pcr考試題庫及答案2025年

一、單項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的主要發(fā)明人是（）A.KaryMullisB.JamesWatsonC.FrancisCrickD.RosalindFranklin答案：A2.在PCR反應(yīng)中，哪種酶起關(guān)鍵作用（）A.解旋酶B.DNA聚合酶C.RNA聚合酶D.限制酶答案：B3.PCR反應(yīng)的變性溫度一般為（）A.50-60℃B.70-80℃C.90-95℃D.100-105℃答案：C4.以下哪種不是PCR反應(yīng)的基本成分（）A.模板DNAB.引物C.核糖體D.dNTPs答案：C5.PCR反應(yīng)中引物的作用是（）A.提供3'-OH末端啟動DNA合成B.解開雙鏈DNAC.連接DNA片段D.識別特定的基因序列答案：A6.一個標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)循環(huán)次數(shù)通常為（）A.10-15次B.20-30次C.40-50次D.60-70次答案：B7.在PCR產(chǎn)物的檢測中，常用的電泳方法是（）A.瓊脂糖凝膠電泳B.聚丙烯酰胺凝膠電泳C.淀粉凝膠電泳D.尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳答案：A8.對于長片段DNA的PCR擴增，以下哪種措施可能有幫助（）A.提高退火溫度B.延長延伸時間C.減少引物濃度D.增加循環(huán)次數(shù)答案：B9.如果PCR反應(yīng)沒有得到預(yù)期的產(chǎn)物，以下哪種原因不太可能（）A.引物設(shè)計錯誤B.模板DNA量過多C.酶失活D.反應(yīng)體系中有抑制劑答案：B10.在實時熒光定量PCR中，哪種熒光信號檢測方式是基于DNA雙鏈結(jié)合的原理（）A.SYBRGreen法B.TaqMan探針法C.分子信標(biāo)法D.熒光共振能量轉(zhuǎn)移法答案：A二、多項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域包括（）A.基因克隆B.遺傳病診斷C.法醫(yī)鑒定D.病毒檢測答案：ABCD2.影響PCR反應(yīng)特異性的因素有（）A.引物特異性B.退火溫度C.模板純度D.酶的種類答案：ABC3.以下哪些是PCR反應(yīng)體系優(yōu)化時需要考慮的參數(shù)（）A.Mg2+濃度B.引物濃度C.dNTP濃度D.模板量答案：ABCD4.在PCR產(chǎn)物的克隆過程中，可能用到的酶有（）A.限制性內(nèi)切酶B.T4DNA連接酶C.DNA聚合酶D.反轉(zhuǎn)錄酶答案：AB5.實時熒光定量PCR的優(yōu)點包括（）A.定量準(zhǔn)確B.靈敏度高C.可檢測低拷貝數(shù)基因D.不需要電泳檢測答案：ABCD6.對于PCR引物設(shè)計，以下哪些原則是正確的（）A.長度15-30bpB.G+C含量40%-60%C.避免引物自身二級結(jié)構(gòu)D.引物間避免互補答案：ABCD7.PCR反應(yīng)中可能出現(xiàn)的假陽性結(jié)果原因有（）A.引物二聚體形成B.污染C.非特異性擴增D.退火溫度過低答案：BC8.以下哪些是新型PCR技術(shù)（）A.數(shù)字PCRB.反向PCRC.巢式PCRD.不對稱PCR答案：ABCD9.在PCR反應(yīng)中，dNTP的作用包括（）A.提供合成DNA的原料B.參與DNA鏈的延伸C.調(diào)節(jié)反應(yīng)體系的pHD.穩(wěn)定酶的活性答案：AB10.以下關(guān)于PCR的描述正確的是（）A.可以在體外快速擴增DNA片段B.需要一對引物C.是一種酶促反應(yīng)D.反應(yīng)產(chǎn)物呈指數(shù)增長答案：ABCD三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)只能擴增雙鏈DNA。（）答案：錯誤2.引物的3'端可以進行修飾，不影響PCR反應(yīng)。（）答案：錯誤3.提高PCR反應(yīng)的退火溫度一定會提高特異性。（）答案：錯誤4.所有的DNA聚合酶都可以用于PCR反應(yīng)。（）答案：錯誤5.PCR產(chǎn)物的大小只取決于模板DNA的長度。（）答案：錯誤6.在實時熒光定量PCR中，內(nèi)參基因的作用是校正實驗誤差。（）答案：正確7.巢式PCR比普通PCR的特異性更高。（）答案：正確8.PCR反應(yīng)過程中不需要能量。（）答案：錯誤9.引物濃度越高，PCR反應(yīng)效果越好。（）答案：錯誤10.瓊脂糖凝膠電泳中，DNA分子向正極移動。（）答案：正確四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述PCR反應(yīng)的基本原理。答案：PCR反應(yīng)是一種體外擴增DNA片段的技術(shù)。以DNA為模板，在DNA聚合酶、引物、dNTPs等存在的條件下，經(jīng)過變性（使模板DNA雙鏈解開）、退火（引物與模板互補序列結(jié)合）、延伸（DNA聚合酶沿引物延伸合成新的DNA鏈）三個基本步驟的多次循環(huán)，使目的DNA片段得到指數(shù)級的擴增。2.說明PCR引物設(shè)計的基本要求。答案：引物長度一般為15-30bp；G+C含量在40%-60%；避免引物自身二級結(jié)構(gòu)；引物間避免互補；引物3'端要與模板嚴(yán)格互補等。3.簡述實時熒光定量PCR中相對定量的原理。答案：相對定量是通過檢測目的基因與內(nèi)參基因的熒光信號比值來確定目的基因的相對表達量。先在不同樣本中同時檢測目的基因和內(nèi)參基因的Ct值，然后根據(jù)公式計算相對表達量，以校正樣本間的差異，如2-ΔΔCt法。4.說出至少三種PCR反應(yīng)中可能出現(xiàn)的異常情況及解決方法。答案：異常情況：無擴增產(chǎn)物，可能是引物設(shè)計錯誤或酶失活，解決方法是重新設(shè)計引物或更換酶；非特異性擴增，可能是退火溫度過低，可提高退火溫度；假陽性，可能是污染導(dǎo)致，要注意防止污染，更換試劑或設(shè)備。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論PCR技術(shù)在新冠疫情防控中的作用。答案：PCR技術(shù)在新冠疫情防控中起關(guān)鍵作用?？捎糜跈z測新冠病毒核酸，快速診斷患者，對疑似病例進行篩查。同時在病毒溯源、監(jiān)測疫情傳播等方面也有重要意義。2.如何提高PCR反應(yīng)的特異性？答案：可提高退火溫度、優(yōu)化引物特異性、提高模板純度等。這些措施有助于引物準(zhǔn)確結(jié)合到目標(biāo)序列，減少非特異性結(jié)合。3.比較普通PCR和實時熒光定量PCR的異同點。答案：