B?！军c評】本題考查傳統(tǒng)發(fā)酵食品的制作等相關(guān)知識，意在考查學(xué)生的識記能力和熟練應(yīng)用的能力。10．（2023秋?濟寧期末）我國早在9000年前就可以運用發(fā)酵技術(shù)獲得產(chǎn)品，為生活增添豐富的色彩。下列說法正確的是（）A．制作果酒時，可通過控制發(fā)酵的溫度、發(fā)酵液的pH等措施降低乳酸菌使果酒變質(zhì)的概率 B．利用酵母菌酒精發(fā)酵進(jìn)行傳統(tǒng)釀酒過程中，需一直保持無氧的條件 C．泡菜壇裝八成滿可以防止發(fā)酵過程中酵母菌、乳酸菌等產(chǎn)生的CO2使發(fā)酵液溢出 D．腐乳鮮美的味道主要由曲霉分解蛋白質(zhì)產(chǎn)生的小分子肽和氨基酸引起【考點】果酒、果醋的制作；發(fā)酵與傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)；制作泡菜．【專題】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作．【答案】A【分析】1、制作泡菜的注意事項：（1）鹽水煮沸，一是為了消除雜菌，二是為了除去水中的氧氣，冷卻再用是為了避免高溫殺死壇中蔬菜表面的乳酸菌；（2）加水密封是為了阻止外面的空氣再進(jìn)入泡菜壇，為乳酸菌發(fā)酵制作泡菜創(chuàng)造無氧的環(huán)境條件。若此過程中進(jìn)入大量氧氣，可能導(dǎo)致乳酸菌死亡而好氧菌大量繁殖，使菜腐爛；（3）菜料只能裝八成滿的原因：初期會有氣體產(chǎn)生；要往壇中加鹽水沒過菜料，所以不能加菜料太滿。2、制作果酒和果醋的注意事項：（1）發(fā)酵瓶和榨計機都要用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精消毒；（2）葡萄要先沖洗再去枝梗，以免去枝梗時葡萄破碎，增加被雜菌污染的風(fēng)險；（3）瓶中留有13空間為酵母菌進(jìn)行有氧呼吸大量繁殖提供氧氣。果酒發(fā)酵過程中會產(chǎn)生大量CO2【解答】解：A、制作果酒時，果酒中除了酵母菌，還有乳酸菌、醋酸菌等微生物；乳酸菌可能分解果酒中的糖、甘油、酒石酸等，從而使果酒變質(zhì)；可通過控制發(fā)酵的溫度、發(fā)酵液的pH等措施降低乳酸菌使果酒變質(zhì)的概率，A正確；B、利用酵母菌釀制果酒時，初始階段可往裝置中通入一定量空氣，使酵母菌進(jìn)行有氧呼吸大量繁殖，后期再密封發(fā)酵使酵母菌進(jìn)行無氧呼吸，產(chǎn)生酒精，B錯誤；C、泡菜發(fā)酵時，發(fā)酵初期酵母菌等的活動會產(chǎn)生氣體，使體積膨脹，故泡菜壇裝八成滿可防止發(fā)酵液溢出，乳酸菌只進(jìn)行無氧呼吸（乳酸發(fā)酵）不產(chǎn)生二氧化碳，C錯誤；D、多種微生物參與了豆腐的發(fā)酵，如酵母、曲霉和毛霉等，其中起主要作用的是毛霉；腐乳發(fā)酵時，發(fā)揮主要作用是毛霉，毛霉通過分泌脂肪酶和蛋白酶（不是胰蛋白酶）將豆腐塊中的大分子物質(zhì)分解為易于被人體吸收的小分子物質(zhì)，有些氨基酸具有特殊的氣味而表現(xiàn)出腐乳的風(fēng)味，D錯誤。故選：A?！军c評】本題主要考查傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用的內(nèi)容，要求考生識記相關(guān)知識，并結(jié)合所學(xué)知識準(zhǔn)確答題。11．（2023秋?濟寧期末）味精是一種鮮味劑，利用發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)味精的主要過程為原料→淀粉糖化→通氣發(fā)酵→發(fā)酵產(chǎn)物提取→味精制造→包裝。下列說法錯誤的是（）A．生產(chǎn)味精需要的谷氨酸棒狀桿菌是需氧型生物 B．淀粉的糖化分解有利于發(fā)酵過程的充分進(jìn)行 C．發(fā)酵時需將發(fā)酵液的pH調(diào)節(jié)為中性或弱酸性 D．從發(fā)酵液中獲得谷氨酸需要采取提取、分離和純化措施【考點】發(fā)酵工程在食品、醫(yī)藥、農(nóng)牧業(yè)等工業(yè)上的應(yīng)用．【專題】正推法；微生物的分離、培養(yǎng)和應(yīng)用；理解能力．【答案】C【分析】在谷氨酸生產(chǎn)過程中，谷氨酸在細(xì)胞內(nèi)大量積累，會抑制谷氨酸脫氫酶的活性，從而導(dǎo)致谷氨酸合成受阻。在發(fā)酵過程中，應(yīng)采用一定手段（如控制磷脂的合成或使細(xì)胞膜受損）改變細(xì)胞膜的通透性，使谷氨酸迅速排放到細(xì)胞外面，從而解除谷氨酸對谷氨酸脫氧酶的抑制作用，提高谷氨酸產(chǎn)量?！窘獯稹拷猓篈、常用的谷氨酸棒狀桿菌為好氧菌，因此培養(yǎng)基中需嚴(yán)格控制溶解氧、通氣量等發(fā)酵條件，以保證谷氨酸棒狀桿菌代謝正常進(jìn)行，A正確；B、淀粉的糖化作用是在發(fā)酵過程中繼續(xù)利用微生物所分泌的淀粉酶將碳水化合物分解成葡萄糖、麥芽糖、糊精等，淀粉的糖化分解有利于發(fā)酵過程的充分進(jìn)行，B正確；C、谷氨酸棒狀桿菌在發(fā)酵過程中要嚴(yán)格控制發(fā)酵液的pH。在中性和弱堿性條件下會積累谷氨酸；在酸性條件下則容易形成谷氨酰胺和N乙酰谷氨酰胺，C錯誤；D、發(fā)酵結(jié)束后，要想獲得純凈谷氨酸，應(yīng)對發(fā)酵液進(jìn)行分離和純化，D正確。故選：C?！军c評】本題考查發(fā)酵工程的相關(guān)內(nèi)容，要求學(xué)生能結(jié)合所學(xué)知識正確作答。12．（2024春?郫都區(qū)校級期中）發(fā)酵工程可實現(xiàn)發(fā)酵產(chǎn)品的大規(guī)模生產(chǎn)，如圖為發(fā)酵工程的基本環(huán)節(jié)，相關(guān)敘述正確的是（）A．①、②可以是誘變育種或基因工程育種 B．③是發(fā)酵工程的中心環(huán)節(jié) C．產(chǎn)物濃度的檢測必須在發(fā)酵結(jié)束后進(jìn)行 D．發(fā)酵條件為室溫和近中性的pH等【考點】發(fā)酵工程的基本環(huán)節(jié)．【專題】模式圖；微生物的分離、培養(yǎng)和應(yīng)用．【答案】A【分析】發(fā)酵工程是指采用現(xiàn)代工程技術(shù)手段，利用微生物的某些特定功能，為人類生產(chǎn)有用的產(chǎn)品，或直接把微生物應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)過程的一種技術(shù)。【解答】解：A、優(yōu)良菌種可以從自然界中篩選出來，也可以通過誘變育種或基因工程育種獲得，因此①、②可以是誘變育種或基因工程育種，A正確；B、③是培養(yǎng)基的滅菌，發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵是發(fā)酵工程的中心環(huán)節(jié)，B錯誤；C、在發(fā)酵過程中，要隨時檢測培養(yǎng)液中的微生物數(shù)量、產(chǎn)物濃度，以了解發(fā)酵進(jìn)程，同時要嚴(yán)格控制發(fā)酵條件，如溫度、pH、溶解氧，故可能需要適時添加營養(yǎng)物質(zhì)等，C錯誤；D、不同微生物的最適溫度和pH值有所不同，因此不同發(fā)酵過程溫度和pH也有所不同，D錯誤。故選：A?！军c評】本題主要考查發(fā)酵工程的基本環(huán)節(jié)，要求考生能夠結(jié)合所學(xué)知識準(zhǔn)確判斷各選項，屬于識記和理解層次的考查。13．（2024秋?河南月考）科研人員計劃從含多種微生物的白酒大曲中分離篩選出能分泌酯化酶的菌株，并用于白酒釀造。白酒大曲中產(chǎn)酯化酶微生物初步篩選時所用培養(yǎng)基成分與操作步驟如表所示。下列敘述錯誤的是（）培養(yǎng)基成分牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、聚乙烯醇溶液、三丁酸甘油酯、水等。（其中聚乙烯醇溶液和三丁酸甘油酯會使培養(yǎng)基呈現(xiàn)乳白色，酯化酶可催化乳白色的物質(zhì)反應(yīng)，產(chǎn)生透明物質(zhì)）操作步驟將白酒大曲塊粉碎制成菌懸液→利用①______（接種方法）接種后培養(yǎng)→將周邊出現(xiàn)②______的菌落挑出→重新劃線接種至分離純化平板培養(yǎng)基上→多次重復(fù)純化至得到不同形態(tài)的單菌落→4℃冰箱保存。A．表中所示培養(yǎng)基中的牛肉膏和蛋白胨可為微生物生長提供氮源 B．篩選產(chǎn)酯化酶的霉菌時，應(yīng)將培養(yǎng)基在滅菌前調(diào)至中性或弱堿性 C．表中①可代表稀釋涂布平板法，②處應(yīng)填透明圈 D．通過劃線操作可將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面【考點】微生物的選擇培養(yǎng)（稀釋涂布平板法）．【專題】正推法；微生物的分離、培養(yǎng)和應(yīng)用．【答案】B【分析】微生物的營養(yǎng)物質(zhì)：主要包括水、碳源、氮源、能源、無機鹽等，這些物質(zhì)能夠滿足微生物的生長、繁殖和參與各種生理活動，促進(jìn)合成新的細(xì)胞和物質(zhì)，同時將代謝廢物排出?！窘獯稹拷猓篈、表中所示培養(yǎng)基中為微生物的生長提供氮源的物質(zhì)是牛肉膏和蛋白胨，A正確；B、若篩選的是產(chǎn)酯化酶的霉菌（真菌），應(yīng)將培養(yǎng)基在用高壓蒸汽滅菌法滅菌前調(diào)至酸性，B錯誤；C、表中①可代表稀釋涂布平板法，聚乙烯醇溶液和三丁酸甘油酯會使培養(yǎng)基呈現(xiàn)乳白色，酯化酶可催化乳白色的物質(zhì)反應(yīng)，因此若被篩選的微生物能分泌酯化酶，則在其菌落的周圍會產(chǎn)生透明圈，因此②處應(yīng)填透明圈，C正確；D、利用平板劃線法分離得到單菌落的原理是通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面，經(jīng)數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離得到單菌落，D正確。故選：B。【點評】本題考查微生物實驗室培養(yǎng)的相關(guān)知識，意在考查學(xué)生的識記能力和判斷能力，學(xué)生具備運用所學(xué)知識綜合分析問題的能力是解答本題的關(guān)鍵。14．（2024秋?如皋市期中）酵母菌的純培養(yǎng)步驟如圖所示，下列敘述正確的是（）A．步驟①需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行 B．步驟②培養(yǎng)基凝固后將平板倒置，可減緩培養(yǎng)基中水分蒸發(fā)，避免過快干裂 C．步驟③接種時，若在平板上劃線4個區(qū)，需蘸取酵母菌液4次 D．步驟④培養(yǎng)前需在培養(yǎng)皿皿蓋上做好標(biāo)記【考點】微生物的純培養(yǎng)．【專題】正推法；微生物的分離、培養(yǎng)和應(yīng)用；理解能力．【答案】B【分析】平板劃線法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)在平板培養(yǎng)基，通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長繁殖成單菌落，通常把這種單菌落當(dāng)作待分離微生物的純種?！窘獯稹拷猓篈、步驟①配制培養(yǎng)基不需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，酒精燈火焰旁主要是進(jìn)行無菌操作的區(qū)域，如接種等操作，A錯誤；B、步驟②培養(yǎng)基凝固后將平板倒置，可減緩培養(yǎng)基中水分蒸發(fā)，避免過快干裂，同時也能防止皿蓋上的水珠滴落到培養(yǎng)基上造成污染，B正確；C、步驟③接種時，若在平板上劃線4個區(qū)，只需蘸取酵母菌液1次，然后通過多次劃線逐步稀釋菌液，C錯誤；D、步驟④培養(yǎng)前需在培養(yǎng)皿底部做好標(biāo)記，而不是皿蓋上，因為如果標(biāo)記在皿蓋上，在培養(yǎng)過程中，皿蓋可能會被拿下來放置在不同位置，容易造成標(biāo)記混亂，D錯誤。故選：B?！军c評】本題考查微生物的培養(yǎng)等相關(guān)知識點，意在考查學(xué)生對相關(guān)知識點的理解和熟練應(yīng)用的能力。15．（2024秋?如皋市期中）某生物小組欲利用以下培養(yǎng)基從土壤中分離某種微生物，下列對該實驗的后續(xù)操作及結(jié)果分析正確的是（）成分葡萄糖K2HPO4K2SO4NaClCaCO3MgSO4?7H2O蒸餾水瓊脂粉含量10g0.2g0.2g0.2g5g0.2g1000mL20gA．配制好的培養(yǎng)基先分裝到錐形瓶后再進(jìn)行高壓蒸汽滅菌 B．該培養(yǎng)基滅菌后需冷卻至40℃再進(jìn)行倒平板操作 C．用無菌水將土樣進(jìn)行系列稀釋，在最后一次稀釋后進(jìn)行涂布接種 D．該無氮培養(yǎng)基可用于硝化細(xì)菌等固氮菌的分離與計數(shù)【考點】微生物的選擇培養(yǎng)（稀釋涂布平板法）．【專題】數(shù)據(jù)表格；微生物的分離、培養(yǎng)和應(yīng)用；理解能力．【答案】A【分析】1、微生物的營養(yǎng)物質(zhì)主要包括碳源、氮源、水和無機鹽等。有些微生物還需要特殊的營養(yǎng)物質(zhì)，如維生素、生長因子等。2、培養(yǎng)基中含有瓊脂的一般為固體培養(yǎng)基。3、選擇培養(yǎng)基是指允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基?！窘獯稹拷猓篈、為有效滅菌并防止分裝時培養(yǎng)基污染，配制好的培養(yǎng)基先分裝到錐形瓶后，再進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，A正確；B、該培養(yǎng)基滅菌后需冷卻至50℃再進(jìn)行倒平板操作，B錯誤；C、用無菌水將土樣進(jìn)行系列稀釋，選用一定稀釋范圍的樣液進(jìn)行涂布接種，C錯誤；D、硝化細(xì)菌不是固氮菌，D錯誤。故選：A?！军c評】本題主要考查微生物培養(yǎng)的相關(guān)知識，難度適中。16．（2024秋?如皋市期中）關(guān)于消毒和滅菌的敘述，錯誤的是（）A．利用微生物寄生于多種細(xì)菌體內(nèi)使細(xì)菌裂解，屬于生物消毒 B．利用紫外線消毒前，噴灑消毒液可加強消毒效果 C．對培養(yǎng)基滅菌時，干熱滅菌比濕熱滅菌需要更高的滅菌溫度 D．對涂布器滅菌，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡，再放在火焰上灼燒【考點】無菌技術(shù)常用的消毒和滅菌方法．【專題】正推法；微生物的分離、培養(yǎng)和應(yīng)用；理解能力．【答案】B【分析】實驗室常用的滅菌方法：（1）灼燒滅菌：將微生物的接種工具，如接種環(huán)、接種針或其他金屬工具，直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速徹底地滅菌，此外，在接種過程中，試管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通過火焰燃燒來滅菌。（2）干熱滅菌：能耐高溫的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）和金屬用具等，可以采用這種方法滅菌。（3）高壓蒸汽滅菌：將滅菌物品放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，為達(dá)到良好的滅菌效果，一般在壓力為100kPa，溫度為121℃的條件下，維持15～30min?！窘獯稹拷猓篈、利用微生物寄生于多種細(xì)菌體內(nèi)使細(xì)菌裂解，這屬于生物消毒的一種方式，A正確；B、紫外線消毒的原理是破壞微生物的核酸結(jié)構(gòu)等，而噴灑消毒液后可能會在物體表面形成一層膜等情況，反而可能影響紫外線的穿透，不能加強消毒效果，B錯誤；C、對培養(yǎng)基滅菌時，干熱滅菌需要在160﹣170℃保持1﹣2小時，濕熱滅菌一般是121℃保持15﹣30分鐘，干熱滅菌比濕熱滅菌需要更高的滅菌溫度，C正確；D、對涂布器滅菌時，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡，再放在火焰上灼燒，防止酒精燃燒引發(fā)危險，D正確。故選：B?！军c評】本題主要考查無菌技術(shù)等相關(guān)知識點，意在考查學(xué)生對相關(guān)知識點的理解和熟練應(yīng)用的能力。二．解答題（共4小題）17．（2024?息縣模擬）（一）某食品公司得到一種高效釀酒的酵母菌菌株，并設(shè)計方案獲得發(fā)酵產(chǎn)物。（1）對于酵母菌的培養(yǎng)，比較適合它的培養(yǎng)基為A（A．馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基；B．MS培養(yǎng)基；C．LB培養(yǎng)基；D．牛肉湯培養(yǎng)基），除了要選擇合適的培養(yǎng)基成分外，還要考慮培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例（配比）。（2）欲知道這種微生物的繁殖速度，可用涂布分離法或血細(xì)胞計數(shù)板（或顯微鏡計數(shù)法）對酵母菌進(jìn)行計數(shù)。對培養(yǎng)到某一時期的培養(yǎng)液制備成10﹣5的稀釋液，每次取0.1mL進(jìn)行涂布分離，三個培養(yǎng)皿生長的菌落數(shù)依次為35個、32個、29個，則培養(yǎng)液中的酵母菌數(shù)量為3.2×107個/mL。在恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)時，培養(yǎng)皿的放置方式如圖a（填“a”或“b”）。（3）該酵母菌的發(fā)酵食品也會因為發(fā)酵時間的長短和發(fā)酵條件、發(fā)酵底物不同，而形成不同的代謝產(chǎn)物，使發(fā)酵食品的風(fēng)味發(fā)生變化。釀酒時會因為發(fā)酵液放置過久等原因，導(dǎo)致出現(xiàn)酸味，可能是因為產(chǎn)生了醋酸（填物質(zhì)）。（二）目前我國新冠病毒核酸檢測的方法是RT﹣PCR，如圖為RT﹣PCR（逆轉(zhuǎn)錄熒光PCR技術(shù)）的原理：PCR過程中探針和引物一起與模板結(jié)合，探針兩側(cè)分別帶有熒光基團和淬滅基團（抑制熒光發(fā)出），當(dāng)酶催化子鏈延伸至探針處時會水解探針，導(dǎo)致熒光基團與淬滅基團分離而發(fā)出熒光（熒光強度與探針?biāo)饬砍烧嚓P(guān)）。請回答下列問題：（4）PCR技術(shù)與DNA體內(nèi)復(fù)制過程相比，兩者的復(fù)制方式都是半保留復(fù)制。RT﹣PCR過程中，需先以RNA為模板合成cDNA，故裝置中需添加逆轉(zhuǎn)錄酶酶。除了加酶，解開cDNA雙螺旋的方法還有加熱。（5）對新冠病毒進(jìn)行檢測時，探針是一段與目的基因中特定的核苷酸序列相同的核苷酸序列。（6）通過熒光檢測到熒光信號，則可判定該檢測樣本為陽性（選填“陽”、“陰”），在相同PCR循環(huán)次數(shù)條件下，熒光強度與病毒數(shù)量呈正相關(guān)。（7）為了在沒有條件進(jìn)行核酸檢測前及早發(fā)現(xiàn)新冠病毒，我國于2022年3月11日推出新冠病毒抗原檢測試劑盒作為核酸檢測的補充措施，該試劑盒的檢測原理是抗原抗體的特異性結(jié)合。試劑盒中的探針應(yīng)采用單克隆抗體技術(shù)生產(chǎn)?！究键c】微生物的數(shù)量測定；發(fā)酵工程在食品、醫(yī)藥、農(nóng)牧業(yè)等工業(yè)上的應(yīng)用；DNA片段的擴增與電泳鑒定．【專題】正推法；微生物的分離、培養(yǎng)和應(yīng)用；PCR技術(shù)；理解能力．【答案】（1）A濃度和比例（配比）（2）血細(xì)胞計數(shù)板##或顯微鏡計數(shù)法3.2×107a（3）發(fā)酵條件、發(fā)酵底物醋酸（4）半保留復(fù)制逆轉(zhuǎn)錄酶加熱（5）目的基因中特定的核苷酸序列（6）陽正相關(guān)（7）抗原抗體的特異性結(jié)合單克隆抗體【分析】1、酵母菌是兼性厭氧微生物，在無氧條件下能進(jìn)行酒精發(fā)酵，其反應(yīng)式為：C6H12O6→酶2C2H5OH+2CO22、人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)﹣培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中一般都含有水、碳源（提供碳元素的物質(zhì)）、氯源（提供氮元素的物質(zhì)）和無機鹽等營養(yǎng)物質(zhì)。3、微生物的計數(shù)方法包括稀釋涂布平板法和利用顯微鏡進(jìn)行直接計數(shù)。4、稀釋涂布平板法需要將樣品進(jìn)行系列梯度稀釋，為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)為30～300的平板進(jìn)行計數(shù)。通常選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)，以保證獲得菌落數(shù)為30～300、適于計數(shù)的平板。在同一稀釋度下，應(yīng)至少對3個平板進(jìn)行重復(fù)計數(shù)，然后求出平均值。5、利用顯微鏡進(jìn)行直接計數(shù)是一種常用的、快速直觀的測定微生物數(shù)量的方法。該方法利用特定的細(xì)菌計數(shù)板或血細(xì)胞計數(shù)板，在顯微鏡下觀察、計數(shù)，然后再計算一定體積的樣品中微生物的數(shù)量，統(tǒng)計的結(jié)果一般是活菌數(shù)和死菌數(shù)的總和。6、逆轉(zhuǎn)錄是指在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下，以RNA為模板將四種脫氧核苷酸合成為DNA的過程。7、PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的縮寫，是一項根據(jù)DNA半保留復(fù)制的原理，在體外提供參與DNA復(fù)制的各種組分與反應(yīng)條件，對目的基因的核苷酸序列進(jìn)行大量復(fù)制的技術(shù)。PCR反應(yīng)的條件為需要在一定的緩沖溶液中才能進(jìn)行，需提供DNA模板，分別與兩條模板鏈結(jié)合的2種引物，4種脫氧核苷酸和耐高溫的DNA聚合酶；同時通過控制溫度使DNA復(fù)制在體外反復(fù)進(jìn)行?！窘獯稹拷猓海?）由分析可知，酵母菌主要以糖類底物進(jìn)行呼吸作用產(chǎn)生酒精，因此比較適合的培養(yǎng)為以糖類為碳源的培養(yǎng)基，即A馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基。除了要選擇合適的培養(yǎng)基成分外，還要考慮培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例，以確保微生物能正常生存和發(fā)酵產(chǎn)品的品質(zhì)。（2）由分析可知，微生物的計數(shù)方法有稀釋涂布平板法和利用顯微鏡進(jìn)行直接計數(shù)，顯微鏡計數(shù)法需要使用血細(xì)胞計數(shù)板對微生物進(jìn)行計數(shù)。根據(jù)題意分析，培養(yǎng)液中酵母菌數(shù)量為35+32+293（3）在發(fā)酵過程中，培養(yǎng)液中的微生物數(shù)量、產(chǎn)物濃度，培養(yǎng)液的營養(yǎng)組分，以及溫度、pH和溶解氧等發(fā)酵條件，不僅會影響微生物的生長繁殖，而且會影響微生物代謝物的形成。因此，發(fā)酵食品會因為發(fā)酵時間的長短、發(fā)酵條件、發(fā)酵底物的不同觀使其風(fēng)味發(fā)生變化。釀酒時會因為發(fā)酵液放置過久等原因，導(dǎo)致出現(xiàn)酸味，可能是因為醋酸菌繁殖產(chǎn)生了醋酸所致。（4）由分析可知，PCR技術(shù)與DNA體內(nèi)復(fù)制的復(fù)制方式都是半保留復(fù)制。RT﹣PCR過程為逆轉(zhuǎn)錄過程，需向裝置中添加逆轉(zhuǎn)錄酶，以RNA為模板合成cDNA。DNA體內(nèi)復(fù)制中解開DNA雙螺旋的是利用解旋酶，在PCR中則是利用加熱解開雙螺旋。（5）由圖可知，利用探針對新冠病毒進(jìn)行檢測的原理是堿基互補配對和DNA復(fù)制，當(dāng)存在病毒時，以病毒的遺傳物質(zhì)RNA逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，探針能與該cDNA通過堿基互補配對結(jié)合，當(dāng)cDNA進(jìn)行復(fù)制時，會水解探針，因此探針是一段與目的基因（病毒的基因）中特定核苷酸序列相同的核苷酸序列。（6）若檢測到熒光信號，說明探針與被檢測物結(jié)合后被水解，則可判定該檢測樣本為陽性，在相同PCR循環(huán)次數(shù)條件下，病毒數(shù)量越多，復(fù)制時水解的探針越多，則熒光強度越強，即熒光強度與病毒數(shù)量呈正相關(guān)。（7）分析題意可知，新冠病毒抗原檢測試劑盒的原理是抗原與抗體的特異性結(jié)合。與傳統(tǒng)方法生產(chǎn)的抗體相比，單克隆抗體具有純度高、特異性強的特點，因此試劑盒中的探針應(yīng)采用單克隆抗體技術(shù)生產(chǎn)。故答案為：（1）A濃度和比例（配比）（2）血細(xì)胞計數(shù)板##或顯微鏡計數(shù)法3.2×107a（3）發(fā)酵條件、發(fā)酵底物醋酸（4）半保留復(fù)制逆轉(zhuǎn)錄酶加熱（5）目的基因中特定的核苷酸序列（6）陽正相關(guān)（7）抗原抗體的特異性結(jié)合單克隆抗體【點評】本題主要考查微生物的培養(yǎng)與計數(shù)和PCR技術(shù)等知識，意在考查學(xué)生知識的掌握情況和理解水平，利用知識分析解決問題能力，要求學(xué)生熟練掌握知識點，形成知識網(wǎng)絡(luò)，能根據(jù)具體題境利用相關(guān)知識解決問題。18．（2023秋?宣威市校級期末）青霉素發(fā)酵是高耗氧過程，發(fā)酵過程中給微生物持續(xù)高效地供氧是保證青霉素持續(xù)高產(chǎn)的關(guān)鍵。血紅蛋白具有很強的攜帶O2的能力，將其引入青霉菌是提高青霉素產(chǎn)能的思路之一、血紅蛋白不僅存在于人和動物的紅細(xì)胞中，某些細(xì)菌（如透明顫菌）細(xì)胞中也存在。研究人員為了將透明顫菌的血紅蛋白引入青霉菌，設(shè)計了如圖所示的方案?；卮鹣铝袉栴}：注：某氨基酸缺陷型菌株是指該菌株在缺少該種氨基酸的培養(yǎng)基上會暫停生長（1）上圖步驟②采用的接種方法是稀釋涂布平板法，步驟③往培養(yǎng)基中添加的某種物質(zhì)是硫氨酸。得到的平板中菌落較?。ㄌ睢按蟆被颉靶　保┑木昙礊榧琢虬彼釥I養(yǎng)缺陷型菌株。（2）溶菌酶屬于免疫系統(tǒng)組成中的免疫活性物質(zhì)，蝸牛酶是從以植物和真菌為食的蝸牛消化道中提取的酶。處理⑤、⑥所用的酶分別是上述兩種酶中的蝸牛酶、溶菌酶。（3）簡述圖甲步驟⑧從融合細(xì)胞中篩選目的菌株的基本思路：用缺乏甲硫氨酸和精氨酸但其他營養(yǎng)成分齊全的培養(yǎng)基培養(yǎng)融合細(xì)胞，能夠在培養(yǎng)基上生長的即為雜種菌株。（4）除了上述方案，請再提出一種將透明顫菌的血紅蛋白引入青霉菌的技術(shù)手段利用基因工程技術(shù)，將透明顫菌的血紅蛋白基因轉(zhuǎn)入青霉菌?！究键c】發(fā)酵工程在食品、醫(yī)藥、農(nóng)牧業(yè)等工業(yè)上的應(yīng)用；基因工程在農(nóng)牧、醫(yī)療、食品等方面的應(yīng)用；免疫系統(tǒng)的組成．【專題】正推法；免疫調(diào)節(jié)；微生物的分離、培養(yǎng)和應(yīng)用；理解能力．【答案】（1）稀釋涂布平板法甲硫氨酸?。?）免疫活性物質(zhì)蝸牛酶、溶菌酶（順序不可調(diào)換）（3）用缺乏甲硫氨酸和精氨酸但其他營養(yǎng)成分齊全的培養(yǎng)基培養(yǎng)融合細(xì)胞，能夠在培養(yǎng)基上生長的即為雜種菌株（4）利用基因工程技術(shù)，將透明顫菌的血紅蛋白基因轉(zhuǎn)入青霉菌【分析】植物體細(xì)胞雜交是指將不同種的植物體細(xì)胞，在一定條件下融合成雜種細(xì)胞，并把雜種細(xì)胞培育成新的植物體的技術(shù)。誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法：物理法（離心、振動、電激等）和化學(xué)法（聚乙二醇等）。植物體細(xì)胞雜交的意義：克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，擴大親本范圍，培育作物新品種?！窘獯稹拷猓海?）圖中平板上的菌落分布比較均勻，該步驟②采用的接種方法是稀釋涂布平板法。經(jīng)過步驟③之后首先得到甲硫氨酸營養(yǎng)缺陷菌株，所以步驟③往培養(yǎng)基中添加的某種物質(zhì)是甲硫氨酸，起到篩選菌株的作用；得到的平板中菌落較小的菌株即為甲硫氨酸營養(yǎng)缺陷型菌株，因為該營養(yǎng)缺陷型菌株生長緩慢，繁殖能力比天然菌株差一些。（2）溶菌酶屬于免疫系統(tǒng)組成中的免疫活性物質(zhì)。蝸牛以植物和真菌為食，可推測其消化道中的酶可以分解真菌的細(xì)胞壁，而溶菌酶可以分解細(xì)菌的細(xì)胞壁，故處理⑤、⑥所用的酶分別是上述兩種酶中的蝸牛酶、溶菌酶。（3）處理⑧的目的是要篩選得到雜種菌株，可以根據(jù)兩種“親本”菌種的特點，采取雙營養(yǎng)缺陷的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。方案為：用缺乏甲硫氨酸和精氨酸但其他營養(yǎng)成分齊全的培養(yǎng)基培養(yǎng)融合細(xì)胞，能夠在培養(yǎng)基上生長的即為雜種菌株。（4）顫菌屬于原核生物，青霉菌屬于真核生物，除了上述方案，將透明顫菌的血紅蛋白引入青霉菌的技術(shù)手段是：利用基因工程技術(shù)，將透明顫菌的血紅蛋白基因轉(zhuǎn)入青霉菌。故答案為：（1）稀釋涂布平板法甲硫氨酸?。?）免疫活性物質(zhì)蝸牛酶、溶菌酶（3）用缺乏甲硫氨酸和精氨酸但其他營養(yǎng)成分齊全的培養(yǎng)基培養(yǎng)融合細(xì)胞，能夠在培養(yǎng)基上生長的即為雜種菌株（4）利用基因工程技術(shù)，將透明顫菌的血紅蛋白基因轉(zhuǎn)入青霉菌【點評】本題考查免疫調(diào)節(jié)、基因工程和發(fā)酵工程的相關(guān)內(nèi)容，要求學(xué)生能結(jié)合所學(xué)知識正確作答。19．（2023秋?杞縣校級期末）回答下列（一）、（二）小題：（一）如圖1是谷氨酸發(fā)酵裝置示意圖，谷氨酸工業(yè)上常用谷氨酸棒狀桿菌在30℃下發(fā)酵獲得；如圖2是谷氨酸生產(chǎn)的機理，谷氨酸棒狀桿菌以葡萄糖為底物進(jìn)行了如下過程。據(jù)圖分析，回答下列問題：（1）如圖1中1、2處是發(fā)酵罐夾層中冷凝水的進(jìn)出口，水在發(fā)酵罐夾層流動的作用是降溫至30℃利于谷氨酸棒狀桿菌發(fā)酵。如圖1中3為攪拌器，可以加快谷氨酸形成的速率，其原理是谷氨酸棒狀桿菌為需氧型微生物，攪拌能增加發(fā)酵液中的溶解氧，可使其與營養(yǎng)物質(zhì)充分接觸利于該菌發(fā)酵。發(fā)酵過程中，若谷氨酸積累過量，會抑制谷氨酸脫氫酶的活性，從而導(dǎo)致該合成途徑中斷，因此提高產(chǎn)物產(chǎn)量的關(guān)鍵是改變菌體細(xì)胞膜的通透性。（2）谷氨酸棒桿菌進(jìn)行以硫酸二乙酯和紫外線相結(jié)合的復(fù)合誘變，經(jīng)選育得到高產(chǎn)突變株LG﹣01．將其接種在含葡萄糖液體培養(yǎng)基中，于30℃下培養(yǎng)48h。搖勻并取培養(yǎng)液稀釋107倍后，向四個培養(yǎng)基分別涂布0.1mL該培養(yǎng)液，四個培養(yǎng)皿生長的菌落依次為31個、2個、35個、33個，則稀釋前菌液的菌體為3.3×109個/mL，計算得到的值比實際值低。（3）發(fā)酵結(jié)束后可用接種環(huán)蘸取發(fā)酵液進(jìn)行平板劃線，從而純化谷氨酸棒狀桿菌得到單菌落。此外，此過程需確保培養(yǎng)基的pH環(huán)境為中性偏堿。（二）甜菜是我國重要的糖料作物之一，為提高甜菜的光合效率和產(chǎn)量?？蒲泄ぷ髡邩?gòu)建攜帶SBPase基因（編碼卡爾文循環(huán)的關(guān)鍵酶）的表達(dá)載體，如圖3為重組質(zhì)粒示意圖，通過基因工程對甜菜進(jìn)行遺傳改造?；卮鹣铝袉栴}：（4）構(gòu)建表達(dá)載體并導(dǎo)入農(nóng)桿菌：獲取目的基因后利用PCR技術(shù)進(jìn)行擴增，經(jīng)凝膠電泳鑒定后，切割凝膠，再將凝膠溶解，回收其中包含目的基因的DNA片段。然后使用限制性內(nèi)切核酸酶切割質(zhì)粒和SBPase基因，將帶有黏性末端的酶切產(chǎn)物純化回收后，用DNA連接酶連接。經(jīng)過一系列步驟后，再將測序正確的重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌。（5）獲取抗性植株：將含有重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌侵染甜菜葉柄并共培養(yǎng)一段時間后，先將外植體放在含有羧芐霉素和頭孢霉素的培養(yǎng)基中初步培養(yǎng)，目的是殺滅農(nóng)桿菌，再轉(zhuǎn)入含有卡那霉素的篩選培養(yǎng)基中獲得抗性植株。此過程使用抗生素時需注意抗生素的種類、劑量及作用時間等。（6）為從分子水平上檢測抗性植株是否含有目的基因，對抗性植株進(jìn)行PCR后檢測，檢測結(jié)果如圖4所示。CK+組是選用含SBPase基因的質(zhì)粒作為陽性對照。（7）取陽性無菌苗葉片提取總RNA，將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，再以cDNA為模板，利用目的基因引物進(jìn)行PCR以檢測SBPase基因的表達(dá)情況。在整個過程中，反應(yīng)體系中的酶有逆轉(zhuǎn)錄酶和耐高溫的DNA聚合酶。【考點】發(fā)酵工程在食品、醫(yī)藥、農(nóng)牧業(yè)等工業(yè)上的應(yīng)用．【專題】圖文信息類簡答題；微生物的分離、培養(yǎng)和應(yīng)用；解決問題能力．【答案】（1）降溫至30℃利于谷氨酸棒狀桿菌發(fā)酵谷氨酸棒狀桿菌為需氧型微生物，攪拌能增加發(fā)酵液中的溶解氧，可使其與營養(yǎng)物質(zhì)充分接觸利于該菌發(fā)酵通透性（2）3.3×109低（3）平板劃線中性偏堿（4）凝膠電泳質(zhì)粒和SBPase基因（5）殺滅農(nóng)桿菌卡那霉素抗生素的種類、劑量及作用時間等（6）SBPase基因（7）SBPase基因的表達(dá)情況逆轉(zhuǎn)錄酶和耐高溫的DNA聚合酶【分析】1、谷氨酸生產(chǎn)所用菌種是好氧菌，通風(fēng)和攪拌不僅會影響對氮源和碳源的利用率，而且會影響發(fā)酵周期和谷氨酸的合成量，尤其是發(fā)酵后期，加大通氣量有利于谷氨酸的合成。當(dāng)菌體生長到穩(wěn)定期，適當(dāng)提高溫度有利于生產(chǎn)谷氨酸。在發(fā)酵過程中，隨著營養(yǎng)物質(zhì)的利用，代謝產(chǎn)物的積累，培養(yǎng)液的pH會不斷變化。2、基因工程是以分子遺傳學(xué)為理論基礎(chǔ)，以分子生物學(xué)和微生物學(xué)的現(xiàn)代方法為手段，將不同來源的基因按預(yù)先設(shè)計的藍(lán)圖，在體外構(gòu)建雜種DNA分子，然后導(dǎo)入活細(xì)胞，以改變生物原有的遺傳特性、獲得新品種?！窘獯稹拷猓海?）在利用發(fā)酵罐進(jìn)行發(fā)酵的過程中，由于微生物的呼吸作用以及攪拌等都能產(chǎn)生大量的熱，使發(fā)酵液溫度升高，為防止溫度過高降低酶的活性，而降低谷氨酸產(chǎn)量，采取了水在發(fā)酵罐表層中流動而降溫的措施。3為攪拌器，可以加快谷氨酸形成的速率，其原理是谷氨酸棒狀桿菌為需氧型微生物，攪拌能增加發(fā)酵液中的溶解氧，可使其與營養(yǎng)物質(zhì)充分接觸利于該菌發(fā)酵。發(fā)酵過程中，若谷氨酸積累過量，會抑制谷氨酸脫氫酶的活性，從而導(dǎo)致該合成途徑中斷，因此提高產(chǎn)物產(chǎn)量的關(guān)鍵是改變菌體細(xì)胞膜的通透性。（2）四個培養(yǎng)皿生長的菌落依次為31個、2個、35個、33個，第二個數(shù)值明顯錯誤應(yīng)去掉，計算平均菌落數(shù)為33個，則稀釋前菌液的菌