目錄摘要 頁(yè)共=NUMPAGES40-337頁(yè)基于轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)的電磁輻射對(duì)神經(jīng)元影響的機(jī)制研究摘要目的探討電磁輻射對(duì)神經(jīng)元的作用及機(jī)制，為電磁輻射對(duì)神經(jīng)元的調(diào)控及應(yīng)用提供依據(jù)。方法提取原代海馬神經(jīng)元，按照隨機(jī)分配的原則將其分為對(duì)照組和輻射組，待生長(zhǎng)到第七天時(shí)對(duì)輻射組進(jìn)行電磁輻射，于輻射后即刻，通過(guò)UHPLC-MS\MS（超高效液相色譜-質(zhì)譜）靶向代謝學(xué)檢測(cè)神經(jīng)元中膽堿類、單胺類等神經(jīng)遞質(zhì)的含量；使用Westernblot檢測(cè)CaMKⅡα、CaMKⅡβ、CaMKⅡγ、CaMKⅡδ蛋白表達(dá)；使用RT-PCR檢測(cè)CaMKⅡα、CaMKⅡβ、CaMKⅡγ、CaMKⅡδmRNA表達(dá)；通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)檢測(cè)原代海馬神經(jīng)元電磁輻射后的差異基因；利用RT-PCR驗(yàn)證差異基因。結(jié)果①與對(duì)照組相比，輻射組大鼠原代海馬神經(jīng)元Ach含量顯著降低（P＜0.01）、OA含量顯著降低（P＜0.001）、LDOPA含量顯著降低（P＜0.001）、Spd含量明顯降低（P＜0.05）、Thr含量顯著降低（P＜0.05）；5HIAA含量明顯增加（P＜0.05）、Hist含量明顯增加（P＜0.05）、Put含量明顯增加（P＜0.05）、5HT含量明顯增加（P＜0.05）、Cys含量明顯增加（P＜0.05）、Gln含量明顯增加（P＜0.05）、Ser含量明顯增加（P＜0.05）；②與對(duì)照組相比，輻射組大鼠原代海馬神經(jīng)元CaMKⅡβ和CaMKⅡδ蛋白表達(dá)明顯升高（P＜0.05），CaMKⅡα（P＜0.01）和CaMKⅡβ（P＜0.001）mRNA表達(dá)顯著增加，CaMKⅡγmRNA表達(dá)明顯降低（P＜0.05）；③共捕捉到差異基因303個(gè)，其中上調(diào)基因139個(gè)，下調(diào)基因164個(gè)。與對(duì)照組相比，輻射組大鼠原代海馬神經(jīng)元Creb3l4、TACR3、GLRA1、Ttll10mRNA表達(dá)明顯增加。結(jié)論電磁輻射可通過(guò)影響神經(jīng)遞質(zhì)釋放、鈣相關(guān)蛋白及基因表達(dá)提升神經(jīng)元活性，同時(shí)影響神經(jīng)元轉(zhuǎn)錄表達(dá)譜改變，其中Creb3l4、TACR3、GLRA1、Ttll10基因可能為電磁輻射敏感的轉(zhuǎn)錄因子。關(guān)鍵詞：電磁輻射；神經(jīng)元；神經(jīng)遞質(zhì)；鈣相關(guān)蛋白；轉(zhuǎn)錄組測(cè)序

MechanismstudyoftheeffectofelectromagneticradiationonneuronsbasedontranscriptomesequencingtechnologyABSTRACTObjectiveToinvestigatetheeffectandmechanismofelectromagneticradiationonneurons,andtoprovideabasisfortheregulationandapplicationofelectromagneticradiationonneurons.MethodsTheprimaryhippocampalneuronsareextracted,dividedintocontrolgroupandradiationgroupaccordingtotheprincipleofrandomallocation,andelectromagneticradiationiscarriedoutontheradiationgroupontheseventhdayofgrowth,andthecontentofcholine,monoamineandotherneurotransmittersinneuronsisdetectedbyUHPLC-MSMS(ultra-highperformanceliquidchromatography-massspectrometry)targetedmetabolismimmediatelyafterradiation;CaMKIIα,CaMKIIβ,CaMKIIγ,CaMKIIδproteinexpressionaredetectedusingWesternblot;usingRT-PCRtodetectCaMKIIα,CaMKIIβ,CaMKIIγ,CaMKIIδmRNAexpression;differentialgenesafterelectromagneticradiationofprimaryhippocampneuronsaredetectedbytranscriptomesequencing;differentialgenesareverifiedbyRT-PCR.Results①Comparedwiththecontrolgroup,theprimaryhippocampalneuronAchcontent(P<0.01),OAcontent(P<0.001),LDOPAcontent(P<0.001),Spdcontent(P<0.05),Thrcontent(P<0.05),5HIAAcontent(P<0.05),Histcontent(P<0.05),Putcontentincreasedsignificantly(P<0.05),5HTcontent(P<0.05),Cyscontent(P<0.05),Glncontent(P<0.05),Sercontent(P<0.05);②Comparedwiththecontrolgroup,theexpressionofprimaryhippocampalneuronCaMKIIβandCaMKIIδproteininratsintheradiationgroupissignificantlyincreased(P<0.05),CaMKIIα(P<0.01)andCaMKIIβ(P<0.001)SignificantincreaseinmRNAexpression,CaMKIIγsignificantdecreaseinmRNAexpression(P<0.05);③Atotalof303differentialgenesarecaptured,including139upregulatedgenesand164downregulatedgenes.Comparedwiththecontrolgroup,theexpressionofprimaryhippocampalneuronsintheradiationgroupissignificantlyincreased.ConclusionElectromagneticradiationcanenhanceneuronalactivitybyinfluencingneurotransmitterrelease,calcium-relatedproteinandgeneexpression,whileaffectingneuronaltranscriptionalexpressionprofilingchanges,ofwhichcreb3l4,TACR3,GLRA1,Ttll10genesmaybeelectromagneticradiation-sensitivetranscriptionfactors.Keywords:Electromagneticradiation;Neurons;Neurotransmitters;calcium-relatedprotein;Transcriptomesequencing

1前言電磁波是由電場(chǎng)和磁場(chǎng)的交互變化產(chǎn)生的，電磁輻射是電磁波向空中發(fā)射或泄露的現(xiàn)象。電磁輻射包括電離輻射和非電離輻射兩種。其中非電離輻射中的射頻、微波等部分統(tǒng)稱為電磁輻射。在日常生活以及作業(yè)場(chǎng)所中，電磁輻射隨處可見(jiàn)，并且與人們的健康息息相關(guān)。相關(guān)研究證明，電磁輻射與一些疾病，如癌癥、抑郁癥、心血管疾病等有一定的關(guān)聯(lián)ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><RecNum>70</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[1,2]</style></DisplayText><record><rec-number>70</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="dfz9rv5abvtpa8ef00npxxpse5p0f92rrfse"timestamp="1645169870">70</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors></contributors><titles><title><職業(yè)性電磁輻射暴露對(duì)全血細(xì)胞參數(shù)的影響_王麗娟.pdf></title></titles><dates></dates><urls></urls><electronic-resource-num>10.13336/j.1003-6520.hve.2014.12.024</electronic-resource-num></record></Cite><Cite><Author>Preece</Author><Year>2000</Year><RecNum>71</RecNum><record><rec-number>71</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="dfz9rv5abvtpa8ef00npxxpse5p0f92rrfse"timestamp="1645169970">71</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Preece,A.W.</author><author>Hand,J.W.</author><author>Clarke,R.N.</author><author>Stewart,A.</author></authors></contributors><auth-address>BristolOncologyCentre,UniversityofBristol,UK.</auth-address><titles><title>Powerfrequencyelectromagneticfieldsandhealth.Where'stheevidence?</title><secondary-title>PhysMedBiol</secondary-title></titles><periodical><full-title>PhysMedBiol</full-title></periodical><pages>R139-54</pages><volume>45</volume><number>9</number><edition>2000/09/29</edition><keywords><keyword>*ElectromagneticFields/adverseeffects</keyword><keyword>*Health</keyword><keyword>Humans</keyword><keyword>Neoplasms/epidemiology</keyword><keyword>RiskFactors</keyword></keywords><dates><year>2000</year><pub-dates><date>Sep</date></pub-dates></dates><isbn>0031-9155(Print) 0031-9155</isbn><accession-num>11008945</accession-num><urls></urls><electronic-resource-num>10.1088/0031-9155/45/9/201</electronic-resource-num><remote-database-provider>NLM</remote-database-provider><language>eng</language></record></Cite></EndNote>[1,2]。而神經(jīng)元是電磁輻射最為敏感的靶標(biāo)之一，因此，本文主要研究電磁輻射對(duì)神經(jīng)元的影響及其作用機(jī)制，為電磁輻射的安全防護(hù)及有效應(yīng)用提供依據(jù)。神經(jīng)細(xì)胞是電磁輻射的敏感細(xì)胞類型之一，雖然電磁輻射并不會(huì)影響神經(jīng)細(xì)胞的活力和增殖，不引起細(xì)胞的凋亡，但是對(duì)于神經(jīng)細(xì)胞的神經(jīng)遞質(zhì)等具有一定的影響ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><RecNum>59</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[3]</style></DisplayText><record><rec-number>59</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="dfz9rv5abvtpa8ef00npxxpse5p0f92rrfse"timestamp="1644202273">59</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors></contributors><titles><title><太赫茲輻射生物效應(yīng)研究進(jìn)展與展望_余爭(zhēng)平.pdf></title></titles><dates></dates><urls></urls></record></Cite></EndNote>[3]。研究表明，鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）在海馬區(qū)高度表達(dá)，并在神經(jīng)可塑性變化及記憶形成中具有重要作用ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[4,5]。轉(zhuǎn)錄組測(cè)序不僅能夠檢測(cè)與現(xiàn)有基因組序列相對(duì)應(yīng)的轉(zhuǎn)錄本，還可以發(fā)現(xiàn)和定量新的轉(zhuǎn)錄本，可以更加系統(tǒng)地研究轉(zhuǎn)錄組學(xué)ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><RecNum>61</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[6]</style></DisplayText><record><rec-number>61</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="dfz9rv5abvtpa8ef00npxxpse5p0f92rrfse"timestamp="1644226335">61</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors></contributors><titles><title><轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)的研究和應(yīng)用進(jìn)展_崔凱.pdf></title></titles><dates></dates><urls></urls><electronic-resource-num>10.13560/ki.biotech.bull.1985.2019-0374</electronic-resource-num></record></Cite></EndNote>[6]。因此，本研究通過(guò)探索電磁輻射對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響，鈣相關(guān)蛋白及其激酶的表達(dá)以及轉(zhuǎn)錄組表達(dá)譜的改變，以明確電磁輻射對(duì)神經(jīng)元的作用及機(jī)制。2研究對(duì)象與方法2.1研究對(duì)象分離新生12hSPF級(jí)雄性大鼠海馬組織，培養(yǎng)原代神經(jīng)元7d用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。將原代海馬神經(jīng)元隨機(jī)分為對(duì)照組（Sham組），電磁輻射組（THz組）。2.2實(shí)驗(yàn)分組電磁輻射組采用軍事醫(yī)學(xué)研究院電磁輻射生物暴露系統(tǒng)，頻率為0.141THz，在37℃，5%CO2的條件下輻射原代海馬神經(jīng)元，輻射時(shí)間為30min。對(duì)照組不予輻射，其他處理?xiàng)l件一致。2.3UHPLC-MS/MS靶向代謝學(xué)檢測(cè)神經(jīng)遞質(zhì)（1）制備樣品取各組神經(jīng)元，將培養(yǎng)液搖勻，快速取出一定量的培養(yǎng)液于4℃條件下離心（1000g，10min），移取上清500μl至新的離心管中，迅速放入液氮中淬滅30秒。淬滅后放入-80℃中保存。（2）檢測(cè)方法采用UHPLC-MS/MS靶向代謝學(xué)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中的神經(jīng)遞質(zhì)釋放濃度。①標(biāo)準(zhǔn)曲線及內(nèi)標(biāo)配制方法：配制相應(yīng)濃度的輕標(biāo)混合標(biāo)品（L-std-a）和內(nèi)標(biāo)混合標(biāo)品（H-std-a）；80μLL-Std-a+40μL100mMNa2CO3+40μL2%L-BzCl，室溫孵育30min，得到衍生后的混標(biāo)L-Std-a-Bz；160μLH-Std-a+80μL100mMNa2CO3+80μL2%H-BzCl，室溫孵育30min，得到衍生后的混標(biāo)H-Std-a-Bz（作為內(nèi)標(biāo)）；取320μL衍生后的混標(biāo)H-Std-a-Bz加入1680μL65%乙腈（0.1%甲酸）定容得到內(nèi)標(biāo)H-Std-a-Bz-DF；標(biāo)品稀釋液為3.2mL65%乙腈（0.1%甲酸）+200μLH-std-a-Bz-DF；L-Std-a-Bz160μL+10μLH-Std-a-Bz-DF內(nèi)標(biāo)作為標(biāo)曲的第一個(gè)點(diǎn)，使用標(biāo)品稀釋液依次稀釋該標(biāo)準(zhǔn)溶液得一系列校正溶液；將標(biāo)品在4℃，12000rpm離心15min，取上清液40μL+20μL水溶液進(jìn)行上機(jī)檢測(cè)。②代謝物提取方法：取20μL待測(cè)樣本于1.5mLEP管中；加入80μL提取液（含0.1%甲酸的乙腈，-20℃預(yù)冷），渦旋30s混合均勻；冰水浴超聲15min；將樣本于-40℃沉淀過(guò)夜；樣品于4℃，12000rpm離心15min后取80μL上清液（Spl）；80μLSpl+40μL100mM/LNa2CO3+40μL2%L-BzCl，室溫孵育30min；取衍生后的Spl160μL+10μLH-std-a-Bz-DF內(nèi)標(biāo)；將樣品4℃，12000rpm離心15min，取40μL+20μLH2O上機(jī)SCIEXExionLC超高效液相色譜儀檢測(cè)。2.4大鼠原代海馬神經(jīng)元總蛋白提取于輻射后即刻棄去神經(jīng)元培養(yǎng)基，加入2mlPBS沖洗兩次，棄去培養(yǎng)基，每皿加入100~120μl的RIPA裂解液和蛋白酶抑制劑（RIPA:蛋白酶抑制劑=100：1），用細(xì)胞刮刀刮下細(xì)胞，吸取至離心管中。全部蛋白收集完成后，于冰上裂解10min后，在4℃，12000rpm下離心10min，收集上清至新的離心管中。提取完成后使用BCA試劑盒（Thermo，美國(guó)）測(cè)定蛋白濃度。向蛋白中加入5×SDS蛋白上樣緩沖液，混合均勻，在沸水中煮10-15min，冷卻后凍存于-20℃中，以備后續(xù)WB實(shí)驗(yàn)使用。2.5WesternBlot檢測(cè)蛋白表達(dá)（1）制膠：選用1.5mm的玻璃板，用洗潔精清洗后，固定在制膠器上，純水測(cè)試不漏水后加入10%的分離膠，用1-2mL純水封膠面，30min后待分離膠凝固后倒去純水，加入5%的濃縮膠，插入梳子，30min后完全凝固，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備。（2）上樣：兩側(cè)加入4μl的Marker，其余孔分別加入待測(cè)蛋白樣品，蛋白上樣量為20μg；（3）電泳：將電泳槽裝入電泳盒中，加入新鮮的電泳液，垂直將梳子拔出，上樣后電泳電壓調(diào)至80V，跑30min，當(dāng)條帶跑出積層膠，進(jìn)入分離膠后，電壓調(diào)至120V，目的蛋白電泳至玻璃板下端，終止電泳。（4）轉(zhuǎn)膜：在甲醇中激活PVDF膜60秒，在托盤中倒入1×電轉(zhuǎn)移緩沖液，撬開玻璃板，取出凝膠，在轉(zhuǎn)膜莢內(nèi)按照（黑色）海綿-浸泡過(guò)緩沖液的厚濾紙-膠-PVDF膜-浸泡過(guò)緩沖液的厚濾紙-海綿（白色）的順序進(jìn)行擺放，將轉(zhuǎn)膜莢放入轉(zhuǎn)移槽中，倒入轉(zhuǎn)膜液，固定電流200mA，轉(zhuǎn)膜90min。（5）封閉：轉(zhuǎn)膜結(jié)束后，配制封閉液（2.5g脫脂奶粉溶于50mL的TBST中，取出PVDF膜，按照目的蛋白和GAPDH的分子量進(jìn)行裁剪。用TBST于萬(wàn)向搖床上洗10min后，取出PVDF膜，加入封閉液后于萬(wàn)向搖床上封閉1小時(shí)。（6）一抗孵育：按照目的蛋白和內(nèi)參一抗稀釋比例用TBST進(jìn)行稀釋，CaMKⅡα1：1000、CaMKⅡβ1：1000、CaMKⅡγ1：1000、CaMKⅡδ1：1000、GAPDH1：5000，在4℃下孵育過(guò)夜。（7）二抗孵育：吸出一抗后用TBST洗膜10min，重復(fù)3次，加入二抗，二抗稀釋比例均為1：10000，在室溫下于萬(wàn)向搖床上輕搖1小時(shí)，TBST洗滌10min，重復(fù)3次。（8）顯影：準(zhǔn)備發(fā)光液（A液：B液=1：1），用凝膠成像儀顯影。2.6WB結(jié)果圖像分析采用ImageJ軟件對(duì)WB結(jié)果進(jìn)行圖像分析，測(cè)定目的蛋白CaMKⅡα、CaMKⅡβ、CaMKⅡγ、CaMKⅡδ條帶的IntDen，以及內(nèi)參條帶GAPDH的IntDen。計(jì)算目的蛋白條帶與內(nèi)參GAPDH的比值。2.7RNA提取、反轉(zhuǎn)錄和定量PCR使用TRIzol，三氯甲烷，無(wú)水乙醇和異丙醇從原代海馬神經(jīng)元細(xì)胞中提取總RNA，使用RevertAidFirstStrandCdnaSymthesisKit（Thermoscientific）進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。使用PowerSYBRGreenPCRMasterMix試劑盒（Appliedbiosystems）進(jìn)行PCR。引物序列見(jiàn)表1。表1Real-timePCR引物序列及擴(kuò)增片段長(zhǎng)度基因名稱擴(kuò)增片段長(zhǎng)度（bp）上游（F）及下游（R）引物序列GAPDH143bpF:GGCACAGTCAAGGCTGAGAATGR:ATGGTGGTGAAGACGCCAGTACaMKⅡα96bpF:TCACCTGCACCCGATTCACR:CAGCCAGCACCTTCACACACaMKⅡβ88bpF:CCCATGGACACAGGGTAAACATCR:GCCTCACGCTGTCTGTGACAACaMKⅡγ97bpF:CACAGCTGACCAGGCTCTCAAR:CTTGCGTAAGCACTCCACTGTCTCCaMKⅡδ148bpF:CCATCACCAGAATGGGACACAGR:GCATCATGGAGGCAACAGTAGAAC表2Real-timePCR引物序列及擴(kuò)增片段長(zhǎng)度基因名稱擴(kuò)增片段長(zhǎng)度（bp）上游（F）及下游（R）引物序列GAPDH143bpF:GGCACAGTCAAGGCTGAGAATGR:ATGGTGGTGAAGACGCCAGTAHtr2b129bpF:TTCAGGCCAATCAGTGCAATTCR:TGTGTGCGTTGACCACATCAGPik3r285bpF:GGACAAGAGCCGCGAGTATGR:CTCTATGGCTGTGCGCTTCACreb3l4142bpF:AGTGGAGCCCTGCATTTATGGTAR:AGTGGAGCCCTGCATTTATGGTATACR3102bpF:GCTACGTGCAGTGGCCAGAAR:AGGTGACACCCATGATGAGCAGGLRA1146bpF:GTGCTCACCATGACCACACAGAR:GACACAAAGTTGACAGCGGCATACHRNB498bpF:AGCTTCATCGCCCAGCATCR:CACAGGAACAGGCGGTCAACTtll10109bpF:GGAGCATGCACGCACTTTGR:ATCCCTGATGTCCAGCCGATANpffr2142bpF:TGGTTGGAATATTCTGCATGCCTAR:GCTATGGCAACCAAGGTGAAGACTimm8a2158bpF:CGTCGAGCGCTTCATCGATAR:CACGGCCTCTGAAGCCCTAAGgt1107bpF:CCGTGCTGATTCTCATCTTGAACR:GGCCTCCACGATACGGTGATAHTR4135bpF:TTTGCCTCAGCTGACCAAATGR:GGAAGCGTTTCTGAGGCTCAC2.8轉(zhuǎn)錄組測(cè)序（1）樣品制備于輻射后即刻，棄細(xì)胞培養(yǎng)液上清，加PBS和Rnase-free室溫沖洗后加入1mlTRIzol，反復(fù)吸打數(shù)次加入1.5ml離心管中，再加300μlRNase-free，進(jìn)行總RNA的提取和總RNA質(zhì)量檢測(cè)，質(zhì)檢合格后，依次進(jìn)行第一鏈cDNA合成、第二鏈cDNA合成、純化雙鏈cDNA、末端修復(fù)、連接接頭、片段篩選、文庫(kù)富集、文庫(kù)純化，并采用Novaseq6000PE150平臺(tái)上機(jī)測(cè)序。（2）生物信息分析①數(shù)據(jù)質(zhì)控與轉(zhuǎn)錄組文庫(kù)質(zhì)量評(píng)估：將高通量測(cè)序的下機(jī)數(shù)據(jù)（RawData）進(jìn)行過(guò)濾得到高質(zhì)量數(shù)據(jù)（CleanData）。參考基因組對(duì)比。把CleanData與指定的參考基因組比對(duì)，計(jì)算測(cè)序數(shù)據(jù)與參考基因組的比對(duì)效率，評(píng)估測(cè)序數(shù)據(jù)的飽和度和基因的覆蓋度。②基因表達(dá)譜構(gòu)建：根據(jù)比對(duì)結(jié)果，進(jìn)行轉(zhuǎn)錄本組裝，計(jì)算基因在不同樣本中的表達(dá)量，構(gòu)建基因表達(dá)譜。用箱線圖、密度曲線圖等圖片展示各樣本中基因表達(dá)值的分布情況。③基因差異篩選與功能富集：在不同樣本分組中篩選差異基因，并對(duì)差異基因進(jìn)行聚類分析以及火山圖可視化展示，對(duì)差異基因進(jìn)行GO/KEGG功能注釋以及功能富集分析、差異基因蛋白互作網(wǎng)絡(luò)分析，發(fā)掘差異基因差異化表達(dá)的功能和調(diào)控關(guān)系。2.9數(shù)據(jù)分析所有數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，對(duì)于電磁輻射對(duì)照組和輻射組的神經(jīng)遞質(zhì)含量的連續(xù)性變量采用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)；對(duì)于鈣相關(guān)蛋白及其激酶的表達(dá)變化的計(jì)量資料的統(tǒng)計(jì)分析使用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)；對(duì)于電磁輻射差異基因轉(zhuǎn)錄譜差異基因mRNA表達(dá)變化的連續(xù)性變量使用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)。對(duì)所有數(shù)據(jù)使用SPSS20統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，使用GraphPad8.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行作圖。3電磁輻射對(duì)神經(jīng)元神經(jīng)遞質(zhì)的影響研究3.1電磁輻射后大鼠原代海馬神經(jīng)元膽堿類神經(jīng)遞質(zhì)含量的變化乙酰膽堿（Acetylcholine，Ach）：與Sham組相比，THz組神經(jīng)元Ach含量于輻射后即刻顯著降低（P<0.01，圖1）。圖1電磁輻射后大鼠原代海馬神經(jīng)元Ach含量變化與Sham組相比，**示P<0.01。3.2電磁輻射后大鼠原代海馬神經(jīng)元單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量的變化5-羥基吲哚乙酸（5-Hydroxyindoleaceticacid，5HIAA）：與Sham組相比，THz組神經(jīng)元5HIAA含量于輻射后即刻明顯增加（P<0.05，圖2A）。組胺（Histamine，Hist）：與Sham組相比，THz組神經(jīng)元Hist含量于輻射后即刻明顯增加（P<0.05，圖2B）。腐胺（Putrescine，Put）：與Sham組相比，THz組神經(jīng)元Put含量于輻射后即刻明顯增加（P<0.05，圖2C）。5-羥色胺（Serotonin，5HT）：與Sham組相比，THz組神經(jīng)元5HT含量于輻射后即刻明顯增加（P<0.05，圖2D）。章魚胺（Octopamine，OA）：與Sham組相比，THz組神經(jīng)元OA含量于輻射后即刻顯著降低（P<0.001，圖2E）。左旋多巴胺（3,4-Dihydroxyphenylalanine，LDOPA）：與Sham組相比，THz組神經(jīng)元LDOPA含量于輻射后即刻顯著降低（P<0.001，圖2F）。亞精胺（Spermidine，Spd）：與Sham組相比，THz組神經(jīng)元Spd含量于輻射后即刻明顯降低（P<0.05，圖2G）。與Sham組相比，THz組神經(jīng)元高香草酸（Homovanillicacid，HVA）（圖2H）、3,4-二羥基苯乙酸（3,4-Dihydroxyphenylaceticacid，DOPAC）（圖2I）、香草扁桃酸（Vanillylmandelicacid，VMA）（圖2J）、多巴胺（Dopamine，DA）（圖2K）、5-羥基色氨酸（5-Hydroxytryptophan，5HTP）（圖2L）、精胺（Spermine，Spm）（圖2M）、色胺（Tryptamine，TrpA）（圖2N）、去甲腎上腺素（Norepinephrine，NE）（圖2O）、腎上腺素（Epinephrine，E）（圖2P）含量未見(jiàn)明顯變化。圖2電磁輻射后大鼠原代海馬神經(jīng)元單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量的變化A：5HIAA；B：Hist；C：Put；D：5HT；E：OA；F：LDOPA；G：Spd；H：HVA；I：DOPAC；J：VMA；K：DA；L：5HTP；M：Spm；N：TrpA；O：NE；P：E。與Sham組相比，*示P＜0.05，***示P＜0.001。3.3電磁輻射后大鼠原代海馬神經(jīng)元氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)含量的變化L-半胱氨酸（L-Cysteine，Cys）：與Sham組相比，THz組神經(jīng)元Cys含量于輻射后即刻明顯增加（P<0.05，圖3A）。L-谷氨酰胺（L-Glutamine，Gln）：與Sham組相比，THz組神經(jīng)元Gln含量于輻射后即刻明顯增加（P<0.05，圖3B）。L-絲氨酸（Serine，Ser）：與Sham組相比，THz組神經(jīng)元Ser含量于輻射后即刻明顯增加（P<0.05，圖3C）。蘇氨酸（Threonine，Thr）：與Sham組相比，THz組神經(jīng)元Thr含量于輻射后即刻明顯降低（P<0.05，圖3D）。與Sham組相比，THz組神經(jīng)元L-亮氨酸（L-Leucine，Leu）（圖3E）、γ-氨基丁酸（4-Aminobutyricacid，GABA）（圖3F）、甘氨酸（Glycine，Gly）（圖3G）、L-甲硫氨酸（Methionine，Met）（圖3H）、犬尿氨酸（Kynurenine，Kyn）（圖3I）、L-苯丙氨酸（L-Phenylalanine，Phe）（圖3J）、β-丙氨酸（β-alanine，BAla）（圖3K）、L-天冬酰胺（L-Asparagine，Asn）（圖3L）、L-賴氨酸（L-Lysine，Lys）（圖3M）、L-纈氨酸（L-Valine，Val）（圖3N）、L-色氨酸（L-Tryptophan，Trp）（圖3O）、L-丙氨酸（L-Alanine，Ala）（圖3P）、（L-Histidine，His）（圖3Q）、L-精氨酸（L(+)-Arginine，Arg）（圖3R）、鳥氨酸（Ornithine，Orn）圖3S）、L-酪氨酸（L-Tyrosine，Tyr）（圖3T）、L-天冬氨酸（L-Aspartate，Asp）（圖3U）、L-谷氨酸（L-Glutamicacid，Glu）（圖3V）含量未見(jiàn)明顯變化。圖3電磁輻射后大鼠原代海馬神經(jīng)元氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)含量的變化A：Cys；B：Gln；C：Ser；D：Thr；E：Leu；F：GABA；G：Gly；H：Met；I：Kyn；J：Phe；K：BAla；L：Asn；M：Lys；N：Val；O：Trp；P：Ala；Q：His；R：Arg；S：Orn；T：Tyr；U：Asp；V：Glu與Sham組相比，*示P＜0.05，**示P＜0.01，***示P＜0.001。3.4電磁輻射后大鼠原代海馬神經(jīng)元GSH和Melatonin含量的變化谷胱甘肽（Glutathione，GSH）：與Sham組相比，THz組神經(jīng)元GSH含量于輻射后即刻明顯增加（P<0.05，圖4A）。褪黑素（Melatonin，Mela）：與Sham組相比，THz組神經(jīng)元Mela含量于輻射后即刻明顯增加（P<0.05，圖4B）。圖4電磁輻射后大鼠原代海馬神經(jīng)元GSH和Melatonin含量的變化A：GSH；B：Melatonin。與Sham組相比，*示P＜0.05。4電磁輻射對(duì)神經(jīng)元鈣相關(guān)蛋白及其激酶表達(dá)的影響4.1電磁輻射后大鼠原代海馬神經(jīng)元CaMKⅡα、CaMKⅡβ、CaMKⅡγ和CaMKⅡδ蛋白表達(dá)變化CaMKⅡα蛋白：與Sham組相比，THz組神經(jīng)元于輻射后即刻CaMKⅡα蛋白表達(dá)未見(jiàn)明顯改變（圖5）。圖5電磁輻射后大鼠原代海馬神經(jīng)元CaMKⅡα蛋白表達(dá)和定量分析CaMKⅡβ蛋白：與Sham組相比，THz組神經(jīng)元于輻射后即刻CaMKⅡβ蛋白表達(dá)明顯升高（P＜0.05，圖6）。圖6電磁輻射后大鼠原代海馬神經(jīng)元CAMKⅡβ蛋白表達(dá)和定量分析與Sham組相比，*示P＜0.05。CaMKⅡγ蛋白：與Sham組相比，THz組神經(jīng)元于輻射后即刻CaMKⅡγ蛋白表達(dá)未見(jiàn)明顯變化（圖7）。圖7電磁輻射后大鼠原代海馬神經(jīng)元CAMKⅡγ蛋白表達(dá)和定量分析CaMKⅡδ蛋白：與Sham組相比，THz組神經(jīng)元于輻射后即刻CaMKⅡδ蛋白表達(dá)明顯增加（P＜0.05，圖8）。圖8電磁輻射后大鼠原代海馬神經(jīng)元CAMKⅡδ蛋白表達(dá)和定量分析與Sham組相比，*示P＜0.05。4.2電磁輻射后大鼠原代海馬神經(jīng)元CaMKⅡα、CaMKⅡβ、CaMKⅡγ和CaMKⅡδmRNA表達(dá)變化CaMKⅡαmRNA：與Sham組相比,THz組神經(jīng)元于輻射后即刻CaMKⅡαmRNA表達(dá)顯著增加（P＜0.01，圖9A）。CaMKⅡβmRNA：與Sham組相比,THz組神經(jīng)元于輻射后即刻CaMKⅡβmRNA表達(dá)顯著增加（P＜0.001，圖9B）。CaMKⅡγmRNA：與Sham組相比,THz組神經(jīng)元于輻射后即刻CaMKⅡγmRNA表達(dá)顯著降低（P＜0.01，圖9C）。CaMKⅡδmRNA：與Sham組相比，THz組神經(jīng)元于輻射后即刻CaMKⅡδmRNA表達(dá)未見(jiàn)明顯變化（圖9D）。圖9電磁輻射后大鼠原代海馬神經(jīng)元CaMKⅡα、CaMKⅡβ、CaMKⅡγ和CaMKⅡδmRNA表達(dá)變化與Sham組相比，**示P＜0.01，***示P＜0.001。5基于轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的電磁輻射對(duì)神經(jīng)元影響的機(jī)制研究5.1電磁輻射后原代海馬神經(jīng)元轉(zhuǎn)錄組表達(dá)譜（1）差異基因與Sham組相比，共捕捉到THz組差異基因共303個(gè)，其中上調(diào)基因139個(gè)，下調(diào)基因164個(gè)。見(jiàn)表3。表3電磁輻射后大鼠原代海馬神經(jīng)元轉(zhuǎn)錄組結(jié)果比較組別差異基因上調(diào)下調(diào)THz組VSSham組303139164差異基因火山圖（VolcanoPlot）可以直觀地展現(xiàn)所有基因的顯著性P值與FoldChange之間的關(guān)系，以便快速查看基因在兩組樣品間的表達(dá)水平差異程度及其統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。電磁輻射后原代海馬神經(jīng)元轉(zhuǎn)錄組基因火山圖見(jiàn)圖10，聚類分析圖見(jiàn)圖11。圖10電磁輻射后大鼠原代還海馬神經(jīng)元差異基因火山圖圖中的每一個(gè)點(diǎn)表示一個(gè)基因，橫坐標(biāo)表示基因在兩分組中表達(dá)量差異倍數(shù)的對(duì)數(shù)值log2(foldchange)；縱坐標(biāo)表示基因表達(dá)量變化的Q值的負(fù)對(duì)數(shù)值。橫坐標(biāo)絕對(duì)值越大，說(shuō)明表達(dá)量在兩分組間的表達(dá)量倍數(shù)差異越大；縱坐標(biāo)值越大，表明差異表達(dá)越顯著。下調(diào)的差異基因用藍(lán)點(diǎn)表示，上調(diào)的差異基因用紅點(diǎn)表示。圖11電磁輻射后大鼠原代海馬神經(jīng)元差異基因聚類圖S為Sham組，T為THz組。圖中橫坐標(biāo)為樣本名稱，縱坐標(biāo)為基因，顏色的深淺代表基因表達(dá)量的高低，紅色代表表達(dá)量高，綠色代表表達(dá)量低。（2）GO功能分析與Sham組相比，THz組差異基因主要定位于胞質(zhì)小核糖體亞基（AC106932.1等）、透明區(qū)受體復(fù)合物（Acat2l1等）、含伴侶蛋白的T復(fù)合物（Acat2l1等）等。見(jiàn)表4和圖12。與Sham組相比，THz組差異基因主要功能為核糖體的結(jié)構(gòu)成分（Rpl35al1等）、DNA-（無(wú)嘌呤或無(wú)嘧啶位點(diǎn)）核酸內(nèi)切酶活性（Neil3等）、cAMP反應(yīng)元件結(jié)合（Creb3l4等）等。見(jiàn)表5和圖12。與Sham組相比，THz組差異基因主要參與生物學(xué)過(guò)程為翻譯（Flt3lg等）、心內(nèi)膜形成（Ovol2等）、細(xì)胞衰老的正調(diào)控（Hmga2等）等。見(jiàn)表6和圖12。表4電磁輻射后大鼠原代海馬神經(jīng)元差異基因細(xì)胞定位分析（CC，Top10）生物學(xué)過(guò)程ID生物學(xué)過(guò)程基因數(shù)目基因名稱P值GO:0022627cytosolicsmallribosomalsubunit胞質(zhì)小核糖體亞基7AC106932.1,AABR07042903.1,AABR07047714.1,AC141489.1,AC110709.1,LOC100361933,-0.00GO:0002199zonapellucidareceptorcomplex透明區(qū)受體復(fù)合物2Acat2l1,AABR07030462.10.00GO:0005832chaperonin-containingT-complex含伴侶蛋白的T復(fù)合物2Acat2l1,AABR07030462.10.00GO:0031011Ino80complexIno80復(fù)合體2NEWGENE_1562258,-0.00GO:0016020membrane膜14Ssc4d,Rgs5,Abcg2,Tacr3,Epb42,Glra1,Chrnb4,Htr4,Cplx3,AABR07026240.1,AABR07042937.1,-,-,-0.00GO:0009897externalsideofplasmamembrane質(zhì)膜外側(cè)7Selp,Glra1,Gucy2g,Fgf8,Scnn1g,Lag3,AABR07044397.10.00GO:0005887integralcomponentofplasmamembrane質(zhì)膜的組成部分12Rxfp2,Selp,Npffr2,Glra1,Chrnb4,Scnn1g,Htr4,Tmc3,Calhm6,P2ry10,AABR07051241.1,Pcdha40.00GO:1990008neurosecretoryvesicle神經(jīng)分泌小泡1Gnrh10.00GO:0005902microvillus微絨毛3Myo1a,Cblif,Clrn10.01GO:0071141SMADproteincomplexSMAD蛋白復(fù)合物1Hmga20.01表5電磁輻射后大鼠原代海馬神經(jīng)元差異基因分子功能分析（MF，Top10）生物學(xué)過(guò)程ID生物學(xué)過(guò)程基因數(shù)目基因名稱P值GO:0003735structuralconstituentofribosome核糖體的結(jié)構(gòu)成分12AC106932.1,AABR07042903.1,AABR07047714.1,AC141489.1,LOC100360647,AC110709.1,LOC687780,LOC103690996,Rpl35al1,Flt3lg,LOC100361933,-0.00GO:0003906DNA-(apurinicorapyrimidinicsite)endonucleaseactivityDNA-（無(wú)嘌呤或無(wú)嘧啶位點(diǎn)）核酸內(nèi)切酶活性2Neil3,Hmga20.00GO:0035497cAMPresponseelementbindingcAMP反應(yīng)元件結(jié)合2Creb3l4,Hmga20.00GO:0036312phosphatidylinositol3-kinaseregulatorysubunitbinding磷脂酰肌醇3-激酶調(diào)節(jié)亞基結(jié)合2Pik3r2,AABR07015080.20.00GO:0016594glycinebinding甘氨酸結(jié)合2Glra1,AABR07051241.10.00GO:0035501MH1domainbindingMH1結(jié)合1Hmga20.00GO:0061501cyclic-GMP-AMPsynthaseactivity環(huán)-GMP-AMP合酶活性1Cgas0.00GO:0000831inositolhexakisphosphate6-kinaseactivity六磷酸肌醇6-激酶活性1Ip6k30.00GO:0070737protein-glycineligaseactivity,elongating延伸蛋白質(zhì)-甘氨酸連接酶活性1Ttll100.00GO:0030338CMP-N-acetylneuraminatemonooxygenaseactivityCMP-N-乙酰神經(jīng)氨酸單加氧酶活性1Cmahp0.00表6電磁輻射后大鼠原代海馬神經(jīng)元差異基因生物學(xué)過(guò)程分析（BP，Top10）生物學(xué)過(guò)程ID生物學(xué)過(guò)程基因數(shù)目基因名稱P值GO:0006412translation翻譯12AC106932.1,AABR07042903.1,AABR07047714.1,AC141489.1,LOC100360647,AC110709.1,LOC687780,LOC103690996,Rpl35al1,Flt3lg,LOC100361933,-0.00GO:0060214endocardiumformation心內(nèi)膜形成2Ovol2,Sox180.00GO:2000774positiveregulationofcellularsenescence細(xì)胞衰老的正調(diào)控2Hmga2,Cgas0.00GO:0006119oxidativephosphorylation氧化磷酸化2-,-0.00GO:0016573histoneacetylation組蛋白乙?；?Mecp2,LOC102556339,-0.00GO:1904851positiveregulationofestablishmentofproteinlocalizationtotelomere正調(diào)控蛋白質(zhì)定位到端粒的建立2Acat2l1,AABR07030462.10.00GO:0051291proteinheterooligomerization蛋白質(zhì)異寡聚化4Glra1,Chrnb4,Trps1,AABR07042937.10.00GO:2001223negativeregulationofneuronmigration神經(jīng)元遷移的負(fù)調(diào)控2Gnrh1,-0.00GO:0030865corticalcytoskeletonorganization皮質(zhì)細(xì)胞骨架組織2AABR07042937.1,-0.00GO:0021846cellproliferationinforebrain前腦細(xì)胞增殖2Fgf8,Hmga20.00圖12電磁輻射后大鼠原代海馬神經(jīng)元GO富集分析結(jié)果橫坐標(biāo)為GO分類，為GO的二級(jí)功能，縱坐標(biāo)左邊是差異基因所占數(shù)目百分比，右邊是差異基因數(shù)目。（3）KEGG信號(hào)通路分析與Sham組相比，THz組差異基因主要參與的信號(hào)通路包括神經(jīng)活性配體-受體相互作用（RXFP2等）、核糖體（RP-S12e等）、TRP通道的炎癥介質(zhì)調(diào)節(jié)（HTR2等）等。見(jiàn)表7，圖13和14。表7電磁輻射后大鼠原代海馬神經(jīng)元差異基因信號(hào)通路分析（KEGG，Top10）信號(hào)通路ID信號(hào)通路名稱基因數(shù)目基因名稱P值ko04080Neuroactiveligand-receptorinteraction神經(jīng)活性配體-受體相互作用8Rxfp2,Npffr2,Tacr3,Glra1,Chrnb4,Htr4,P2ry10,AABR07051241.10.00ko03010Ribosome核糖體11AC106932.1,AABR07042903.1,AABR07047714.1,AC141489.1,LOC100360647,AC110709.1,LOC687780,LOC103690996,Rpl35al1,LOC100361933,-0.00ko04750InflammatorymediatorregulationofTRPchannelsTRP通道的炎癥介質(zhì)調(diào)節(jié)3Htr2b,Pik3r2,AABR07043564.10.01ko04151PI3K-AktsignalingpathwayPI3K-Akt信號(hào)通路5Ssc4d,Fgf8,Creb3l4,-,-0.01ko05030Cocaineaddiction可卡因成癮2Creb3l4,AABR07051241.10.01ko00460Cyanoaminoacidmetabolism氰基氨基酸代謝1Ggt10.02ko05031Amphetamineaddiction苯丙胺成癮2Creb3l4,AABR07051241.10.03ko04113Meiosis–yeast酵母減數(shù)分裂2AABR07043564.1,AABR07066020.10.03ko04020Calciumsignalingpathway鈣信號(hào)通路3Tacr3,Htr4,AABR07051241.10.03ko00430Taurineandhypotaurinemetabolism?；撬岷蛠喤；撬岽x1Ggt10.04圖13電磁輻射后大鼠原代海馬神經(jīng)元上調(diào)基因KEGG富集通路圖橫坐標(biāo)是該類pathway上注釋的gene數(shù)目占注釋到KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)中的所有g(shù)ene數(shù)目的比例，縱坐標(biāo)是pathway類別，數(shù)字為注釋到該pathway的gene數(shù)目，相同顏色的pathway屬于同一個(gè)大類。圖14電磁輻射后大鼠原代海馬神經(jīng)元下調(diào)基因KEGG富集通路圖橫坐標(biāo)是該類pathway上注釋的gene數(shù)目占注釋到KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)中的所有g(shù)ene數(shù)目的比例，縱坐標(biāo)是pathway類別，數(shù)字為注釋到該pathway的gene數(shù)目，相同顏色的pathway屬于同一個(gè)大類。5.2電磁輻射后大鼠原代海馬神經(jīng)元差異基因驗(yàn)證結(jié)果Creb3l4：與Sham組相比，THz組Creb3l4mRNA表達(dá)于輻射后即刻顯著增加（P<0.001，圖15A）。TACR3：與Sham組相比，THz組TACR3mRNA表達(dá)于輻射后即刻明顯增加（P<0.05，圖15B）。GLRA1：與Sham組相比，THz組GLRA1mRNA表達(dá)于輻射后即刻顯著增加（P<0.05，圖15C）。Ttll10：與Sham組相比，THz組Ttll10mRNA表達(dá)于輻射后即刻明顯增加（P<0.05，圖15D）。Npffr2：與Sham組相比，THz組Npffr2mRNA表達(dá)于輻射后即刻顯著降低（P<0.01，圖15E）。與Sham組相比，THz組Timm8a2（圖15F）、Pik3r2（圖15G）、Htr2b（圖15H）、Smyd2（圖15I）、CHRNB4（圖15J）、Ggt1（圖15K）、HTR4（圖15L）mRNA表達(dá)未見(jiàn)明顯變化。圖15電磁輻射后大鼠原代海馬神經(jīng)元差異基因表達(dá)A：Creb3l4；B：TACR3；C：GLRA1；D：Ttll10；E：Npffr2；F：Timm8a2；G：Pik3r2；H：Htr2b；I：Smyd2；J：CHRNB4；K：Ggt1；L：HTR4。與Sham組相比，*示P＜0.05；**示P＜0.01，***示P＜0.001。6討論6.1電磁輻射對(duì)神經(jīng)元神經(jīng)遞質(zhì)的影響研究相關(guān)研究顯示，乙酰膽堿類神經(jīng)遞質(zhì)主要包括Ach。Ach屬于興奮性神經(jīng)遞質(zhì)。申延豐ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><RecNum>40</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[7]</style></DisplayText><record><rec-number>40</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="dfz9rv5abvtpa8ef00npxxpse5p0f92rrfse"timestamp="1644054346">40</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors></contributors><titles><title><癲癇患兒興奮性及抑制性神經(jīng)...變化及與嚴(yán)重程度的關(guān)系探究_申延豐.pdf></title></titles><dates></dates><urls></urls><electronic-resource-num>10.3969/j.issn.1674-4985.2021.21.042</electronic-resource-num></record></Cite></EndNote>[7]等研究發(fā)現(xiàn)癲癇兒童的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)Ach顯著高于同時(shí)期正常兒童，表明Ach含量的降低屬于癲癇的保護(hù)因素。本研究發(fā)現(xiàn)，電磁輻射后Ach含量顯著降低，提示電磁輻射可能通過(guò)降低興奮性神經(jīng)遞質(zhì)的釋放保護(hù)神經(jīng)元功能。單胺類神經(jīng)遞質(zhì)主要包括多巴胺、腎上腺素、5HT和HIAA等。本研究共檢測(cè)包括5HIAA、Hist、Put、5HT、OA、LDOPA、Spd等16種單胺類神經(jīng)遞質(zhì)。其中，5HIAA、Hist、Put、5HT在電磁輻射后含量明顯增加，OA、LDOPA、Spd在電磁輻射后含量顯著降低。5HT及其代謝產(chǎn)物5HIAA，均與抑郁癥的發(fā)病密切相關(guān)。研究表明，抑郁癥最普遍接受的發(fā)病機(jī)制是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中單胺類物質(zhì)水平的減少，包括5HT、去甲腎上腺素和DAADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[8,9]。除此以外，5HT對(duì)睡眠也有重要作用，提高突觸間的5HT含量可以改善睡眠，可以通過(guò)5HT抗抑郁、調(diào)節(jié)睡眠和緩解疲勞ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><RecNum>36</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[10]</style></DisplayText><record><rec-number>36</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="dfz9rv5abvtpa8ef00npxxpse5p0f92rrfse"timestamp="1643435996">36</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors></contributors><titles><title><蛇床子催眠活性組分對(duì)原代海...神經(jīng)遞質(zhì)與鐘基因表達(dá)的影響_郝雨蒙.pdf></title></titles><dates></dates><urls></urls><electronic-resource-num>10</electronic-resource-num></record></Cite></EndNote>[10]。張曄ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><RecNum>37</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[11]</style></DisplayText><record><rec-number>37</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="dfz9rv5abvtpa8ef00npxxpse5p0f92rrfse"timestamp="1643436999">37</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors></contributors><titles><title><芍藥苷抗抑郁作用及機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展_張曄.pdf></title></titles><dates></dates><urls></urls><electronic-resource-num>10.16254/ki.53-1120/r.2018.12.035</electronic-resource-num></record></Cite></EndNote>[11]等研究發(fā)現(xiàn)，增加海馬類單胺類神經(jīng)遞質(zhì)5HT和5HIAA的水平，有助于改善眼瞼下垂的癥狀。本研究發(fā)現(xiàn)，抑制性神經(jīng)遞質(zhì)5HT和5HIAA含量在輻射后明顯增加，降低了神經(jīng)興奮性，提示電磁暴露可能提升抑制性神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，以達(dá)到緩解和促進(jìn)神經(jīng)元修復(fù)、生長(zhǎng)和功能發(fā)揮的作用。Hist由組氨酸脫羧基而成，是促進(jìn)覺(jué)醒和維持覺(jué)醒狀態(tài)的一種興奮性神經(jīng)遞質(zhì)。電磁輻射后Hist明顯升高，提示電磁輻射對(duì)神經(jīng)元的提升作用ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><RecNum>49</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[12]</style></DisplayText><record><rec-number>49</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="dfz9rv5abvtpa8ef00npxxpse5p0f92rrfse"timestamp="1644067487">49</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors></contributors><titles><title><神經(jīng)遞質(zhì)與睡眠覺(jué)醒及學(xué)習(xí)記憶的關(guān)系研究_王雅麗.pdf></title></titles><dates></dates><urls></urls></record></Cite></EndNote>[12]。LDOPA可以通過(guò)血腦屏障，進(jìn)入腦脊液代謝為多巴胺發(fā)揮治療帕金森病的作用，但是隨著帕金森病情的發(fā)展，左旋多巴胺的作用減弱ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><RecNum>47</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[13]</style></DisplayText><record><rec-number>47</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="dfz9rv5abvtpa8ef00npxxpse5p0f92rrfse"timestamp="1644066568">47</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors></contributors><titles><title><抗帕金森病新藥的研發(fā)進(jìn)展_阿麗塔.pdf></title></titles><dates></dates><urls></urls><electronic-resource-num>10.16153/j.1002-7777.2012.06.030</electronic-resource-num></record></Cite></EndNote>[13]。降低左旋多巴胺的用量，能間接起到保護(hù)神經(jīng)元的作用ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><RecNum>48</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[14]</style></DisplayText><record><rec-number>48</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="dfz9rv5abvtpa8ef00npxxpse5p0f92rrfse"timestamp="1644066586">48</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors></contributors><titles><title><單胺氧化酶抑制劑的研究進(jìn)展_宋明貴.pdf></title></titles><dates></dates><urls></urls></record></Cite></EndNote>[14]。OA是體內(nèi)內(nèi)源性生物胺，具有神經(jīng)介質(zhì)的功能，是一種優(yōu)秀的選擇性的β3-腎上腺素能受體激動(dòng)劑ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[15,16]。OA是無(wú)脊椎動(dòng)物，特別是節(jié)肢動(dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)中普遍存在的生物胺之一ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><RecNum>45</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[17]</style></DisplayText><record><rec-number>45</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="dfz9rv5abvtpa8ef00npxxpse5p0f92rrfse"timestamp="1644065255">45</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors></contributors><titles><title><昆蟲體內(nèi)章魚胺的分布、功能及其研究進(jìn)展_潘燦平.pdf></title></titles><dates></dates><urls></urls></record></Cite></EndNote>[17]。OA、LDOPA、Spd在電磁輻射后含量顯著降低，提示電磁輻射同樣具有抑制興奮性神經(jīng)遞質(zhì)釋放的作用。氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)可以分為興奮性和抑制性兩類，在學(xué)習(xí)記憶功能上發(fā)揮著重要的作用ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><RecNum>32</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[18]</style></DisplayText><record><rec-number>32</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="dfz9rv5abvtpa8ef00npxxpse5p0f92rrfse"timestamp="1643427422">32</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors></contributors><titles><title><不同條件微波輻射對(duì)大鼠遠(yuǎn)后...憶功能及海馬組織結(jié)構(gòu)的影響_王惠.pdf></title></titles><dates></dates><urls></urls><electronic-resource-num>10</electronic-resource-num></record></Cite></EndNote>[18]。本研究共檢測(cè)出包括Cys、Gln、Ser、Thr等在內(nèi)的22種氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)，其中，Cys、Gln、Ser在太赫茲輻射后明顯增加，Thr在輻射后明顯降低。郭雙ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><RecNum>33</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[19]</style></DisplayText><record><rec-number>33</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="dfz9rv5abvtpa8ef00npxxpse5p0f92rrfse"timestamp="1643433720">33</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors></contributors><titles><title><基于GC-TOF-MS代謝...枝湯對(duì)腦缺血大鼠的作用機(jī)制_郭雙.pdf></title></titles><dates></dates><urls></urls></record></Cite></EndNote>[19]等研究發(fā)現(xiàn)，Cys的變化對(duì)缺血再灌注損傷有一定的影響。Gln可以通過(guò)谷氨酰胺酶轉(zhuǎn)化為突觸小泡所需的GluADDINEN.CITE<EndNote><Cite><RecNum>38</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[20]</style></DisplayText><record><rec-number>38</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="dfz9rv5abvtpa8ef00npxxpse5p0f92rrfse"timestamp="1643438759">38</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors></contributors><titles><title><L-茶氨酸改善睡眠作用研究進(jìn)展_張穎.pdf></title></titles><dates></dates><urls></urls><electronic-resource-num>10.13386/j.issn1002-0306.2020070289</electronic-resource-num></record></Cite></EndNote>[20]。研究ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><RecNum>50</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[21]</style></DisplayText><record><rec-number>50</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="dfz9rv5abvtpa8ef00npxxpse5p0f92rrfse"timestamp="1644068852">50</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors></contributors><titles><title><HPLC-ESI-MS法測(cè)...經(jīng)遞質(zhì)L_D-絲氨酸的含量_王偉莉.pdf></title></titles><dates></dates><urls></urls></record></Cite></EndNote>[21]顯示Ser主要參與學(xué)習(xí)記憶等生理功能，輻射后海馬神經(jīng)元的Ser含量增加，提示電磁輻射對(duì)神經(jīng)元的提升作用。GSH在腦組織中的含量豐富，相關(guān)體外研究表明，GSH的缺失會(huì)加重缺血再灌注損傷ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[22]。邵斌霞ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><RecNum>28</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[23]</style></DisplayText><record><rec-number>28</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id=