1實驗03植物種子中不飽和脂肪酸的分離

(反相紙層析法)一、原理

在紙層析中，通常支持相是含水的，移動相是有機溶劑。脂肪酸用有機介質(zhì)為支持相，以含水溶劑為移動相，也就是所謂“反相紙層析法”。2由于不同的脂肪酸在兩相中的分配系數(shù)不同，在層析濾紙上移動速率就有差異，最后使混合脂肪酸的各組分被分開。然后用醋酸銅處理，將脂肪酸轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的銅鹽，再用紅氨酸顯色，即可得到藍(lán)灰色點狀層析圖譜。34二、材料、設(shè)備與試劑（一）實驗材料：油菜籽（二）設(shè)備：1.層析紙；2.層析缸；3.層析架；4.顯色盤；5.烘箱或電吹風(fēng)；6.微量進(jìn)樣器或毛細(xì)管。5（三）試劑5%KOH-CH3OH溶液2.10%液體石蠟-石油醚溶液3.95%醋酸溶液4.1%醋酸銅溶液5.0.03%紅氨酸(二硫代草酰胺)溶液6.1mol/LHCl7.石油醚6三、實驗步驟(一)樣品制備磨樣：將1克干燥的油菜種子放在研缽中研磨成粉狀，倒入磨口試管中加入1mLKOH-CH3OH溶液，25℃～30℃條件下放置6～8小時（酯化）。加入1mL1mol/LHCl及1mL石油醚。7(二)點樣在經(jīng)石臘油處理并晾干的層析紙一端1.5～

2cm處用鉛筆輕輕劃一直線，每隔1.5cm用鉛筆輕輕點一記號并編號。在層析紙各編號處，用毛細(xì)管取樣品上清液0.01mL，按編號順序滴入點樣處（每個點重復(fù)點樣2～

3）。8(三)展開溶劑系統(tǒng)與條件將點好樣的層析紙固定，編號端朝下放入盛有醋酸溶液的層析缸中，醋酸溶液的多少以能浸泡層析紙但液面低于點樣處為宜。至展層劑上升到距濾紙頂端2/3處為止，取出層析紙，吹干。9(四)顯色將吹干的層析紙放入醋酸銅溶液中浸泡約20秒，使之生成脂肪酸銅鹽。用清水沖洗，再放入潔凈的瓷盤中，用流水漂洗20分鐘以上。將層析紙小心取出，放置在潔凈的吸水紙上，用電吹風(fēng)吹干。將吹干的層析紙在紅氨酸溶液中一帶而過，層析分離后的脂肪酸立即顯出藍(lán)灰色的斑點。10四.結(jié)果分析根據(jù)紙層析色譜上的斑點位置標(biāo)出5種不飽和脂肪酸。圖譜中的順序由下而上為：芥酸、廿碳烯酸、油酸、亞油酸、亞麻酸。五、討論根據(jù)結(jié)果比較不同油菜種子中芥酸含量的高低。11亞麻酸亞油酸油酸廿碳烯酸芥酸12實驗04油菜籽中硫代葡萄糖甙總量的快速測定(葡萄糖試紙法)

硫代葡萄糖甙（thioglucoside，簡稱硫甙）是廣泛存在于十字花科植物中的一種含硫化合物，其結(jié)構(gòu)同時如下：13

在植物體內(nèi)硫代葡萄糖甙葡萄糖水解酶的作用下，會分解產(chǎn)生異硫氰酸酯、噁唑烷硫酮、腈等劇毒物質(zhì)，是影響油菜籽綜合利用的重要限制因素?！半p低油菜”指的就是“低芥酸、低硫甙”?？焖贉y定油菜籽中硫代葡萄糖甙的含量，對于選育、篩選“雙低”油菜具有重要意義。14一、原理十字花科植物種子種含有硫甙和分解硫甙的硫甙酶，將油料種子經(jīng)破碎后，加入適量的水，硫甙酶便可促使硫甙水解，每分子的硫甙經(jīng)水解后產(chǎn)生一分子的葡萄糖，用葡萄糖試紙便可快速檢測水解液中葡萄糖的含量，根據(jù)葡萄糖與硫甙的定量關(guān)系便可知待測樣品中硫甙總量的高低。15二、材料、儀器設(shè)備及試劑（一）材料油菜種子（高硫甙、低硫甙品種）（二）儀器設(shè)備

1.點滴板2.玻棒3.滴管（三）試劑1.蒸餾水2.葡萄糖試紙16三、實驗步驟分別取高硫苷、低硫苷油菜種子5～

10粒放入點滴板中，用滴管各加入3～5滴蒸餾水，用玻棒搗碎后攪勻，將葡萄糖試紙浸入被測液中，3～

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