天津pcr培訓(xùn)班考試題及答案

一、單項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的基本原理是（）A.基因重組B.轉(zhuǎn)錄C.核酸擴(kuò)增D.翻譯答案：C2.以下哪種酶是PCR反應(yīng)所必需的（）A.解旋酶B.RNA聚合酶C.Taq酶D.逆轉(zhuǎn)錄酶答案：C3.PCR反應(yīng)的變性溫度一般為（）A.90-95℃B.50-60℃C.70-75℃D.30-40℃答案：A4.在PCR反應(yīng)中，引物的作用是（）A.提供起始的單鏈DNA模板B.提供合成的原料C.引導(dǎo)DNA聚合酶合成新的DNA鏈D.終止反應(yīng)答案：C5.對于一個標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系，其包含的主要成分不包括（）A.模板DNAB.引物C.蛋白酶D.dNTPs答案：C6.PCR產(chǎn)物的特異性主要取決于（）A.模板的純度B.引物的特異性C.酶的活性D.反應(yīng)溫度答案：B7.以下哪種不是PCR的衍生技術(shù)（）A.RT-PCRB.巢式PCRC.蛋白質(zhì)印跡法D.熒光定量PCR答案：C8.在進(jìn)行PCR實驗時，防止污染的重要措施不包括（）A.嚴(yán)格分區(qū)操作B.使用一次性耗材C.增加反應(yīng)循環(huán)數(shù)D.定期清潔儀器設(shè)備答案：C9.如果PCR反應(yīng)沒有得到預(yù)期的產(chǎn)物，可能的原因不包括（）A.引物設(shè)計錯誤B.模板量過多C.反應(yīng)體系中各成分比例合適D.退火溫度不合適答案：C10.熒光定量PCR主要用于（）A.定性檢測DNAB.定量檢測DNA或RNAC.蛋白質(zhì)定性分析D.蛋白質(zhì)定量分析答案：B二、多項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)體系包括以下哪些成分（）A.模板DNAB.引物C.Taq酶D.dNTPsE.緩沖液答案：ABCDE2.影響PCR反應(yīng)的因素有（）A.模板質(zhì)量B.引物質(zhì)量C.酶的活性D.反應(yīng)溫度E.反應(yīng)時間答案：ABCDE3.以下屬于PCR引物設(shè)計原則的有（）A.長度合適B.避免引物自身形成二級結(jié)構(gòu)C.引物之間不能互補D.G-C含量適中E.特異性強(qiáng)答案：ABCDE4.以下哪些是PCR技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域（）A.基因克隆B.遺傳病診斷C.病原體檢測D.法醫(yī)鑒定E.基因表達(dá)研究答案：ABCDE5.在PCR實驗中，以下哪些操作有助于提高產(chǎn)物特異性（）A.優(yōu)化引物設(shè)計B.提高退火溫度C.降低模板濃度D.減少酶量E.適當(dāng)延長延伸時間答案：AB6.以下關(guān)于Taq酶的特點正確的是（）A.熱穩(wěn)定性高B.具有5'-3'聚合酶活性C.具有3'-5'外切酶活性D.可以在高溫下進(jìn)行DNA合成E.是一種RNA聚合酶答案：ABD7.巢式PCR的優(yōu)點包括（）A.提高特異性B.增加靈敏度C.降低假陽性率D.操作簡單E.不需要特殊儀器答案：ABC8.熒光定量PCR的檢測方法有（）A.染料法B.探針法C.電泳法D.雜交法E.免疫學(xué)法答案：AB9.在PCR實驗中，防止樣本交叉污染的方法有（）A.使用帶濾芯的槍頭B.樣本處理在不同的房間或區(qū)域C.實驗人員操作規(guī)范D.實驗器材專人專用E.對實驗環(huán)境進(jìn)行消毒答案：ABCDE10.PCR反應(yīng)中，以下關(guān)于退火溫度說法正確的是（）A.退火溫度過低會導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增B.退火溫度過高會導(dǎo)致擴(kuò)增效率降低C.退火溫度主要取決于引物的長度和G-C含量D.可以通過軟件預(yù)測合適的退火溫度E.退火溫度與酶的活性有關(guān)答案：ABCD三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)可以將微量的DNA大量擴(kuò)增。（）答案：對2.在PCR反應(yīng)中，解旋酶的作用是解開雙鏈DNA。（）答案：錯3.引物的長度越長越好。（）答案：錯4.所有的DNA聚合酶都可以用于PCR反應(yīng)。（）答案：錯5.PCR產(chǎn)物可以直接用于基因測序。（）答案：對6.熒光定量PCR只能檢測DNA。（）答案：錯7.巢式PCR是進(jìn)行兩次PCR反應(yīng)。（）答案：對8.提高模板濃度一定會提高PCR反應(yīng)的產(chǎn)量。（）答案：錯9.在PCR反應(yīng)中，延伸時間越長越好。（）答案：錯10.引物的特異性對PCR結(jié)果影響不大。（）答案：錯四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述PCR的基本步驟。答案：PCR基本步驟包括變性（90-95℃，使雙鏈DNA解鏈為單鏈）、退火（引物與模板鏈結(jié)合，溫度根據(jù)引物而定）、延伸（72℃左右，Taq酶合成新的DNA鏈），這三個步驟循環(huán)進(jìn)行。2.說明引物設(shè)計時需要考慮的兩個重要因素。答案：一是特異性，要與目的序列特異性結(jié)合，避免非特異性擴(kuò)增；二是引物的長度和G-C含量，長度合適、G-C含量適中有助于引物與模板的結(jié)合。3.簡述熒光定量PCR中染料法和探針法的區(qū)別。答案：染料法是利用熒光染料結(jié)合雙鏈DNA發(fā)出熒光，操作簡單，但特異性稍差。探針法是通過特異性的探針與模板結(jié)合發(fā)出熒光，特異性高，但成本較高且設(shè)計較復(fù)雜。4.說出PCR實驗中防止污染的兩點主要措施。答案：一是嚴(yán)格分區(qū)操作，如試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)等；二是使用一次性耗材，避免交叉污染。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論如何優(yōu)化一個PCR反應(yīng)體系。答案：可以從多個方面優(yōu)化。首先優(yōu)化引物設(shè)計，提高特異性。其次調(diào)整反應(yīng)溫度，找到合適的變性、退火和延伸溫度。再者優(yōu)化各成分的濃度，如模板、引物、酶和dNTPs等。2.分析PCR技術(shù)在病原體檢測中的優(yōu)勢和局限性。答案：優(yōu)勢是特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速簡便，能檢測微量病原體。局限性在于可能存在假陽性、需要一定的儀器設(shè)備和技術(shù)人員，且不能區(qū)分活死病原體。3.闡述巢式PCR提高特異性的原理。答案：巢式PCR通過兩次PCR反應(yīng)，第一次PCR產(chǎn)物作為第二次的模板。第二次