微生物學(xué)

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第五章微生物的染色和鏡檢技術(shù)

本章內(nèi)容

第一節(jié)顯微鏡的種類及原理

第二節(jié)常用微生物染色方法

實(shí)驗(yàn)一細(xì)菌革蘭染色及顯微鏡的使用與維護(hù)

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第一節(jié)微鏡的種類及原理

顯微鏡的分類

主要包括普通光學(xué)顯微鏡

光學(xué)顯微鏡T暗視野顯微鏡

相差顯微鏡

一透射電子顯微鏡

電子顯微鏡

一掃描電子顯微

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一、光學(xué)顯微鏡

（一）普通光學(xué)顯微鏡

分辨率

最小可分辨距離（分辨率）=0.52/（nsin0）

普通光學(xué)顯微鏡不同物鏡的特性比較

物鏡

特性

低倍鏡高倍鏡油鏡

放大倍數(shù)10x40~45X90~100X

數(shù)值孔徑值0.250.55飛.651.25~1.4

焦深/mm1641.8~2.0

工作距離/mm4~80.5~0.70.1

心光時(shí)可到達(dá)的分辨率

第6頁0.90.350.18

一、光學(xué)顯微鏡

（二）暗視野顯微鏡：它的特點(diǎn)是視野的背景是黑的，照明光線直接進(jìn)入視

野的顯微鏡為明視野顯微鏡，屬于透射照明。

（三）熒光顯微鏡：是以人眼不可見的一定波長紫外線為光源照射被檢物體，使之受

激發(fā)后產(chǎn)生人眼可見的熒光，顯微鏡成像系統(tǒng)放大來進(jìn)行境檢。

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一、光學(xué)顯微鏡

（四）相差顯微鏡：相差顯微鏡（phasecontrastmicroscope）與普通光學(xué)顯微鏡結(jié)構(gòu)基本相同（圖

-3）,不同的是它有四個(gè)特殊的結(jié)構(gòu)：相差物鏡（內(nèi)有相板）、具有環(huán)狀光闌的轉(zhuǎn)盤聚光器、合軸調(diào)

中望遠(yuǎn)鏡、綠色的濾光鏡。其關(guān)犍是相差物鏡和環(huán)狀光闌，更具體地說是相板和環(huán)狀光闌。

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二、電子顯微鏡

(一)透射電子顯微鏡

透射電子顯微鏡(transmissionelectronmicroscope,TEM)由德國人E.Ruska等于1933年發(fā)明，

制成了世界上第一臺(tái)以電子束為光源的顯微鏡，即電子顯微彘,可以看到在光學(xué)顯微鏡卜.無法

看清的小于0.2ym的細(xì)微結(jié)構(gòu)。

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二、電子顯微鏡

（二）掃描電子顯微鏡

與光學(xué)顯微鏡和投射電子顯微鏡不同，掃描電子顯微鏡（scanningelectron

microscope,SEM）的工作原理為：電子槍發(fā)出電子束，磁透鏡將這些電子束匯聚

成極細(xì)的“探針”，“掃描”樣品表面并激發(fā)被掃描部位的二次電子（同時(shí)也有一些

其他信號(hào)）。

其他顯微鏡：掃描隧道顯微鏡、原子力顯微鏡等。

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第二節(jié)常用微生物染色方法

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常用微生物染色方法

一、基本原理

二、影響因素

單染色法革蘭染色法

復(fù)染色法一

三、染色方法抗酸染色法

特殊染色法

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04-」

一、基本原理

物理因素：毛細(xì)現(xiàn)象、滲透、吸附作用

化學(xué)因素：物質(zhì)和染料的酸堿性、pH值等

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二、影響因素

菌體細(xì)胞的構(gòu)造和其外膜的通透性：如細(xì)胞膜的通透性、膜孔的大小和細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整

與否。

菌齡：

染色液中的電介質(zhì)含量和pH、溫度：

培養(yǎng)基的組成：

藥物的作用：

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實(shí)驗(yàn)一細(xì)菌革蘭染色及顯微

鏡的使用與維護(hù)

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一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.掌握革蘭染色操作技術(shù)及油鏡的使用方法；

2.熟悉油鏡維護(hù)及保養(yǎng)方法；

3.了解革蘭染色的原理及油鏡的工作原理

二、實(shí)驗(yàn)原理

1、革蘭染色原理：G+菌細(xì)胞壁的肽聚糖層厚且交聯(lián)緊密，在經(jīng)過乙醇脫色時(shí)肽聚糖層脫

水，導(dǎo)致空隙變小，顆粒較大的結(jié)晶紫一碘復(fù)合物不能從細(xì)胞壁中脫除，復(fù)染的紅色染料雖

然也進(jìn)入細(xì)胞，但被紫色遮蓋，所以G+菌仍保持著紫色。G-菌細(xì)胞壁的肽聚糖層薄、交聯(lián)疏松

且富含類脂，乙醇脫色后類脂溶出導(dǎo)致其細(xì)胞壁的空隙變大，結(jié)晶紫-碘的復(fù)合物易從細(xì)胞壁

中脫出，再用紅色燃料復(fù)染時(shí)，則呈現(xiàn)為紅色。

2、油鏡的使用原理：

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三、實(shí)驗(yàn)材料

1、菌種：大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌

2、革蘭染色液：結(jié)晶紫、盧氏碘液、95%乙醇、沙黃

3、生理鹽水

4、接種環(huán)、載玻片、洗瓶、廢液缸、木夾、酒精燈、吸水紙、

5、普通光學(xué)顯微鏡、香柏油、擦鏡液、擦鏡紙

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四、實(shí)驗(yàn)步驟

（一）細(xì)菌革蘭染色法

（二）顯微鏡的使用與維護(hù)