【高考生物】2026步步高大一輪復(fù)習(xí)講義66練第十單元生物技術(shù)與工程第十單元第十單元課時(shí)練54基因工程的基本工具和基本操作程序(含DNA的粗提取)選擇題1～2題，每小題7分，3～6題，每小題8分，共46分。一、選擇題1．(2024·湖南，5)某同學(xué)將質(zhì)粒DNA進(jìn)行限制酶酶切時(shí)，發(fā)現(xiàn)DNA完全沒(méi)有被酶切，分析可能的原因并提出解決方法。下列敘述錯(cuò)誤的是()A．限制酶失活，更換新的限制酶B．酶切條件不合適，調(diào)整反應(yīng)條件如溫度和酶的用量等C．質(zhì)粒DNA突變導(dǎo)致酶識(shí)別位點(diǎn)缺失，更換正常質(zhì)粒DNAD．酶切位點(diǎn)被甲基化修飾，換用對(duì)DNA甲基化不敏感的限制酶2．(2024·石家莊調(diào)研)圖1為某種質(zhì)粒簡(jiǎn)圖，圖2表示某外源DNA上的目的基因，小箭頭所指分別為限制酶EcoRⅠ、BamHⅠ、HindⅢ的酶切位點(diǎn)。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A．在基因工程中若只用一種限制酶完成對(duì)質(zhì)粒和外源DNA的切割，則可選EcoRⅠB．如果將一個(gè)外源DNA分子和一個(gè)質(zhì)粒分別用EcoRⅠ酶切后，再用DNA連接酶連接，形成一個(gè)含有目的基因的重組DNA，此重組DNA中EcoRⅠ切割位點(diǎn)有1個(gè)C．為了防止質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化，酶切時(shí)可使用BamHⅠ和HindⅢ兩種限制酶同時(shí)處理質(zhì)粒和目的基因D．一個(gè)如圖1所示的質(zhì)粒分子經(jīng)EcoRⅠ切割后，含有2個(gè)游離的磷酸基團(tuán)3．(2022·山東，13)關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是()A．過(guò)濾液沉淀過(guò)程在4℃冰箱中進(jìn)行是為了防止DNA降解B．離心研磨液是為了加速DNA的沉淀C．在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑呈現(xiàn)藍(lán)色D．粗提取的DNA中可能含有蛋白質(zhì)4．(2023·廣東，11)“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)的基本過(guò)程：裂解→分離→沉淀→鑒定。下列敘述錯(cuò)誤的是()A．裂解：使細(xì)胞破裂釋放出DNA等物質(zhì)B．分離：可去除混合物中的多糖、蛋白質(zhì)等C．沉淀：可反復(fù)多次以提高DNA的純度D．鑒定：加入二苯胺試劑后即呈現(xiàn)藍(lán)色5．(2025·黃石模擬)如圖所示，研究人員將雪花蓮凝集素基因(GNA)和尾穗莧凝集素基因(ACA)與載體(pBI121)結(jié)合，然后導(dǎo)入棉花細(xì)胞。下列操作不符合實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖?)A．用PCR技術(shù)可檢測(cè)GNA和ACA基因是否導(dǎo)入棉花細(xì)胞中B．將棉花細(xì)胞接種在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上可篩選出轉(zhuǎn)基因細(xì)胞C．用限制酶BsaBⅠ和DNA連接酶處理兩種基因可獲得GNA—ACA融合基因D．與只用KpnⅠ相比，KpnⅠ和XhoⅠ處理融合基因和載體可保證基因轉(zhuǎn)錄方向正確6．(2025·十堰調(diào)研)當(dāng)蘋(píng)果削好皮或切開(kāi)后放置一會(huì)兒，切口面的顏色就會(huì)由淺變深，最后變成深褐色。發(fā)生色變反應(yīng)主要是因?yàn)檫@些植物體內(nèi)存在著酚類化合物。酚類化合物易被氧化成醌類化合物，即發(fā)生變色反應(yīng)變成黃色，隨著反應(yīng)的量的增加顏色就逐漸加深，最后變成深褐色。氧化反應(yīng)的發(fā)生是由于與空氣中的氧接觸和細(xì)胞中酚氧化酶的釋放。如圖是培育抗褐變的轉(zhuǎn)基因蘋(píng)果的過(guò)程，下列敘述不正確的是()A．要想獲得抗褐變的轉(zhuǎn)基因蘋(píng)果，目的基因可選擇抑制酚氧化酶表達(dá)的基因B．實(shí)施步驟①是需要限制性內(nèi)切核酸酶和DNA聚合酶的參與C．步驟④階段使用的MS培養(yǎng)基中要加入植物激素和卡那霉素等物質(zhì)D．為了評(píng)估目的基因抑制蘋(píng)果褐變的效果，可與導(dǎo)入含pBI121質(zhì)粒的植株作對(duì)照二、非選擇題7．(16分)(2024·重慶，19)大豆是重要的糧油作物，提高大豆產(chǎn)量是我國(guó)農(nóng)業(yè)領(lǐng)域的重要任務(wù)。我國(guó)研究人員發(fā)現(xiàn)，基因S在大豆品種DN(種子較大)中的表達(dá)量高于品種TL(種子較小)，然后克隆了該基因(兩品種中基因S序列無(wú)差異)及其上游的啟動(dòng)子序列，并開(kāi)展相關(guān)研究。(1)基因S啟動(dòng)子的基本組成單位是____________。(2)通過(guò)基因工程方法，將DN克隆的“啟動(dòng)子D＋基因S”序列導(dǎo)入無(wú)基因S的優(yōu)質(zhì)大豆品種YZ。根據(jù)題圖所示信息(不考慮未標(biāo)明序列)判斷構(gòu)建重組表達(dá)載體時(shí)，為保證目標(biāo)序列的完整性，不宜使用的限制酶是____________；此外，不宜同時(shí)選用酶SpeⅠ和XbaⅠ，原因是______________________________________________________________________。(3)為驗(yàn)證“啟動(dòng)子D＋基因S”是否連接在表達(dá)載體上，可用限制酶對(duì)重組表達(dá)載體酶切后進(jìn)行電泳。電泳時(shí)，對(duì)照樣品除指示分子大小的標(biāo)準(zhǔn)參照物外，還應(yīng)有________________________________________________________________________。經(jīng)驗(yàn)證的重組表達(dá)載體需轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌，檢測(cè)轉(zhuǎn)入是否成功的技術(shù)是______________。(4)用檢測(cè)后的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化品種YZ所得再生植株YZ－1的種子變大。同時(shí)將從TL克隆的“啟動(dòng)子T＋基因S”序列成功導(dǎo)入YZ，所得再生植株YZ－2的種子也變大，但小于YZ－1。綜合分析，大豆品種DN較TL種子大的原因是___________________________________________________________________________________________________________。8．(20分)(2024·貴州，21)研究者用以蔗糖為唯一碳源的液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)真菌A的野生型(含NV基因)、突變體(NV基因突變)和轉(zhuǎn)基因菌株(轉(zhuǎn)入NV基因)，檢測(cè)三種菌株NV酶的生成與培養(yǎng)液中的葡萄糖含量，結(jié)果如表所示(表中“＋”表示有，“－”表示無(wú))。檢測(cè)用菌株蔗糖NV酶葡萄糖(培養(yǎng)液中)野生型＋＋＋野生型－－－突變體＋－－轉(zhuǎn)基因菌株＋＋＋回答下列問(wèn)題：(1)據(jù)表可推測(cè)__________誘導(dǎo)了NV基因表達(dá)。NV酶的作用是____________________。檢測(cè)NV酶活性時(shí)，需測(cè)定的指標(biāo)是_______________________________________________________________________________________________________________(答出1點(diǎn)即可)。(2)表中突變體由T－DNA隨機(jī)插入野生型菌株基因組DNA篩選獲得。從野生型與突變體中分別提取基因組DNA作為模板，用與__________(填“T－DNA”或“NV基因”)配對(duì)的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。若突變體擴(kuò)增片段長(zhǎng)度__________(填“>”“＝”或“<”)野生型擴(kuò)增片段長(zhǎng)度，則表明突變體構(gòu)建成功，從基因序列分析其原因是______________________________________________________________________________________________________。(3)為進(jìn)一步驗(yàn)證NV基因的功能，表中的轉(zhuǎn)基因菌株是將NV基因?qū)隷_________細(xì)胞獲得的。在構(gòu)建NV基因表達(dá)載體時(shí)，需要添加新的標(biāo)記基因，原因是_______________________________________________________________________________________________。9．(18分)(2024·衡水模擬)研究人員從分解纖維素的細(xì)菌(A菌)中提取出一種纖維素酶基因(CBHⅡ)并進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后與高效表達(dá)載體pUT質(zhì)粒(圖1)連接構(gòu)建成重組質(zhì)粒并導(dǎo)入A菌，從而獲得分解纖維素能力更強(qiáng)的工程菌(B菌)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：幾種限制酶識(shí)別序列及酶切位點(diǎn)限制酶識(shí)別序列及酶切位點(diǎn)BglⅡ5′－A↓GATCT－3′BstEⅡ5′－G↓GTNACC－3′(N為任意堿基)SacⅠ5′－GAGCT↓C－3′MspⅠ5′－C↓CGG－3′BamHⅠ5′－G↓GATCC－3′(1)構(gòu)建成重組質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)選擇限制酶__________________對(duì)pUT質(zhì)粒進(jìn)行酶切，經(jīng)酶切后形成了兩個(gè)DNA片段(X和Y)，X兩端的黏性末端分別為－CTAG和－CAATG，則Y兩端的黏性末端分別為－CTAG和______________。(2)CBHⅡ基因中無(wú)上述限制酶的酶切位點(diǎn)，兩端需添加相關(guān)酶切位點(diǎn)才能在酶切后與pUT質(zhì)粒連接，PCR擴(kuò)增過(guò)程中，最早經(jīng)過(guò)________輪循環(huán)后，便可獲得兩端均攜帶限制酶識(shí)別序列的所需雙鏈目的基因。PCR的產(chǎn)物一般通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳來(lái)鑒定。為了能在波長(zhǎng)為300nm紫外燈下檢測(cè)出DNA分子，需要在瓊脂糖溶液中加入適量的____________。(3)為鑒定重組質(zhì)粒是否構(gòu)建成功以及是否成功導(dǎo)入A菌，將其接種在含抗生素________(填“M”或“N”)的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，將3個(gè)不同菌落擴(kuò)大培養(yǎng)后提取質(zhì)粒分別進(jìn)行雙酶切并進(jìn)行電泳，結(jié)果如圖3所示(片段過(guò)小時(shí)檢測(cè)不到條帶)。據(jù)圖分析，菌落________中成功導(dǎo)入了重組質(zhì)粒。(4)為檢測(cè)B菌的纖維素分解能力，將含有20%纖維素的培養(yǎng)基均分為三組，進(jìn)行不同處理后，在相同條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，測(cè)定培養(yǎng)基中纖維素含量，結(jié)果如圖4所示，對(duì)照組2的處理為接種________，說(shuō)明_____________________________________________________________________________________________________________________________________。答案精析1．B[限制酶失活會(huì)使DNA完全不被酶切，此時(shí)應(yīng)更換新的限制酶，A正確；在酶切條件不合適時(shí)，可能會(huì)出現(xiàn)DNA完全沒(méi)有被酶切的情況，需要調(diào)整反應(yīng)條件如溫度、pH等，但調(diào)整酶的用量沒(méi)有作用，B錯(cuò)誤；質(zhì)粒DNA突變可能會(huì)導(dǎo)致限制酶識(shí)別位點(diǎn)缺失，進(jìn)而造成限制酶無(wú)法進(jìn)行切割，此時(shí)應(yīng)更換為正常質(zhì)粒DNA，C正確；質(zhì)粒DNA上酶切位點(diǎn)被甲基化修飾，會(huì)導(dǎo)致對(duì)DNA甲基化敏感的限制酶無(wú)法進(jìn)行酶切，此時(shí)應(yīng)換用對(duì)DNA甲基化不敏感的限制酶，D正確。]2．B[圖中目的基因兩側(cè)都有EcoRⅠ酶切位點(diǎn)，質(zhì)粒上也存在EcoRⅠ酶切位點(diǎn)，若只用一種限制酶完成對(duì)質(zhì)粒和外源DNA的切割，可選EcoRⅠ，A正確；EcoRⅠ切割外源DNA分子和質(zhì)粒，再用DNA連接酶連接，形成的含目的基因的重組DNA分子中，EcoRⅠ酶切割位點(diǎn)有2個(gè)，B錯(cuò)誤；為了防止質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化，酶切時(shí)可使用BamHⅠ和HindⅢ兩種限制酶同時(shí)處理質(zhì)粒和目的基因，C正確；該質(zhì)粒分子經(jīng)EcoRⅠ切割后，產(chǎn)生兩個(gè)黏性末端，含有2個(gè)游離的磷酸基團(tuán)，D正確。]3．B[離心研磨液是為了使細(xì)胞碎片沉淀，B錯(cuò)誤；在沸水浴條件下，DNA遇二苯胺試劑呈現(xiàn)藍(lán)色，C正確。]4．D[裂解是使細(xì)胞破裂釋放出DNA等物質(zhì)，針對(duì)不同的實(shí)驗(yàn)材料，可選擇不同的方法破壞細(xì)胞，如植物細(xì)胞可選擇研磨的方法，而動(dòng)物細(xì)胞可選擇吸水漲破的方法，A正確；DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，能溶于2mol/L的NaCl溶液，將溶液過(guò)濾，即可將混合物中的多糖、蛋白質(zhì)等與DNA分離，B正確；DNA不溶于酒精，而某些蛋白質(zhì)溶于酒精，可以反復(fù)多次用酒精沉淀出DNA，提高DNA的純度，C正確；將DNA溶于NaCl溶液中，加入二苯胺試劑，沸水浴加熱5分鐘，待冷卻后，溶液能呈現(xiàn)藍(lán)色，D錯(cuò)誤。]5．B[根據(jù)GNA－ACA融合基因的兩端序列設(shè)計(jì)合適的引物，可以利用PCR技術(shù)檢測(cè)GNA和ACA基因是否導(dǎo)入棉花細(xì)胞的染色體DNA上，A正確；由于重組質(zhì)粒含有卡那霉素抗性基因，故將棉花細(xì)胞接種在含卡那霉素的培養(yǎng)基上可篩選出轉(zhuǎn)基因細(xì)胞，B錯(cuò)誤；GNA和ACA基因均有BsaBⅠ酶切位點(diǎn)，所以用限制酶BsaBⅠ和DNA連接酶處理兩種基因可獲得GNA－ACA融合基因，C正確；圖中質(zhì)粒與GNA－ACA融合基因上都含有KpnⅠ和XhoⅠ的酶切位點(diǎn)，與只用KpnⅠ相比，KpnⅠ和XhoⅠ處理融合基因和載體可保證基因轉(zhuǎn)錄方向正確，D正確。]6．B[褐變是細(xì)胞中的酚氧化酶催化酚類化合物變成黃色所致，故要想獲得抗褐變的轉(zhuǎn)基因蘋(píng)果，可選擇抑制酚氧化酶表達(dá)的基因作為目的基因，A正確；步驟①是目的基因表達(dá)載體的構(gòu)建，該過(guò)程中需要限制性內(nèi)切核酸酶和DNA連接酶的參與，B錯(cuò)誤；步驟④是脫分化階段，該階段使用的MS培養(yǎng)基中要加入植物激素(影響細(xì)胞的發(fā)育方向)和卡那霉素(將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái))，C正確；為了評(píng)估目的基因抑制蘋(píng)果褐變的效果，可與導(dǎo)入不含目的基因質(zhì)粒的植株作對(duì)照，本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的目的是排除質(zhì)粒本身對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，同時(shí)也能檢測(cè)導(dǎo)入目的基因的效果，D正確。]7．(1)脫氧核糖核苷酸(脫氧核苷酸)(2)EcoRⅠ酶切后形成的片段黏性末端相同，易自我環(huán)化；不能保證目標(biāo)片段與載體定向鏈接(反向鏈接)(3)酶切后的空載體片段，啟動(dòng)子D＋基因S片段PCR(4)品種DN的基因S上游啟動(dòng)子效應(yīng)比TL強(qiáng)，使得基因S表達(dá)量更高，種子更大解析(1)啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，用于驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄，是一段有特殊序列結(jié)構(gòu)的DNA片段，其基本組成單位是四種脫氧核糖核苷酸。(2)根據(jù)圖示信息可知，“啟動(dòng)子D＋基因S”的DNA序列上存在EcoRⅠ的識(shí)別序列，若使用限制酶EcoRⅠ，會(huì)使目的基因序列被破壞；根據(jù)圖中限制酶的識(shí)別序列可知，酶SpeⅠ和XbaⅠ切割產(chǎn)生的黏性末端相同，若用這兩種限制酶切割，形成的DNA片段在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，容易出現(xiàn)自我環(huán)化，以及無(wú)法保證目的基因片段與載體片段單向連接，影響目的基因在受體細(xì)胞中的表達(dá)。(3)DNA電泳可以分離不同大小的DNA片段，用限制酶對(duì)重組表達(dá)載體酶切后的產(chǎn)物不僅有“啟動(dòng)子D＋基因S”片段，還有酶切后的空載體片段，因此電泳時(shí)，對(duì)照樣品除指示分子大小的標(biāo)準(zhǔn)參照物外，還應(yīng)有酶切后的空載體片段和“啟動(dòng)子D＋基因S”片段；在分子水平上檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)入成功可通過(guò)PCR等技術(shù)檢測(cè)受體細(xì)胞的染色體DNA上是否插入目的基因或目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA。(4)根據(jù)(4)題目信息可知，再生植株YZ－1導(dǎo)入的目的基因?yàn)槿∽云贩NDN的“啟動(dòng)子D＋基因S”序列，再生植株YZ－2導(dǎo)入的目的基因?yàn)槿∽云贩NTL的“啟動(dòng)子T＋基因S”序列，結(jié)合題干信息“兩品種中基因S序列無(wú)差異”可推測(cè)：品種DN的基因S上游的啟動(dòng)子D的效應(yīng)強(qiáng)于品種TL的啟動(dòng)子T，啟動(dòng)子D使基因S表達(dá)量更高，因而種子更大。8．(1)蔗糖參與蔗糖分解代謝，將蔗糖分解成葡萄糖單位時(shí)間內(nèi)葡萄糖的生成量(或蔗糖的減少量等)(2)NV基因＞突變體NV基因中插入了T－DNA序列，使基因中堿基對(duì)增加而發(fā)生突變(3)突變體便于篩選出成功導(dǎo)入NV基因的細(xì)胞解析(1)根據(jù)表格可知，野生型菌株在加入蔗糖的培養(yǎng)基中會(huì)合成NV酶，不加蔗糖不會(huì)合成NV酶，推測(cè)蔗糖誘導(dǎo)了NV基因表達(dá)。分析表格可知，有NV酶時(shí)，菌株就能將蔗糖分解成葡萄糖，因此NV酶可能參與蔗糖的分解代謝過(guò)程。檢測(cè)NV酶活性時(shí)，需測(cè)定單位時(shí)間內(nèi)葡萄糖的生成量或蔗糖的減少量等。(2)從題目中可知，突變體是由T－DNA隨機(jī)插入野生型菌株基因組DNA篩選獲得的。在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，使用的引物需要與特定的DNA序列互補(bǔ)配對(duì)，才能啟動(dòng)DNA的擴(kuò)增。野生型菌株的基因組DNA中沒(méi)有T－DNA的插入，所以只有用與NV基因配對(duì)的引物進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)，才可以擴(kuò)增出兩種菌株的基因片段。突變體中的NV基因中插入了T－DNA序列，導(dǎo)致其堿基對(duì)增加，因此若突變體擴(kuò)增片段長(zhǎng)度＞野生型擴(kuò)增片段長(zhǎng)度，則表明突變體構(gòu)建成功。(3)為進(jìn)一步驗(yàn)證NV基因的功能，表中的轉(zhuǎn)基因菌株是將NV基因?qū)胪蛔凅w細(xì)胞獲得的。突變體由于NV基因發(fā)生突變，無(wú)法正常表達(dá)NV酶，導(dǎo)致相關(guān)生理功能缺失或異常。將正常的NV基因?qū)胪蛔凅w細(xì)胞，如果能夠恢復(fù)原本在突變體中缺失或異常的生理功能，就可以有力地證明NV基因確實(shí)具有特定的功能。在構(gòu)建NV基因表達(dá)載體時(shí)，需要添加新的標(biāo)記基因，便于篩選出成功導(dǎo)入NV基因的細(xì)胞。9．(1)BglⅡ、BstEⅡ—CATTG(2)3核酸染料(3)N2、3(4)A菌B菌分解纖維素能力比A菌更強(qiáng)解析(1)需要將目的基因插入高效啟動(dòng)子之后，至少保留一個(gè)標(biāo)記基因M或N，故選擇BglⅡ、BstEⅡ?qū)|(zhì)粒進(jìn)行酶切。根據(jù)表格中BstEⅡ識(shí)別序列和切割位點(diǎn)，X端的黏性末端有—CAATG，則Y端與之互補(bǔ)為—CATTG。(2)PCR擴(kuò)增過(guò)程中，第一、二輪循環(huán)合成的子鏈長(zhǎng)度均不同，根據(jù)半保留復(fù)制特點(diǎn)可知，前兩輪循環(huán)產(chǎn)生的四個(gè)DNA分子的兩條鏈均不等長(zhǎng)，第三輪循環(huán)產(chǎn)生的DNA分子存在等長(zhǎng)的兩條核苷酸鏈。因此PCR擴(kuò)增過(guò)程中，最早經(jīng)過(guò)3輪循環(huán)后，便可獲得兩端均攜帶限制酶識(shí)別序列的所需雙鏈目的基因。為了便于對(duì)分離后的DNA片段進(jìn)行檢測(cè)，在凝膠制備中加入核酸染料，能夠與DNA分子結(jié)合，凝膠中的DNA分子通過(guò)染色，可以在波長(zhǎng)為300nm的紫外燈下被檢測(cè)出來(lái)。(3)所選限制酶破壞了抗生素M抗性基因，但保留了抗生素N抗性基因，因此為鑒定重組質(zhì)粒是否構(gòu)建成功，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入A菌，并將其接種在含抗生素N的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。圖3為瓊脂糖凝膠電泳圖譜，由CBHⅡ基因大小可知，菌落2和3擴(kuò)增出了目的基因，說(shuō)明成功導(dǎo)入了重組質(zhì)粒。(4)對(duì)照組1為空白對(duì)照，對(duì)照組2應(yīng)為接種A菌，由圖4可知，B菌分解纖維素能力比A菌更強(qiáng)。第十單元課時(shí)練56生物技術(shù)的安全性與倫理問(wèn)題選擇題1～12題，每小題6分，13～14題，每小題7分，共86分。一、選擇題1．近期，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部根據(jù)國(guó)家生物育種產(chǎn)業(yè)化工作部署及有關(guān)法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，審定通過(guò)了部分轉(zhuǎn)基因玉米、大豆品種，并向26家企業(yè)發(fā)放了轉(zhuǎn)基因玉米、大豆種子生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)許可證。同時(shí)明確，這些品種實(shí)際種植區(qū)域還要符合國(guó)家生物育種產(chǎn)業(yè)化有關(guān)安排。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A．轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品需要經(jīng)過(guò)一系列的安全性評(píng)價(jià)，符合相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)后才能推廣種植B．轉(zhuǎn)基因食品可能是轉(zhuǎn)基因生物本身或其加工產(chǎn)品C．轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物產(chǎn)品一定可以增進(jìn)人類健康D．使用轉(zhuǎn)基因大豆加工成的食用油一定要進(jìn)行標(biāo)識(shí)2．(2025·天門模擬)科學(xué)家們利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育出大批具有抗蟲(chóng)、抗病、抗除草劑和耐儲(chǔ)藏等新性狀的作物。下列有關(guān)說(shuō)法錯(cuò)誤的是()A．若轉(zhuǎn)基因植物的外源基因來(lái)源于自然界，則不存在安全性問(wèn)題B．隨著除草劑的大量應(yīng)用，農(nóng)田雜草對(duì)除草劑抗性逐漸增強(qiáng)C．在抗除草劑轉(zhuǎn)基因作物農(nóng)田中使用除草劑仍會(huì)影響農(nóng)產(chǎn)品的食用安全性D．轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)農(nóng)作物可減少殺蟲(chóng)劑的使用，提高產(chǎn)品的品質(zhì)3．(2024·廣州聯(lián)考)科學(xué)家將外源抗蟲(chóng)基因(Bt抗蟲(chóng)蛋白基因)轉(zhuǎn)入某茄科植物細(xì)胞中，并整合到該植物的線粒體DNA上，獲得了具有抗蟲(chóng)性狀的轉(zhuǎn)基因植物。下列敘述錯(cuò)誤的是()A．Bt抗蟲(chóng)蛋白在線粒體中的成功合成與密碼子的通用性有關(guān)B．葉肉細(xì)胞內(nèi)有多個(gè)線粒體，這有利于增加該轉(zhuǎn)基因植物的抗蟲(chóng)性C．將該轉(zhuǎn)基因植物與同種非轉(zhuǎn)基因植物進(jìn)行正、反交，所得子代均有抗蟲(chóng)性D．該技術(shù)能有效避免或減少外源基因通過(guò)花粉向其他植物的轉(zhuǎn)移4．(2024·河北正定中學(xué)質(zhì)檢)轉(zhuǎn)基因食品存在“是否安全”的爭(zhēng)議，有人認(rèn)為轉(zhuǎn)基因食品是有害的，比如抗“草甘膦”(除草劑)轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物的種植，使噴灑除草劑的人患癌癥。請(qǐng)用已學(xué)知識(shí)判斷，下列說(shuō)法正確的是()A．自古就有“吃啥補(bǔ)啥”的說(shuō)法，所以吃了轉(zhuǎn)基因食品，則其中的基因會(huì)整合到人的基因組中B.嚴(yán)格管理好目的基因和控制好目的基因的表達(dá)部位，則轉(zhuǎn)基因食品的安全性可以得到保障C．若食用轉(zhuǎn)基因大米，就一定會(huì)對(duì)人的健康造成危害D．抗除草劑植物生產(chǎn)的食品會(huì)導(dǎo)致人患癌癥5．(2023·浙江1月選考，2)以哺乳動(dòng)物為研究對(duì)象的生物技術(shù)已獲得了長(zhǎng)足的進(jìn)步。對(duì)生物技術(shù)應(yīng)用于人類，在安全與倫理方面有不同的觀點(diǎn)，下列敘述正確的是()A．試管嬰兒技術(shù)應(yīng)全面禁止B．治療性克隆不需要監(jiān)控和審查C．生殖性克隆不存在倫理道德方面的風(fēng)險(xiǎn)D．我國(guó)不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實(shí)驗(yàn)6．(2025·武漢調(diào)研)生殖性克隆是指通過(guò)克隆技術(shù)產(chǎn)生獨(dú)立生存的新個(gè)體。治療性克隆是指利用克隆技術(shù)產(chǎn)生特定的細(xì)胞、組織和器官，用它們修復(fù)或替代受損的細(xì)胞、組織和器官，從而達(dá)到治療疾病的目的。下列敘述錯(cuò)誤的是()A．生殖性克隆需將細(xì)胞核移植到去核卵母細(xì)胞中B．生殖性克隆需借助早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)C．治療性克隆需借助胚胎移植技術(shù)D．治療性克隆需要的胚胎干細(xì)胞可來(lái)自囊胚7．(2024·衡陽(yáng)一模)為有效防范由各類生物因子和生物技術(shù)誤用、濫用等引起的生物性危害，生物安全已納入國(guó)家安全體系。下列敘述正確的是()A．干細(xì)胞的研究可用于治療很多疾病，有不涉及倫理和道德問(wèn)題等優(yōu)點(diǎn)B．克隆技術(shù)會(huì)導(dǎo)致社會(huì)倫理問(wèn)題，治療性克隆技術(shù)的應(yīng)用也應(yīng)禁止C．轉(zhuǎn)入葉綠體中的基因不會(huì)隨花粉傳遞給子代，避免造成基因污染D．試管嬰兒技術(shù)要對(duì)胚胎進(jìn)行遺傳學(xué)診斷，不能用于解決不孕不育問(wèn)題8．(2025·鹽城調(diào)研)下列有關(guān)生物技術(shù)的安全性與倫理問(wèn)題的敘述，錯(cuò)誤的是()A．人被帶有生物戰(zhàn)劑的昆蟲(chóng)叮咬后，會(huì)通過(guò)血液傳染而患病B．我國(guó)政府的態(tài)度是禁止生殖性克隆人，但不反對(duì)治療性克隆C．我國(guó)對(duì)農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物實(shí)行了標(biāo)識(shí)制度D．設(shè)計(jì)試管嬰兒可確定嬰兒性別，通過(guò)此項(xiàng)技術(shù)可保證人口正常的性別比例9．(2024·張掖模擬)某生物實(shí)驗(yàn)室感染病毒的小白鼠逃出實(shí)驗(yàn)室，使得生物技術(shù)的安全性問(wèn)題再次引發(fā)關(guān)注。下列敘述錯(cuò)誤的是()A．對(duì)實(shí)驗(yàn)生物應(yīng)該進(jìn)行嚴(yán)格閉環(huán)管理B．通過(guò)治療性克隆，可以解決人體移植器官短缺問(wèn)題C．生物武器種類多樣，包括病毒類、毒品類、致病菌類等D．生物安全防控應(yīng)消除生物武器威脅、防止生物武器及其技術(shù)和設(shè)備的擴(kuò)散10．(2024·湖北孝感中學(xué)質(zhì)檢)炭疽桿菌造成感染者死亡率極高的主要原因之一是它能產(chǎn)生兩種成分為蛋白質(zhì)的內(nèi)毒素。有科學(xué)家將該菌的大型環(huán)狀DNA分子破壞，該菌仍能產(chǎn)生內(nèi)毒素。據(jù)此判斷，下列對(duì)炭疽桿菌的敘述，錯(cuò)誤的是()A．炭疽桿菌合成的內(nèi)毒素屬于代謝產(chǎn)物B．控制內(nèi)毒素合成的基因位于炭疽桿菌的擬核中C．若將炭疽桿菌用于軍事或恐怖活動(dòng)，則屬于生物武器D．將蠟樣芽孢桿菌改造成像炭疽桿菌一樣的致病菌需要通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)11．(2024·河北正定調(diào)研)下列關(guān)于生物武器的敘述，錯(cuò)誤是()A．生物武器是造價(jià)昂貴，卻具有大規(guī)模殺傷性的武器B．轉(zhuǎn)基因技術(shù)的出現(xiàn)，使得利用這一技術(shù)制造各種新型致病菌成為可能C．生物武器可以直接或者通過(guò)食物、生活必需品和帶菌昆蟲(chóng)等散布D．生物武器一旦使用，將對(duì)軍隊(duì)和平民造成大規(guī)模的殺傷后果12．(2024·北京東城一模)生物安全是指與生物有關(guān)的各種因素對(duì)社會(huì)、經(jīng)濟(jì)、人類健康以及生態(tài)環(huán)境所產(chǎn)生的危害或潛在風(fēng)險(xiǎn)。下列敘述與我國(guó)政府相關(guān)法規(guī)或主張不符的是()A．禁止人的生殖性克隆和治療性克隆B．禁止非醫(yī)學(xué)需要的胎兒性別鑒定C．銷售轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品應(yīng)有明確標(biāo)注D．全面禁止和徹底銷毀生物武器13．(2024·哈爾濱模擬)人們利用生物技術(shù)對(duì)生物體進(jìn)行不同層次的設(shè)計(jì)、控制、改造或模擬，產(chǎn)生巨大生產(chǎn)力的同時(shí)，也帶來(lái)了多種涉及安全和倫理的問(wèn)題。下列相關(guān)敘述正確的是()A．如果確實(shí)有證據(jù)表明某種轉(zhuǎn)基因食品有害，就應(yīng)該禁止轉(zhuǎn)基因技術(shù)的應(yīng)用B．利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)制造的新型致病菌具有極大的危害性，其原因之一是人體不會(huì)對(duì)它們產(chǎn)生免疫反應(yīng)C．“設(shè)計(jì)試管嬰兒”移植前可對(duì)胚胎進(jìn)行遺傳學(xué)診斷和基因改造D．要在清晰地了解轉(zhuǎn)基因技術(shù)的原理和操作規(guī)程的基礎(chǔ)上來(lái)討論轉(zhuǎn)基因技術(shù)的相關(guān)問(wèn)題14．(2024·白山檢測(cè))生物技術(shù)是以現(xiàn)代生命科學(xué)理論為基礎(chǔ)，在個(gè)體、細(xì)胞及分子水平上研究及制造產(chǎn)品或改造動(dòng)物、植物、微生物等，并使其具有所期望的品質(zhì)和特性。下列敘述錯(cuò)誤的是()A．干細(xì)胞培養(yǎng)在臨床醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域前景廣泛，但也可能面臨安全性問(wèn)題B．蛋白質(zhì)工程是在基因操作水平上改造或創(chuàng)造新的蛋白質(zhì)C．治療性克隆的研究與應(yīng)用必須受到相應(yīng)法律法規(guī)的規(guī)范限制D．生物武器主要影響人畜健康，對(duì)植物的影響不大二、非選擇題15．(14分)(2024·湖南衡陽(yáng)八中模擬)轉(zhuǎn)基因技術(shù)可以改善作物品質(zhì)、提高作物產(chǎn)量，減少農(nóng)藥使用量，在解決糧食需求和保障農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展等方面發(fā)揮重要作用。但是轉(zhuǎn)基因技術(shù)存在種子公司轉(zhuǎn)基因技術(shù)的專利保護(hù)問(wèn)題，還存在外源基因通過(guò)花粉和種子等途徑在種群之間漂移擴(kuò)散，帶來(lái)生態(tài)安全隱患以及人們對(duì)轉(zhuǎn)基因食品安全性擔(dān)憂的問(wèn)題?？茖W(xué)家采用葉綠體轉(zhuǎn)基因、“終結(jié)者”種子、“外源基因清除”技術(shù)試圖解決上述問(wèn)題?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)轉(zhuǎn)基因技術(shù)能按照人們的愿望，賦予生物新的______________，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。從技術(shù)操作層面看，轉(zhuǎn)基因技術(shù)是在DNA分子水平上進(jìn)行的設(shè)計(jì)和施工，其核心步驟是____________________________________________________。(2)“終結(jié)者”種子技術(shù)是通過(guò)植入“終結(jié)者基因”，阻滯種子胚胎后期發(fā)育，最后得到成熟但不育的種子?！敖K結(jié)者”種子技術(shù)在一定程度上解決了轉(zhuǎn)基因技術(shù)存在的____________________________________________________________________問(wèn)題，但危害到了農(nóng)民自行留種的權(quán)利，也不能消除人們對(duì)轉(zhuǎn)基因食品安全性的擔(dān)憂。(3)(8分)“外源基因清除”技術(shù)將“外源基因清除”調(diào)控組件與基因表達(dá)載體的必備組件重組后構(gòu)建出新的基因表達(dá)載體，轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞中表達(dá)，待外源基因完成相應(yīng)的功能后，“外源基因清除”調(diào)控組件將全部外源基因從花粉、種子和果實(shí)等特定器官中徹底清除?！巴庠椿蚯宄闭{(diào)控組件由特定器官特異啟動(dòng)子、重組酶(FLP)基因和融合識(shí)別位點(diǎn)(LF)構(gòu)成，LF是利用噬菌體的Cre/LoxP系統(tǒng)和酵母的FLP/FRT系統(tǒng)創(chuàng)造出的融合識(shí)別位點(diǎn)。FLP基因在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間和空間表達(dá)后，重組酶(FLP)可識(shí)別融合識(shí)別位點(diǎn)(LF)并在L與F之間完成切割，從而將兩個(gè)融合識(shí)別位點(diǎn)之間的序列在特定時(shí)期從特定植物器官的細(xì)胞基因組中全部清除。其技術(shù)原理如圖所示：圖中基因表達(dá)載體的必備組件包括______________________________。通過(guò)插入不同的__________________，以決定在不同器官中表達(dá)重組酶，從而將相應(yīng)器官中的某些基因序列從基因組中徹底清除，按需獲得不含外源基因的種子、果實(shí)等。請(qǐng)?jiān)趫D示方框中填寫(xiě)重組酶發(fā)揮清除作用后剩余的序列組合。答案精析1．C[轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物產(chǎn)品的安全性還尚未得到明確結(jié)論，故轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物產(chǎn)品不一定可以增進(jìn)人類健康，C錯(cuò)誤。]2．A[即使轉(zhuǎn)基因植物的外源基因來(lái)源于自然界，也可能存在安全性問(wèn)題，A錯(cuò)誤。]3．C[相同的遺傳信息在不同的生物體內(nèi)表達(dá)出相同的蛋白質(zhì)利用了密碼子的通用性的原理，A正確；葉肉細(xì)胞內(nèi)有多個(gè)線粒體，則線粒體轉(zhuǎn)化獲得的抗蟲(chóng)基因數(shù)量多，其表達(dá)量遠(yuǎn)高于核轉(zhuǎn)化的水平，有利于增加外源抗蟲(chóng)蛋白的含量，增加抗蟲(chóng)性，B正確；外源抗蟲(chóng)基因轉(zhuǎn)入線粒體，只能通過(guò)母本卵細(xì)胞遺傳給后代，若該轉(zhuǎn)基因植物作為父本則不可遺傳，C錯(cuò)誤；植物受精卵的細(xì)胞質(zhì)基因幾乎全來(lái)自卵細(xì)胞，將外源基因轉(zhuǎn)入線粒體中，可以防止外源基因通過(guò)花粉向其他植物的轉(zhuǎn)移，D正確。]4．B[吃了轉(zhuǎn)基因食品，其中的基因會(huì)被消化分解，不會(huì)整合到人的基因組中，A錯(cuò)誤；轉(zhuǎn)基因大米經(jīng)過(guò)嚴(yán)格鑒定后種植，不一定會(huì)對(duì)人的健康造成危害，C錯(cuò)誤；抗除草劑植物生產(chǎn)的食品經(jīng)過(guò)嚴(yán)格檢驗(yàn)其安全性后方可作為食品，不會(huì)導(dǎo)致人患癌癥，D錯(cuò)誤。]5．D[我國(guó)政府一再重申四不原則：不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實(shí)驗(yàn)，但試管嬰兒技術(shù)可在有效監(jiān)控和嚴(yán)格審查下實(shí)施，A錯(cuò)誤，D正確；我國(guó)政府同樣重視治療性克隆所涉及的倫理問(wèn)題，主張對(duì)治療性克隆進(jìn)行有效監(jiān)控和嚴(yán)格審查，B錯(cuò)誤；生殖性克隆人沖擊了現(xiàn)有的一些有關(guān)婚姻、家庭和兩性關(guān)系的倫理道德觀念，C錯(cuò)誤。]6．C[治療性克隆不需要借助胚胎移植技術(shù)，C錯(cuò)誤。]7．C[干細(xì)胞的研究可用于治療很多疾病，但胚胎干細(xì)胞必須從胚胎中獲取，這涉及倫理問(wèn)題，因而限制了它在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用，A錯(cuò)誤；我國(guó)不反對(duì)治療性克隆，主張對(duì)治療性克隆進(jìn)行有效監(jiān)控和嚴(yán)格審查，B錯(cuò)誤；子代受精卵中的細(xì)胞質(zhì)幾乎全部來(lái)自母方，因此轉(zhuǎn)入葉綠體中的基因不會(huì)隨花粉傳遞給子代，從而避免造成基因污染，C正確；試管嬰兒技術(shù)一般不需要對(duì)胚胎進(jìn)行遺傳學(xué)診斷，常用于解決不孕不育問(wèn)題，D錯(cuò)誤。]8．D[通過(guò)設(shè)計(jì)試管嬰兒這種技術(shù)出生的人口占比較小，并不能保證人口正常的性別比例，D錯(cuò)誤。]9．C[生物武器包括致病菌類、病毒類和生化毒劑類等，不包括毒品類，C錯(cuò)誤。]10．B[大型環(huán)狀DNA位于擬核，破壞大型環(huán)狀DNA分子，該菌仍能產(chǎn)生內(nèi)毒素，說(shuō)明控制內(nèi)毒素合成的基因位于炭疽桿菌的質(zhì)粒中，B錯(cuò)誤。]11．A[生物武器包括致病菌類、病毒類和生化毒劑類等，與常規(guī)武器相比成本造價(jià)低廉，容易獲得，A錯(cuò)誤。]12．A[我國(guó)政府不贊成、不允許、不接受、不支持任何生殖性克隆人實(shí)驗(yàn)，但不反對(duì)治療性克隆，A符合題意。]13．D[轉(zhuǎn)基因技術(shù)本身是中性的，如果確實(shí)有證據(jù)表明某種轉(zhuǎn)基因食品有害，就應(yīng)該禁止該轉(zhuǎn)基因食品的使用，而不應(yīng)該禁止轉(zhuǎn)基因技術(shù)的應(yīng)用，A錯(cuò)誤；利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)制造的新型致病菌，致病能力和傳染能力以及抗藥能力等大幅度增強(qiáng)，因而具有極大的危害性，但人體會(huì)對(duì)它們產(chǎn)生免疫反應(yīng)，B錯(cuò)誤；“設(shè)計(jì)試管嬰兒”移植前可對(duì)胚胎進(jìn)行遺傳學(xué)診斷，不涉及基因改造，C錯(cuò)誤。]14．D[生物武器對(duì)人畜、植物等均可能造成重大傷害，D錯(cuò)誤。]15．(1)遺傳特性(或性狀)構(gòu)建基因表達(dá)載體(2)轉(zhuǎn)基因技術(shù)的專利保護(hù)(或外源基因通過(guò)種子擴(kuò)散，帶來(lái)生態(tài)安全隱患)(3)啟動(dòng)子、目的基因、標(biāo)記基因、終止子特定器官特異啟動(dòng)子如圖所示LF植物基因組解析(2)“終結(jié)者”種子技術(shù)是通過(guò)植入“終結(jié)者基因”，阻滯種子胚胎后期發(fā)育，最后得到成熟但不育的種子，故外源基因不能通過(guò)該種子擴(kuò)散，解決了生態(tài)安全隱患問(wèn)題。(3)基因表達(dá)載體的必備組件包括啟動(dòng)子、目的基因、標(biāo)記基因、終止子，特定基因只能在特定器官中表達(dá)，因此清除不同器官中的外源基因時(shí)需要插入不同的特定器官特異啟動(dòng)子。由題圖可知，特異啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)FLP基因表達(dá)產(chǎn)生重組酶，重組酶可以將兩個(gè)融合識(shí)別位點(diǎn)之間的序列在特定時(shí)期從特定植物器官的細(xì)胞基因組中全部清除，故剩余的序列見(jiàn)答案。第十單元專題突破10綜合PCR的基因工程問(wèn)題選擇題1～2題，每小題7分，3～8題，每小題8分，共62分。一、選擇題1．(2024·武漢期末)基因工程中，通過(guò)PCR可以特異性地快速擴(kuò)增目的基因，PCR產(chǎn)物常采用瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)進(jìn)行鑒定。下列有關(guān)該實(shí)驗(yàn)的敘述，正確的是()A．在同一電場(chǎng)作用下，DNA片段越長(zhǎng)遷移速率越快B．DNA分子在凝膠中的遷移速率與凝膠的濃度無(wú)關(guān)C．瓊脂糖凝膠中的DNA分子可在紅外燈下被檢測(cè)出來(lái)D．如果引物特異性不強(qiáng)，擴(kuò)增出來(lái)的條帶可能不止一條2．(2025·武漢一模)油菜的綠葉對(duì)黃化葉為顯性。與綠葉基因相比，黃化葉基因有一個(gè)堿基對(duì)發(fā)生了改變，從而出現(xiàn)一個(gè)限制酶B的酶切位點(diǎn)。為鑒定某綠葉油菜的基因型，提取其DNA進(jìn)行了PCR和電泳。下列敘述正確的是()A．需設(shè)計(jì)能與目的基因結(jié)合的雙鏈DNA作為PCR引物B．應(yīng)在PCR擴(kuò)增體系中添加Mg2＋，以激活DNA聚合酶C．可適當(dāng)降低復(fù)性的溫度，以減少PCR中非特異性條帶的產(chǎn)生D．用限制酶B作用后進(jìn)行電泳，若有2條電泳條帶可判斷為雜合子3．(2024·廈門質(zhì)檢)如圖表示PCR過(guò)程中某個(gè)階段反應(yīng)體系的情況，①②③④表示相關(guān)物質(zhì)，L、R表示方向。下列敘述正確的是()A．②鏈從L到R的方向?yàn)?′→5′，①②鏈均可作為子鏈合成的模板B．PCR過(guò)程需要通過(guò)解旋酶斷開(kāi)氫鍵，且為邊解旋邊復(fù)制C．以1個(gè)DNA為模板經(jīng)3次循環(huán)需消耗8個(gè)引物③D．物質(zhì)③的5′端添加了某序列，至少需經(jīng)2次循環(huán)才可獲得該序列的雙鏈產(chǎn)物4．(2024·重慶模擬)不對(duì)稱PCR是利用不等量的一對(duì)引物來(lái)產(chǎn)生大量單鏈DNA(ssDNA)的方法，如圖所示。不對(duì)稱PCR中加入的一對(duì)引物中含量較少的被稱為限制性引物，含量較多的被稱為非限制性引物，兩者的比例通常為1∶100。PCR反應(yīng)最初的若干次循環(huán)中，其擴(kuò)增產(chǎn)物主要是雙鏈DNA(dsDNA)，但當(dāng)限制性引物消耗完后，就會(huì)產(chǎn)生大量的ssDNA。下列相關(guān)說(shuō)法錯(cuò)誤的是()A．用不對(duì)稱PCR方法擴(kuò)增目的基因時(shí)，不需要知道基因的全部序列B．進(jìn)行最初若干次循環(huán)的目的是增加模板DNA的量C．最后大量獲得的ssDNA與圖中乙鏈的堿基序列一致D．因?yàn)殡p鏈DNA和單鏈DNA的分子量大小不同，可通過(guò)電泳方法將其分離5.反向PCR是一種通過(guò)已知序列設(shè)計(jì)引物對(duì)未知序列(圖中L、R)進(jìn)行擴(kuò)增的技術(shù)，其過(guò)程如圖所示。下列相關(guān)敘述不正確的是()A．過(guò)程①用同一種限制酶對(duì)未知序列兩端進(jìn)行切割B．過(guò)程②需要使用DNA連接酶，形成磷酸二酯鍵C．過(guò)程③PCR體系需要添加耐高溫的DNA聚合酶和解旋酶D．該技術(shù)可檢測(cè)T－DNA整合到植物染色體DNA的位置6．(2024·無(wú)錫模擬)重疊延伸PCR可實(shí)現(xiàn)定點(diǎn)基因誘變，其操作過(guò)程如圖所示(凸起處代表突變位點(diǎn))。下列說(shuō)法正確的是()A．過(guò)程①需要把兩對(duì)引物同時(shí)加入一個(gè)擴(kuò)增體系以提高擴(kuò)增效率B．過(guò)程①需要2輪PCR才能得到圖中所示PCR產(chǎn)物C．過(guò)程②的產(chǎn)物都可以完成延伸過(guò)程D．若過(guò)程④得到16個(gè)突變基因，則需要消耗15個(gè)通用引物RP27.(2024·安順調(diào)研)熒光定量PCR技術(shù)可定量檢測(cè)樣本中DNA含量，用于病毒檢測(cè)。其原理是在PCR反應(yīng)體系中加入引物的同時(shí)，加入與某條模板鏈互補(bǔ)的熒光探針。當(dāng)耐高溫的DNA聚合酶催化子鏈延伸至探針處會(huì)水解探針，使熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一次，就有一個(gè)熒光分子生成(如圖)。通過(guò)實(shí)時(shí)檢測(cè)熒光信號(hào)強(qiáng)度，可得Ct值(熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)次數(shù))。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A．PCR每個(gè)循環(huán)包括變性、復(fù)性(引物和模板結(jié)合)、延伸3個(gè)階段B．耐高溫的DNA聚合酶在該反應(yīng)中的作用是形成磷酸二酯鍵和水解磷酸二酯鍵C．最終監(jiān)測(cè)的熒光強(qiáng)度與起始時(shí)反應(yīng)管內(nèi)樣本DNA的含量呈正相關(guān)D．Ct值越大表示被檢測(cè)樣本中病毒數(shù)目越多，患者危險(xiǎn)性更高8．(2025·成都期末)某科研小組采用PCR技術(shù)構(gòu)建了紅色熒光蛋白基因(dsred2)和α-淀粉酶基因(amy)的dsred2－amy融合基因，其過(guò)程如圖所示，其中引物②和引物③中部分序列(灰色區(qū)域)可互補(bǔ)配對(duì)。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是()A．利用PCR技術(shù)擴(kuò)增基因時(shí)不需要解旋酶來(lái)打開(kāi)DNA雙鏈B．不能在同一反應(yīng)體系中進(jìn)行dsred2基因和amy基因的擴(kuò)增C．dsred2基因和amy基因混合后只能得到一種類型的雜交鏈D．雜交鏈延伸得到dsred2－amy融合基因的過(guò)程不需要加引物二、非選擇題9．(12分)(2025·長(zhǎng)沙模擬)水稻穗粒數(shù)可影響水稻產(chǎn)量。農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T－DNA可以轉(zhuǎn)移并隨機(jī)插入野生型水稻基因組中(可在基因組單一位點(diǎn)插入也可以同時(shí)插入多個(gè)位點(diǎn))，導(dǎo)致被插入的基因功能喪失，從而得到一系列水稻突變體。研究者從中篩選得到一株穗粒數(shù)異常突變體，為確定T－DNA插入植物細(xì)胞的染色體位置，可根據(jù)T－DNA序列，擴(kuò)增其兩側(cè)未知序列比對(duì)，從而確定插入的染色體。(1)圖1所示序列使用限制酶酶切后，將所得DNA使用__________酶連成環(huán)狀(如圖2)，再設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，其中復(fù)性過(guò)程的作用是____________________________。(2)請(qǐng)根據(jù)圖1的T－DNA的一條鏈的堿基序列，選出PCR中使用的引物序列是______和______(填序號(hào))。T－DNA序列引物序列5′－AACTATGCGC……CGTAGCCTAT－3′①5′－GCGCATAGTT－3′②5′－ATAGGCTACG－3′③5′－CGTAGCCTAT－3′④5′－AACTATGCGC－3′(3)由圖2中環(huán)狀DNA至少經(jīng)過(guò)______輪循環(huán)才能得到圖示鏈狀PCR產(chǎn)物(如圖3)。(4)經(jīng)過(guò)與野生型水稻基因組序列比對(duì)，確定T－DNA插入2號(hào)染色體上的B基因中。研究發(fā)現(xiàn)，該突變體產(chǎn)量明顯低于野生型，據(jù)此推測(cè)B基因可______(填“促進(jìn)”或“抑制”)水稻穗粒的形成，從而控制高產(chǎn)性狀。10．(14分)(2025·安慶模擬)巢式PCR是一種特殊的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，使用兩組不同的引物實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)DNA片段的擴(kuò)增。第一組外引物大小為25bp，復(fù)性溫度較高(68℃)，擴(kuò)增后得到中間產(chǎn)物；第二組內(nèi)引物大小為17bp，復(fù)性溫度較低(46℃)，內(nèi)引物的結(jié)合部位在中間產(chǎn)物內(nèi)部。具體過(guò)程如圖一所示，回答下列問(wèn)題：(1)巢式PCR反應(yīng)體系中除模板、引物、Mg2＋外，還應(yīng)加入____________________________(答出兩點(diǎn)即可)等。(2)巢式PCR時(shí)，復(fù)性溫度與引物長(zhǎng)度呈________(填“正相關(guān)”或“負(fù)相關(guān)”)。若使用外引物進(jìn)行第一次PCR擴(kuò)增時(shí)產(chǎn)生了錯(cuò)誤片段，則使用內(nèi)引物進(jìn)行第二次PCR擴(kuò)增時(shí)，完成配對(duì)并擴(kuò)增的概率會(huì)__________。由此可知，巢式PCR相較于常規(guī)PCR具有的優(yōu)點(diǎn)是________________________________________________________________________。(3)家畜胚胎的性別鑒定技術(shù)對(duì)畜牧業(yè)的發(fā)展具有重要意義。科研人員利用多重巢式PCR技術(shù)同時(shí)擴(kuò)增奶牛Y染色體上的雄性決定基因(SRY)和常染色體上的酪蛋白基因(CSN1S1)，進(jìn)行早期胚胎性別鑒定和胚胎移植，獲得高產(chǎn)奶牛。實(shí)驗(yàn)?zāi)康姆椒ú襟E要點(diǎn)囊胚樣品DNA提取選取滋養(yǎng)層細(xì)胞提取DNAPCR引物的設(shè)計(jì)和合成根據(jù)牛的SRY和CSN1S1基因序列設(shè)計(jì)并合成a.______對(duì)引物PCR擴(kuò)增預(yù)變性→變性→復(fù)性→延伸鑒定分析采用瓊脂糖凝膠電泳對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行鑒定，確定胚胎性別b._______________對(duì)受體奶牛注射前列腺素胚胎移植將符合要求的胚胎移植到受體奶牛的子宮內(nèi)①請(qǐng)將表格內(nèi)容補(bǔ)充完整：a是____________；b是________________。②巢式PCR產(chǎn)物鑒定結(jié)果如圖二所示，1～5號(hào)為取自不同胚胎的DNA樣品，其中符合要求的胚胎是__________。11．(12分)(2023·江蘇，22節(jié)選)為了將某納米抗體和綠色熒光蛋白基因融合表達(dá)，運(yùn)用重組酶技術(shù)構(gòu)建質(zhì)粒，如圖1所示。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增片段F1與片段F2時(shí)，配制的兩個(gè)反應(yīng)體系中不同的有______________，擴(kuò)增程序中最主要的不同是________________。(2)將PCR產(chǎn)物片段與線性質(zhì)粒載體混合后，在重組酶作用下可形成環(huán)化質(zhì)粒，直接用于轉(zhuǎn)化細(xì)菌。這一過(guò)程與傳統(tǒng)重組質(zhì)粒構(gòu)建過(guò)程相比，無(wú)需使用的酶主要有________________________________________________________________________。(3)轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌需采用含有抗生素的培養(yǎng)基篩選，下列敘述錯(cuò)誤的有________。A．稀釋涂布平板需控制每個(gè)平板30～300個(gè)菌落B．抗性平板上未長(zhǎng)出菌落的原因一般是培養(yǎng)基溫度太高C．抗性平板上常常會(huì)出現(xiàn)大量雜菌形成的菌落D．抗性平板上長(zhǎng)出的單菌落不需要進(jìn)一步劃線純化(4)為了驗(yàn)證平板上菌落中的質(zhì)粒是否符合設(shè)計(jì)，用不同菌落的質(zhì)粒為模板、用引物F1－F和F2－R進(jìn)行了PCR擴(kuò)增，質(zhì)粒P1～P4的擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果如圖2。根據(jù)圖中結(jié)果判斷，可以舍棄的質(zhì)粒有________。(5)對(duì)于PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果符合預(yù)期的質(zhì)粒，通常需進(jìn)一步通過(guò)基因測(cè)序確認(rèn)，原因是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。答案精析1．D[在同一電場(chǎng)作用下，DNA片段越長(zhǎng)遷移速率越慢，A錯(cuò)誤；凝膠的濃度會(huì)影響DNA分子在凝膠中的遷移速率，B錯(cuò)誤；瓊脂糖凝膠中的DNA分子經(jīng)過(guò)核酸染料染色后可在波長(zhǎng)為300nm的紫外燈下被檢測(cè)出來(lái)，C錯(cuò)誤；如果引物特異性不強(qiáng)，引物可能會(huì)與目的基因以外的其他的DNA片段結(jié)合，擴(kuò)增出來(lái)的條帶可能不止一條，D正確。]2．B[引物是一小段能與DNA母鏈的一段堿基序列互補(bǔ)配對(duì)的短單鏈核酸，A錯(cuò)誤；PCR過(guò)程中用到了緩沖液，緩沖液中一般要添加Mg2＋用于激活DNA聚合酶，B正確；復(fù)性溫度過(guò)低會(huì)導(dǎo)致引物與模板鏈的結(jié)合不牢固，會(huì)增加PCR中非特異性條帶，C錯(cuò)誤；與綠葉基因相比，黃化葉基因有一個(gè)堿基對(duì)發(fā)生了改變，從而出現(xiàn)一個(gè)限制酶B的酶切位點(diǎn)，用限制酶B作用后進(jìn)行電泳，若有3條電泳條帶可判斷為雜合子，D錯(cuò)誤。]3．D[根據(jù)DNA分子中兩條鏈的反向平行關(guān)系及圖示可判斷，②鏈從L到R的方向?yàn)?′→3′，A錯(cuò)誤；PCR過(guò)程是通過(guò)高溫將雙鏈DNA之間的氫鍵斷開(kāi)，并且是全部解旋之后才進(jìn)行復(fù)制，B錯(cuò)誤；以1個(gè)DNA為模板經(jīng)3次循環(huán)產(chǎn)生的DNA分子數(shù)目為23＝8，需消耗7個(gè)引物③，C錯(cuò)誤。]4．C[不對(duì)稱PCR中加入的一對(duì)引物中含量較多的被稱為非限制性引物，非限制性引物與乙鏈結(jié)合，最后大量獲得的ssDNA與圖中甲鏈的堿基序列一致，C錯(cuò)誤。]5．C[過(guò)程③即PCR擴(kuò)增，PCR技術(shù)中DNA解旋是在高溫下實(shí)現(xiàn)的，不需要加入解旋酶，C錯(cuò)誤。]6．D[